抑制miRNA-376c-3p对肾透明细胞癌生长的影响

目的探究miRNA-376c-3对肾透明细胞癌(ccRCC)中肿瘤细胞生长的影响。方法以实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测人ccRCC细胞系786-O、Caki-1、SN12-PM6、ACHN及正常人近段肾小管上皮细胞系HKC中miRNA-376c-3p的表达。体外培养786-O细胞,随机分为对照组、miR-376c-3p inhibitor组(转染miR-376c-3p inhibitor)、miR-376c-3p mimics组(转染miR-376c-3p mimics)、阴性对照组(转染miR-376c-3p阴性对照),分组转染后以RT-PCR检测4组细胞miRNA-376c-3p表达;以Ki67免疫荧光染色、集落生成实验检测4组786-O细胞增殖;以TUNEL染色检测4组786-O细胞凋亡;以免疫荧光染色检测4组786-O细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达并比较其Bax/Bcl-2。于右腋窝皮下接种上述4组786-O细胞建立其裸鼠移植瘤模型,3周后测定其肿瘤体积与质量;以Ki67免疫荧光染色、TUNEL染色分别检测4组裸鼠肿瘤细胞增殖与凋亡。结果与HKC细胞比较,ccRCC细胞系786-O、Caki-1、SN12-PM6、ACHN中miR-376c-3p表达降低(P<0.05)。与对照组比较,miR-376c-3p inhibitor组细胞增殖率与集落形成率、肿瘤体积与质量、裸鼠肿瘤组织Ki67阳性比升高(P<0.05),细胞miR-376c-3p相对表达、Bax/Bcl-2与凋亡率、裸鼠肿瘤组织TUNEL阳性比降低(P<0.05);miR-376c-3p mimics组细胞增殖率与集落形成率、肿瘤体积与质量、裸鼠肿瘤组织Ki67阳性比降低(P<0.05),细胞miR-376c-3p相对表达、Bax/Bcl-2与凋亡率、裸鼠肿瘤组织TUNEL阳性比升高(P<0.05);阴性对照组各指标无明显变化(P>0.05)。结论抑制miRNA-376c-3p可削弱ccRCC细胞增殖及集落生成活性,促进其凋亡,并在裸鼠体内抑制其移植瘤生长。

CT扫描在肾透明细胞癌假包膜完整性评估中的应用

目的 分析CT扫描成像在肾透明细胞癌假包膜评估中的应用价值。方法 经病理检查确诊、肿瘤直径≤7 cm的肾透明细胞癌患者136例,采用腹部CT扫描和组织病理检查评价假包膜完整性。采用Kappa一致性检验评价病理检查与CT扫描评估假包膜的一致性。结果 136例CT扫描结果显示,假包膜完整96例,假包膜不完整36例,无明显假包膜4例。病理检查结果显示,假包膜完整97例,假包膜不完整32例,无明显假包膜7例。经Kappa检验,CT扫描与病理检查结果一致性高(Kappa=0.745)。结论 大多数肾透明细胞癌有明显的假包膜;CT扫描能够评估肿瘤边缘和假包膜的完整性,CT扫描与病理检查结果一致性良好。

