中药单体靶向TGF-β 1/Smad信号通路防治肾间质纤维化研究进展

肾间质纤维化(RIF)是慢性肾脏病(CKD)的主要病理学基础,是各种肾脏疾病进展至终末期肾病的最终共同途径,以细胞外基质(ECM)在肾间质中异常沉积为特征。RIF是多种信号通路相互作用的结果,其中TGF-β 1/Smad具有调控细胞增殖、分化、凋亡、自噬等作用,是RIF的主要信号转导通路。受损组织的修复再生有赖于瞬时信号通路的激活,但持续的信号激活会刺激纤维瘢痕增生并替代正常的肾单位,损伤肾功能 [1] 。目前西医对于RIF的治疗多选用RAAS阻断剂,但其在延缓CKD进展方面的有效率仅为20%左右 [2] ,这在临床上造成很大的局限性。

大黄■虫丸对大鼠肾间质纤维化及TGF-β_1表达的影响

目的:探讨大黄虫丸对腺嘌呤所致人鼠肾间质纤维化及TGF-β_1表达的影响。方法:用腺嘌呤造模,成功后随机分为模型组、中药组和西药组,另设正常组对照。两治疗组分别以大黄虫丸、氯沙坦治疗,检测治疗第3周、6周血肌酐、尿素氮,肾脏过碘酸雪夫(PAS)、Masson染色检测肾间质纤维化程度,利用免疫组化和原位杂交法观察肾脏TGF-β_1,蛋白和TGF-β_1 mRNA 的表达。结果:与模型组比较,中药组、西药组均能改善肾功能,明显减轻间质纤维化程度,同时TGF-β_1蛋白和mRNA 表达下调。中药组作用优于西药组。结论:大黄虫丸可通过下调TGF-β_1表达的作用,改善大鼠肾间质纤维化程度。

UUO模型大鼠肾间质纤维化动态进展及α-SMA、TGF-β_1和VDR表达变化

目的观察单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾小管间质纤维化动态进展,研究该病理过程中肾脏纤维化相关蛋白表达的变化。方法 32只清洁级SD大鼠随机分为假手术组(n=16)和UUO模型组(模型组,n=16)。两组大鼠分别于术后(模型组建模后)第2、5、9、14天分批(n=4)处死,留取手术侧(模型组梗阻侧)肾脏组织。分别采用HE和Masson染色、免疫组织化学染色及Western blotting等方法,评价肾小管间质纤维化损伤程度并检测肾脏组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、维生素D受体(VDR)及转化生长因子β1(TGF-β_1)等相关蛋白的表达。结果肾脏组织形态学观察显示,随着输尿管梗阻时间的延长,肾小管间质纤维化程度逐步加重。免疫组织化学染色显示,模型组大鼠建模后各时间点肾间质α-SMA和FN阳性面积百分比均显著高于假手术组(P<0.05),且随着梗阻时间的延长逐渐升高,至建模后第14天时达到高峰。Western blotting分析表明,模型组大鼠建模后各时间点α-SMA和TGF-β_1相对表达量均显著高于假手术组(P<0.05),而VDR相对表达量显著低于假手术组(P<0.05);建模后第2天,模型组大鼠肾脏组织α-SMA相对表达量已显著增加;建模后第14天,模型组α-SMA和TGF-β_1相对表达量分别增高至假手术组的12.7倍和8.8倍,而VDR相对表达量下降至假手术组的3%。结论 UUO模型大鼠建模后第14天可出现显著的肾间质纤维化;建模早期肾间质中α-SMA表达增加提示肾间质成纤维细胞的活化;VDR表达的进行性减少提示其与肾间质纤维化有关。

