肿瘤内皮标记物1通过丝裂原活化蛋白激酶途径介导内皮细胞对血管新生及对心力衰竭心肌重塑

目的 基于肿瘤内皮标记物1(TEM1)介导的丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)途径,探讨内皮细胞对血管新生及对心力衰竭心肌重塑的作用。方法 将小鼠随机分成4组,包括假手术组、MI组、MI+sh-NC组和MI+sh-TEM1组。在心肌梗死(MI)后第7天通过免疫荧光染色检测梗死边缘区EndMT的变化,第28天通过超声心动图评估小鼠的心脏功能。小鼠主动脉内皮细胞(MAECs)分为3组:对照组、Vector组和rTEM1组。此外,用MAPK抑制剂SB203580预处理MAECs,用rTEM1处理细胞48 h。通过Western blot评估内皮细胞中EndMT和MAPKs信号通路的变化。结果 在梗死边缘区的心肌中,TEM1水平在MI后第1天轻微增加,在第7天显著达到峰值,然后在第28天降低。与Vector组相比,rTEM1组MAECs中VE-Cadherin蛋白表达显著下降(P <0.05),和α-SMA、波形蛋白蛋白水平、相对迁移距离、侵袭细胞数和形成分支数量显著增加(P <0.05)。SB203580逆转了由rTEM1诱导MAECs的这些变化。与MI组相比,MI+sh-TEM1组中的CD31+Vimentin+共染色水平显著降低(P <0.01)。在第28天,MI+sh-TEM1组小鼠的LVEF和LVFS均较MI组显著增强(P <0.05)。与MI组相比,MI+sh-TEM1组小鼠的内皮细胞中p-P38/P38和p-JNK/JNK蛋白表达降低。结论 TEM1诱导的EndMT和血管生成参与了MI诱导心肌重塑的发病机制,其作用机制与MAPKs信号通路激活有关。

肿瘤内皮标志物8同型物Ⅰ基因真核表达载体的构建及其在HEK293F细胞中的表达

目的:构建肿瘤内皮标志物8(TEM8)基因真核表达载体,实现TEM8在HEK293F细胞中的外源表达。方法:用PCR技术扩增TEM8基因,经限制性酶切、连接、转化,插入pcDNA3.1(+)-EGFP真核表达载体,并通过脂质体将TEM8表达质粒转染至HEK293F细胞中,Western印迹检测TEM8的表达。结果:PCR扩增得到TEM8基因,构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-TEM8-EGFP并转染HEK293F细胞,经G418加压筛选及有限稀释法得到生长性状良好、表达效率高的单克隆细胞系TEM8-EGFP/HEK293F;Western印迹证明过表达细胞系TEM8-EGFP/HEK293F显著表达TEM8蛋白。结论:构建了表达TEM8的重组HEK293F工程细胞系TEM8-EGFP/HEK293F,为进一步研究TEM8的生理功能奠定了基础。

肿瘤内皮细胞通过上皮调节蛋白在食管癌中的迁移和癌症干细胞样表型研究

目的 探讨肿瘤内皮细胞(HENECs)通过升高的上皮调节蛋白在食管癌中促进转移和癌症干细胞样表型研究。方法 从2018年1月至2020年12月临床随访的食管癌患者中随机获得98个石蜡包埋的食管癌组织和成对的相邻正常食管癌组织,同时收集同时段50例石蜡包埋的食管癌和成对的淋巴结转移样本。肿瘤循环内皮细胞(HECECs)和HENECs分别从食管癌和相邻的正常组织中分离得到,经过细胞培养、体外血管生成试验、入侵检测、免疫组织化学、Western blot实验、免疫荧光染色,研究肿瘤内皮细胞通过升高的上皮调节蛋白在食管癌中促进转移和癌症干细胞样表型。结果 HECECs的增殖速度比HENECs快;与HENECs相比,HECECs可以连续传代至少25次,这些差异表达基因与细胞外基质因子高度相关;HECECs显著加速了EC9706和Kyse30细胞的侵袭和迁移;EREG过表达可使EC9706细胞侵袭率显著增加3.9倍;EC9706-EREG细胞和Kyse30-EREG细胞中球形数量分别比载体细胞和亲代癌细胞增加;正常组织中未见EREG免疫阳性,但98个原发病灶中有69个呈阳性染色,EREG高水平与浸润深度、淋巴结转移相关,差异有显著性意义(P<0.05)。结论 HECEC在增强入侵性方面发挥着关键作用,上皮调节蛋白对食管癌细胞的迁移、癌症干细胞表型和转移有潜在的影响。

