血红蛋白、基质金属蛋白酶-7水平与老年糖尿病肾病患者肾间质纤维化以及预后的关系分析

目的探讨血红蛋白(Hb)、基质金属蛋白酶-7(MMP-7)水平与老年糖尿病肾病患者肾间质纤维化(RIF)以及进展为终末期肾病(ESRD)的关系。方法选择2014年4月至2020年4月石家庄市第三医院肾内科收治的103例老年糖尿病肾病患者(肾病组),95例单纯糖尿病患者(糖尿病组),59例体检志愿者为对照组。所有患者均接受Hb、MMP-7、肾功能、RIF血清学指标检测,出院后随访至2022年4月,统计ESRD发生情况。Pearson分析Hb、MMP-7与肾功能、RIF血清学指标的相关性。Kaplan-Meier生存曲线分析不同Hb、MMP-7水平下糖尿病肾病患者肾脏累积存活率。单因素或多因素COX风险比例回归分析老年糖尿病肾病患者ESRD的危险因素。结果肾病组Hb、估算肾小球滤过率(eGFR)低于对照组(P<0.05),MMP-7、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、转化生长因子(TGF)-β1、TGF-α水平高于对照组(P<0.05)。肾病组Hb与eGFR呈正相关(P<0.05),与Scr、BUN、TGF-β1、TGF-α呈负相关(P<0.05),MMP-7与eGFR呈负相关,与Scr、BUN、TGF-β1、TGF-α呈正相关(P<0.05)。低Hb水平组无ESRD累积存活率低于高Hb水平组(P<0.05),高MMP-7水平组无ESRD累积存活率低于低MMP-7水平组(P<0.05)。多因素COX回归分析结果显示TGF-β1、TGF-α、MMP-7是糖尿病肾病患者ESRD的危险因素(P<0.05),Hb、eGFR是糖尿病肾病患者ESRD保护因素(P<0.05)。结论老年糖尿病肾病患者Hb水平降低,血清MMP-7水平增高,且与肾功能下降、RIF以及ESRD发生有关。

α-平滑肌肌动蛋白和E-钙依赖性黏附素在肾间质纤维化大鼠肾组织中的表达

目的:检测单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾间质纤维化模型肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙依赖性黏附素(E-Cad)表达的动态变化,并观察比较在肾小管间质纤维化不同阶段的病理变化。方法:采用54只雄性健康SD大鼠随机分为正常组、假手术组和模型组,模型组行左侧输尿管结扎术,正常组21 d处死6只动物,假手术组和UUO组分别于术后3、7、14、21 d各处死6只动物,共48只,取肾组织常规行HE染色、六胺银染色光镜下观察,取肾皮质电镜下观察病变情况。采用蛋白印迹法检测肾组织α-SMA、E-Cad蛋白表达。结果:(1)随着造模时间的延长,肾小管间质纤维化逐渐加重,UUO术后21 d的肾小管扩张与萎缩均明显,肾间质有大量的纤维化组织出现。(2)与假手术组相比,模型组肾组织α-SMA于术后第3 d即表达增加,并随梗阻时间延长表达逐渐增加,至UUO术后21 d达高峰。21 d模型组与假手术组比较,有显著差异(P<0.01)。(3)而E-Cad蛋白于术后第3 d即表达降低,并随梗阻时间延长逐渐降低。结论:在UUO阻塞性肾病中,α-SMA蛋白表达呈时间依赖性上调,而E-Cad蛋白表达呈时间依赖性下调,提示在阻塞性肾病中,肌纤维母细胞的活化是一个动态的过程,可能与肾小管上皮细胞转分化有关。