大鼠单侧输尿管梗阻致肾间质纤维化与TGF β_1 mRNA表达的关系

目的：探讨转化生长因子β1（TGFβ1）在单侧输尿管梗阻（UUO）所致肾间质纤维化中的作用。方法：应用原位杂交，生化分析及病理形态学观察等技术，研究UUO术后1、3、7、14、21d不同时相肾皮质中TGFβ1mRNA表达与小管间质病变、羟脯氨酸代谢的关系。结果：UUO肾组织中羟脯氨酸含量逐渐增加及间质面积增宽，伴TGFβ1mRNA表达增高。结论：TGFβ1lmRNA表达增加是UUO致肾间质纤维化的重要原因之一。

姜黄素对腺嘌呤诱发的肾间质纤维化大鼠血及尿FN、TGF-β_1、Col-Ⅳ水平的影响

目的观察姜黄素对腺嘌呤诱发肾间质纤维化大鼠血、尿纤维连接蛋白(FN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、胶原蛋白-Ⅳ(Col-Ⅳ)水平的影响。方法选择雄性Wistar大鼠84只,其中72只采用腺嘌呤混悬液连续灌胃制作腺嘌呤诱发RIF大鼠模型,将其中60只模型制作成功的大鼠随机分为5个组,分别为模型组、尿毒清组、姜黄素低剂量组、姜黄素中剂量组和姜黄素高剂量组各12只,另12只正常大鼠作为空白对照组。造模后24 d姜黄素低、中、高剂量组大鼠分别给予125、250、500 mg/(kg·d)姜黄素灌胃;尿毒清组大鼠给予尿毒清颗粒3.75 g/(kg·d)灌胃;模型组与空白对照组大鼠给予等量蒸馏水灌胃,共处理60 d。采用双抗体夹心ELISA法检测大鼠血液及尿液中FN、TGF-β1、Col-Ⅳ水平。结果模型组大鼠血、尿FN、TGF-β1、Col-Ⅳ高于空白对照组(P均<0.05),姜黄素各剂量组各指标有所下降,以高剂量组效果最佳,尿毒清组各指标也有所下降,但高于姜黄素高剂量组。结论姜黄素可能通过下调肾间质纤维化大鼠血、尿FN、TGF-β1、Col-Ⅳ水平干预肾间质纤维化,效果优于尿毒清。

冬虫夏草在肾间质纤维化大鼠模型中的作用及其对TGF-β_1、α-SMA的影响

目的:探讨冬虫夏草在肾小管间质纤维化大鼠模型中肾脏保护作用及其可能的作用机制。方法:采用单侧输尿管结扎术(UUO)致肾小管间质纤维化大鼠模型。将大鼠随机分为3组:假手术组、模型组、虫草治疗组。手术后第9d处死各组大鼠,用免疫组化半定量检测各组肾脏TGF-β1、α-SMA、Ⅳ型胶原的表达,Masson染色评定各组肾小管间质损害程度。结果:模型组TGF-β1、α-SMA、Ⅳ型胶原的表达及肾小管间质损伤指数明显高于假手术组(P<0.01),而虫草治疗组明显低于模型组(P<0.01)。结论:冬虫夏草可能通过下调TGF-β1,抑制肾小管上皮细胞、成纤维细胞转化为成肌纤维细胞防治肾小管间质纤维化。

BMP-7/Smads/TGF-β_1信号转导通路与肾间质纤维化

肾间质纤维化导致多种肾脏疾病发展至终末期肾衰竭,TGF-β1/Smads信号通路是肾脏纤维化重要的转导通路。骨形态发生蛋白7(BMP-7)不仅影响TGF-β1/Smads通路的信号转导,还与TGF-β1存在互逆作用,可多方面抵消TGF-β1的促肾纤维化作用。现就BMP-7/Smads/TGF-β1信号转导通路与肾间质纤维化的关系进行综述。