术前老年营养风险指数联合内生肌酐清除率对老年肾透明细胞癌患者的预后价值

目的探讨术前老年营养风险指数(GNRI)联合内生肌酐清除率(Ccr)对老年肾透明细胞癌患者的预后价值。方法选取2016年1月至2017年12月广西医科大学第一附属医院泌尿外科收治住院的老年肾透明细胞癌患者148例,根据随访状况将患者分为存活组122例和死亡组26例。采用采用单因素和多因素Cox回归分析老年肾透明细胞癌患者预后的影响因素。采用Kaplan-Meier分析GNRI和Ccr与老年肾透明细胞癌患者总生存时间的相关性。绘制受试者工作特征曲线分析预测效能。结果两组患者一般资料中,性别、M分期、T分期、肿瘤坏死、白蛋白、GNRI差异有统计学意义(P<0.05);两组患者血清指标中,碱性磷酸酶、前白蛋白、Ccr差异有统计学意义(P<0.05)。Cox回归分析显示,GNRI升高(HR:0.803,95%CI:0.686~0.939)与Ccr升高(HR:0.971,95%CI:0.943~0.999)是老年肾透明细胞癌患者预后的保护因素(P<0.05),肿瘤M分期为M 1期(HR:5.132,95%CI:1.021~25.787)、T分期为T 3、T 4期(HR:5.179,95%CI:1.249~21.473)是老年肾透明细胞癌患者预后的危险因素(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,高GNRI组5年生存率高于低GNRI组(χ^(2)=15.446,P<0.001),高Ccr组5年生存率高于低Ccr组(χ^(2)=11.959,P=0.001)。受试者工作特征曲线曲线显示,GNRI联合Ccr对患者术后1年及3年预后不良预测效果好(曲线下面积分别为0.909、0.755)。结论术前GNRI和Ccr的降低与老年肾透明细胞癌患者预后不良密切相关,GNRI联合Ccr预测老年肾透明细胞癌患者疗效更佳。

血浆纤维蛋白原、全身炎症反应指数对非转移性肾透明细胞癌患者的预后判断价值

目的 探讨血浆纤维蛋白原(fibrinogen, FIB)、全身炎症反应指数(Systemic inflammatory response index, SIRI)对非转移性肾透明细胞癌(Non-metastatic renal cell carcinoma, nmRCC)患者的预后判断价值。方法 选择2018年1月-2022年12月苏州大学附属第二医院收治的146例nmRCC患者为研究对象,采用受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic,ROC)曲线确定FIB、SIRI诊断高Fuhrman分级(Ⅲ~Ⅳ级)的最佳截断值,并根据最佳截断值将患者分为高、低FIB组和高、低SIRI组。比较不同FIB、SIRI水平患者临床病理参数与生存预后的差异。用多因素Cox风险模型分析影响患者总体生存时间(Overall survival, OS)、肿瘤特异生存时间(Cancer specific survival, CSS)、无复发生存时间(Disease free survival, DFS)的独立危险因素。ROC曲线分析FIB、SIRI单独及联合检测对患者预后不良的预测效能。结果 患者FIB、SIRI水平越高,肿瘤直径越大,TNM分期及Fuhrman分级越高(P<0.05)。与低FIB组相比,高FIB组患者的总体生存率显著较低(χ^(2)=8.385,P=0.003);与低SIRI组相比,高SIRI组患者的总体生存率显著较低(χ^(2)=10.029,P<0.001)。Cox多因素分析显示,FIB水平、SIRI水平、肿瘤直径、Fuhrman分级、TNM分期均是影响患者OS、CSS、DFS的独立性危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,FIB、SIRI预测肾透明细胞癌患者预后不良的曲线下面积(Area under curve,AUC)分别为0.735、0.799,敏感性分别为62.6%、67.4%,特异性分别为659%、72.3%,二者联合检测的AUC为0.852,敏感性为71.2%,特异性为76.6%。结论 高FIB与高SIRI是nmRCC患者不良生存预后的危险因素,二者联合检测对患者预后不良的预测效能更高。

RNA干扰受体相互作用蛋白激酶1基因表达对肾透明细胞癌生物活性的影响

目的探讨受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)对肾透明细胞癌(ccRCC)生物功能的影响及机制。方法通过RNA干扰技术降低RIPK1在ccRCC中的表达后,光镜观察细胞形态变化,CCK-8法检测细胞增殖变化情况,Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力的变化,流式细胞仪检测细胞发生凋亡、坏死水平,Western blot法检测cleaved caspase-3、混合谱系蛋白激酶样结构域(MLKL)和RIPK3表达变化。结果小干扰RNA(siRNA)干扰48 h后,RIPK1-siRNA组细胞增殖吸光度值(0.563±0.042)低于NC-siRNA组(0.944±0.039;t=11.550,P=0.003);siRNA干扰72 h后,RIPK1-siRNA组吸光度值(0.408±0.019)低于NC-siRNA组(1.717±0.108;t=20.620,P<0.001)。与NC-siRNA组(72.000±12.120)比较,RIPK1-siRNA组(31.660±10.020)ccRCC细胞的迁移数量明显减少(t=4.442,P=0.011)。与NC-siRNA组(0.360±0.090、0.510±0.060、0.880±0.070)比较,RIPK1-siRNA组ccRCC细胞内cleaved caspase3、MLKL、RIPK3表达明显增加(0.780±0.070、1.490±0.100、1.680±0.130;t=6.380,P=0.003;t=8.656,P=0.001;t=14.150,P=0.001)。结论RIPK1是ccRCC内调控细胞增殖、死亡及迁移能力的重要基因,抑制RIPK1能够促进ccRCC发生凋亡及坏死性凋亡。

