瘢痕疙瘩中肿瘤坏死因子α刺激基因-6及相关上下游分子表达水平及相关性的初步探究

目的:研究瘢痕疙瘩中肿瘤坏死因子α刺激基因(TSG)-6及相关上下游分子的表达水平及相关性。方法:收集78例瘢痕疙瘩样本,另取50例正常皮肤组织样本作为对照。采用免疫组化检测TSG-6的阳性表达率,采用Western blot检测TSG-6、磷酸化磷酸肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、自杀相关因子(Fas)、Fas配体(FasL)、转化生长因子(TGF)-β1及磷酸化Smad3(p-Smad3)的蛋白表达水平,采用荧光定量PCR法检测组织样本中微小RNA(miR)-23b、miR-181a及miR-376b的表达水平。结果:瘢痕疙瘩组织中TSG-6的阳性表达率、TSG-6、Fas及FasL的蛋白表达水平均低于正常皮肤组织,p-PI3K、pAKT、TGF-β1、p-Smad3、miR-23b、miR-181a及miR-376b的表达水平高于正常皮肤组织(P<0.05);瘢痕疙瘩组织中TSG-6的表达水平与p-PI3K、p-AKT、TGF-β1、p-Smad3、miR-23b、miR-181a及miR-376b的表达水平呈负相关,与Fas及FasL的表达水平呈正相关(P<0.05)。结论:TSG-6表达降低与瘢痕疙瘩形成有关,其机制可能涉及上游miR-23b、miR-181a、miR-376b及下游PI3K/AKT、Fas/FasL、TGF-β1/Smad通路。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与肿瘤放射治疗

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)或称凋亡素2配体(Apo2L),是肿瘤坏死因子(TNF)超家族中的新成员,通过与受体结合而选择性地诱导肿瘤细胞、转化细胞及病毒感染的细胞发生程序性死亡。TRAIL在选择性地诱导肿瘤细胞凋亡同时对正常组织细胞无毒副作用。研究发现,联合药物治疗或者放射治疗可以增强TRAIL对肿瘤细胞诱导凋亡的敏感性,因此目前受到国内外学者的普遍关注。本文以TRAIL与放射治疗的联合应用为切入点进行论述,以期理解其在肿瘤放射治疗中的作用。

肿瘤坏死因子α基因启动子376位点基因多态性与脓毒症急性肾损伤及死亡的关系

目的探究肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因启动子376位点基因多态性与脓毒症急性肾损伤及死亡的关系。方法选择2020年1月至2022年1月在湖州市第一人民医院就诊的90例脓毒症患者作为研究对象,按照是否合并急性肾损伤(AKI),分为脓毒症合并AKI组(58例)和未合并急性肾损伤(Non-AKI)组(32例),比较两组TNF-α-376位点基因型,并分析脓毒症患者30d存活情况。结果脓毒症合并AKI组的GG、GA、AA型分布为46.55%、39.66%、13.79%,而Non-AKI组的GG、GA、AA型分布为90.63%、9.37%、0.00%,两组基因型分布差异有统计学意义(P<0.05);脓毒症合并AKI组的G、A等位基因携带率分别为66.38%、33.62%,Non-AKI组为95.31%、4.69%,两组等位基因携带率差异有统计学意义(P<0.05)。脓毒症合并AKI组中,TNF-α-376位点为GG型患者的总生存率为50.00%,高于GA型及AA型的26.92%、12.50%(P<0.05)。结论TNF-α-376位点的GA、AA型患者脓毒症合并AKI发病率高,TNF-α-376位点为GG型的生存率较高。临床需多关注GA、AA型患者情况,及时进行治疗,改善其预后。

肿瘤坏死因子基因多态性与矽肺遗传易感性的研究

目的探讨肿瘤坏死因子α基因(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)启动子区-308和-238位点G→A的碱基突变与中国西南地区汉族人群矽肺遗传易感性的相关性。方法分别选择在职的75例矽肺患者和137名矽尘接触者,140例高龄矽肺患者和135名高龄正常人为研究对象。采集外周静脉血,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析和测序检测其TNF-α基因多态位点的变化。结果75例在职矽肺组中TNF-α-308A、-238A的分布频率显著高于矽尘接触组(P<0.01),其中期矽肺患者-308A的分布频率与矽尘接触组差异无统计学意义(P>0.01),而期、期矽肺患者-308A、-238A的分布频率均远高于矽尘接触组(P<0.01)。调整混杂因素后,Logistic回归分析发现,矽肺组及各亚组和正常矽尘接触组-308A、-238A的分布频率差异均有统计学意义(P<0.01)。而140例高龄矽肺患者TNF-α-308A的分布频率远低于正常对照组(P<0.001)。结论TNF-α-308及-238位点基因G→A的碱基突变与中国西南地区汉族人矽肺的发生及其严重程度有关,TNF2可能影响矽肺患者的转归和存活。