循环肿瘤细胞和循环肿瘤内皮细胞计数对局限性肾癌术后复发转移监测的价值

目的:探讨局限性肾癌患者行根治或部分切除术后循环肿瘤细胞和循环肿瘤内皮细胞数量变化在预测肿瘤复发转移中的作用。方法:收集52例局限性肾癌患者术前和术后3个月7.5 mL外周血和20例健康者7.5 mL外周血。术后循环肿瘤细胞数量和循环肿瘤内皮细胞数量高于术前者纳入阳性组,反之纳入阴性组。分别对两组患者进行随访,终点事件为肿瘤复发转移,最长随访时间21个月。结果:CTC阳性组复发转移率为61.9%(13/21),明显高于阴性组19.4%(6/31),差异有统计学意义(P=0.003),CTEC阳性组复发转移率为57.1%(12/21),阴性组复发转移率为22.6%(7/31),差异有统计学意义(P=0.012),双阳性组复发转移率为75.0%(12/16)。结论:术后3个月循环肿瘤细胞计数高于术前的肾癌患者易出现复发转移,若同时术后循环肿瘤内皮细胞计数高于术前,则提示患者复发转移率可能会更高。循环肿瘤细胞和循环肿瘤内皮细胞数量变化可作为较好的肾癌术后监测指标。

循环肿瘤细胞和循环肿瘤内皮细胞对尿路上皮癌预后的预测价值

目的:探究术前外周血中循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)和循环肿瘤内皮细胞(circulating tumor-derived endothelial cell,CTEC)对尿路上皮癌(urothelial carcinoma,UC)患者预后的预测作用。方法:收集2018年5月至2020年1月于承德医学院附属医院诊治的161例患者的临床病理资料,以100例UC为试验组,46例尿路上皮的良性疾病和15例健康患者为对照组。术前采用差相富集联合免疫染色荧光原位杂交技术(SE-iFISH)富集并染色CTC和CTEC。通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)确定CTC和CTEC诊断的截断值,分为阳性组和阴性组,分析其与UC患者临床特征的关系。采用Kaplan-Meier法和Cox比例风险回归模型多因素分析进行生存分析。结果:ROC曲线分析显示术前CTC和CTEC的截断值均为0.5。CTC阳性组和CTEC阳性组中位随访时间分别为12.0个月和12.5个月,阴性组分别为20.0个月和16.5个月。Cox比例风险回归多因素分析显示术前CTEC阳性是UC患者预后的独立危险因子。结论:术前患者外周循环血中的CTC和CTEC对UC患者的预后有预测作用,CTEC为影响预后的独立因素。

肿瘤内皮标志物(TEM8)及其与肿瘤关系的研究进展

根据Parkin等[1]报道,预计到2020年,全球恶性肿瘤新发病例和死亡病例将达到2 000万和1 200万,癌症即成为人类健康的第一杀手。传统的放、化疗疗效都非常有限,且常伴有难以忍受的不良反应,因此迫切需要新的诊治手段。

抗人肿瘤内皮标志物1 ( TEM1)抗体的表达及活性鉴定

目的构建抗人肿瘤内皮标志物1(TEM1)全抗体IgG78的真核表达载体,进行表达纯化后鉴定其生物学活性。方法利用PCR分别从单链抗体ScFv78中扩增TEM1抗体的轻、重链可变区基因,并克隆入带有小鼠抗体恒定区的真核表达载体Bichim-L,瞬时转染HEK293F细胞,表达产物用蛋白G亲和层析柱进行纯化,所得蛋白用SDS-PAGE和Western blot法进行鉴定,采用流式细胞术和活细胞ELISA检测该抗体与TEM1阳性细胞的结合特异性及亲和力。结果成功构建了TEM1全抗体IgG78的真核表达载体,并在HEK293F细胞中表达。SDS-PAGE和Western blot法证实目的蛋白符合预期大小,流式细胞术及细胞ELISA结果显示该抗体可特异性结合TEM1阳性肿瘤细胞,且有较高的亲和力。结论成功获得了一株具有良好结合特异性和较高亲和力的TEM1抗体。