整合素连接激酶和α-平滑肌肌动蛋白的表达与肾间质纤维化关系的研究

目的探讨整合素连接激酶(ILK)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与肾间质纤维化(RIF)的关系。方法选取原发性肾小球肾炎患者肾活检标本88例,根据光镜下肾小管间质的病变程度分组。采用免疫组化方法检测各组标本ILK、α-SMA的表达,并将ILK、α-SMA的表达与肾间质纤维化程度进行相关性分析。结果ILK主要表达于病变肾小管上皮细胞,并且随肾间质病变的加重表达量增加,范围增大。肾小管间质中ILK表达量与RIF病变程度呈正相关;α-SMA表达主要见于纤维化间质,其表达与RIF程度呈正相关。结论随着肾小管间质病变程度的加重,ILK、α-SMA的表达逐渐增加,ILK可能参与了RIF的进程。

百令胶囊对肾小管间质纤维化大鼠肾脏α-平滑肌肌动蛋白表达的影响及意义

目的观察百令胶囊对肾小管间质纤维化大鼠肾脏α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscleactin,α-SMA)表达的影响,探讨百令胶囊肾脏保护作用的可能机制。方法雄性3个月龄SD大鼠90只,随机分为:对照组(30只),模型组(30只),预防组(30只),以腺嘌呤灌胃法建立大鼠肾小管间质纤维化模型,预防组加以1.5 g/(kg.d)百令胶囊溶于生理盐水灌胃以预防肾小管间质纤维化;对照组以等体积的2%淀粉溶液和生理盐水灌胃。分别于实验第7、12、17周时随机处死10只大鼠,进行血肌酐(creatinine,Cr)、尿素氮(blood urea nitrogen BUN),24 h尿蛋白定量和尿N乙-酰-β-D氨-基葡萄糖苷(N-a-cetylβ--D-glucosam inidase,NAG)酶检测,光镜下观察肾组织的病理变化及免疫组织化学法检测肾脏转化生长因子-β1(transform ing growth factor-beta1,TGFβ-1)、α-SMA的表达情况。结果①功能学变化:与对照组比较,各时相点模型组、预防组大鼠尿蛋白、尿NAG酶、血Cr及血BUN均升高(P<0.01),但预防组低于模型组(P<0.01);模型组、预防组自身对照各指标均较前一时相点升高(P<0.01)。②病理学变化:7周时模型组、预防组即有肾小管间质损害;模型组、预防组自身对照肾小管间质损害均较前一时相点加重(P<0.01),但7、12周时预防组肾小管间质损害均较模型组为轻(P<0.01),17周时两组间差异无统计学意义(P=0.670)。③免疫组化:各时相点模型组、预防组大鼠肾脏TGFβ-1、α-SMA的表达均高于对照组(P<0.01),但预防组均低于模型组(P<0.01),模型组、预防组自身对照均较前一时相点升高(P<0.01),17周时表达量最高。结论百令胶囊可能通过抑制α-SMA,在肾小管间质纤维化早期应用时起到保护作用。

α-平滑肌肌动蛋白在大鼠肾小管间质纤维化中的表达及意义

目的探讨α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在大鼠肾小管间质纤维化过程中的表达及意义。方法雄性3月龄SD大鼠60只,随机分为对照组和模型组各30只,以腺嘌呤灌胃法建立大鼠肾小管间质纤维化模型,对照组以等体积20g/L淀粉溶液灌胃,分别于实验第7、12、17周时随机处死10只大鼠,进行血Cr、BUN、24h尿蛋白定量和尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)检测,光镜下观察肾组织病理变化及免疫组织化学法检测肾脏转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-SMA表达情况。结果与对照组比较,模型组各时相点大鼠尿蛋白、尿NAG、血Cr、BUN均升高(Pa<0.01);7周时模型组即有肾小管间质损害,随病程进展,肾小管间质损害逐渐加重;肾脏α-SMA表达明显增多。结论α-SMA表达增多促进肾小管间质纤维化发生。