应用基因工程方法制备新型重组人肿瘤坏死因子-α

目的 应用基因工程技术 ,制备一种新型的重组人肿瘤坏死因子 α (novelrecombinanthumantumornecrosisfactor α ,nrhTNF α) ,并对其生物学活性、理化性质进行鉴定 ,为进入临床前研究提供基础。方法 应用PCR技术 ,将hTNF α基因的 5′端 17个氨基酸的编码序列删除 ,基因中Pro8Ser9Asp10 的编码序列用Arg Lys Arg的编码序列取代 ,同时Leu157的密码子被Phe的密码子所取代。将hTNF α突变基因 ,插入原核高效表达载体pBV2 2 0中 ,构建高表达工程菌株。纯化表达产物 ,对连续 3批制备的新型rhTNF α,按人用《重组DNA制品质量控制要点》检定要求进行鉴定。结果DNA序列分析和蛋白质N末端、C末端部分氨基酸序列分析表明 ,nrhTNF α与天然的hTNF α相比较 ,N末端缺失了 7个氨基酸 ,13位氨基酸为Arg Lys Arg ,其后为天然hTNF α 11位以后的氨基酸。 15 7位Leu的密码子被Phe的密码子所取代。产物表达量占菌体蛋白的 6 7.4 %。经 (NH4) 2 SO4沉淀、Q SepharoseF .F .及S SepharoseF .F .柱层析分离纯化后 ,产品的纯度达 99% ,比活性达 1× 10 9IU/mg蛋白。结论成功地制备了nrhTNF ,对连续 3批制备的nrhTNF α按人用《重组DNA制品质量控制要点》检定要求进行鉴定 。

转基因蓝藻制备α型重组人肿瘤坏死因子衍生物

应用ＤＮＡ重组技术将ａ型重组人肿瘤坏死因子衍生物（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａ，ｒｈＴＮＦａ）ｃＤＮＡ插到穿梭质粒ＰＤＣ－８上，构建成穿梭表达载体ＰＤＣ－ＴＮＦ，转入鱼腥藻ＰＣＣ－７１２２０中进行表达。

肿瘤坏死因子α基因多态性对强直性脊柱炎的易感性和临床表现型的影响

目的 :探讨 TNF- α基因启动子 - 2 38和 - 30 8位点多态性对强直性脊柱炎 (AS)易感性和临床表现型的影响。方法 :采用 DNA直接测序法 ,对 1 0 8例 AS患者和 1 0 0名正常对照者 TNF- α- 2 38和 - 30 8位点进行基因分型 ,并分析基因型与疾病临床表现之间的关系。结果 :AS组 TNF-α - 2 38G/ G基因型有 1 0 6例 (98.1 % ) ,- 2 38G/ A基因型有 2例 (1 .9% ) ,正常对照组两种基因型分别有 95例 (95 .0 % )和 5例 (5 .0 % ) ,两组间比较无显著性差异 ;AS组 TNF-α - 30 8.1 .1 (G/ G)基因型有 89例 (82 .4 % ) ,- 30 8.1 .2 (G/ A)基因型有 1 9例 (1 7.6 % ) ,正常对照组中 - 30 8.1 .1 (G/ G)有 85例 (85 .0 % ) ,- 30 8.1 .2 (G/ A)有 1 4例 (1 4 .0 % ) ,- 30 8.2 .2 (A/ A)有 1例 (1 .0 % ) ,两组比较亦无显著性差异。 AS患者根据 X线判定的疾病严重程度在TNF-α - 30 8位点 G/ G、G/ A基因型之间有显著的不同 ,- 30 8.1 .2 (G/ A)基因型发病较轻 (P<0 .0 5 )。 结论 :在所研究的人群中未发现 TNF-α基因启动子 - 2 38和 - 30 8位点多态性与 AS的易感性相关 ,但 TNF-α基因启动子 - 30