控制营养状态评分和相关炎性指标在肾透明细胞癌预后预测中的价值:一项多中心回顾性研究

目的探讨控制营养状态(CONUT)评分和相关炎性指标在肾透明细胞癌(ccRCC)患者预后预测中的价值,为临床更好地评估病情及制定个体化治疗方案提供参考。方法回顾性分析2010—2018年宜宾市4所综合性医院收治的132例ccRCC患者的病历资料和生存情况,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析CONUT评分及炎性指标中性粒细胞和淋巴细胞比值(NLR)、血小板和淋巴细胞比值(PLR)以及淋巴细胞和单核细胞比值(LMR)预测患者预后的曲线下面积和最佳截断值,Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用Log-rank检验和Cox回归分析影响预后的因素。结果患者中位随访时间62(53,71)个月,随访期内死亡37例(28.03%),疾病特异性生存期(DSS)和无进展生存时间(PFS)分别为51(41,58)个月和46(35,56)个月,患者3、5年DSS分别为84.09%和71.97%,3、5年PFS分别为75.00%和71.97%。CONUT评分、NLR、PLR以及LMR预测患者预后的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.980、0.905、0.899和0.884,最佳截断值分别为3.50分、3.19、89.07和3.56。多因素Cox回归分析显示:CONUT评分和PLR与患者DSS有关,其HR(95%CI)分别为0.042(0.013~0.140)和0.182(0.045~0.744);CONUT评分和LMR与患者PFS有关,其HR(95%CI)分别为0.029(0.010~0.086)和2.984(1.227~7.258)。结论ccRCC患者预后与机体营养、免疫和炎症状况有关,CONUT评分和炎症相关指标(PLR、LMR)可能是患者DSS和PFS的重要预测因子。

基于MRI-DWI不同指数模型构建的列线图模型对肾透明细胞癌与肾错构瘤的鉴别诊断价值

目的:基于磁共振-弥散加权成像(MRI-DWI)不同指数构建列线图模型,探讨其对肾透明细胞癌(ccRCC)与肾错构瘤的鉴别诊断价值。方法:回顾性选择医院经病理确诊的85例ccRCC或肾错构瘤患者作为建模组,其中肾错构瘤54例,ccRCC 31例;选择经病理确诊的105例ccRCC或肾错构瘤患者作为验证组,其中肾错构瘤59例,ccRCC 46例。基于建模组数据比较肾错构瘤与ccRCC组MRI-DWI不同指数模型参数,采用多因素Logistic回归分析筛选鉴别诊断ccRCC与肾错构瘤的影响因子,并建立列线图模型进行内部验证及外部验证。结果:ccRCC组MRI-DWI参数微循环灌注相关快速表观弥散系数(ADC)(Dt)、扩散异质性指数(α)值高于肾错构瘤组,表观弥散系数(ADC)值、单纯扩散相关慢速表观弥散系数值(Dp)、灌注分数(fp)、扩散分布指数(DDC)值低于肾错构瘤组(P<0.05)。经Logistic回归分析显示,Dt、α值是鉴别诊断ccRCC与肾错构瘤的危险因子(OR>1,P<0.05),ADC值、Dp、fp、DDC值是保护因子(OR<1,P<0.05)。根据以上参数建立的列线图模型在建模组与验证组C指数分别为0.941、0.903,校准曲线与理想曲线接近;ROC曲线显示,建模组与验证组的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.962(95%CI为0.921~1.000)、0.903(95%CI为0.846~0.961),敏感度分别为0.907、0.898,特异度分别为0.935、0.804,约登指数分别为0.842、0.702。结论:基于MRI-DWI不同模型参数构建的列线图模型具有良好的区分度、准确性,对ccRCC与肾错构瘤具有较高的鉴别诊断价值。