延肾口服液对肾间质纤维化大鼠肾组织转化生长因子-β和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的探讨延肾口服液对肾间质纤维化（RIF）大鼠的影响及可能的作用机制。方法将75只SD雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组和模型组，采用单侧输尿管梗阻（UUO）复制RIF模型，成模大鼠再随机分为模型组、贝那普利组及延肾口服液高、低剂量组，每组15只。术前1d治疗组开始灌胃贝那普利3．5ml／d及延肾口服液2．8ml／d、1．4ml／d；假手术组、模型组给予等量生理盐水。术后8周留取血、尿标本，行血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）及尿肌酐（ucr）、尿尿素氮（UUN）和24h尿蛋白定量测定；处死大鼠取。肾组织，苏木素-伊红（HE）染色观察各组RIF程度；用免疫组化二步法和半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定转化生长因子-β（TGF—β）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的蛋白和mRNA表达。结果①光镜下观察，模型组肾管上皮细胞呈现不同程度的萎缩、变性及坏死，小管周围肾间质间隙增宽；贝那普利组和延肾口服液高、低剂量组部分肾小管轻度扩张，病变程度轻于模型组。②与假手术组比较，模型组UUN、UCr、BUN及TGF-β、α-SMA的蛋白和mRNA表达均明显升高（均P〈0．01）；与模型组比较，贝那普利组及延肾口服液高、低剂量组TGF-β、α—SMA蛋白和mRNA[吸光度（A）值]表达均显著减少，以延肾口服液高剂量组减少更显著（TGF-β蛋白：0．72±0．24比1．78±0．33，α-SMA蛋白：0．87±0．55比1．59±0．44；TGF—BmRNA：1．68±0．53比3．14±0．44，α-SMAmRNA：1．66±0．14比3．41±0．10，均P〈O．01）；贝那普利组和延肾口服液高、低剂量组UUN（mmol／L）、UCr（p．mol／L）、BUN（mmol／L）均明显降低（P〈0．05或P〈O．01），以延肾口服液高剂量组降低更显著（UUN：0．56±0．19比1．34±0．22，UCr：2788．00±178．98比3652．75±188．26，BUN：7．25±0．47比16．30±0．47，均P〈0．01），延肾口服液高剂量组与贝那普利组相比差异无统计学意义（均P〉0．05），SCr及24h尿蛋白定量在各组间比较差异均无统计学意义（均P〉O．05）。结论延肾口服液延缓UUO模型大鼠RIF的作用与其抑制TGF-β和α—SMA表达有关，其疗效与贝那普利组相似，并表现出明显的量效关系。

博莱霉素诱导α平滑肌肌动蛋白Cre重组酶转基因小鼠肺纤维化上皮细胞-间质转分化的研究

目的探讨在博莱霉素诱导的肺纤维化中是否发生了上皮细胞-间质转分化(EMT)现象,支气管上皮细胞是否参与了这一过程。方法采用α平滑肌肌动蛋白Cre重组酶转基因小鼠(α-SMA-Cre/R26R双转基因鼠)为实验动物,构建博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化模型,进行组织X-gal染色和α平滑肌肌动蛋白免疫荧光检测。结果气管内灌注博莱霉素的转基因小鼠支气管上皮下部分X-gal蓝染明显增多,终末小气道周围和肺血管壁蓝染细胞出现或增多,部分地区出现了支气管周围肺泡上皮细胞(ACE)阳性蓝染和浸润。结论在博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠模型中可以观察到EMT现象,气道上皮细胞和肺泡上皮细胞能向间充质细胞转化,参与肺纤维化病理过程。