六味地黄汤调控TGF-β及Smad家族蛋白表达对肾间质纤维化的影响研究

目的探究六味地黄汤抑制肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的干预作用及机制。方法将30只SPF级SD大鼠随机均分为假手术组、模型组、阳性药物组、中药高剂量组和中药低剂量组,每组6只。除假手术组外,其余各组采用左侧输尿管结扎术制备RIF模型。造模结束后,假手术组和模型组予以蒸馏水灌胃,阳性药物组予以醋酸泼尼松片0.2 mg/kg灌胃,中药低、高剂量组分别予以六味地黄汤0.5、1 mg/kg灌胃,疗程为21 d。治疗结束后,采用HE染色法评估肾间质损伤,Masson染色法检测肾间质胶原蛋白沉积和纤维化,RT-PCR测定肾间质转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、针对半身不遂同源物2的重组母体(recombinant mothers against decapentaplegic homolog 2,Smad2)、Smad3、Smad7的mRNA表达,Western blot测定肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组的病理呈现系膜增生、间质增宽、胶原蛋白大面积沉积和明显纤维化,且TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05)。与模型组相比,阳性药物组和中药低、高剂量组的病理表现均减轻,且TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。与中药低剂量组相比,阳性药物组和中药高剂量组的TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。结论六味地黄汤能够减轻RIF大鼠的肾间质纤维化程度,且高剂量效果更佳,其机制可能与调控TGF-β及Smad家族蛋白表达有关。

黄芪山甲方对UUO模型中肾间质纤维化TGF-β_1及FN的影响

目的:探讨黄芪山甲方(HQSJ)对单侧输尿管结扎(UUO)致肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维黏连蛋白(FN)表达的影响。方法:实验采用UUO大鼠模型,将雄性SD大鼠30只随机分成5组:假手术组(Sham)、模型组(UUO)、中药组(UUOA)、西药组(UUOE)、中西药组(UUOAE)。治疗第14天检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),光镜观察肾组织病理改变,免疫组织化学法检测肾组织TGF-β1、FN的表达。结果:经过2周的处理,各组BUN及Scr与Sham组分别比较,明显上升,差异有统计学意义(P<0.05)。肾组织免疫组化观察:Sham组肾小球、肾小管、肾间质及肾血管内几乎无TGF-β1、FN表达。其他各组14天时大鼠TGF-β1、FN在肾小管、肾间质均有不同程度表达,肾小球分布相对较少,表现为黄褐色颗粒状沉积,尤其在UUO组。UUOAE组、UUOA组、UUOE组表达均较模型组轻。UUOAE组最轻、UUOA组其次、UUOE组最差,与Sham组比较,UUO组及各治疗组大鼠Scr、BUN、TGF-β1、FN表达及肾小管间质损伤评分表达差异均有统计学意义(P<0.05)。各治疗组与UUO组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。UUOAE组与UUOE组比较差异有统计学意义(P<0.05),UUOA组与UUOE组比较差异有统计学意义(P<0.05),UUOAE组与UUOA组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HQSJ可能通过下调肾组织TGF-β1、FN的表达水平,从而抑制RIF的发展,起到一定的肾脏保护作用。

益肾降浊化瘀方对肾间质纤维化大鼠肾组织HGF、TGF-β_1、CTGF表达的影响

目的:观察益肾降浊化瘀方及其拆方对肾间质纤维化大鼠肾组织中肝细胞生长因子(HGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法:采用腺嘌呤灌胃的方法建立肾间质纤维化大鼠模型,分空白组、模型组、尿毒清组、益肾降浊化瘀方组、补肾健脾组、益气活血组、化湿祛浊组。造模8周后,检测各组大鼠血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)指标;HE染色观察肾组织病理变化,Masson染色观察肾组织胶原沉积;免疫组化技术检测肾组织中HGF、TGF-β1及CTGF的表达。结果:1益肾降浊化瘀方组Scr、BUN水平明显低于补肾健脾组、益气活血组、化湿祛浊组、模型组;益肾降浊化瘀方组与尿毒清组无明显差别;2益肾降浊化瘀方组HGF表达明显高于补肾健脾组、益气活血组、化湿祛浊组、模型组;益肾降浊化瘀方组TGF-β1及CTGF表达明显低于补肾健脾组、益气活血组、化湿祛浊组、模型组;益肾降浊化瘀方组HGF、TGF-β1及CTGF表达与尿毒清组均无明显差别;3各组TP、ALB水平与空白组相比均无明显差别。结论:益肾降浊化瘀方可能通过调节HGF、TGF-β1及CTGF在肾组织的表达,减轻肾间质纤维化,从而延缓慢性肾衰竭的进展。