针灸治疗实验性骨质疏松症对肿瘤坏死因子基因表达的影响

目的 :通过肿瘤坏死因子 (TNFα)基因表达 ,研究针灸治疗绝经后骨质疏松症的作用机理。方法 :8个月龄SD雌性大鼠 40只 ,双侧卵巢切除后 ,均分为模型、针刺、艾灸、西药四组。相同水、饲料喂养 3个月后 ,针刺、艾灸、西药组治疗 3个疗程。将 40只鼠断头取血 ,检测血清中骨钙素(BGP)、雌二醇 (E2 )含量 ;取双侧股骨测骨密度 ;无菌条件下取出大鼠右侧胫骨 ,分离骨髓细胞 ;利用对L92 9细胞的杀伤作用检测TNFαmRNA生物活性 ;利用RT PCR技术检测TNFαmRNA表达。结果 :针刺、艾灸组BGP、E2 较模型组有显著增高 (P <0 0 5) ;L92 9死亡率较模型组明显减少(P <0 0 0 1) ;RT PCR显示TNFαmRNA表达较模型组明显减少。结论 :针刺、艾灸治疗绝经后骨质疏松症是在基因转录后水平上进行的 ,即针灸治疗绝经后骨质疏松症是通过调控TNFαmRNA表达 。

抗人肿瘤坏死因子-α单链抗体基因在大肠杆菌中的融合表达

目的：将抗ｈＴＮＦ－α单链抗体基因克隆入融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ－１中，以期得到ＧＳＴ－ＳｃＦｖ融合表达蛋白。方法：将限制性内切酶酶切拼接法获得的Ｅ６ＳｃＦｖ基因克隆入融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ－１中，转化大肠杆菌ＤＨ５α，经异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导，１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测表达产物，光密度扫描和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ验证表达产物。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示，Ｅ６ＳｃＦｖ表达产物约为５２ｋｕ左右，与预期的结果相符；光密度扫描结果表明，ＧＳＴ－Ｅ６ＳｃＦｖ融合蛋白占菌体总蛋白的４０％；Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ证实，在相应分子量处，有ＧＳＴ－Ｅ６ＳｃＦｖ融合蛋白的显色印迹；进一步对表达产物的形式分析，ＧＳＴ－Ｅ６ＳｃＦｖ融合蛋白的表达产物为包涵体形式。

采用定位基因缺失突变技术在大肠杆菌中高效表达肿瘤坏死因子

肿瘤坏死因子α(TNF)为157个氨基酸组成的细胞因子,在克隆的全长cDNA的5'端有480bP的非编码区包括76个氨基酸信号肽编码区。本文采用寡核苷酸指导下的定位基因缺尖突变方法,删除了这一非编码区及信号肽序列,并在成熟TNF分子第一个氨基酸密码前插入一个翻译起始密码(ATG),形成一个限制酶NcoI的识别位点CCATGG。然后取出含有成熟TNF全基因的NcoI-Pst Ⅰ片段,插入到原核表达载体pBV220中,获得了肿瘤坏死因子的高效表达菌株。活性检测结果表明,肿瘤坏死因子的表达量可达3.42×10~8u/L菌液。SDS-PAGE电泳凝胶扫描结果显示,肿瘤坏死因子在大肠杆菌的表达量可占细菌可溶性总蛋白量的22.8%。抗肿瘤坏死因子单克隆抗体可以中和大肠杆菌表达的肿瘤坏死因子对L929细胞的细胞毒性。SD和ATG间插入31个核苷酸可使TNF表达量降低约10倍。

人肿瘤坏死因子-α基因转导绒癌耐药细胞系体外耐药逆转的研究

目的 将人肿瘤坏死因子 alpha(hTNF α)基因导入已建立的绒癌耐药细胞系 ,观察hTNF α基因转导后对绒癌细胞耐药性逆转的体外作用。方法 通过阳离子脂质体将hTNF α基因转导绒癌耐药细胞系 ,用新霉素筛选含hTNF α片段的单细胞克隆 ,用RT PCR方法和细胞免疫组织化学方法 ,检测转导hTNF α基因的耐药细胞中MDR1mRNA和MDR1蛋白 (P gp)表达水平的改变。采用四甲基偶氮唑蓝比色法 ,检测转导hTNF α基因的耐药细胞对足叶乙甙 (VP 16 )的耐药指数。结果 转导hTNF α基因后 ,绒癌耐药细胞中检测出hTNF αmRNA表达 ,转导hTNF α基因在mRNA水平能一定程度的逆转绒癌耐药细胞的MDR1,而在P gp蛋白水平几乎能完全逆转绒癌耐药细胞的MDR1。转导hTNF α基因的细胞的耐药指数明显降低。结论 hTNF α基因转导后 ,可通过调节MDR1的表达 。

