异叶败酱总甙片抗肿瘤作用的实验研究

目的:观察异叶败酱总甙片抗肿瘤的药效学作用。方法:按常规方法分别给小鼠腹腔接种艾氏腹水癌细胞(1×107/mL)和S180肉瘤细胞(1×107/mL),实验组给予异叶败酱总甙片的溶液,对照组给予等量生理盐水。观察异叶败酱总甙片对肿瘤的作用及对单核吞噬细胞功能的影响。结果:异叶败酱总甙片对艾氏腹水型腹水癌有较强的抑制作用,可明显降低单位体积肉瘤细胞浓度,改善腹水量;对S180肉瘤也有明显的抑制作用,肿瘤抑制率达到41.12%;可显著延长荷瘤小鼠的生命存活期,并明显提高小鼠单核吞噬细胞功能。结论:异叶败酱总甙有显著的抗肿瘤活性,具有良好的应用前景。

槲皮素二水对多柔比星抗肿瘤的增效及减毒作用研究

目的:了解槲皮素二水与多柔比星(doxorubicin,ADM)联合用药后能否增强多柔比星的抗肿瘤作用,并且观察槲皮素二水能否减低多柔比星对心脏的毒副作用。方法:增效作用采用槲皮素二水不同剂量与多柔比星联合用药,以荷动物移植性肿瘤肝癌(H22)小鼠模型观察其对小鼠生命延长率的影响,以荷动物移植性肉瘤实体型(S180)小鼠模型来观察其对抑瘤率的影响;减毒作用研究采用家兔多柔比星心肌损伤模型,观察槲皮素二水治疗后外周血心肌酶谱:肌酸激酶(CK)、CK同工酶MB亚型(CK-MB)、C-反应蛋白(CRP)、乳酸脱氢酶(LDH)和谷草转氨酶(AST)的变化。结果:增效作用显示槲皮素二水(100μg/g)合用多柔比星与模型对照组对比,能明显延长荷H22腹水瘤小鼠的生存时间,并对小鼠S180实体瘤有明显抑制作用;与单用多柔比星组对比,抑制对荷H22腹水瘤小鼠的生存时间有延长趋势,S180实体瘤作用显著增强。减毒作用显示槲皮素二水治疗组与模型对照组对比,CK、CK-MB、CR、LDH和AST均有降低,差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:槲皮素二水与多柔比星联合用药能明显增强多柔比星对小鼠H22腹水瘤和S180实体瘤的抑制作用,并对多柔比星所致家兔心肌功能损伤有明显保护作用。

扶正抑瘤颗粒抗肿瘤作用的研究

目的:探讨复方扶正抑瘤颗粒(FYK)的抑瘤作用。方法:采用体内动物实验观察FYK对H2 2 小鼠的抑瘤作用,细胞凋亡的形态学变化,TUNEL法检测凋亡细胞。结果:FYK对接种H2 2 小鼠抑瘤率分别为36 .99% (小剂量)、4 6 .5 2 % (中剂量)、5 8.2 4 % (大剂量) ;FYK各治疗组凋亡指数与模型组相比较有显著差异(P <0 .0 1)。结论:FYK有明显的抑瘤作用,可诱导H2 2 瘤细胞凋亡来发挥抑瘤效率。

黄芪注射液对糖尿病视网膜病变患者内皮细胞肿瘤坏死因子-α表达的抑制作用

目的研究中药黄芪注射液对于糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)患者血清IgG型抗内皮细胞抗体(anti-endothelial cell antibodies,AECA)刺激引起的体外培养内皮细胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响。方法建立三个浓度的抗体组及两个浓度的药物组,以离子交换层析法纯化DR患者血清IgG型AECA,作用于体外培养的脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothe-lial cell,HUVEC);同时加入中药黄芪注射液,利用对TNF-α高度敏感的WEHI 164.13细胞建立了四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethy thioazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide,MTT]法,测定各组AECA作用HUVEC后产生的TNF-α对细胞的杀伤情况,并检测黄芪对HUVEC的保护作用。结果加有黄芪的实验组中TNF-α的生成量显著低于空白对照组(P<0.05),且高浓度黄芪组低于低浓度黄芪组(P<0.05)。结论中药黄芪注射液对于DR患者血清IgG型AECA作用后引起的体外培养内皮细胞TNF-α表达具有显著抑制作用。