肿瘤内皮细胞标志物1在卵巢癌诊疗中作用的研究进展

卵巢癌是一种常见的妇科恶性肿瘤,具有发病率高、致死率高的特点。由于其发病隐蔽且缺乏有效检测手段,确诊时一般已处于中晚期,因此提高卵巢癌早期诊断率可有效提高患者的预后及生存率。肿瘤内皮细胞标志物1(tumor endothelial marker 1,TEM1)是一种新近发现的卵巢癌特异性肿瘤标志物,其表达于卵巢癌细胞表面,而在正常组织中不表达或仅极低表达。该特点使TEM1成为极具潜能的卵巢癌诊断和治疗的新靶点。应用TEM1的特异性抗体结合影像学、基因工程学等技术,无论在卵巢癌影像以及治疗方面都显示出了极好的抗肿瘤效果。同时大量基于靶向TEM1的临床试验正在进行中。本文综述TEM1的发现、结构、组织表达以及其在卵巢癌诊断及治疗中的研究进展,以期为卵巢癌的治疗提供新思路。

循环肿瘤细胞和循环肿瘤内皮细胞对鼻咽癌治疗的应答变化及其意义

目的 探究鼻咽癌患者各治疗阶段循环肿瘤细胞(circulating tumor cell, CTC)及循环肿瘤内皮细胞(circulating tumor endothelial cell, CTEC)与治疗方式的关系。方法 回顾性收集2016年3月-2019年11月在四川大学华西医院就诊的不同治疗阶段鼻咽癌患者,通过差相富集-瘤标免疫荧光染色-染色体原位杂交进行CTC检测,部分患者进行CTEC检测,分析CTC及CTEC与鼻咽癌患者放疗及化疗之间的关系,并探究鼻咽癌CTC与CTEC之间的相关性。结果 共纳入191例鼻咽癌患者,其中初治治疗前66例,诱导化疗后38例,同步放化疗后87例;127例患者行CTEC检查,其中初治治疗前41例,诱导化疗后29例,同步放化疗后57例。各治疗阶段组患者CTC阳性率分别为89.4%、81.6%以及69.0%,其中仅初治治疗前组与同步放化疗后组差异有统计学意义(P=0.003);同步放化疗后组CTC数目分别较初治治疗前组、诱导化疗后组减少(P<0.001,P=0.002);同步放化疗后组三倍体CTC数目与初治治疗前组、诱导化疗后组差异有统计学意义(P=0.009,P=0.013);同步放化疗后组四倍体CTC数目与诱导化疗后组差异有统计学意义(P=0.007);同步放化疗后组多倍体(五倍体或8号染色体拷贝数>5)CTC数目与初治治疗前组差异有统计学意义(P<0.001)。各治疗阶段组患者CTEC阳性率分别为70.7%、82.8%以及64.9%,差异无统计学意义(P>0.05);同步放化疗后组CTEC数目仅较诱导化疗后组减少(P=0.009);各组间三倍体、四倍体CTEC数目差异无统计学意义(P=0.265,P=0.088);多倍体CTEC数目仅同步放化疗后组与诱导化疗后组之间差异有统计学意义(P=0.007)。Spearman相关性分析结果显示,CTC和CTEC之间呈正相关关系(rs=0.437,P<0.001)。结论 同步放化疗对鼻咽癌患者血液CTC数目的减少起着重要作用,而诱导化疗似乎并不会直接引起CTC数目的改变。鼻咽癌患者中,不同倍型CTC对不同治疗方式所产生的应答不同。鼻咽癌CTEC水平与CTC水平呈正相关关系。

