氨磷汀通过上调PKM2表达增强肾近端小管上皮细胞抵抗顺铂毒性

目的探究氨磷汀缓解顺铂肾毒性的分子机制。方法在肾近端小管上皮细胞系HK-2及原代细胞中,采用CCK-8细胞活性实验检测氨磷汀对顺铂细胞毒性的抑制作用。通过在线数据库tabula-muris分析肾脏组织各细胞亚群PKM2的表达。通过流式细胞术检测细胞凋亡比例。通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测细胞中PKM2基因表达。通过小RNA干扰技术敲低细胞中PKM2基因表达。结果氨磷汀显著增强HK-2细胞和原代肾近端小管上皮细胞抵抗顺铂的毒性。在顺铂处理的细胞中,随着氨磷汀浓度的增加,细胞的活力从0.37增加到0.45至0.77(P<0.001)。另外,随着氨磷汀浓度的增加,HK-2细胞中PKM2基因表达依次增加,在1μmol/L浓度时增加到8.76倍(P<0.001)。在HK-2细胞中干扰PKM2基因表达,氨磷汀对顺铂的细胞毒性的保护作用显著受到抑制。顺铂诱导的细胞凋亡比例、标志蛋白Cleaved-PARP和Cleaved-caspase3的表达被氨磷汀显著抑制。单细胞数据分析的结果表明,相对于肾脏组织其他细胞亚群,PKM2在肾近端小管上皮细胞中表达最低。结论氨磷汀通过上调肾近端小管上皮细胞PKM2的表达抑制顺铂诱导的细胞凋亡,从而缓解顺铂的细胞毒性。

缬沙坦对人肾近端小管上皮细胞TGF-β/Smad信号途径的影响

目的观察缬沙坦对TGF-β刺激人肾近端小管上皮细胞表达Smad的影响。方法以人肾小管上皮细胞(HKC)为对象,分为正常对照组;TGF-β1刺激组;缬沙坦组。Western blot检测p-Smad2/3、smad2/3、Smad7以及细胞上清ColⅠ蛋白含量;RT-PCR检测Smad2 mRNA和Smad7 mRNA水平。MTT法检测刺激组及缬沙坦组在不同时间、不同药物浓度对细胞增殖状态的影响。结果①Western blot显示,与TGF-β1刺激组相比,缬沙坦使Smad2/3、p-Smad2/3蛋白的表达下降,ColⅠ分泌显示相同趋势,而Smad7蛋白的表达没有变化。②半定量RT-PCR显示,与TGF-β1刺激组相比,缬沙坦组Smad2 mRNA降低,Smad7 mRNA无变化。③MTT法检测显示不同浓度缬沙坦对TGF-β1刺激所引起的细胞增殖受抑制现象均有改善,并且随药物浓度的增加该作用增强。结论提示缬沙坦的肾脏保护作用可能部分是通过抑制TGF-β/Smads信号途径实现的。

miR-30e*在顺铂诱导的肾近端小管上皮细胞凋亡和线粒体损伤中的作用

目的:观察顺铂诱导肾近端小管细胞损伤过程中mi R-30e*的表达变化,并探讨其在顺铂诱导的小管细胞凋亡和线粒体损伤中的作用。方法:实时定量PCR(q RT-PCR)检测顺铂处理后的小管细胞mi R-30e*的表达水平;使用重组慢病毒载体感染细胞,稳定高表达或低表达mi R-30e*;使用流式细胞仪检测细胞凋亡,观察mi R-30e*在顺铂诱导的小管细胞凋亡中的作用;q RT-PCR检测线粒体DNA(mt DNA)拷贝数,JC-1检测线粒体膜电位变化,探究mi R-30e*在顺铂引起的线粒体损伤中的作用。结果:1顺铂处理肾小管上皮细胞后,mi R-30e*的表达呈时间依赖性和剂量依赖性下调;2使用q RT-PCR检测重组慢病毒载体制备的稳定高表达或低表达mi R-30e*的小管细胞株中mi R-30e*的表达,过表达组增高了7倍,敲低表达组降低了近50%;3加入顺铂后,与对照组相比小管细胞凋亡增加,过表达mi R-30e*对凋亡起保护作用,敲低mi R-30e*则加重凋亡;4通过检测mt DNA的拷贝数发现顺铂诱导的线粒体损伤在48 h时有意义,迟于mi R-30e*表达的下调,线粒体膜电位检测JC-1提示过表达mi R-30e*对线粒体有保护作用。结论:顺铂处理小管细胞可降低其mi R-30e*的表达;体外过表达mi R-30e*对顺铂引起的小管细胞的凋亡和线粒体损伤具有保护作用,敲低mi R-30e*会加重顺铂诱导的肾近端小管细胞凋亡和线粒体损伤。