基于Wnt/β-catenin信号通路探索芪蛭通络方对糖尿病肾病大鼠肾间质纤维化的作用机制

目的:基于Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路探讨芪蛭通络方对糖尿病肾病(DKD)大鼠肾间质纤维化的作用机制。方法:SD大鼠予高糖高脂饲料及腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作DKD模型,取50只造模成功的大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组(每日14 mg/kg)和芪蛭通络方低、中、高剂量组(每日1.215 g/kg、2.430 g/kg、4.860 g/kg),每组10只。同时取10只SD大鼠予普通饲料和腹腔注射柠檬酸缓冲液,作为正常组。造模成功后,各给药组每日予相应药物灌胃,正常组和模型组每日灌胃等体积蒸馏水,各组均连续灌胃8周。收集处死前1 d各组大鼠24 h尿液,检测24 h尿蛋白定量(24 h-UTP);处死前尾静脉取血,测血糖(GLU);末次给药后5 h,各组大鼠予异氟烷吸入麻醉,腹主动脉取血,分离血清测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);取双肾,采用苏木素-伊红(HE)染色法、马松(Masson)染色法观察各组大鼠肾脏组织病理变化;分别采用免疫组化(IHC)法、蛋白免疫印迹(Westernblot)法检测各组大鼠肾组织Wnt1、β-catenin、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达。结果:模型组大鼠GLU、Scr、BUN、24 h-UTP水平均明显高于正常组(P<0.01),各给药组大鼠上述指标均明显低于模型组(P<0.01),芪蛭通络方高剂量组上述指标均明显低于厄贝沙坦组(P<0.01),芪蛭通络方对上述指标的改善作用表现出一定的剂量依赖性。病理图片显示,模型组大鼠肾小球结构遭到破坏,炎性改变明显,肾小管扩张,肾间质纤维化明显,肾组织蓝色胶原分泌增多且伴病理损伤;各给药组大鼠肾组织病理改变均有不同程度的改善,以芪蛭通络方高剂量组改善最为显著。免疫组化法及蛋白免疫印迹法结果显示,模型组大鼠Wnt1、β-catenin、CTGF、GSK-3β蛋白表达均明显高于正常组(P<0.01);各给药组大鼠上述蛋白表达均明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。免疫组化法结果显示,芪蛭通络方高剂量组上述蛋白表达均明显低于厄贝沙坦组(P<0.05,P<0.01);蛋白免疫印迹法结果显示,芪蛭通络方高剂量组Wnt1、GSK-3β蛋白表达明显低于厄贝沙坦组(P<0.05,P<0.01),β-catenin、CTGF蛋白表达与厄贝沙坦组比较差异无统计学意义(P>0.05)。芪蛭通络方对上述蛋白的表达表现出一定的剂量依赖性。结论:芪蛭通络方可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活,在一定程度上延缓肾间质纤维化,从而起到保护肾功能的作用。

α平滑肌肌动蛋白和转化生长因子β_1在小管间质纤维化模型大鼠肾组织中的表达

目的 探讨肾小管上皮细胞 -肌纤维母细胞表型转化在肾间质纤维化形成中的作用。 方法 制备大鼠单侧输尿管梗阻模型 ,在光学显微镜下观察大鼠肾组织病理变化 ,采用免疫组化法检测肾组织中α平滑肌肌动蛋白 (α -SMA)和转化生长因子β1(TGF- β1)的表达 ,并采用计算机图像软件进行定量分析。结果 肾脏病理检查显示形态学改变符合肾小管间质纤维化的病理变化 ;在输尿管梗阻14、28d后肾组织α -SMA和TGF - β1表达较对照组增加 (P<0.05)。 结论 α -SMA可作为肾小管上皮细胞 -肌纤维母细胞表型转化的重要标志物 ,TGF- β1 可能参与了肾小管上皮细胞 -肌纤维母细胞表型转化 ,且是进一步导致肾间质纤维化的重要因素。