肾透明细胞癌VSIG4表达及其与免疫细胞浸润的相关性研究

目的:探究VSIG4在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达及其与免疫细胞浸润和预后的关系。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载ccRCC的RNA-seq数据和患者相应的临床数据;通过Wilcoxon秩和检验分析ccRCC及正常肾组织中VSIG4 mRNA表达水平;Wilcoxon秩和或Kruskal-Wallis秩和检验分析VSIG4表达与临床病理参数的相关性;Kaplan-Meier法分析VSIG4表达与患者预后的相关性;基因集富集分析(GSEA)探究VSIG4在ccRCC中参与的信号通路;使用R软件运行CIBERSORT算法分析VSIG4表达与肿瘤浸润免疫细胞的相关性;Western blotting检测人正常肾上皮细胞系293T和人肾癌细胞系ACHN、A-498、786-O、OS-RC-2中VSIG4蛋白表达。结果:VSIG4在ccRCC中的表达水平显著高于正常组织(P<0.05);VSIG4的表达与患者远处转移分期和淋巴结转移分期显著相关(P<0.05);生存分析显示,VSIG4高表达组患者总体生存率显著低于低表达组患者(P<0.05);GSEA富集分析结果显示,VSIG4主要在凋亡、趋化因子信号通路、细胞黏附分子等信号通路富集;VSIG4表达与M1巨噬细胞呈负相关(r<0,P<0.05),而与M2巨噬细胞呈正相关(r>0,P<0.05);免疫印迹结果表明,肾癌细胞中VSIG4蛋白表达均高于人正常肾上皮细胞系。结论:VSIG4在ccRCC中高表达,且与预后呈负相关,可能成为ccRCC患者预后的生物标志物。

染色质调节因子相关的lncRNA肾透明细胞癌预后模型的构建和验证

目的构建染色质调节因子(CR)相关长链非编码RNA(lncRNA)的肾透明细胞癌(ccRCC)预后模型,提高ccRCC的预后管理。方法从TCGA数据库下载ccRCC的转录组数据和临床数据,并通过“caret”R包将ccRCC样本以7∶3的比例分为训练集(166例)和验证集(71例)。基于“DESeq2”R包筛选出差异表达的CR及相关的lncRNA。构建CR与lncRNA的共表达网络,并筛选出相关系数|rs|>0.3且P<0.05的差异lncRNA。利用单因素Cox、Lasso和多因素逐步Cox回归分析,构建CR相关的lncRNA预后模型。计算训练集和验证集样本的风险评分,根据风险评分的中位数将ccRCC患者分为高、低风险组。K-M曲线和受试者操作特征(ROC)曲线评价模型,单因素和多因素Cox回归分析评估风险评分的独立预测性能。“DynNom”和“shiny”R包开发在线预测工具。单样本基因集富集分析探索风险评分与免疫微环境及免疫检查点的关系。结果本研究最终纳入237个肿瘤样本和72个癌旁正常组织样本,鉴定了1025个CR相关的lncRNA,最终筛选得到7个CR相关lncRNA(DUXAP8、AC026462.3、LINC01460、AL592494.1、AL353804.2、AC012462.1、AC009518.1)构建预后模型,并将其开发成在线工具(https://xzlmodelshiny.shinyapps.io/DynNomapp/)。高危组患者的生存率低于低危组(P<0.05),ROC曲线表明模型预测效能较好,单因素分析和多因素分析中风险评分的HR值分别为4.058(95%CI:2.530~6.508,P<0.001)和3.096(95%CI:1.887~5.080,P<0.001)。高风险组MDSC和Tregs细胞等免疫抑制细胞的浸润比例高于低风险组,趋化因子、免疫检查点及副炎症等通路的富集水平高于低风险组(P<0.05)。此外,风险评分与免疫检查点TNFRSF25和TNFSF14呈正相关(r>0.3,P<0.05)。结论本研究构建的CR相关的lncRNA风险模型可独立有效地预测ccRCC患者的预后。