肿瘤坏死因子-α基因启动子区点突变与乙型肝炎相关

目的:调查我国汉族健康人群和乙肝患者中TNF-α基因启动子区点突变的分布特点,并探讨HBV感染与TNF-α基因多态性之间的关系.方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)的方法对健康人群(103例)与HBV患者(232例)的TNF-α基因启动子区-308G→A单碱基突变多态性进行了分析.结果:TNF-α基因启动子区-308G→A单碱基突变频率在HBV患者中的分布明显低于健康人群(4.7%vs9.7%,P<0.05).不同性别、不同HBV血清标记类型、不同HBVDNA肝炎患者之间TNF-α(-308G→A)基因型与突变频率均无显著性差异.结论:我国汉族人群TNF-α的基因启动子区-308nt单碱基多态性可能与HBV的发病及易感性相关.

诱导型一氧化氮合酶及肿瘤坏死因子-α基因多态与矽肺易感性

目的探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因多态性与矿工矽肺易感性的关系.方法采用病例对照设计,以男性矽肺病人184例为病例组,111例无矽肺的男性接尘矿工为对照组.应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)技术检测iNOS Ser608Leu和TNF-α-308位点的多态性.结果 iNOS Ser608Leu位点携带T等位基因(C/T或T/T)的个体患矽肺的危险性降低(OR=0.48,95%CI=0.29～0.80),且与矽肺期别相关(P＜0.01).在矽尘高暴露组中,T等位基因的保护作用明显(OR=0.43,95%CI=0.24～0.78).TNF-α-308基因多态与矽肺危险性之间无相关性(P＞0.05),但携带A等位基因(G/A或A/A基因型)的吸烟工人更易发生矽肺(OR=2.48,95%CI=1.16～5.32).结论iNOS基因16外显子C＞T突变可能是抵抗矽肺发生和发展的保护因素,TNF-α-308位点基因多态在矽肺发病的遗传易感因素中不起主要作用,但该多态性与吸烟有交互作用.

肿瘤坏死因子-α基因多态性与慢性阻塞性肺疾病的关系

目的:探讨中国北方汉族人肿瘤坏死因子鄄α(TNF鄄α)基因多态性与慢性阻塞性肺疾病(COPD)易感性的关系。方法:应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性法(PCR鄄RFLP)检测TNF鄄α基因鄄308位基因型在58例中国北方汉族人COPD患者和60例健康对照者中基因频率的分布。结果:58例COPD患者和60例健康对照者TNF2频率分别为17.5%、7.5%,2者差异有统计学意义(P<0.025,OR=2.56)。结论:TNF鄄α(308)的基因多态性与中国北方汉族人COPD易感性有关。

乙型肝炎病毒C基因启动子变异与白细胞介素10与12、肿瘤坏死因子α、γ-干扰素及病毒含量的关系

目的探讨慢性肝病患者乙型肝炎病毒C基因启动子变异(HBV BCP)与血清白细胞介素10(IL-10)、12(IL-12)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)及病毒含量(HBV DNA)的关系。方法采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术,对176例HBV慢性感染者(慢性乙型病毒性肝炎轻、中、重度,肝炎肝硬化,慢性重型肝炎和原发性肝癌)血清进行检测HBV BCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764碱基G→A联合突变;采用双抗体夹心ELISA检测技术,检测患者血清细胞因子(IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ)水平。结果HBVBCP变异阳性组、阴性组间对细胞因子(IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ)及HBV DNA复制水平的影响差异有统计学意义(P<0.05),BCP变异阳性组的血清IL-10(80.96±30.86vs72.11±24.19 mg/L)I、L-12(41.33±15.10vs35.98±14.47 mg/L)、TNF-α(56.04±27.05vs38.01±10.49 mg/L)、IFN-γ(19.81±12.29vs16.55±8.99mg/L)和HBV DNA(108.2478±0.9826vs105.8876±1.4822拷贝/ml)的水平明显高于BCP变异阴性组。结论HBV BCP变异可导致血清IL-10I、L-12、TNF-α、IFN-γ和病毒复制水平增高。