TGF-β_1对诱导肾间质成纤维细胞活化并表达MMP-9及TIMP-1的影响

目的 研究转化生长因子-β 1 （transforming growth factor beta-1 ，TGF-β 1 ） 诱导的肾间质成纤维细胞（NRK-49F） 发生表型转化时基质金属降解酶MMP-9 及其抑制因子TIMP-1 表达的变化及对分泌纤维连接蛋白（fibronectin，FN） 的影响。 方法 以不同浓度hTGF-β 1 （0 ng/ml 、0.5 ng/ml、1 ng/ml、2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml） 刺激NRK-49F 细胞48 h，分别应用ELISA法检测细胞上清FN 的浓度，免疫荧光检测细胞表型标记物α-SMA、Vimentin 的表达，Western blot、Northern blotting 方法检测MMP-9、TIMP-1 的基因及蛋白质表达。 结果 0.5 ～ 10 ng/ml TGF- β 1 随刺激浓度增高NRK-49F 细胞表达α-SMA明显增多、Vimentin 明显减少，细胞上清中FN 的含量显著增加（P ＜ 0.05 或P ＜ 0.01） ；同时，TGF-β 1 浓度＞ 2 ng/ml 时显著上调TIMP-1 mRNA 及蛋白表达水平（P ＜ 0.05 或P ＜ 0.01） ；以上效应均呈浓度依赖性，但对细胞MMP-9 mRNA 及蛋白表达无明显影响（P ＞ 0.05）。 结论 TGF- β 1 能诱导肾间质成纤维细胞活化，使FN 的分泌增多，该作用可能与TGF-β 1 上调了TIMP-1 基因及蛋白质水平，进而减少细胞外基质（extracellular matrix，ECM） 的降解有关。

肾清饮对肾间质纤维化大鼠Ⅰ型胶原及TGF-β_1表达的影响

目的:探讨中药复方肾清饮(SQY)对实验性大鼠肾间质纤维化的影响及其机制。方法:40只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、SQY预防组、SQY治疗组和苯那普利组,每组8只。适应性饲养1周后,除正常对照组外其余均采用腺嘌呤灌胃法建立大鼠肾间质纤维化动物模型,6周后采血分离血浆测定内皮素-1(ET-1)含量,处死大鼠,分离肾脏,应用HE及Masson染色,观察肾脏组织病理学改变,免疫组化方法检测肾组织Ⅰ型胶原(ColⅠ)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果:肾清饮及苯那普利各组可减轻肾小管-间质损害及纤维化程度;免疫组化半定量分析显示各治疗组肾脏ColⅠ、TGF-β1的表达量和血浆ET-1含量均少于模型组(P<0.05)。结论:肾清饮有防治肾间质纤维化的作用,其机制可能是通过减少肾组织ColⅠ的沉积、减少血浆ET-1含量和降低肾组织TGF-β1表达而发挥作用。

肾衰保肾胶囊对肾间质纤维化大鼠TGF-β_1及其受体mRNA表达的影响

目的:研究肾衰保肾胶囊对慢性肾衰竭大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)及其受体mRNA表达的影响,探讨该药物抗肾间质纤维化的机制。方法:建立腺嘌呤致大鼠慢性肾衰竭模型,通过免疫组化二步法、半定量RT-PCR分别检测TGF-β1及其受体mRNA的表达水平。结果:肾衰保肾胶囊明显抑制TGF-β1及其受体mRNA的表达,治疗组与模型组比较,有统计学差异(P<0.01)。结论:肾衰保肾胶囊能抑制肾间质纤维化,其机制可能是通过抑制TGF-β1及其受体mRNA的表达起作用。

