促红细胞生成素对牦牛肾间质成纤维细胞凋亡因子表达的影响

旨在探讨促红细胞生成素(EPO)对牦牛肾间质成纤维细胞(RIFs)中凋亡因子的影响。本研究首先分别采集3头4岁龄的健康牦牛和黄牛的肾脏组织,采用免疫组织化学方法和Western blot检测牦牛和黄牛肾脏中EPO的准确分布及其表达量。同时对牦牛RIFs进行原代培养鉴定,并对其进行不同药物处理来调控RIFs中EPO表达水平,检测EPO对凋亡相关基因Bax,Bcl-2,PCNA在mRNA和蛋白表达水平的影响。免疫组化学检测结果显示,EPO在牦牛和黄牛肾脏中集合管上皮细胞、肾小管上皮细胞和小管周间质成纤维样细胞中均呈阳性表达。qRT-PCR和Western blot结果显示,EPO在牦牛肾脏中的表达量显著高于黄牛(P<0.001)。随后对生成EPO的RIFs进行原代培养并调控EPO的表达,结果表明:激活组显著升高RIFs中Bcl-2和PCNA的表达,降低Bax的表达(P<0.001)。EPO抑制组显著降低RIFs中Bcl-2、PCNA的表达,上调Bax的表达(P<0.001)。综上表明,EPO在牦牛和黄牛肾脏中集合管上皮细胞、肾小管上皮细胞和小管周间质成纤维样细胞中均呈阳性表达,牦牛肾脏中的EPO高表达能够促进RIFs中Bcl-2和PCNA的表达,并降低Bax的表达,说明EPO可以在牦牛肾脏中起到抗凋亡的作用。

低氧下牦牛、黑白花牛肾间质成纤维细胞PDK1、Smad2、Caspase3等因子表达差异研究

为了比较低氧条件下不同海拔牛种肾间质成纤维细胞(RIFs)内PDK1、Smad2、Caspase3等因子的表达差异及细胞增殖差异,并进一步探究牦牛肾脏的高原低氧适应性特点,本研究采用牦牛和黑白花牛RIFs作为研究对象,低氧(1%O2)处理后,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(WB)法检测细胞内PDK1等因子表达差异。波形蛋白(Vimentin)免疫组化染色鉴定结果显示,两种牛的原代RIFs纯度较高,可用于后续试验。低氧处理后,两种牛的RIFs内PDK1、Smad2及Caspase3的mRNA和蛋白表达均存在不同程度上调,且种属间存在显著差异(P<0.05),牦牛HIF-1α、PDK1、Smad2及Caspase3等基因表达量于24 h达到峰值,之后下调,而黑白花牛基因则随时间呈递增趋势,且牦牛RIFs低氧下增殖能力低于黑白花牛。综上所述,低氧诱导的相关转录因子表达存在差异,两种牛RIFs的增殖能力存在差异,这可能是导致低氧下黑白花牛肾纤维化程度的加深,从而产生肾源性高原疾病的原因之一。本研究为比较不同海拔牛种肾脏的低氧适应性研究提供了基础数据,为探索牦牛肾脏高原低氧适应机制提供了一定的理论依据。