人参皂苷Rg3对小鼠肺腺癌多耐药的逆转作用

目的观察人参皂苷Rg3对小鼠肺腺癌多耐药的逆转作用并探讨其机制。方法 将32只接种获得性多药耐药Lewis肺癌细胞的小鼠随机分成4组:荷瘤对照组、多柔比星(ADM)组、人参皂苷Rg3组和人参皂苷Rg3联合多柔比星(ADM)组。各组予以相应干预,观察肿瘤生长情况,肿瘤接种24天处死全部小鼠,剥取皮下移植肿瘤,称瘤重,计算抑瘤率,收集移植瘤标本行免疫组织化学检测P-糖蛋白(P-glycaprotein,p-Gp)和多药耐药相关蛋白1的表达,并行RT-PCR半定量检测多药耐药基因(multidrug resistance,MDR1)mRNA、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)mRNA表达。结果 (1)各用药组肿瘤的生长受到不同程度抑制,瘤重低于对照组,其抑瘤率分别为10.5%、36.3%、56.2%,联合用药组抗瘤作用进一步增强。(2)免疫组织化学:p-Gp及MRPl蛋白质的表达具有一致性,对照组和ADM组表达较高,而人参皂苷Rg3组和联合组表达明显降低,其中对照组和ADM组比较,人参皂苷Rg3组和联合组比较,差异无统计学意义(P>0.05);而人参皂苷Rg3组和联合组与对照组和ADM组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。(3)RT-PCR:与对照组和ADM组比较,人参皂苷Rg3组和联合组MDR1 mRNA荧光强度降低,人参皂苷Rg3组、联合组同对照组及ADM组比较MDR1 mRNA相对量减小,差异均有统计学意义(P<0.01),而对照组同ADM组比较,人参皂苷Rg3组同联合组比较差异未见统计学意义,MRP1 mRNA的表达与MDR1 mRNA类似。结论 人参皂苷Rg3对小鼠肺腺癌多药耐药有逆转作用,其作用机制可能是下调MDR1 mRNA、MRP1 mRNA及其蛋白的表达。

雷帕霉素诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡中Bcl-2作用研究

目的探讨雷帕霉素(rapamycin,RAPA)体外对肝癌BEL-7402细胞生长抑制及诱导细胞凋亡中的作用及Bcl-2变化在凋亡机制中的意义。方法以5、10、20、30、40和50nmol/L不同浓度的RAPA作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化,Westernblot观察Bcl-2、Bcl-xl和bax等凋亡相关表达变化。结果RAPA可显著抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。RAPA作用肝癌细胞BEL-740248h后,在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,凋亡过程中伴有抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl表达的降低和促凋亡蛋白bax上调。结论RAPA可能通过诱导抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl表达的降低和促凋亡蛋白bax表达上调而诱导凋亡发生,抑制BEL-7402细胞的生长。

冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用研究

目的：探讨冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用。方法：以8、16、24和32μmol／L不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪检测细胞凋亡，Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。结果：16～32μmol／L的冬凌草甲素可显著抑制BEL-7402细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用48～60h后Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征。结论：冬凌草甲素能通过诱导细胞发生凋亡，抑制BEL-7402细胞的生长而发挥抗增殖作用。

低分子量聚乙烯亚胺作为转基因载体在肿瘤基因治疗中的应用

目的构建一种以4臂聚乙二醇(4arm PEG)为核心的串联小分子聚乙烯亚胺(PE I)的聚合物,并考察其在肿瘤基因治疗中的应用。方法应用N,N’-羰基二咪唑(N,N-’C arbony ld iim idazo le,CD I)和3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(N-Succ in im idy l-3-(2-pyridy ld ith io)]prop ionate,SPDP)作为化学连接试剂,合成4arm PEG-PE I2000以及4arm PEG-PE I2000-M C 11,1H-NM R进行化学表征,凝胶电泳阻滞实验观察聚合物对质粒DNA的浓缩,M TT法检测聚合物的毒性,H epG 2细胞体外转基因实验确定4arm PEG-PE I2000和4arm PEG-PE I2000-M C 11的转基因能力以及M C 11的作用。结果成功合成4arm PEG-PE I2000和4arm PEG-PE I2000-M C 11,4arm PEG-PE I2000在N/P比为3时能够成功浓缩质粒DNA,毒性低,N/P比为30的时候,在H epG 2细胞中的转基因效率是PE I2000的5倍,连接上配体M C 11后,其转基因效率可以增加1倍,游离M C 11可以有效抑制4armPEG-PE I2000-M C 11的转基因效率。结论4arm PEG-PE I2000具有低毒、高转基因效率,连接配体M C 11后,可成为一个实用的转基因载体。