复方α-酮酸联合羟苯磺酸钙治疗糖尿病肾病患者肾间质纤维化的疗效

目的观察复方α-酮酸联合羟苯磺酸钙对糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)患者肾间质纤维化指标及血清超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)、血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA)的影响。方法选取94例DKD患者,用随机数字表法均分为2组,对照组予以羟苯磺酸钙,观察组在对照组治疗的基础上联合使用复方α-酮酸,检测治疗前后血糖指标[餐后2 h血糖(2-hour postprandial plasma glucose,2 hPG)及空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)]、肾间质纤维化指标[肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、转化生长因子β_(1)(transforming growth factorβ_(1),TGF-β_(1))、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)]、hs-CRP、SAA水平和肾功能指标[血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿白蛋白排泄率(urine albumin excretion rate,UAER)、肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)],记录不良反应的发生情况。结果经治疗,观察组2 hPG、FPG、TGF-β_(1)、VEGF及Hcy的水平均明显低于对照组(P<0.05),HGF的水平明显高于对照组(P<0.05);观察组血清hs-CRP和SAA的水平均明显低于对照组(P<0.05),Scr、BUN及UAER均明显低于对照组(P<0.05),GFR明显高于对照组(P<0.05);2组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论复方α-酮酸联合羟苯磺酸钙可更好地延缓DKD患者的肾纤维化,降低血清hs-CRP和SAA的水平,改善患者的肾功能,且安全性好。

基于巨噬细胞-肌成纤维细胞转分化的肾间质纤维化病理机制及药物干预作用

在肾间质纤维化过程中,骨髓中募集的巨噬细胞可在损伤的肾脏中直接转化为肌成纤维细胞。巨噬细胞-肌成纤维细胞转分化(MMT)是肾间质纤维化的重要病理机制之一。在MMT过程中,巨噬细胞的活化受转化生长因子-β1、Janus激酶3/信号转导及转录活化因子6、Wnt等信号通路调控,阻断这些信号通路可抑制MMT,改善肾间质纤维化。在临床及体内外实验中,针对防治肾纤维化的药物干预研究较活跃,其中某些药物的干预作用可能与巨噬细胞及MMT相关。因此,深入研究肾脏MMT的病理机制及药物干预作用可以为相关疾病的治疗提供新思路。

miR-193-5p联合Toll样受体4评估IgA肾病患者肾间质纤维化程度的价值分析

IgA肾病是一种以IgA免疫复合物在肾小球沉积引起的慢性肾脏疾病,占所有原发性肾小球疾病的30%~40%[1]。临床上诊断主要依靠肾活检和免疫病理;但是肾活检有一定的创伤性,并发症较多,而且穿刺取样不当可能造成结果不准确[2]。因此迫切需要寻找一种潜在的无创生物标志物用于IgA肾病的早期诊断。

实验性慢性肾缺血模型肾小管-间质细胞a-平滑肌肌动蛋白的表达和意义

目的:观察单侧肾动脉狭窄(RAS)大鼠模型慢性肾缺血组织中肾小管-间质a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)的表达和意义。 方法:建立Goldblatt单侧RAS大鼠模型,观察大鼠慢性缺血肾脏在90天内不同阶段的病理改变;应用免疫组化法检测肾小管-间质a-SMA及波形蛋白(vimentin)在不同时间点的表达;应用免疫荧光双标记激光共聚焦显微镜观察细胞角蛋白(cytokeratin,CK)与a-SMA在肾小管上皮细胞中的共定位情况。 结果:RAS术后第5天首先出现肾小管vimentin阳性,术后第7天肾间质可见少量的a-SMA阳性细胞并随时间递增。通过连续切片观察到,vimentin阳性的肾小管周围肾间质细胞a-SMA表达增强,并与肾小管间质纤维化程度基本一致。当慢性缺血状态持续存在时,后期(术后第45天至90天)少数损伤的肾小管上皮细胞表达a-SMA。应用免疫荧光双标记激光共聚焦显微镜观察发现,部分a-SMA阳性的肾小管上皮细胞同时表达CK,并且个别细胞还有向间质游走的趋势。 结论:在慢性肾缺血早期Vimentin阳性的肾小管上皮细胞本身可能诱导了肾间质固有细胞发生肌成纤维细胞转分化,参与肾间质纤维化的发生和发展;在慢性肾缺血后期,肾小管上皮细胞转分化可能是导致肾纤维化进行性发展的关键环节。