肾透明细胞癌患者血清miR-21及miR-27b与预后的关系

目的探究肾透明细胞癌患者血清微小RNA(miR)-21及miR-27b与预后的关系。方法筛选2019年2月至2021年4月青海大学附属医院收治的118例肾透明细胞癌患者作为研究对象,另选取院内同期健康体检患者118例作为对照组,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测所有受试者血清miR-21及miR-27b表达。比较肾透明细胞癌患者及健康对照患者的血清miR-21及miR-27b相对表达量;不同病理分期、Fuhrman分级肾透明细胞癌患者的血清miR-21及miR-27b表达及相关性;血清miR-21及miR-27b表达与肾透明细胞癌患者生存预后的关系。结果肾透明细胞癌组患者的血清miR-21及miR-27b表达量均高于健康对照组(P<0.05)。Ⅲ期患者的血清miR-21表达量高于Ⅰ期(P<0.05),Ⅳ期患者的血清miR-21表达量高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期(P<0.05)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者的血清miR-27b表达量逐渐升高(P<0.05)。病理分期与血清miR-21及miR-27b表达均呈正相关(P<0.001)。Fuhrman分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级患者的血清miR-21、miR-27b表达量逐渐升高(P<0.05)。Fuhrman分级与血清miR-21及miR-27b表达均呈正相关(P<0.001)。miR-21高表达组与低表达组,miR-27b高表达组与低表达组患者的生存曲线比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论肾透明细胞癌患者的血清miR-21及miR-27b表达水平可反映患者的病情进展及预后生存情况。

肾透明细胞癌中双硫死亡核心基因SLC7A11的孟德尔随机化及生物信息学分析

目的分析溶质载体家族7成员11(SLC7A11)在肾透明细胞癌(ccRCC)发生、发展中的作用及其预后价值。方法采用两样本孟德尔随机化分析以识别与ccRCC风险存在因果关系的基因。使用来自UCSC Xena泛癌队列的RNA测序数据及临床数据分析SLC7A11的表达及预后意义。使用TCGA-KIRC数据(训练集)进行基因集富集分析(GSEA)。随后通过逐步Cox回归分析建立了基于SLC7A11的预后模型,并在E-MATB-1980队列(验证集)中进行了外部验证。结果孟德尔随机化分析显示,SLC7A11水平升高会加重ccRCC的患病风险(HR=1.27,95%CI:1.15~1.40,P<0.001)。SLC7A11在各种肿瘤中过表达,并与高T分期和较差的生存预后相关(P<0.05)。GSEA显示SLC7A11富集在增殖和转移相关通路,包括E2F和上皮-间质转化信号通路。SLC7A11预后模型在训练集(1、3、5年AUC=0.78、0.73、0.71)和验证集(1、3、5年AUC=0.70、0.71、0.72)中均显示出强大的预测性能。结论SLC7A11作为ccRCC的潜在生物标志物和治疗靶点,为精准医学提供了新视角。

基于网络药理学及分子对接技术探讨甘松-大黄-藿香配伍治疗肾透明细胞癌的作用机制

目的 通过网络药理学和分子对接技术研究甘松-大黄-藿香配伍治疗肾透明细胞癌(KIRC)的作用机制。方法 在中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)中,搜索甘松-大黄-藿香的主要活性成分和有效靶点。在GEO数据库中寻找KIRC的疾病效应靶点,建立甘松-大黄-藿香—生物活性成分—靶点网。取药物靶点和疾病靶点之间的交集,并使用STRING数据库构建蛋白质的相互作用网络,以研究蛋白质-蛋白质相关作用(PPI)之间的关联。对核心靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。对主要的生物活性组分和核心蛋白进行分子对接,以判断其结合能力。结果 甘松-大黄-藿香含有186个靶点,其与KIRC疾病靶点有96个交集靶点。通过药物—活性成分—靶点网络推测甘松-大黄-藿香治疗KIRC的关键成分有槲皮素、葛花苷元、芦荟大黄素和β-谷甾醇等,PPI网络中核心靶点为TP53、CASP3、MYC、EGFR、STAT1、Bax。GO富集分析结果发现,甘松-大黄-藿香治疗KIRC的靶点在生物过程主要包括对蛋白质结合的调节、对酶结合的反应等。KEGG结果显示,甘松-大黄-藿香通过肿瘤相关信号通路和PI3K-Akt信号通路等发挥抗KIRC作用。分子对接结果显示,甘松-大黄-藿香有效成分与其治疗KIRC的核心靶点均有较好的结合活性。其中β-谷甾醇与多个核心靶点均具有较高的结合能,与Bax的结合能高达-6.28 kcal·mol^(-1)。结论 甘松-大黄-藿香可通过β-谷甾醇等主要活性成分作用于TP53、CASP3、MYC、EGFR等靶点,参与PI3KAkt等信号通路有效治疗KIRC。