熊果酸对荷肺癌裸小鼠移植瘤生长抑制及促凋亡作用研究

目的:研究熊果酸(Ursolic acid,UA)对荷肺癌裸小鼠移植瘤生长的影响并探讨其机制。方法:通过右侧腹股沟区皮下接种人非小细胞肺癌A549细胞的方法建立荷肺癌裸小鼠模型,分别腹腔注射给予不同剂量UA(5、10、20mg/(kg·d))和顺铂(2mg/(kg·d))进行干预治疗,疗程14d。观察裸小鼠生存状态和肿瘤特征;称量瘤重并计算抑瘤率;HE染色法观察肿瘤组织形态结构改变,TUNEL染色法观察肿瘤组织细胞凋亡状况,IHC法检测肿瘤组织中Caspase-3、Bax、bcl-2蛋白表达并进行半定量分析。结果:与模型组比较发现:经UA治疗14d能够明显改善荷肺癌裸小鼠饮食状况和精神状态,瘤体减小、活动度和硬度降低;较模型组,UA治疗组移植瘤组织呈现细胞皱缩、片状坏死等病变,凋亡细胞数量显著增多,瘤体重量显著减轻、抑瘤率显著升高;移植瘤组织中Caspase-3蛋白和Bax蛋白表达显著升高、bcl-2蛋白表达显著降低,Bax/bcl-2比值显著升高;UA上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论:UA具有抑制荷肺癌裸小鼠移植瘤生长的作用,作用机制可能与UA调节凋亡相关蛋白(Caspase-3、Bax、bcl-2)表达而促进肿瘤细胞凋亡有关。

蝙蝠葛提取物对人肺癌细胞系A549诱导凋亡作用的研究

目的探讨蝙蝠葛提取物对人肺癌细胞系A549诱导凋亡和抗增殖作用及其机制,为开发抗肿瘤新中药提供实验依据。方法应用MTT法测定蝙蝠葛提取物对人肺癌细胞系A549的生长抑制作用;通过倒置显微镜、光学显微镜观察肿瘤细胞凋亡的形态学变化;采用流式细胞术检测A549细胞的凋亡率;应用免疫组织化学技术检测药物处理前后凋亡相关蛋白酶caspase-3、caspase-8、caspase-9的表达。结果 (1)MTT法检测结果:蝙蝠葛提取物对人肺癌细胞系A549有明显的抑制生长的作用,且呈现出浓度的依赖性;(2)倒置显微镜观察结果:实验组肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质凝集,细胞间连接疏松,贴壁能力减弱;(3)HE染色观察结果:实验组肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质浓缩或染色质块形成,有的细胞膜起泡形成凋亡小体;(4)流式细胞术检测结果显示:蝙蝠葛提取物可以诱导A549细胞发生凋亡,加药组出现亚二倍体峰。结论 (1)蝙蝠葛提取物在体外对人肺癌细胞系A549有显著的诱导凋亡作用;(2)蝙蝠葛提取物诱导凋亡作用机制可能通过上调caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白表达,经由细胞凋亡的死亡受体和线粒体通路完成凋亡的启动和执行;(3)蝙蝠葛提取物具有显著的体外抗肿瘤作用,有望开发成一种新的抗肿瘤药物。

肿瘤耐药及其逆转策略

恶性肿瘤是当今威胁人类健康的重大疾病,肿瘤化疗是治疗恶性肿瘤最有效、最广泛应用的手段之一,但肿瘤的耐药性却严重影响了抗肿瘤药物的治疗效果。肿瘤耐药是一个复杂的,多因素的,并且不断发展变化问题,始终是肿瘤研究的热点领域。本文将对肿瘤耐药的机制及其逆转策略的研究进展作一综述。

As_2O_3对乳腺癌细胞系MDA-MB-435s作用的研究

目的:探讨不同浓度三氧化二砷(As2O3)对人乳腺癌细胞系MDA-MB-435s的生长抑制作用及其机理。方法:不同浓度As2O3作用于体外培养细胞MDA-MB-435s,采用MTT法检测细胞生长,倒置显微镜观察细胞形态,并通过DNA梯状电泳和TUNEL检测凋亡。结果:As2O3剂量依赖性抑制细胞生长;观察到典型的细胞凋亡形态学特征性改变;琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡DNA梯状条带;As2O3作用组的凋亡指数明显高于阴性对照组(P<0.05)。结论:As2O3具有抑制乳腺癌MDA-MB-435s细胞生长的作用,其机理与诱导细胞凋亡有关。

肿瘤患者外周血淋巴细胞与肿瘤细胞体外化疗药敏研究

目的 :研究肿瘤患者外周血淋巴细胞 ( peripheralbloodlymphocytes ,PBL )的体外化疗药物敏感性 ,以及与肿瘤细胞化疗药敏的相关性。方法 :采用MTT法测定了 14 2例肿瘤患者PBL及其肿瘤细胞对 17种临床常用化疗药物的敏感性。结果 :神经胶质瘤患者PBL与肿瘤细胞对15种化疗药的敏感性相关性好 ,差异无统计学意义 ,P >0 0 5 ;骨肉瘤患者PBL与肿瘤细胞对 13种化疗药的敏感性相关性好 ,差异无统计学意义 ,P >0 0 5 ;乳腺癌患者PBL和肿瘤细胞对 12种化疗药物的敏感性差异有统计学意义 ,P <0 0 5或P<0 0 1。结论 :神经胶质瘤和骨肉瘤患者PBL对化疗药物的敏感性具有良好的正相关性 。