尿酸盐在慢性肾病并发肾间质纤维化中的作用及机制

目的探讨尿酸盐在慢性肾病并发肾间质纤维化过程中的作用及机制。方法利用0.2%腺嘌呤的饲料喂养小鼠9周,构建慢性肾病小鼠模型。造模结束后,小鼠眼眶后静脉丛采血,检测肾功能和血尿酸含量;HE染色和PAS染色分析肾脏组织病理变化;Masson染色观察肾脏纤维化程度;尿酸盐染色观察肾组织中尿酸盐沉积;Western blot和免疫组化检测目标分子的表达变化。利用不同浓度尿酸刺激原代培养小鼠肾小管上皮细胞(mRTECs)及人肾小管上皮细胞系(HKC);划痕实验观察尿酸对细胞迁移的影响。结果动物水平上,生化分析检测结果显示,模型组小鼠血清尿素氮(P=0.0064)、肌酐(P=0.0080)、血尿酸(P=0.0007)水平较对照组明显增加;HE和PAS染色结果显示,模型组小鼠出现严重肾小管损伤及炎症细胞浸润;Masson染色结果显示,模型组胶原沉积明显增加;尿酸盐染色结果显示,与对照组比较,模型组小鼠肾组织出现大量尿酸盐结晶;Western blot和免疫组化结果显示,模型组小鼠波形蛋白、平滑肌肌动蛋白和转化生长因子β1(TGF-β1)水平较对照组升高,E钙黏蛋白水平较对照组降低。细胞水平上,划痕结果显示,尿酸刺激促进肾小管上皮细胞迁移;Western blot检测结果与免疫组化一致。结论尿酸可通过促进肾小管上皮细胞分泌TGF-β1,进而促进上皮-间质细胞转分化,加速肾间质纤维化的发生。

锌指蛋白281抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞上皮间质转化和细胞外基质合成

目的探讨锌指蛋白281(ZNF281)在高糖(HG)诱导的肾小管上皮细胞(RTECs)上皮间质转化(EMT)和细胞外基质(ECM)合成中的作用及机制。方法使用HG诱导RTECs以构建糖尿病肾病模型,分为Control组、HG组和Mannitol组,使用CCK-8检测细胞增殖活力。使用小干扰RNA(siRNA)在HG诱导的RTECs中敲低ZNF281的表达水平,分为Control组、HG组、HG+ZNF281 siRNA组和HG+ZNF281 vector组。使用腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)激动剂阿卡地新(AICAR)活化AMPK,分为Control组、HG组、HG+AICAR组和HG+二甲基亚砜组。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测ZNF281、EMT和ECM合成相关指标表达水平。结果与Control组相比,HG组ZNF281、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)和Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)的蛋白和mRNA表达水平升高,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平降低;与HG组相比,HG+ZNF281 siRNA组和HG+AICAR组的EMT和ECM合成相关指标的蛋白和mRNA表达水平发生明显变化,同时HG+AICAR组ZNF281的蛋白和mRNA表达水平较HG组降低;在使用AICAR和转染ZNF281过表达质粒共处理的细胞中,AICAR+ZNF281组vimentin、α-SMA、FN、ColⅠ的表达水平较空载组升高,E-cadherin表达水平降低。结论AMPK通过负向调控ZNF281的表达水平进而抑制HG诱导的RTECs中EMT和ECM合成。