基于自噬和铁死亡基因的肾透明细胞癌预后模型的建立和验证

目的:建立基于自噬和铁死亡相关基因的预后模型,并基于肾透明细胞癌(ccrCC)的自噬基因(autophagy related genes,ARGs)和铁死亡基因(ferroptosis related genes,FRGs)模型评估预后。方法:通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库中的ccRCC数据集识别与风险相关的ARGs和FRGs,进行功能富集和肿瘤分型分析,通过单变量和多变量Cox回归建立537例患者的预后风险模型。多指标ROC用于评估模型的准确性。最后使用GSE29609数据集验证。结果:共发现37个差异表达的基因。单变量和多变量Cox回归确定了8个与OS相关的风险相关基因:CASP4、PRKCQ、BNIP3、BAG1、BIRC5、CHAC1、ATG16L2、EIF4EBP1。Kaplan-Meier生存分析显示,高危组患者生存率较低,多指标ROC曲线下面积>0.75,说明模型预测准确率较高。然后基于CIBERSORT算法进行免疫细胞浸润评估。结论:基于8个ARGs和FRGs的肾透明细胞癌相关基因预后模型具有一定的准确性,可更准确地指导临床治疗。

肾透明细胞癌组织中NSUN2的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的:检测NSUN2在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的表达,分析其与临床病理特征、预后之间的关系。方法:收集ccRCC组织蜡块标本及对应的癌旁组织蜡块标本各95例,采用免疫组化法检测NSUN2在两组标本中的表达水平,分析NSUN2与ccRCC患者的临床病理特征关系。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,使用Log-rank检验进行单因素生存分析,Cox回归模型进行多因素生存分析,分析NSUN2表达与ccRCC患者预后之间的相关性。结果:NSUN2在癌组织的高表达率为69.5%,在癌旁组织中的高表达率为15.8%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。NSUN2高表达与肿瘤大小(P<0.05)、组织学分级(P<0.05)、淋巴转移(P<0.05)及临床分期有关(P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示,NSUN2表达水平与ccRCC患者预后相关(P<0.05)。Cox回归模型显示,NSUN2表达是预测ccRCC预后的独立危险因素。结论:NSUN2在ccRCC组织中高表达,且与ccRCC的临床病理特征、预后相关,可作为ccRCC预后判断的指标。

肾透明细胞癌来源的IL4I1介导PD1^(+)CD8^(+)T淋巴细胞募集的相关研究

目的:探讨肾透明细胞癌(ccRCC)来源的白细胞介素4诱导蛋白1(IL4I1)对表达PD1的CD8^(+)肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)的诱导与募集作用。方法:利用公共数据库分析ccRCC组织中IL4I1的表达与CD8^(+)T淋巴细胞浸润及免疫功能相关分子表达的关系,通过免疫组织化学法进行验证;构建过表达IL4I1蛋白的769P细胞系并验证;荧光定量PCR(qPCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测过表达IL4I1 ccRCC细胞表达趋化因子的变化。结果:高表达IL4I1的ccRCC组织中有更多的CD8^(+)T淋巴细胞浸润(P=6.843×10^(-7)),其浸润水平与IL4I1的表达水平呈正相关(r^(2)=0.5764,P<0.001);且浸润的CD8^(+)T细胞多表达抑制型分子PD1。过表达IL4I1的ccRCC 769P细胞所表达的趋化因子配体(CCL2、CCL4、CCL5、CCL17)在mRNA水平显著下调(t=95.16、116.1、21.28、68.47,均P<0.05)。同时,细胞培养上清中CCL4、CCL5浓度明显升高(t=6.760、6.846,均P<0.05)。结论:ccRCC组织中IL4I1与PD1+CD8^(+)T淋巴细胞浸润密切相关,可能通过调控趋化因子的表达,参与免疫抑制型CD8^(+)T淋巴细胞在肿瘤局部的募集。