miR-23b-3p调控肾间质成纤维细胞成骨样分化参与Randall斑形成的机制研究

目的探究miR-23b-3p对肾间质成纤维(hRIFs)细胞成骨样分化和Randall斑形成的影响及其可能机制。方法采用qRT-PCR技术检测草酸钙(CaOx)结石患者Randall斑组织(RP)和接受肾切除术的肾肿瘤患者正常乳头状组织(nRP)的miR-23b-3p和肌细胞特异性增强子因子2C(MEF2C)、成骨标志物人骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)的mRNA表达水平;体外分离、培养hRIFs细胞,将miR-23b-3p过表达质粒pSi-miR-23b-3p及空载质粒pSi-NC和MEF2C慢病毒过表达质粒Lv-MEF2C及空载质粒Lv-NC转染至hRIFs细胞中,并诱导细胞成骨分化14 d;ELISA法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色观察各组细胞矿化结节形成情况;qRT-PCR检测细胞中miR-23b-3p和MEF2C、OCN、OPN、Runx2 mRNA表达水平;Western blot检测细胞中MEF2C蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p与MEF2C的靶向关系。结果①与nRP组比较,RP组中miR-23b-3p低表达,而MEF2C、OCN、OPN和Runx2 mRNA高表达;②hRIFs成骨诱导14 d后,细胞中ALP活性升高,矿化结节形成能力增强,miR-23b-3p表达水平降低,而MEF2C、OCN、OPN和Runx2 mRNA表达水平及MEF2C蛋白表达水平升高;③miR-23b-3p过表达降低成骨诱导后hRIFs细胞中ALP活性,抑制细胞矿化结节形成能力,下调细胞中OCN、OPN、Runx2 mRNA表达水平;④MEF2C过表达可逆转miR-23b-3p过表达对hRIFs细胞成骨分化的抑制作用;⑤MEF2C是miR-23b-3p下游靶基因。结论miR-23b-3p在RP组织及hRIFs细胞成骨样分化过程中低表达,上调miR-23b-3p可抑制hRIFs细胞的成骨样分化,其作用机制可能与靶向沉默MEF2C有关。

PPAR-γ通过活化PTEN抑制肾间质成纤维细胞MMP2的活化

目的探讨激活的PPAR-γ是否通过活化PTEN抑制血小板源性生长因子(PDGF)刺激的肾间质成纤维细胞MMP2活化,从而介导肾间质纤维化的发生。方法以原代分离培养的小鼠肾间质成纤维细胞为研究对象,以肾间质纤维化的主要刺激因子PDGF-AA刺激细胞。于PDGF-AA刺激细胞前,分别予以罗格列酮激活PPAR-γ,PI3K、PTEN、PPAR-γ特异性抑制剂LY294002、bpV(Pic)、GW9662预处理细胞,检测AKT、PTEN、PPAR-γ、MMP2的活化水平。结果成功分离并培养小鼠肾间质成纤维细胞,并证实PDGF-AA可剂量依赖性激活MMP2,而对MMP9、TIMPs无影响。特异性抑制PI3K/AKT信号通路或激活PPAR-γ显著抑制PDGF-AA刺激的AKT、MMP2活性;抑制PTEN可逆转PPAR-γ激活对PDGF-AA诱导的AKT磷酸化及MMP2活性的影响。结论 PI3K/AKT信号通路特异性介导PDGF-AA诱导的肾间质成纤维细胞MMP2的活化;激活的PPAR-γ通过活化PTEN抑制PI3K/AKT信号通路进而抑制MMP2活化。

银杏叶提取物对肾间质成纤维细胞中糖基化终产物诱导的血管生成素及其受体表达的影响

目的:观察糖基化终末产物(AGEs)对肾间质成纤维细胞中血管新生关键调节因子血管生成素(Ang)1、2及其受体酪氨酸激酶受体2(Tie-2)表达的影响,探讨其可能的机制以及抗氧化剂银杏叶提取物(EGb)的干预作用。方法:选择正常大鼠肾间质成纤维细胞系(NRK-49F)为研究对象,以低糖DMEM培养液培养细胞作对照,分别用含AGEs(400mg/L)和高糖(25mmol/L)的DMEM培养液体外培养24h,用抗氧化剂EGb(100mg/L)预处理后再分别加入AGEs和高糖继续培养。采用实时定量PCR检测Ang-1、Ang-2、Tie-2,核因子κB(NF-κB)及其抑制物(I-κB)mRNA表达水平,Westernblot检测蛋白表达水平。二乙酰二氯荧光素(DCFH)染色后荧光倒置显微镜及流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果:与对照组相比,AGEs和高糖组细胞内ROS水平明显升高;且Ang-1及NF-κBmRNA和蛋白表达显著增高,I-κBmRNA和蛋白表达显著下降,Ang-2和Tie-2表达则无明显变化。EGb预处理后可降低细胞内ROS水平及Ang-1和NF-κB表达水平,提高I-κB表达水平,而对Ang-2和Tie-2表达无影响。结论:AGEs可通过增强细胞内氧化应激,抑制I-κB表达而激活NF-κB,上调Ang-1表达,参与糖尿病肾病(DN)血管新生的调控。EGb可通过减少氧化应激,上调I-κB表达,抑制NF-κB途径而下调Ang-1表达,在防治DN方面有良好的应用前景。