TGF-β_1/p38MAPK通路在介导单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化过程中的作用

目的探讨TGF-β1/p38MAPK信号传导通路在老年单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化过程中的作用。方法将老年SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、SB203580治疗组。分别至UUO术后第3、7、14天处死,取梗阻侧肾脏,观察病理改变;采用免疫组织化学方法检测各组大鼠肾小管上皮细胞中转化生长因子(TGF)-β1、p-p38、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)的表达情况。结果与假手术组比较,模型组及治疗组TGF-β1、p-p38MAPK、α-SMA的表达显著升高(P<0.05);而与模型组相比较,治疗组TGF-β1、p-p38MAPK、α-SMA的表达显著降低(P<0.05)。TGF-β1、p-p38MAPK和α-SMA三者的表达呈正相关(TGF-β1与p38MAPK之间r1=0.745,P<0.05;p-p38MAPK与α-SMA之间r2=0.659,P<0.05;TGF-β1与α-SMA之间r3=0.770,P<0.05)。结论 TGF-β1/p38MAPK通路的激活可上调肾小管上皮细胞α-SMA的表达,促进上皮细胞转分化,并可能是调控UUO大鼠肾间质纤维化主要信号通路之一。

TGF-β_1/Smad信号转导通路对肾间质纤维化的影响

肾间质纤维化是各种慢性肾脏疾病进展为终末期肾衰竭的共同通路,以肾间质中细胞及胶原成分集聚增多、伴有肾小管萎缩或扩张、变形及肾小管和间质毛细血管的丧失为特征。

CC类趋化因子受体2、Th1/Th2细胞在IgA肾病大鼠肾间质纤维化中的表达及意义

目的检测IgA肾病大鼠肾间质纤维化中CC类趋化因子受体2(C-C motif chemokine receptor 2,CCR2)的表达和辅助性T细胞1/2(helper T cell 1/2,Th1/Th2)的含量,并观察其在肾脏纤维化中的作用。方法40只SD雄性大鼠,随机分为模型组和对照组,每组20只。采用脂多糖+改良牛血清白蛋白+四氯化碳法构建免疫球蛋白A(IgA)肾病模型。观察大鼠肾组织病理改变和IgA沉淀,计算胶原纤维占肾组织百分比,采用Katafuchi评分标准评估肾小管间质损伤程度。蛋白质印迹测定肾组织CCR2水平。双抗体夹心酶联免疫吸附法测定血清白细胞介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)水平。流式细胞术检测Th1/Th2细胞比例。结果模型组大鼠肾组织胶原纤维面积百分比和Katafuchi评分显著高于对照组(P<0.05);模型组大鼠肾组织CCR2、血清IL-4水平、Th2细胞含量及IL-4/IFN-γ比值显著高于对照组,血清IFN-γ水平、Th1细胞含量显著低于对照组(P<0.05);CCR2和IL-4水平及IL-4/IFN-γ比值与胶原纤维面积百分比、Katafuchi评分呈正相关(P<0.05);IFN-γ水平与胶原纤维面积百分比、Katafuchi评分呈负相关(P<0.05)。结论CCR2和Th1/Th2失衡参与IgA肾病大鼠肾间质纤维化发生和发展,拮抗CCR2和调节Th1/Th2平衡有可能减轻IgA肾病大鼠肾脏纤维化改变。