山奈酚靶向B细胞淋巴瘤2相关蛋白A1抑制肾透明细胞癌细胞生物行为

目的 探讨山奈酚(Kaempferol)靶向B淋巴细胞瘤2相关蛋白(BCL2)A1抑制肾透明细胞癌(ccRCC)细胞的作用机制。方法 将ccRCC细胞(ACHN和769-P)分成Vector组(转染空载质粒)或Control组(正常培养)、Kaempferol组(Kaempferol处理细胞)和Kaempferol+BCL2A1组(转染BCL2A1并用Kaempferol处理)。生物信息学预测Kaempferol靶点并分析其与临床不良表型之间关系。噻唑蓝(MTT)检测不同浓度Kaempferol处理细胞的活力。CCK-8试剂盒和克隆形成检测细胞增殖能力。Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力。裸鼠移植瘤实验检测Kaempferol体内抑制细胞增殖能力。免疫组化检测增殖细胞抗原Ki67。Western印迹检测BCL2A1及上皮细胞间质转化(EMT)相关蛋白表达。结果 生物信息学数据库和软件分析显示,Kaempferol靶向BCL2A1,BCL2A1在ccRCC组织中表达上调且与临床不良表型有关。Kaempferol浓度和时间依赖性明显抑制ccRCC细胞BCL2A1蛋白表达(P<0.05)。以120或150μmol/L浓度分别作用ACHN、769-P细胞后,细胞活力明显下降(P<0.05)。以相应浓度Kaempferol作用细胞后,ccRCC细胞增殖、迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05)。Kaempferol组移植瘤体积、重量、Ki67相对表达量和BCL2A1蛋白表达明显小于Control组(P<0.05)。与Vector组相比,BCL2A1组中BCL2A1蛋白表达明显增加(P<0.05)。与Control组相比,Kaempferol组中BCL2A1蛋白表达、增殖细胞、克隆细胞、迁移和侵袭细胞数明显减少(P<0.05);与Kaempferol组相比,Kaempferol+BCL2A1组上述指标明显增多(P<0.05)。细胞经Kaempferol干预后,E-cadherin蛋白表达明显增加,N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显减少,而BCL2A1可明显逆转Kaempferol对EMT相关蛋白表达的影响(P<0.05)。结论 Kaempferol可抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力,其可能是通过靶向调节BCL2A1蛋白表达,影响EMT相关蛋白表达实现的。

肾透明细胞癌非标记定量蛋白质组学及磷酸化修饰组学分析

目的:应用非标记定量蛋白质组学分析技术,筛选与肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)发病机制相关的蛋白质,发现ccRCC新的诊疗靶点。方法:选取2017年01月至2020年12月在新疆医科大学附属肿瘤医院泌尿外科手术治疗并经术后病理证实的ccRCC及癌旁组织样本30例,利用非标记定量蛋白质组学及磷酸化修饰组学技术,分析差异表达的蛋白质及磷酸化修饰位点。生物信息学分析关键蛋白激酶、磷酸化位点以及信号通路。结果:组学联合分析策略共鉴定到2552个差异总蛋白、3024个差异表达的磷酸化位点及与之对应的1572个磷酸化蛋白。功能富集和聚类分析表明差异磷酸化蛋白主要涉及ErbB信号传导途径、VEGF信号传导通路和细胞黏附通路等重要信号通路,其中PDHK1、NDR1、NDR2及MST1可能成为新型候选标志物和药物作用靶点。结论:ccRCC与癌旁正常组织的总蛋白及磷酸化蛋白表达水平存在显著差异,有望成为肾透明细胞癌精准诊疗潜在的研究应用方向。