皮肤肿瘤患者外周血循环肿瘤细胞与循环肿瘤血管内皮细胞检测的临床价值

目的探究循环肿瘤细胞(CTC)与循环肿瘤血管内皮细胞(CTEC)检测在皮肤恶性肿瘤中的临床运用价值。方法采用差相富集-免疫荧光染色结合染色体荧光原位杂交(SE-iFISH)方法检测5例皮肤恶性肿瘤患者(肿瘤组)以及14例健康人(健康组)外周血中CTC及CTEC数量,计算检出率,分析肿瘤组CTC/CTEC的亚类分型特征以及CTC/CTEC数量与患者临床特征的相关性。结果肿瘤组CTC及CTEC阳性检出率均为100%,外周血中CTC平均值为(6.93±8.18)个/mL,CTEC平均值为(1.60±1.03)个/mL;健康组CTC及CTEC阳性检出率均为64%,外周血中CTC平均(0.19±0.21)个/mL,CTEC平均(0.30±0.33)个/mL。肿瘤直径较大、伴淋巴结转移、临床分期为Ⅲ、Ⅳ期患者CTC及CTEC水平较高。肿瘤患者大细胞CTC占总数的88.46%(184/208),大细胞CTEC占总数的81.25%(39/48),且主要为≥五倍体CTC和CTEC。结论皮肤肿瘤患者CTC/CTEC检出率较高;CTC及CTEC数量与患者临床特征具有密切关系;皮肤肿瘤外周血中大细胞多倍体CTC和CTEC比例高于其他亚型。

诱导正常血管内皮细胞具备肿瘤血管特性的研究

【目的】探讨用肿瘤细胞培养上清液诱导的人脐静脉血管内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells,HUVEC)是否具备肿瘤血管内皮细胞的特性,旨在寻找一种简便的方法,解决肿瘤血管内皮细胞不易获得的难题。【方法】HUVEC用含不同浓度人肝癌细胞株HepG2培养上清的条件培养液培养,3鄄(4,5鄄二甲基噻唑)鄄5鄄(3鄄羧甲酯基)鄄2鄄(4鄄磺苯基)鄄2氢鄄四唑盐法(MTS)检测其增殖率,免疫细胞化学法结合图像定量分析测量血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)的变化,逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)检测肿瘤内皮标记物1和8(TEM1、TEM8)的mRNA表达。【结果】含体积分数10%、20%、40%HepG2培养上清的条件培养液培养,HUVEC增殖率分别为71%、89%、109%。HUVEC用含体积分数50%HepG2培养上清液的条件培养液培养后,VEGFR2平均光密度值明显高于对照组(P<0.05),且TEM1及TEM8呈阳性表达,而对照组不表达。【结论】HepG2上清液促进HUVEC增殖,增殖后的HUVEC具备肿瘤血管内皮细胞的特性。

肝癌内皮细胞包裹肿瘤簇的研究进展

肝癌的血管侵犯及播散转移,是导致其疾病进展迅速、转移率高、手术切除率低和术后复发率高及预后差的重要因素。研究肝癌的血管生成及转移的机制尤为重要。肝癌组织中存在一种血管内皮细胞包裹肿瘤簇的独特结构。该结构与肿瘤直径、微血管侵犯呈正相关,并且与多种分子的表达密切相关,是患者不良预后影响因素之一。本文对肝癌内皮细胞包裹肿瘤簇的相关分子机制、临床特点、影像学特征及靶向免疫治疗进展进行综述。

肿瘤血管内皮抑素tumstatin腺相关病毒载体的构建及其功能的初步鉴定

目的:探讨腺相关病毒(rAAV)-肿瘤内皮抑素(tumstatin)(简称rAAV-Tum)载体的构建及其生物学效应的初步鉴定。方法:用PCR扩增tumstatin序列至pAAV-MCS载体,构建pAAV-Tum;采用AAV-Helper Free System包装系统、"氯仿-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提"及冰乙醇沉淀法进行AAV的包装、纯化和浓缩;用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对rAAV-Tum生物学效应进行初步鉴定。结果:成功构建pAAV-Tum载体,并经酶切、PCR及测序证实;rAAV病毒颗粒滴度达2×1010v.p/mL,浓缩后可达到2×1011～12v.p/mL;rAAV-Tum可以分泌内皮抑素,诱导HUVEC凋亡。结论:成功构建rAAV-Tum腺相关病毒,体外实验表明该病毒能高效诱导内皮细胞的凋亡。