温肾活血化湿方对肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β_1、smad7蛋白表达的影响

目的:观察温肾活血化湿方对单侧输尿管梗阻(UUO)法致肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β1、smad7蛋白表达的影响,初步揭示该方防治肾间质纤维化的作用机制。方法:将雄性SD大鼠(120只)随机分为假手术组、UUO组、氯沙坦组和温肾活血化湿方组,每组30只。采用UUO建立大鼠肾间质纤维化模型(假手术组只分离但不结扎输尿管),于造模后第2天开始灌胃,假手术组、UUO组给予生理盐水,氯沙坦组灌胃氯沙坦(10 mg·kg-1·d-1),温肾活血化湿方组灌温肾活血化湿方(9.8 g·kg-1·d-1)。于造模后第7、14、21天留取梗阻侧肾组织HE、Masson染色,观察肾组织病理变化,免疫组化法检测肾组织TGF-β1、smad7蛋白的表达。结果:造模后第14天温肾活血化湿方较模型组明显降低尿蛋白定量(P<0.05),第21天温肾活血化湿方与模型组比较有极显著降低(P<0.05)。温肾活血化湿方组与模型组相比较TGF-β1蛋白表达明显降低(P<0.05)。温肾活血化湿方组与模型组相比较smad7蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论:温肾活血化湿方通过抑制TGF-β1,上调smad7蛋白表达,从而延缓肾间质纤维化的进程。

蛭倍煎对大鼠肾小管间质纤维化TGF-β_1表达及细胞外基质的影响

目的:探讨蛭倍煎(水蛭、五倍子)抑制肾纤维化的作用及可能机理。方法:采用大鼠单侧输尿管(UUO)梗阻术诱导肾间质纤维化动物模型,然后随机分为假手术组(A)、模型组(B)、中药组(C)、西药组(D)。中、西药组灌胃2周后,用免疫组化的方法比较各组肾组织中TGF-β1、FN、CoⅢ的表达水平。Masson染色观察肾小管间质纤维化的程度。结果:模型组、中、西药组与假手术组比较,TGF-β1、FN、CoⅢ的表达水平明显增加(P<0.05);中、西药组与模型组比较,表达水平明显减少(P<0.05),中、西药两组间表达水平无显著差异(P>0.05)。Masson染色结果与FN一致。结论:蛭倍煎通过降低转化生长因子β1的活性和减少细胞外基质的异常沉积来改善肾间质纤维化。

通络益肾方对UUO大鼠肾间质纤维化及piezo1的影响

目的探讨通络益肾方对单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾脏纤维化及压电式机械敏感离子通道组件1(piezo-type mechanosensitive ion channel component 1,piezo1)的影响。方法以UUO大鼠为模型,以通络益肾方为干预手段,以缬沙坦为阳性药,连续给药14天。观察大鼠血肌酐和尿素氮变化。采用苏木素—伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,观察大鼠肾脏病理形态学变化。采用Ⅲ型胶原免疫组化评估大鼠肾间质纤维化程度。采用CD34免疫荧光观察大鼠肾脏肾小管周毛细血管(peritubular capillary,PTC)变化。采用免疫组化、免疫蛋白印记法和转录PCR观察大鼠肾脏piezo1及其下游分子mRNA以及蛋白表达改变。结果与假手术组相比,模型组血清肌酐和尿素氮水平升高(P<0.05),与模型组相比,缬沙坦组和通络益肾方组血清肌酐(P<0.05)和尿素氮(P>0.05)较低。与假手术组相比,模型组镜下观察肾间质纤维化改变明显,PTC明显减少,piezo1表达增加,经通络益肾方和缬沙坦干预后UUO大鼠肾脏间质纤维化程度改善,PTC增多,piezo1表达减少。与假手术组相比,模型组piezo1蛋白表达显著增加(P<0.05),通络益肾方和缬沙坦干预均能降低piezo1蛋白表达(P<0.05);与假手术组相比,模型组大鼠肾组织胎盘生长因子(placental growth factor,PlGF)表达增多(P<0.05);与模型组相比,缬沙坦组和通络益肾方组PlGF表达增多(P<0.05);模型组PlGF的受体血管内皮生长因子受体1(FMS-like tyrosine kinase 1,flt1)表达较假手术组减少(P<0.05),缬沙坦组与通络益肾方组与模型组相比flt1表达水平的升高。结论通络益肾方能明显改善UUO大鼠肾间质纤维化进展,其机制可能是通过下调piezo1蛋白表达,上调ADM、PlGF及其受体flt1表达,减轻PTC损伤,起到拮抗肾间质纤维化的作用。