庆大霉素致大鼠肾近端小管上皮细胞凋亡的超微结构研究

目的探讨庆大霉素对实验性大鼠肾近端小管上皮细胞凋亡的影响。方法通过给大鼠腹腔注射庆大霉素100mg/Kg/d,分别在连续用药第5天、8天、10天等不同天数处死大鼠,取肾脏制备超薄切片,在透射电镜下观察肾近端小管上皮细胞凋亡的情况。结果大鼠连续注射庆大霉素5天、8天、10天后肾近端小管上皮细胞均有凋亡的发生,注射庆大霉素10天的大鼠肾小管上皮细胞出现较多坏死。结论庆大霉素肾毒性作用部分是通过肾近端小管上皮细胞凋亡而实现的,细胞凋亡的发生与庆大霉素肾毒性作用强弱有关。

维生素E对慢性镉染毒小鼠肾近端小管细胞损伤的保护作用

目的探讨维生素EVE对慢性染镉小鼠肾近端小管细胞损伤的保护作用。方法75只昆明种小鼠随机分为对照组、镉组和VE组,每组25只。镉组:每周2次经皮下注射氯化镉2mg/kg,给药体积5ml/kg;VE组:同时按10mg/(kg·d)给予VE;对照组:经皮下注射等量生理盐水。3个月后,用光镜、透射电镜、免疫组化细胞凋亡染色(Tunel法)观察经VE处理的慢性染镉小鼠肾近端小管上皮细胞细微结构的改变,并作形态计量分析;观察细胞凋亡情况,对凋亡细胞进行计数。结果经VE处理的慢性染镉小鼠肾近端小管上皮细胞形态结构与正常对照组接近,与镉组比较有明显不同;上皮细胞核的平均截面周长、平均截面积、平均表面积、平均体积和体积密度等形态参数值与镉组比较差异也有显著性(P<0.05);与对照组相比,镉组细胞凋亡染色阳性反应细胞数量明显增多(P<0.01),而VE组数量无明显变化(P>0.05)。结论VE对慢性染镉引起的小鼠肾近端小管上皮细胞损害有保护作用。

川芎嗪对TGF-β_1诱导人胚肾近端小管上皮细胞转分化影响的实验研究

目的利用原代培养的人胚肾近端小管上皮细胞作为研究对象,探讨川芎嗪(TMP)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肾近端小管上皮细胞转分化的影响。方法采用胶原酶消化后系列网筛过滤,再用密度梯度离心分离纯化细胞的方法,进行人胚肾近端小管上皮细胞的原代培养。原代培养的人胚肾近端小管上皮细胞传至第2代后分为5组,空白对照组、10ng/mL TGF-β1刺激组、5ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组、10ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组及20ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组。刺激48h后,采用倒置相差显微镜、透射电子显微镜、酶化学染色和免疫细胞化学方法检测细胞的转分化情况。结果 TGF-β1刺激人胚肾近端小管上皮细胞后细胞拉长呈梭形,细胞间隙加大;电子显微镜下细胞失去极性,微绒毛减少直至消失;碱性磷酸酶染色阴性;细胞角蛋白18(CK-18)表达减弱,波形蛋白(Vimentin)表达增强,并表达α平滑肌肌动蛋白抗体(α-SMA)。各浓度TMP+10ng/mL TGF-β1刺激组细胞的上述变化均有不同程度的减弱,减弱程度与TMP浓度呈正比。结论 TMP能以浓度依赖方式阻止TGF-β1诱导的人胚肾近端小管上皮细胞的转分化。

糖肾宁对高糖培养肾近端小管上皮细胞FN分泌及TGF-β1 mRNA表达作用

目的研究中药复方糖肾宁对高糖诱导的肾近端小管上皮细胞转化生长因子β1（TGF-β1）表达和分泌纤维连接蛋白（FN）的影响，探讨其治疗糖尿病肾病（DN）的机制。方法分别采用RT-PCR和ELISA方法检测不同时间下高糖对肾近端小管上皮细胞TGF-β1 mRNA表达和分泌FN的作用，及糖肾宁药物血清对上述指标的影响。结果高糖呈时间依赖性增加肾小管上皮细胞TGF-β1 mRNA表达，高糖培养24h后细胞分泌FN也明显增多，加入糖肾宁药物血清后上述指标均有下降（P〈0．05）。结论糖肾宁抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞TGF-β1和FN表达可能是其治疗DN的分子机制之一。