肿瘤相关性高内皮微静脉在肿瘤治疗中角色的研究进展

在恶性肿瘤中发现的表型类似于次级淋巴器官(secondary lymphoid organ,SLO)中高内皮微静脉(high endothelial venules,HEVs)的血管被称为肿瘤相关性高内皮微静脉(tumor-associated high endothelial venules,TA-HEVs),其在肿瘤中的形成与次级淋巴器官中HEVs的形成机制相似。TA-HEVs在促使淋巴细胞浸润肿瘤组织的过程中发挥了重要作用。随着对TAHEVs研究深入,其在放疗、化疗、免疫治疗及抗血管生成治疗等抗肿瘤治疗中发挥积极作用,TA-HEVs的临床价值逐步凸显,本文将对其相应的机制、通路等进行综述。

肿瘤内皮来源CXC趋化因子配体8对肝细胞癌血管生成拟态的影响

目的探讨肿瘤内皮细胞(TECs)来源CXC趋化因子配体8(CXCL8)在肝细胞癌(HCC)血管生成拟态(VM)中的作用。方法收集2018年9月到2019年9月在北京朝阳医院行手术切除的HCC组织,免疫磁珠法分离TECs;慢病毒感染TECs,敲低其CXCL8表达,分为对照组和敲低组,收集其条件培养基;酶联免疫吸附试验检测TECs条件培养基中CXCL8的表达;小管形成实验观察HCC细胞VM;蛋白质印迹法观察HCC细胞中相关蛋白水平变化。组间比较采用独立样本t检验或单因素方差分析。结果TECs敲低组中CXCL8蛋白表达水平较对照组明显降低。对照组条件培养基中CXCL8水平[(1076.00±88.80)pg/ml]较敲低组明显升高[(787.50±63.43)pg/ml],差异有统计学意义(t=5.920,P<0.01)。对照组和敲低组条件培养基处理HepG2细胞后相对小管长度分别为(9814.0±692.8)和(6434.0±1272.0),差异有统计学意义(t=4.042,P<0.05);在SMMC7721细胞中,对照组和敲低组分别为(22317.0±3121.0)和(9834.0±1534.0),差异有统计学意义(t=6.217,P<0.01)。CXC趋化因子受体1(CXCR1)中和性抗体预处理HCC细胞后,TECs促进HCC细胞的VM能力减弱。对照组条件培养基较敲低组明显促进HCC细胞中波形蛋白(Vimentin)和Snail的表达。HepG2细胞中Vimentin的表达量为0.178±0.020和0.094±0.023(t=4.707,P<0.01),Snail的表达量为0.273±0.020和0.188±0.033(t=3.755,P<0.05);SMMC7721细胞中Vimentin的表达量为0.342±0.020和0.242±0.035(t=4.270,P<0.05),Snail的表达量为0.189±0.014和0.139±0.021(t=3.354,P<0.05)。结论TECs通过旁分泌CXCL8方式结合HCC细胞表面CXCR1,调节上皮-间充质转化(EMT)来促进HCC细胞VM。

肿瘤源性血管内皮细胞的培养及其细胞生物学特性鉴定

目的探讨肿瘤来源血管内皮细胞的诱导和体外培养方法，并对其进行细胞生物学特性鉴定。方法胰蛋白酶灌流消化法收集人脐静脉内皮细胞（HUVEC），采用肿瘤细胞的培养上清液诱导HUVEC增殖，制备肿瘤衍生的血管内皮细胞（Td—EC）。采用形态学观察和荧光染色Ⅷ因子相关抗原，鉴定血管内皮细胞，用RTPCR检测肿瘤血管内皮细胞标志物（TEM）的表达，采用迁徙试验、透射电镜、流式细胞仪细胞周期分析等方法检测、比较HUVEC和Td—EC的生物学特性。结果原代培养的HuVEC约于24h完全贴壁，4～5d后融合成单层铺路石样结构。Ⅷ因子荧光染色证实培养的细胞是HUVEC。经肿瘤细胞上清液诱导后，用RT-PCR检测到TEM1和TEM8 mRNA在Td—EC中的表达；Td—EC细胞迁徙能力较HUVEC显著增强；Td—EC细胞增生活跃，G0～S期细胞比例明显增高，具有肿瘤血管内皮细胞特性。结论胰蛋白酶灌流消化法可获得大量连续传代扩增的HUVEC，并可诱导生成肿瘤源性的血管内皮细胞。