复方鳖甲软肝片方对TGF-β_1诱导的肾间质成纤维细胞增殖及分泌细胞外基质的影响

目的:观察中药"复方鳖甲软肝片方"对TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞(NRK-49F)增殖及分泌细胞外基质的影响。方法:以2 ng/ml hTGF-β1诱导NRK-49F细胞,并以软肝片方大、中、小剂量(分别以7g/kg、3.5 g/kg、1.75 g/kg)药物血清进行干预,分别应用MTT法、ELISA、免疫细胞化学方法,观察肾间质成纤维细胞增殖、细胞上清FN浓度及ColⅠ、ColⅢ的表达。结果:软肝方含药血清对hTGF-β1诱导的细胞增殖无影响;但大、中剂量软肝方能不同程度地降低FN的分泌及ColⅠ、ColⅢ的表达,软肝方大剂量组作用最强(P<0.01)。结论:复方鳖甲软肝片方在一定程度上抑制TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞ColⅠ或ColⅢ的表达,大剂量软肝方作用最强。

蛋白酶体抑制剂对肾间质成纤维细胞凋亡和增殖的影响

目的：探讨泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）及其在转化生长因子β1（TGF-β1）诱导下的细胞凋亡和增殖情况，并初步探索其机制。方法：采用5ng／ml的TGF-β1作用于NRK-49F，不同浓度（0～5μM）的蛋白酶体抑制剂MG-132预处理NRK-49F细胞，应用MTT法检测其增殖情况，LDH法检测细胞毒性，应用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率，Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态学变化，Westernblot检测p-IKβ1IKB蛋白的变化。结果：TGF-Bl（5ng／m1）能促进NRK-49F的增殖（0．661±0．04猫0．495±0．06），MG-132（O．25—5μM）呈剂量依赖型抑制这种效应；MG-132（0．1—5μM）对NRK-49F有一定的细胞毒性作用，在0．5μM时达高峰；TGF-β1单独不能促使NRK-49F的凋亡[（3．8±0．4）％摊（4．7±1．6）％]，但加用MG．132（0．1—2．5μM）干预后呈剂量依赖关系促进细胞凋亡，MG-132单独也有促进细胞凋亡作用；MG-132（0～1斗M）作用于TGF-β1诱导的NRK-49F后，其S期比例呈剂量依赖关系显著减少，G1期细胞比例增加；Hoechst33258染色显示MG．132（0．5μM）＋TGF-β1组及MG-132组细胞核均出现核固缩、核碎裂、凋亡小体等凋亡特异形态学改变；Westernblot结果显示，TGF-β1及MG-132（2．5μM）＋TGF-β1均能以时间依赖方式诱导p-IKB、IKB蛋白表达增加，且MG-132能上调TGF-β1诱导下的p-Iκβ, IκB蛋白表达。结论：泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对正常及病理状态下的NRK-49F都有促凋亡作用，并可能通过G1期阻滞过程来抑制其增殖作用。其机制可能与MG-132阻断IKB蛋白的泛素化降解有关。

来氟米特抑制结缔组织生长因子诱导的肾间质成纤维细胞增殖和胶原合成的研究

目的探讨来氟米特(LEF)对人肾间质成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法在体外培养的人肾间质成纤维细胞中,加入不同浓度来氟米特活性代谢产物A771726和重组人结缔组织生长因子(rhCT-GF),MTT法测定两者单独及同时干预下细胞增殖情况;ELISA法测定细胞合成I、IV型胶原的含量。结果经不同浓度的rhCTGF刺激,成纤维细胞增殖和细胞合呈I型、IV型胶原均成剂量依赖性增加(P<0.01);而来氟米特作用细胞后,细胞增殖及胶原合成均呈剂量依赖性减少(P<0.01);在来氟米特与结缔组织生长因子(CTGF)共同作用下,细胞的增殖和胶原的合成较单用同剂量的CTGF时减少(P<0.05)。结论rhCTGF能够促进人肾间质成纤维细胞的增殖及I、IV型胶原合成;来氟米特则抑制细胞的增殖及细胞合成I、IV型胶原;来氟米特对rhCTGF诱导的胶原合成增加有一定的拮抗作用。