受体Megalin和Cubilin在培养的Opossum肾近端小管细胞的表达

目的及方法 采用Western印迹法及免疫细胞化学双标记法检测肾近端小管培养的OK细胞株上受体megalin及cubilin的表达及分布。结果 受体megalin及cubilin在分离的OK细胞膜上有所表达 ,并且 ,应用me galin及cubilin抗体的免疫细胞化学双标记法显示 ,它们分布在细胞内顶部胞质的细胞内吞系统 ,包括微绒毛根部的有被小凹、胞内的有被吞饮小泡、大泡、溶酶体及参与细胞膜再循环的顶部致密小管。结论 这一分布特征提示 ,两种大分子糖蛋白受体与肾近端小管上皮细胞受体介导的细胞内吞功能有关。由于其分布极其接近 ,很可能在一些大分子的重吸收中起到相互作用。

切应力对肾近端小管上皮细胞的生物学影响

液体流动诱导的切应力所引起的细胞生物学改变是目前许多细胞研究领域的热点。既往研究主要集中于血流诱导的切应力在调节内皮细胞功能中的作用。最近研究发现,在肾脏的近端小管上皮细胞,由尿液流动诱导的切应力对其具有多效性,如调节溶质的转运、影响细胞骨架的重组、改变细胞外基质的重塑及调节选择性基因和蛋白质的表达等。管流诱导的肾近端小管上皮细胞生物学改变的机制仍不清楚,可能与细胞骨架肌动蛋白的重排有关。

人肾近端小管上皮细胞的原代培养、传代及鉴定方法研究

目的:创建一种重复性好、细胞量多的人肾近端小管细胞(PTC)培养方法.方法:取新鲜正常人肾组织分离纯化,用含10%新生牛血清等营养充分的DMEM/F12(1:1)液进行近端小管细胞的原代培养及传代,并以免疫组化、酶化学染色、透射电镜鉴定.结果:培养5～6天后融合成单层细胞,形态呈鹅卵石样,可传代7～9代,鉴定确定为人肾近端小管细胞,重复培养10次,均能稳定获得同样细胞,每克肾皮质可分离培养出(6～12)×106个PTC.结论:此培养方法可在7天内获得人肾近端小管细胞,且重复性好,细胞数量多,为进行肾小管细胞治疗提供必需的细胞,也为研究肾小管病变提供实验平台.

尿本周氏蛋白及转化生长因子β_1对肾近端小管上皮细胞增殖的影响

目的 :研究多发性骨髓瘤 (MM)患者尿本周氏蛋白 (BJP)及转化生长因子 β1(TGF - β1)在体外对肾近端小管上皮细胞 (PTC)增殖的影响。方法 :将自MM患者尿中提取的λ型BJP和 /或TGF - β1与大鼠NRK .5 2E株PTC共同培养 ,用 [3 H]TdR掺入研究PTC增殖。并用ELISA法测定BJP与PTC培养上清液中的TGF - β1含量。结果 :①10 0 - 80 0 μmol/LBJP以浓度依赖方式抑制PTC增殖 ,当浓度≥ 4 0 0 μmol/L与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,当加入 2 μg/LTGF - β1共同培养 ,在BJP浓度为 4 0 0 μmol/L时 ,[3 H]TdR掺入低于单用BJP(P <0 .0 5 ) ,但与单用BJP浓度为 80 0 μmol/L无显著差异 ;② 10 0 - 80 0 μmol/LBJP与PTC共同培养液中的TGF - β1含量均增加 ,尤以BJP为 4 0 0μmol/L明显大于对照组 (P <0 .0 5 ) ;③外源性 0 .5 - 10 μg/LTGF - β1与PTC共同培养 ,[3 H]TdR掺入随TGF - β1浓度增加而减少。结论 :MM患者λ型BJP可抑制PTC的增殖 ,其部分机理可能与其促进对PTC增殖也有抑制作用的TGF-

铁蛋白在兔肾近端小管中的穿细胞运输

为了确定蛋白质的穿细胞转运途径，用体内显微注射技术，将阳离子铁蛋白直接注入家兔肾近端小管腔内，观察肾对蛋白质的摄取与转运。结果表明：注入铁蛋白后１５ｍｉｎ，蛋白质分子主要聚集在细胞顶部的胞吞小泡、胞吞大泡、致密顶端小管和溶酶体中。随着注入铁蛋白后时间的增加，这些蛋白质被转运到细胞底部胞质。此外，还可见一种与致密顶端小管不同的结构，直径小于０．０５μｍ，呈细管泡状，也含有铁蛋白颗粒，最初位于顶部胞质的铁蛋白运载大泡附近，可与该大泡融合，也可散在于胞质中，以后主要分布在细胞底部的胞质中。铁蛋白颗粒成簇分布在细胞侧基部间隙中，随着实验时间延长，该现象明显增加。

低甲大鼠肾近端小管细胞膜的定量形态学研究

本文应用几种先进的体视学方法，对实验性低甲状以激素状态（下称低甲）大鼠肾近端小管上皮细胞膜的改变进行了定量形态学分析。结果表明低甲动物肾近端小管微绒毛明显变短、表面积减少、侧基底细胞膜面积减少，为低甲肾小管功能低下的细胞生物机制的研究提供了可靠的定量形态学依据。