肿瘤坏死因子-α对胎儿生长受限胎盘Bcl-2、Bax基因表达调节的探讨

目的:探讨胎儿生长受限(FGR)肿瘤坏死因子α(TNF-α)与胎盘组织凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的关系。方法:用放射免疫分析法(RIA)测定25例足月正常体重儿(对照组)和20例FGR组母血、脐血TNF-α浓度;用免疫组化SP法检测胎盘组织中Bcl-2、Bax基因表达;采用图像分析系统进行Bcl-2、Bax阳性细胞率、平均吸光度(A)值测定,量化基因表达。结果:FGR组母血、脐血TNF-α浓度与对照组比较均明显增高(P均<0.05)。FGR组与对照组比较,胎盘Bcl-2阳性细胞率明显降低(P<0.01),A值明显增加(P<0.01);而Bax阳性细胞率明显增高(P<0.01),A值明显降低(P<0.01)。FGR组母血、脐血TNF-α浓度与胎盘Bcl-2阳性细胞率均呈负相关(P均<0.01),与A值均呈正相关(P均<0.01);与Bax表达无关。结论:母血、脐血TNF-α增高是引起FGR的原因之一;FGR组胎盘组织Bcl-2表达下降,Bax表达增高;在FGR中TNF-α可通过对Bcl-2表达的负调节促进胎盘细胞凋亡,抑制胎儿生长发育。

肿瘤坏死因子α和肿瘤坏死因子α转化酶基因在糖尿病心肌病变大鼠心肌中的表达

对小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射加高脂饲料喂养建立糖尿病心肌病变大鼠模型的研究显示,模型组大鼠心肌组织中肿瘤坏死因子α(TNFα)和肿瘤坏死因子α转化酶(TACE)mRNA表达量均比正常组显著增高。

肿瘤坏死因子β基因多态性与多发性硬化的相关性研究

目的研究肿瘤坏死因子β(tumor necrosis factor β,TNFβ)基因多态性与多发性硬化(multiple sclero-sis,MS)的相关性。方法①采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对58例MS患者和79名健康人进行TNFβ基因多态性分析。②对MS组患者分别进行临床EDSS评分等临床资料收集。结果①MS组TNFβ1等位基因频率(45·69%)较健康人(27·85%)明显升高(P<0·05);②基因型为TNFβ1/1、TNFβ1/2、TNFβ2/2的MS组患者EDSS评分、首次发病年龄、病程及发病次数各组间比较差异均无统计学意义(P>0·05)。结论TNFβ1等位基因多态性与MS的易患性有关,与EDSS评分、首次发病年龄、病程及发病次数无显著相关性。

肿瘤坏死因子-α基因多态性及其血清水平与脑梗死的相关性

目的探讨肿瘤坏死因子（TNF）-α T1031C多态性位点及血清水平与动脉粥样硬化性脑梗死的病情严重程度和发病风险的关系。方法选择动脉粥样硬化性脑梗死患者（病例组）120例，健康者75例为对照组。采用限制性片段长度多态性分析技术，检测两组TNF—α T1031C多态的分布。采用酶联免疫吸附法（ELLSA）检测两组患者血清TNF-α水平。结果病例组TNF—αT1031C的cc基因型、C等位基因频率明显高于对照组（P〈0．05）。TNF—α T1031C的各基因型与脑梗死病情严重程度无相关性（P〉0．05）。Logistic回归校正性别、年龄、吸烟、血糖、血压等因素后，TNF-αT1031C的CC基因型脑梗死发病风险明显增加（OR=3．671，95％CI：10．26～13．135，P=0．046）。病例组TNF-α血清水平明显高于对照组（P〈0．05）。病例组和对照组TNF—α T1031C各基因型的血清TNF-α 水平无显著差异（P〉0．05）。结论TNF-α基因T1031C的CC基因型增加动脉粥样硬化性脑梗死的发病风险，C等位基因是脑梗死的遗传易感基因之一。

肿瘤坏死因子β基因多态性在中国汉族SLE病人中的分布特点及与不同人种的比较研究

目的 :探讨中国江苏地区汉族人群TNFβ基因多态性在SLE病人中分布特点 ,并与不同人种进行比较研究。 方法 :收集江苏地区 16 8名无血缘关系健康个体及 6 6例SLE病人的静脉血提取DNA ,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR RFLP) ,分析TNFβ基因的多态性。 结果 :中国汉族SLE病人与白种SLE病人TNFβ基因频率差异无统计学意义 ;中国汉族健康个体TNFβ 1等位基因频率明显高于白种健康个体 ;SLE病人TNFβ 2基因频率较正常人明显升高 (SLE病人 6 7 4% ,正常人 5 5 1% ,P <0 0 5 ,R =1 6 8) ;中国汉族SLE病人与白种SLE病人TNFβ基因频率差异无统计学意义。 结论 :TNFβ等位基因频率在正常人分布具有种族差异 ,但在SLE病人分布无种族差异。