沉默肿瘤内皮标志物8基因对XWLC-05肺癌细胞活性的影响

目的探讨沉默肿瘤内皮标志物8(TEM8)基因对XWLC-05肺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法将XWLC-05肺癌细胞随机分为3组:空白组(空白试剂)、第1转染组和第2转染组,按照Lipofectamine 2000说明,后2组分别转染TEM8阴性对照物和TEM8 siRNA。用MTT法检测XWLC-05细胞增殖能力(OD值),用Transwell小室检测XWLC-05细胞侵袭能力,用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率。结果转染后48 h时,空白组、第1转染组和第2转染组的增殖能力分别为0.93±0.15,0.94±0.16和0.39±0.12;上述3组的穿膜细胞数分别为(93±8),(95±12)和(38±8)个;上述3组细胞凋亡率分别为(2.48±0.24)%,(2.51±0.38)%和(9.24±0.35)%。第1转染组与空白组比较,上述指标差异均无统计学意义(均P>0.05);第2转染组与第1转染组和空白组比较,上述指标差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论沉默TEM8可降低XWLC-05细胞的增殖、迁移和侵袭,增加XWLC-05细胞凋亡,可能成为肺癌治疗的新靶点。

肿瘤血管内皮细胞对胶质瘤细胞迁移能力影响的机制研究

目的:探讨肿瘤血管内皮细胞(GVEC)在胶质瘤肿瘤细胞迁移过程中的作用。方法:分别培养正常血管内皮细胞(VEC)及胶质瘤GVEC,在体外与胶质瘤细胞株(CGH5)共培养,并以单独培养的CHG5细胞作为对照。通过Transwell培养板迁移实验分析GVEC对CHG5细胞迁移能力的影响;免疫荧光染色观察GVEC对CHG5细胞骨架的影响;Western blotting检测共培养后CHG5细胞Rac1和Cdc42表达的变化。结果:CHG5与GVEC共培养后迁移能力显著高于与VEC共培养和单独培养的CHG5细胞(P<0.05)。细胞骨架免疫荧光染色显示,与GVEC共培养的CHG5细胞的微管蛋白形态发生改变,细胞核附近微管蛋白较粗厚,呈圆环状,放射状排列。Western blotting结果表明,与GVEC共培养的CHG5细胞Rac1和Cdc42表达明显增高(P<0.05),但与VEC共培养的CHG5细胞表达无明显变化(P>0.05)。结论:肿瘤细胞血管在胶质瘤细胞迁移的过程中至关重要,GVEC可以通过改变细胞微管蛋白结构,并上调Rac1和Cdc42蛋白的表达,促进胶质瘤细胞的迁移运动。

靛玉红对肿瘤血管内皮细胞增殖迁移及血管形成的影响

目的探讨靛玉红(Indirubin)对肿瘤血管内皮细胞增殖、迁移、血管形成影响。方法采用肝癌Hep G2细胞上清诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)成为肿瘤血管内皮细胞(tumor-derived endothelial cells,TdEC),通过MTT法、细胞迁徙试验、血管形成实验检测靛玉红对HUVEC与Td-EC增殖、迁移、血管形成的影响。结果靛玉红在体外对Td-EC有显著的生长抑制作用,并具有时间和浓度依赖性;一定浓度的靛玉红能显著降低Td-EC细胞迁徙活性和抑制血管的形成,而同样条件下,靛玉红对HUVEC的抑制作用弱于Td-EC。结论靛玉红在体外可特异地抑制Td-EC增殖、迁移、血管形成。

肿瘤血管内皮标志物的研究进展

肿瘤血管内皮标志物（tumor endothelial markers,TEMs）是近年来在使用基因微阵列技术对肿瘤和非肿瘤的血管内皮进行比较时发现的,其在肿瘤组织中的特异表达模式及跨细胞膜定位的独特结构对于肿瘤的诊断、预后和靶向治疗具有重要意义。现对TEMs的研究进展进行综述。