益肾软坚散含药血清拮抗马兜铃酸对人肾间质成纤维细胞的作用

目的研究益肾软坚散含药血清能否干预马兜铃酸 (aristolochicacid ,AA)对人肾间质成纤维细胞 (humanrenalinterstitialfibroblasts,hRIFs)的致细胞外基质 (excellularmatrix ,ECM )蓄积效应。方法用马兜铃酸钠盐 (AA Na ,4 0 μg/ml)加或不加 10 %大鼠含药血清与hRIFs孵育 ,而后检测hRIFs对转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor β1,TGF β1)、结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor,CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物 1(plasminogenactivatorinhibitor 1,PAI 1)、金属蛋白酶组织抑制物 1(tissueinhibitorofmetalloproteinase 1,TIMP 1)和Ⅰ型胶原 (typeⅠCollagen ,ColⅠ )的mRNA(RT PCR方法 )和蛋白质表达(ELISA或Westernblot方法 )。结果大鼠含药血清能显著下调AA Na刺激后hRIFs对TGF β1、CTGF、TIMP 1和ColⅠmRNA及蛋白质高表达 (P <0 .0 5 ) ,但不影响PAI 1mRNA及蛋白质高表达 (P >0 .0 5 )。结论益肾软坚散含药血清可通过下调hRIFs促ECM合成因子及抗ECM降解因子的表达 。

TGF-β_1对诱导肾间质成纤维细胞活化并表达MMP-9及TIMP-1的影响

目的 研究转化生长因子-β 1 （transforming growth factor beta-1 ，TGF-β 1 ） 诱导的肾间质成纤维细胞（NRK-49F） 发生表型转化时基质金属降解酶MMP-9 及其抑制因子TIMP-1 表达的变化及对分泌纤维连接蛋白（fibronectin，FN） 的影响。 方法 以不同浓度hTGF-β 1 （0 ng/ml 、0.5 ng/ml、1 ng/ml、2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml） 刺激NRK-49F 细胞48 h，分别应用ELISA法检测细胞上清FN 的浓度，免疫荧光检测细胞表型标记物α-SMA、Vimentin 的表达，Western blot、Northern blotting 方法检测MMP-9、TIMP-1 的基因及蛋白质表达。 结果 0.5 ～ 10 ng/ml TGF- β 1 随刺激浓度增高NRK-49F 细胞表达α-SMA明显增多、Vimentin 明显减少，细胞上清中FN 的含量显著增加（P ＜ 0.05 或P ＜ 0.01） ；同时，TGF-β 1 浓度＞ 2 ng/ml 时显著上调TIMP-1 mRNA 及蛋白表达水平（P ＜ 0.05 或P ＜ 0.01） ；以上效应均呈浓度依赖性，但对细胞MMP-9 mRNA 及蛋白表达无明显影响（P ＞ 0.05）。 结论 TGF- β 1 能诱导肾间质成纤维细胞活化，使FN 的分泌增多，该作用可能与TGF-β 1 上调了TIMP-1 基因及蛋白质水平，进而减少细胞外基质（extracellular matrix，ECM） 的降解有关。

白血病抑制因子对肾间质成纤维细胞活化的影响

目的研究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)对肾间质成纤维细胞活化的干预作用。方法体外培养正常大鼠肾脏成纤维细胞,分对照组、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)处理组及TGF-β1和LIF共处理组,电镜下观察细胞形态变化,通过RT-PCR及Western blot检测肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)表达的改变,双抗体夹心ABC-ELISA检测细胞上清Ⅰ型胶原。结果 TGF-β1引起成纤维细胞激活,产生形态学改变,α-SMA表达增高(P<0.01),Ⅰ型胶原产生增加(P<0.01)。与TGF-β1处理组相比,LIF干预组形态学改变不明显,LIF能干预TGF-β1引起大鼠肾间质成纤维细胞α-SMA表达和Ⅰ型胶原产生。结论 LIF可以抑制TGF-β1引起的肾间质成纤维细胞激活。