龙胆苦苷腹腔注射对单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化的改善作用及其机制

目的 探讨龙胆苦苷(GPS)对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化的改善作用及其机制。方法将25只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组、模型对照组、GPS低剂量组、GPS高剂量组、厄贝沙坦组,每组各5只。假手术组正常饲养,其余四组采用结扎单侧输尿管的方式建立UUO模型。造模成功后,GPS低、高剂量组分别给予0.1、0.2 g/kg GPS腹腔注射,厄贝沙坦组给予0.02 g/kg厄贝沙坦腹腔注射,模型组和假手术组给予等体积生理盐水腹腔注射,连续7 d。处死小鼠,取肾脏组织,采用HE染色法观察肾组织形态学变化,Masson染色法观察肾组织纤维化情况,采用Western blotting法、RT-qPCR法检测肾组织纤连蛋白(Fn)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白及mRNA表达。另取6只小鼠,随机分为模型组和干预组各3只,建立UUO模型后,干预组给予0.2 g/kg GPS腹腔注射,模型组给予等体积生理盐水腹腔注射,连续7 d。处死小鼠,取肾脏组织进行转录组测序,分析两组差异表达基因,并进行GO和KEGG通路富集,最后采用RT-qPCR法进行验证。结果 与假手术组比较,模型对照组肾小管明显扩张,肾组织大量炎性细胞浸润,肾间质大量胶原纤维沉积;与模型对照组比较,GPS低、高剂量组肾脏组织肾小管扩张、炎性细胞浸润有一定程度减轻,肾间质纤维化改善,其中GPS高剂量组改善效果更明显。与假手术组比较,模型对照组肾脏组织Fn、α-SMA蛋白及mRNA表达水平均升高;与模型对照组比较,GPS低、高剂量组肾脏组织Fn、α-SMA蛋白及mRNA表达水平均降低,且GPS高剂量组低于低剂量组(P均<0.05)。测序分析结果显示,模型组与干预组存在710个差异表达基因。GO富集分析显示,差异表达基因主要集中在细胞进程、生物调节、生物进程调控等方面;KEGG通路富集分析发现,差异表达基因涉及Ras、Rap1、PI3K/AKT、MAPK信号通路等。筛选出2个有效基因HGF、CCDC3进行验证,干预组肾组织HGF、CCDC3表达水平较模型组升高(P均<0.05),与测序结果一致。结论 GPS能够有效改善UUO小鼠肾脏纤维化,且高剂量GPS改善作用更明显;其作用机制可能与上调HGF及CCDC3表达作用于Rap1、Ras、PI3K/AKT、MAPK信号通路等生物学途径有关。

萆薢分清颗粒对单侧输尿管梗阻肾纤维化大鼠mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ蛋白表达影响研究

目的 观察萆薢分清颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化相关蛋白雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的影响,探讨萆薢分清颗粒的肾脏保护作用。方法 取60只SPF级雄性SD大鼠,从中随机取10只作为空白组,其余50只大鼠采用单侧输尿管梗阻术构建肾纤维化模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、氯沙坦组及萆薢分清高、中、低剂量组,每组10只,萆薢分清高、中、低剂量组分别给予13.12 mL/(kg·d)、6.56 mL/(kg·d)、3.28 mL/(kg·d)萆薢分清颗粒溶液灌胃,氯沙坦组给予氯沙坦2.62 mL/(kg·d)灌胃,空白组和模型组给予等量生理盐水灌胃,均1次/d,连续灌胃4周。末次灌胃结束后检测尿白蛋白与尿肌酐的比值(ACR)、24 h尿蛋白量及血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平,HE染色、Masson染色观察肾脏病理形态,免疫组化法及Western blot法分别检测大鼠肾脏组织中mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ表达情况。结果 与空白组比较,模型组大鼠ACR、24 h尿蛋白量及SCr、BUN水平均明显升高(P均<0.05);肾脏发生明显纤维化病变;肾组织中mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ阳性表达平均光密度值和蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。与模型组比较,氯沙坦组与萆薢分清高、中剂量组大鼠ACR、24 h尿蛋白量及SCr、BUN水平均明显降低(P均<0.05);肾纤维化病变较轻;肾组织中mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ阳性表达平均光密度值和蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。结论 萆薢分清颗粒可减轻单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化,保护残存肾功能,机制可能与下调mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ表达有关。

