肾乳头钙化斑病变检查方法的研究进展

有关肾结石的发病机制仍未有明确结论。RANDALL最先提出肾乳头钙化斑病变是肾结石的起源,推测结石在斑块上生长并脱落,最终变成有症状的尿路结石。随着科学技术的革新,多种研究方法深化了对肾乳头钙化斑病变的理解,如肾组织病理学、影像学技术、内窥镜等,但其起源和发展仍待进一步探索。

羟基磷灰石对人肾小管上皮细胞骨桥蛋白表达的影响及机制探讨

目的观察羟基磷灰石(HAP)对人肾小管上皮细胞株HK-2细胞骨桥蛋白(OPN)表达的影响,探讨HAP在肾结石形成中的作用机制。方法体外培养HK-2细胞,分为正常对照组、HAP1组、HAP2组、HAP3组及HAP4组。正常对照组在正常培养液中培养,HAP1~4组分别在正常培养液中加入200、400、600、800 ng/m L的HAP悬液。各组培养至12、24、48、72 h时,采用CCK-8法检测细胞活力。培养至24 h时,采用RT-q PCR法检测各组细胞中OPN mRNA的表达,采用Western blot法检测各组细胞中OPN蛋白的表达。结果随着HAP浓度增加,细胞存活率逐渐降低,细胞存活率与HAP的浓度呈负相关(r=-0.566 3,P<0.01)。随着HAP作用时间延长,细胞存活率逐渐降低,细胞存活率与HAP作用时间呈负相关(r=-0.796 3,P<0.01)。正常对照组、HAP1组、HAP2组、HAP3组、HAP4组OPN mRNA相对表达量分别为1.151±0.029、1.201±0.004、1.269±0.029、1.179±0.022、1.406±0.058,HAP2组、HAP4组OPN mRNA相对表达量均高于正常对照组(P均<0.05)。正常对照组、HAP1组、HAP2组、HAP3组、HAP4组OPN蛋白相对表达量分别为0.418±0.010、0.436±0.016、0.512±0.021、0.562±0.016、0.627±0.023,HAP2、HAP3、HAP4组OPN蛋白相对表达量均高于正常对照组(P均<0.05)。结论 HAP可使人肾小管上皮细胞出现损伤并上调OPN表达,可能是其参与肾结石形成的机制之一。

体外诱导人肾间质成纤维细胞成骨分化

目的：观察在体外培养条件下,使用成骨诱导培养液或不同浓度钙离子诱导人肾间质成纤维细胞发生成骨分化的效果,初步探讨肾脏Randall斑形成可能的细胞机制。方法：体外培养人肾间质成纤维细胞,实验分为5组：成骨诱导组（加成骨诱导液）、CaⅠ组（加0.5 mmol/L Ca2＋液）、CaⅡ组（加1.5 mmol/L Ca2＋液）、CaⅢ组（加2.5 mmol/L Ca2＋液）和对照组（加PBS）。各组细胞分别培养至第1、3、6、9天时,采用MTT法检测细胞活力;诱导至第9天时,用细胞钙茜素红染色液和钙钴法磷酸酶染色液对各组细胞进行染色,观察钙结节形成和碱性磷酸酶的表达情况。另外,分别采用real-time PCR和Western blot检测各组细胞不同时间点Runt相关转录因子2（Runx2）的mRNA和蛋白表达水平。结果：在1.5 mmol/L和2.5 mmol/L Ca2＋浓度条件下细胞的活力明显受抑制。细胞染色结果证实成骨诱导液组和钙离子组均可以见到典型的红色钙结节和黑色块状的硫化钴沉淀物。成骨诱导组细胞Runx2的mRNA和蛋白相对表达量（0~9 d）逐渐升高（P〈0.05）;诱导至第9天时,3个钙离子组细胞Runx2的mRNA和蛋白表达呈浓度依赖性升高（P〈0.05）。结论：在体外培养环境下,人肾成纤维细胞可以在成骨诱导培养液的刺激作用下发生成骨分化;另外,在高钙离子环境,人肾成纤维细胞也发生了类似的成骨分化。肾乳头组织中的成纤维细胞在高钙离子等因素的作用下发生成骨分化,这可能是肾脏Randall斑形成的细胞学基础。