抑制P2X7受体表达对高糖诱导的肾间质成纤维细胞TGF-β1/p38MAPK信号通路的影响

目的探究抑制P2X7受体(R)表达对高糖诱导的肾间质成纤维细胞转化生长因子(TGF)-β1/p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法设计、合成P2X7R序列并制备慢病毒悬液,分离肾间质成纤维细胞,分为空白组、高糖组、过表达组、沉默组,空白组细胞使用DMEM完全培养液+5.5 mmol/L葡萄糖培养;高糖组使用DMEM完全培养液+25 mmol/L葡萄糖培养;过表达组细胞使用2 ml按照1∶1比例混合的siNC P2X7R慢病毒悬液和DMEM培养液+25 mmol/L葡萄糖培养;沉默组细胞使用2 ml按照1∶1比例所混合的siRNA P2X7R慢病毒悬液和DMEM培养液+25 mmol/L葡萄糖培养。对比4组细胞增殖、凋亡能力、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平及TGF-β1/p38MAPK信号通路因子表达量。结果沉默组细胞增殖率低于过表达组,细胞凋亡率高于过表达组,具有统计学差异(P<0.05)。沉默组MDA水平低于过表达组,SOD水平高于过表达组,具有统计学差异(P<0.05)。沉默组TGF-β1、p38MAPK、Caspase-3 mRNA表达量均低于过表达组,具有统计学差异(P<0.05)。结论抑制P2X7受体表达可经影响高糖诱导的肾间质成纤维细胞TGF-β1/p38MAPK信号通路,抑制氧化应激及增殖,促进凋亡,进而减轻肾损伤。

转化生长因子β1诱导肾间质成纤维细胞表型转化及其对结缔组织生长因子基因表达的影响

目的 研究转化生长因子β1（transforming growth factor beta-1,TGF-β1）诱导大鼠正常肾间质成纤维细胞（NRK-49F）表型转化过程中结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）基因表达的变化.方法 以不同浓度的TGF-β1（0、0.5、1、2、5、10 ng/ml）刺激NRK-49F细胞,分别应用MTT比色法、Western Blot、Northern Blot方法,检测TGF-β1刺激后肾间质成纤维细胞的增殖、Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRAN的表达、细胞表型标志物α-SMA mRNA及蛋白质表达、CTGFmRNA的表达变化.结果 1 ng/ml浓度以上TGF-β1能显著促进NRK-49F细胞增殖,上调Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达水平,诱导肌成纤维细胞表型标志α-SMA mRNA及蛋白质的表达,显著上调CTGF mRNA的表达水平（P＜0.01或P＜0.05）;以上效应均呈浓度依赖性.同时CTGF mRNA表达水平的增高与细胞表型转化的程度相一致.结论 TGF β1能诱导肾间质成纤维细胞发生表型转化,并促进了细胞增殖及细胞外基质的合成;该效应与TGF β1显著上调CTGF的基因表达一致.

保肾片诱导大鼠肾间质成纤维细胞凋亡的实验研究

采用血清药理学方法 ,通过保肾片对大鼠肾间质成纤维细胞的作用研究 ,探讨中药保肾片治疗、延缓慢性肾功能衰竭进展的作用机理。目的 :研究中药保肾片对大鼠肾间质成纤维细胞是否具有诱导凋亡作用。方法 :取SD大鼠肾间质成纤维细胞进行体外培养 ,采用血清药理学方法 ,取含药大鼠血清加入体外培养的细胞中 ,应用倒置显微镜、光镜、透射电镜及流式细胞仪等仪器观察研究保肾片对大鼠肾脏肾间质成纤维细胞的诱导凋亡作用。结果 :与正常大鼠血清对照组相比 ,含药大鼠血清能诱导成纤维细胞发生凋亡。结论 :保肾片延缓慢性肾衰进展的作用机理之一与诱导肾间质成纤维细胞发生凋亡有关。

PDGF-BB对人肾间质成纤维细胞CD44表达的影响

目的探讨血小板衍化生长因于一BB（PDGF-BB）与肾间质成纤维细胞的相互作用。方法应用人际间质成纤维细胞体外培养，以MTT比色法和RT-PCR方法观察PDGF-BB对人肾间质成纤维细胞的增殖作用和CD44mRNA表达的影响。结票PDGF-BB可促进人野间质成纤维细胞的增殖，与PDGF-BB的浓度呈正相关；PDGF-BB可上调人肾间质成纤维细胞CD44mRNA的表达，呈一定的剂量和时间依赖效应。结论PDGF-BB与肾间质成纤维细胞的相互作用在肾间质纤维化中可能起重要作用。