银杏叶提取物对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响及机制

目的探究银杏叶提取物(GBE)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化(RIF)的影响及机制。方法随机选取20只SD大鼠作为Sham组,54只SD大鼠UUO建模成功后随机均分为模型组、GBE组和厄贝沙坦组。观察各组大鼠肾组织病理变化,比较各组大鼠血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)水平及肾组织纤维连接蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原蛋白(Col-I)、肝细胞生长因子(HGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果与Sham组比较,其他组SCr、BUN、24 h尿蛋白、MDA、ROS水平及FN、α-SMA、Col-I、TGF-β1表达显著升高,SOD水平及HGF表达显著下降(P<0.05)。与模型组比较,GBE组和厄贝沙坦组SCr、BUN、24 h尿蛋白、MDA、ROS水平及FN、α-SMA、Col-I、TGF-β1表达显著下降,SOD水平及HGF表达显著升高(P<0.05)。GBE组SCr、BUN、24 h尿蛋白、MDA、ROS水平低于厄贝沙坦组,SOD高于厄贝沙坦组(P<0.05)。结论GBE可抑制UUO大鼠RIF发生及进展,保护肾功能,其机制可能与纠正HGF/TGF-β1平衡失调有关。

从结缔组织生长因子、α-平滑肌肌动蛋白表达观察益肾解毒汤对肾组织纤维化的影响

目的研究益肾解毒汤对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织纤维化的影响。方法将80只大鼠随机分入假手术组、模型组、益肾解毒汤组和氯沙坦钾组,每组20只。假手术组大鼠游离左侧输尿管后,不结扎,分层缝合,其余3组大鼠均行UUO模型制备。益肾解毒汤组和氯沙坦钾组分别予益肾解毒汤和对照药方1mL每日灌胃,模型组和假手术组均予0.9%氯化钠溶液1mL每日灌胃。1周为1个疗程,共观察2个疗程。分别于UUO模型制作完成后1(UUO 7d)和2周(UUO 14d),采用考马斯亮蓝法(CBB法)测定24h尿蛋白定量;采用免疫组织化学染色检测肾组织中结缔组织生长因子(CTGF)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)的表达,结果以积分光密度(IOD值)的平均值表示。结果模型组、益肾解毒汤组和氯沙坦钾组大鼠UUO 7d和UUO 14d的24h尿蛋白定量,以及CTGF和α-SMA表达均显著高于假手术组同时间(P值分别<0.05、0.01);益肾解毒汤组和氯沙坦钾组大鼠UUO 7d和UUO 14d的24h尿蛋白定量,以及CTGF、α-SMA表达均显著低于模型组同时间(P值分别<0.05、0.01);益肾解毒汤组大鼠UUO 7d和UUO 14d的24h尿蛋白定量,以及CTGF和α-SMA表达均显著低于氯沙坦钾组同时间(P值分别<0.05、0.01)。结论益肾解毒汤能降低UUO大鼠24h尿蛋白定量水平,改善肾组织病理变化,抑制大鼠肾组织中CTGF、α-SMA的过度表达,具有保护肾功能和抗肾组织纤维化的作用。

促红细胞生成素对大鼠肾间质纤维化发动蛋白-1表达影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对大鼠肾间质纤维化发动蛋白-1(Drp-1)表达的影响。方法 81只SD大鼠,分为假手术组、对照组和EPO组,每组各27只。EPO组、对照组采用单侧输尿管结扎并剪断建立肾间质纤维化模型,假手术组仅游离输尿管而不结扎和剪断;EPO组予EPO皮下注射;假手术组和对照组给予等量生理盐水皮下注射。各组于术后7、14和21 d取动脉血分离血清检测血肌酐和尿素氮水平。取梗阻侧肾组织行苏木精-伊红和Masson染色,观察肾脏病理学变化。用免疫组化方法检测肾组织Drp-1的表达。结果①EPO组各时点血清肌酐和尿素氮水平显著低于对照组(P<0.01),但高于假手术组(P<0.05)。②EPO组各时点肾组织病理改变较对照组明显减轻,肾小管间质损伤评分和肾间质纤维化相对面积均低于对照组(P均<0.05),但高于假手术组(P<0.05)。③EPO组肾组织的Drp-1表达显著低于对照组(P<0.05),但高于假手术组(P<0.05)。结论 Drp-1在大鼠肾间质纤维化肾组织中表达增加,参与肾脏纤维化过程;EPO可以通过抑制Drp-1表达,从而延缓肾间质纤维化的进展。