高三尖杉酯碱对人急性髓系白血病干细胞的杀伤作用

目的:观察高三尖杉酯碱(HHT)对人急性髓系白血病(AML)干细胞的杀伤作用,探讨其分子学机制。方法:用流式细胞仪(FACS)分析AML细胞株白细胞干细胞(LSC)的表型特征,用MTT法检测HHT对具有LSC特征的KG-1细胞的生长抑制作用,用FACS观察HHT对CD34+CD38-CD96+的KG-1细胞数量的影响,Western blot法检测药物处理后Caspase途径和凋亡相关蛋白的改变。结果:KG-1和Kasumi-1细胞CD34+CD38-CD96+分别为69%和26.7%,U937细胞不表达CD96。HHT能显著抑制KG-1细胞的生长,并呈剂量依赖性(r2=0.9971,P<0.05)。48 h的半数抑制浓度为16.9 ng/ml。HHT作用KG-1细胞后,CD34+CD38-CD96+细胞的比例从63.6%下降到17.1%。HHT能显著激活Caspase-3、Caspase-9和PARP,抑制磷酸化Akt和Bcl-2的表达。结论:HHT能显著抑制人AML细胞KG-1的增殖,减少CD34+CD38-CD96+白血病干细胞数量;对Akt活性和Bcl-2的调控可能是其重要的作用机制。

苦参素诱导人食管癌Eca-109凋亡作用及机制的研究

目的:探讨苦参素诱导人食管癌Eca-109凋亡作用及其机制。方法:运用倒置显微镜和透射电子显微镜观察细胞形态变化;运用流式细胞术检测细胞凋亡及凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Bax的表达水平。结果:苦参素1 mg/mL、2 mg/mL作用24 h后,倒置显微镜和透射电子显微镜观察Eca-109细胞均出现典型的凋亡形态变化;流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性(P<0.05);Bcl-2表达量明显减少,Bax表达量明显增加,差异具有显著性(P<0.05);但细胞凋亡峰不明显。结论:苦参素对人食管癌Eca-109有诱导凋亡作用,其机制与上调Bax和下调Bcl-2表达有关。

加味六味地黄汤对大鼠佐剂性关节炎的作用及机制研究

目的:探讨加味六味地黄汤治疗佐剂性关节炎的作用及其机制。方法:制备佐剂性关节炎大鼠模型,观察加味六味地黄汤对病鼠超敏反应性炎症左、右后足跖厚度以及病鼠血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、循环免疫复合物(CIC)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。结果:加味六味地黄汤能抑制佐剂性关节炎大鼠继发性、自身免疫性足跖肿胀,疗效随疗程延长而增强,差异有高度显著性(P<0.01);能降低病鼠增高的TNF-α、CIC、MDA含量,提高其低下的SOD活性,差异均有高度显著性(P<0.01)。结论:加味六味地黄汤具有对抗大鼠佐剂性、继发性关节炎的作用,其机制与抑制自由基损伤和降低自身免疫的病理生理性反应有关。

5-氮胞苷对EBV阳性胃癌细胞系特异性去甲基作用的体外实验探讨

目的:探讨去甲基化试剂5-氮胞苷对EBV阳性胃癌细胞系的特异性去甲基作用。方法:用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和PCR-southern检测不同剂量5-氮胞苷处理前后EBV启动子的活性,并用Westernblot检测EBV相关基因的表达。结果:5-氮胞苷处理后EBV阳性胃癌细胞系中被甲基化失活的C启动子重新活化,并表达LMP1(潜伏性膜蛋白1),且呈剂量依赖性。结论:5-氮胞苷可能对EBV阳性胃癌的特异性治疗有帮助。

抑癌丸抑制小鼠移植性肿瘤肝癌H_(22)生长及对PCNA的表达影响

目的:探讨抑癌丸对小鼠移植性肿瘤肝癌H22的作用机制。方法:将带有H22小鼠分成4组,给药几天后,根据瘤重计算抑瘤率,用免疫组化SP法计算PCNA阳性细胞数。结果:以对照组为基数,大剂量组对小鼠移植性肿瘤H22有较明显抑制率(P<0.05),程度不同的PCNA阳性细胞数的表达均低于对照组。结论:抑癌丸对小鼠移植性肿瘤肝癌H22的生长具有一定的抑制作用,其机制可能与抑制增殖细胞核抗原PCNA的表达有关。

血液灌流消除肝癌化疗毒副作用的最新进展

本文综述了近年来血液灌流消除肝癌化疗毒副作用的效果及其装置(人工肝)的最新研究成果.并报告了我们的工作。