AT2R转染表达抑制人肾间质成纤维细胞迁移活性

目的 探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 2型受体 (AT2R)基因表达对人肾间质成纤维细胞 (hRIF)迁移活性的影响。方法 构建带AT2R基因的重组复制型腺病毒载体 (AdCMV -AT2R) ,转染培养的hRIF ,用流式细胞仪检测AT2R细胞表达率 ,RT -PCR方法检测AT2RmRNA表达。用改良Boyden’s趋化小室和激光共聚焦显微镜检测hRIF迁移活性。结果 构建的AdCMV -AT2R转染培养hRIF表达率为 90 6%。改良Boyden’s趋化小室检测表明 ,迁移细胞数抑制比例最高可达 62 2 % (P <0 0 1) ,激光共聚焦显微镜检测表明 ,转染组F -actin表达明显受抑制。结论 AT2R转染表达可显著抑制hRIF迁移活性 。

补体C5a及受体对人肾间质成纤维细胞增殖的影响及机制研究

目的探讨补体C5a及受体(C5aR)对人肾间质成纤维细胞(human renal interstitial fibroblasts,hRIFs)增殖及纤维化相关因子表达的影响。方法原代培养hRIFs细胞,对细胞进行鉴定后,检测C5aR表达情况;同用C5a和C5aR拮抗剂分别对hRIFs处理后检测细胞增殖、细胞外基质蛋白(fibronectin,Collagen-I)以及转化生长因子-β1(TGF-β1)的蛋白表达情况。结果hRIFs细胞vimentin蛋白表达阳性,desmin蛋白表达阴性,C5aR表达于hRIFs细胞表面。MTS实验结果显示:与对照组相比,C5a纯品(浓度分别为10,15,20nmol/L)刺激后第2h,8h的A值差异无统计学意义(P>0.05),刺激后第24h的A值(0.217±0.037 vs 0.613±0.016,0.793±0.041,0.887±0.039)显著升高,差异有统计学意义(t=4.891,4.211,8.408,均P<0.05)。与C5a纯品组相比,C5a纯品+C5aR拮抗剂组的A值明显降低(0.887±0.039 vs 0.424±0.016),差异有统计学意义(t=8.657,P<0.05)。Western-Blot结果显示,与对照组相比,补体C5a(20nmol/L)刺激后第24h,fibronectin(26091±128 vs 15400±105),Collagen-I(31229±129 vs 24823±136)以及TGF-β1(27855±161 vs 20326±152)蛋白表达水平都有明显增加,差异具有统计学意义(t=4.891,5.820,2.311,均P<0.05)。与C5a纯品组相比,C5a纯品+C5aR拮抗剂组fibronectin(22188±132 vs 26091±128),Collagen-I(27181±113 vs 31229±129)以及TGF-β1(25013±139 vs 27855±161)蛋白表达水平显著降低,差异具有统计学意义(t=2.349,1.618,3.774,均P<0.05)。结论补体C5a-C5aR相互作用可导致hRIFs细胞增殖、促纤因子TGF-β1表达升高及细胞外基质蛋白生成增加,对肾间质纤维化具有重要意义。

舒拉明对血清刺激的大鼠肾间质成纤维细胞增殖的研究

目的:肾间质成纤维细胞增殖是肾间质纤维化的重要启动机制之一,本研究将探讨舒拉明对血清刺激的大鼠肾间质成纤维细胞增殖的影响及其调控机制。方法:体外培养大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F),舒拉明以不同浓度(0,10,50,100μmol/L)处理细胞,观察细胞数目变化,显微镜拍照,MTT方法检测细胞活性变化,免疫印迹技术检测细胞周期蛋白Cyclin D1和P27的变化。结果:研究发现,舒拉明以剂量依赖性效应抑制细胞生长;MTT方法检测发现随着舒拉明剂量的加大,显著下调细胞增殖活性;通过检测细胞周期正向调控蛋白(Cyclin D1)和细胞周期负向调控蛋白(P27),证实舒拉明可剂量依赖性效应抑制Cyclin D1表达,增强细胞周期负向调控蛋白P27表达。结论:舒拉明可在体外以剂量依赖性效应抑制肾间质成纤维细胞增殖,可能与其调控细胞周期蛋白表达有关。