近端肾小管上皮细胞代谢重编程在急性肾损伤中的研究进展

肾脏是一个高代谢器官,尤其是近端肾小管上皮细胞,在生理情况下主要依赖脂肪酸氧化供能,但是在急性肾损伤(AKI)期间,线粒体和过氧化物酶体功能障碍,近端肾小管上皮细胞发生代谢重编程,能量供应转向糖酵解,生成乳酸,并伴脂肪酸氧化紊乱及糖异生受损,短期内代谢重编程可能是对肾脏有益的能量代偿,但是该过程中也会加重肾损伤。本文就近端肾小管上皮细胞代谢重编程在AKI中的作用进行综述。

近端小管RAS功能轴在早期糖尿病小鼠肾脏中的变化

目的:观察自发性糖尿病小鼠模型中,糖尿病肾病早期近端小管肾素-血管紧张素系统(RAS)两条轴[血管紧张素转换酶(ACE)-血管紧张素II(Ang II)-血管紧张素II 1型受体(AT1)经典轴和ACE2-Ang(1-7)-Mas受体(MasR)新轴]的变化特征及对肾脏结构和功能的影响。方法:应用雄性自发性1型糖尿病Akita小鼠(以C57BL/6背景的雄性非糖尿病小鼠为正常对照)和自发性2型糖尿病db/db小鼠(以C57BLKS/J背景的雄性db/m非糖尿病小鼠为正常对照),饲养至16周龄时处死小鼠,测定相应生理指标。收集尿液,检测尿液中Ang II和Ang(1-7)的含量;收取肾脏组织行病理切片染色观察肾脏结构变化;免疫组化法观察肾脏组织血管紧张素原(Agt)、ACE、ACE2和MasR的表达部位及变化;Western blot和RT-qPCR测定近端肾小管的上述蛋白及mRNA的变化。结果:两种糖尿病小鼠16周龄时,肾小球滤过率和尿白蛋白/肌酐比值显著增加(P<0.05),PAS染色可见近端肾小管细胞体积增加,管腔扩张,肾小管肥大,肾小管损伤分数显著增加(P<0.01)。RAS成分检测结果显示,与对照组相比,糖尿病小鼠近端小管Agt和ACE2的蛋白和mRNA表达水平显著升高(P<0.01),尿Ang II排泄显著增加(P<0.01),而ACE和MasR的蛋白和mRNA表达水平显著下调(P<0.01),尿Ang(1-7)含量显著减少(P<0.01)。结论:在自发性糖尿病小鼠中,近端小管RAS在糖尿病肾病早期被激活,激活的RAS可能参与糖尿病肾病早期肾小球高滤过、肾小球和肾小管肥大及近端小管损伤。

结晶型轻链近端肾小管病

43岁男性,既往发现血清肌酐升高1年余。肾脏损害表现为蛋白尿和肾功能不全,伴Fanconi综合征,血和尿免疫固定电泳κ阳性,血κ/λ比值明显升高。肾活检病理提示急性肾小管损伤,免疫电镜可见单克隆κ阳性轻链结晶沉积于肾小管胞质。最终诊断为轻链近端肾小管病(结晶型)。

半胱氨酸蛋白酶-8和P53在慢性砷中毒大鼠肾近端小管表达的研究

目的探讨慢性砷中毒大鼠肾近端小管细胞半胱氨酸蛋白酶-8（caspase-8）和P53表达致肾脏损伤的分子机制。方法60只SD大鼠分为对照组，低、高剂量组，每组20只，高、低剂量组分别给予三氧化二砷（As2O3）10．0、0．4mg／kg水溶液自由饮用，对照组自由饮用蒸馏水。分笼4个月，测定血砷、尿砷，取肾脏标本，组织学技术HE染色，免疫组织化学（SABC）法检测大鼠肾小管上皮细胞caspase-8、P53免疫阳性细胞，并进行计数和图像分析研究。结果对照组，低、高剂量组肾近端小管上皮caspase-8阳性细胞计数[（3．33±1．32）、（31．14±8．02）、（46．50±7．20）个／视野]依次增加（P均〈0．05），平均灰度值（151．34±6．40、133．58±4．63、128．34±16．28）依次降低（P均〈0．05），P53阳性细胞计数[（3．17±1．59）、（26．29±4．23）、（47．00±6．22）个／视野]依次增加（P均〈0．05），平均灰度值（142．54±8．06、121．48±5．68、101．89±6．35）依次降低（P均〈0．05）。结论caspase-8、P53阳性细胞增多是砷中毒致肾脏损伤的分子机制之一。