基于生物信息学分析ADCY1基因在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的通过生物信息学方法分析腺苷酸环化酶1(ADCY1)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达水平、临床意义及预后价值。方法基于UALCAN数据库获得数据分析ADCY1在ccRCC组织中的表达水平及与病理特征的相关性。通过GEPIA2数据库分析ADCY1在ccRCC中的预后价值。通过HPA数据库分析ADCY1的蛋白质表达水平和三维结构。基于Genecard数据库分析ADCY1的亚细胞定位。利用STRING数据库获得ADCY1相互作用蛋白,并使用R软件分析其功能富集。通过cBioPortal数据库分析ADCY1基因的突变情况。基于R语言分析ADCY1在ccRCC中的免疫细胞浸润情况。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和免疫组织化学染色初步验证ADCY1在ccRCC临床组织样本中的表达水平。结果ADCY1在ccRCC中表达降低,且与ccRCC病理分期、分级显著相关,ADCY1低表达的患者总生存率(OS)和无病生存率(RFS)低。ADCY1主要表达于细胞的质膜、细胞外、细胞核。ADCY1与吗啡成瘾、昼夜节律调节、多巴胺能突触、3′,5′-单磷酸腺苷(cAMP)信号通路密切相关。ADCY1在ccRCC中的主要突变类型为错义突变。ADCY1与ccRCC中的CD4 T细胞和巨噬细胞浸润呈正相关。验证实验结果显示,在ccRCC临床组织样本中ADCY1基因和蛋白表达相较于正常组织下降。结论ADCY1可能是ccRCC的新预后标志物和潜在临床治疗靶点。

胰腺转移性肾透明细胞癌一例

1 病例介绍。患者,女,56岁,因“体检发现胰腺占位8 d”于2022年7月21日入院。患者8 d前于当地医院体检查B超发现胰头部低回声团,考虑实质性占位。患者无腹痛腹胀,无发热、寒战,无腹泻,无恶心、呕吐等不适,当时未予特殊诊治。患者2006年因“肾透明细胞癌”于广西壮族自治区人民医院行右肾切除术,术后恢复良好,定期复查。无胰腺炎病史。近期体重无下降。专科查体:全身皮肤及巩膜无黄染,无出血点,未见肝掌,未见蜘蛛痣,可见腹部陈旧手术瘢痕,上腹部轻压痛,大小便正常。

m6A修饰相关的长链非编码RNA对肾透明细胞癌预后和免疫治疗的研究

目的探究与N6-甲基腺嘌呤(m6A)相关的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)对肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma,ccRCC)预后和免疫治疗的特征。方法通过TCGA数据库下载532例ccRCC患者组织和72例正常肾组织的转录组数据和临床特征数据,利用共表达和单因素COX回归分析筛选与预后和m6A相关的lncRNA。基于预后和m6A相关的lncRNA的表达进行聚类分析,分析两种聚类分型与免疫检查点程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4)表达的相关性。构建LASSO COX回归风险预后模型,验证其临床应用价值,利用ESTIMATE方法比较ccRCC肿瘤微环境的差异,免疫表观评分(immunophenoscore,IPS)预测ccRCC对免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitor,ICI)的敏感度。结果通过共表达和单因素COX回归分析筛选出29个与预后和m6A相关的lncRNA,大多数在ccRCC组织中表达上调,而COL18A1-AS1、AC007066.2和AC018752.1则表达下调。通过聚类分析将532例ccRCC组织样本分为cluster1组和cluster2组,cluster2组预后更差,PD-L1和CTLA4表达更高。利用LASSO COX回归算法确定8个与预后和m6A相关的lncRNA,建立ccRCC风险预后模型,该模型在不同临床特征中均有较好的预测价值。依据模型计算风险值将患者分为高风险组和低风险组。高风险组患者预后更差,富含更多免疫细胞成分,对ICI治疗更敏感。结论m6A相关的lncRNA对ccRCC患者的预后预测和免疫治疗指导具有重要意义。