肿瘤坏死因子前体转换酶前肽结构域对TACE活性调节作用

目的:探讨肿瘤坏死因子前体转换酶(TACE)的前肽结构域在TACE成熟过程中所起的作用,为人工干预炎症过程提供依据和手段。方法:以pIRES2-EGFP质粒为载体,利用DNA重组技术分别构造含信号肽结构域+前肽结构域、全长结构域及缺失前肽结构域的真核表达重组体,根据其碱基数目分别命名为pIRES2-EGFP/T648、pIRES2-EGFP/T2472、pIRES2-EGFP/T57-T1824;真核转染U937细胞;LPS刺激转染细胞后,用ELISA法及流式细胞技术检测TNF-α。结果:pIRES2-EGFP/T648的真核表达能显著抑制TACE的活性,减少sTNF-α分泌,抑制率达61.09%;pIRES2-EGFP/T57-T1824的真核表达对sTNF-α的分泌无影响;pIRES2-EGFP/T2472的真核表达能显著增加sTNF-α分泌。结论:前肽结构域在TACE的成熟过程中起了双重作用,TACE抑制剂的研制和开发为抗炎药物的设计和改造提供了新的依据和方法。

动态动脉硬化指数联合血清肿瘤坏死因子受体相关因子6、前蛋白转化酶枯草溶菌素9对急性分水岭脑梗死病人的预后价值

目的探究动态动脉硬化指数(AASI)联合血清肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)对急性分水岭脑梗死(CWI)病人的预后价值。方法选取2019年8月至2021年8月保定市第二中心医院收治的96例急性CWI病人为研究组,另取同期体检健康者80例为对照组。收集病人一般临床资料,并对研究组和对照组的血清TRAF6、PCSK9水平及AASI进行检测;根据研究组病人预后情况将其分为预后良好组(67例)和预后不良组(29例),多因素logistic回归分析急性CWI病人预后的影响因素;绘制AASI与血清TRAF6、PCSK9对急性CWI病人预后评估的受试者操作特征曲线(ROC曲线)。结果研究组血清TRAF6(1.48±0.34)µg/L、PCSK9(97.25±14.25)µg/L水平及AASI(0.56±0.15)高于对照组(0.87±0.19)µg/L、(82.78±9.17)µg/L、(0.36±0.11)(P<0.05)。预后良好组与预后不良组年龄、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、空腹血糖、狭窄程度及血管斑块性质差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清TRAF6(1.77±0.37)µg/L、PCSK9(104.82±17.93)µg/L水平及AASI(0.62±0.12)高于预后良好组(1.35±0.21)µg/L、(93.97±12.65)µg/L、0.53±0.09(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示NIHSS评分、狭窄程度、血管斑块性质、AASI、血清TRAF6、PCSK9水平是急性CWI病人预后的影响因素(P<0.05)。AASI联合血清TRAF6、PCSK9预测急性CWI病人预后的AUC是0.92,灵敏度为93.10%,特异度为76.12%,Youden指数为0.69,优于AASI、TRAF6、PCSK9各自单独预测(P<0.05)。结论急性CWI病人血清TRAF6、PCSK9水平显著升高,联合AA-SI对病人的预后状况具有较高的预测效能,可为临床的合理干预和改善病人预后提供依据。

15-脱氧前列腺素J_2对脂肪肝大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ、肿瘤坏死因子α和白细胞介素6表达的影响

目的观察15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法普通饲料喂养的雄性Wistar大鼠作为正常对照组8只;高脂饲料喂养雄性Wistar大鼠建造NAFLD模型16只,将建模成功的大鼠随机分为模型对照组8只和实验组8只。模型对照组大鼠腹腔注射生理盐水2ml·kg-1·d-1;实验组大鼠腹腔注射15d-PGJ210μg·kg-1·d-1。干预2周后处死各组大鼠,检测各组肝组织匀浆总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量,苏木精-伊红(HE)染色光镜下观察各组大鼠肝组织的病理改变,免疫组织化学法检测各组大鼠肝组织PPAR-γ、TNF-α和IL-6的表达。结果模型对照组肝组织总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平明显高于正常对照组,TC(1.27±0.26)mmol/g vs(0.74±0.18)mmol/g、TG(1.56±0.27)mmol/g vs(1.13±0.39)mmol/g(P<0.01);实验组肝组织TC、TG水平明显低于模型对照组,TC(1.01±0.22)mmol/g vs(1.27±0.26)mmol/g、TG(1.15±0.20)mmol/g vs(1.56±0.27)mmol/g(P<0.05)。光镜下未见正常对照组肝组织病理形态学异常;模型对照组可见大量肝细胞脂肪变性及肝组织多处点状坏死;实验组大鼠肝细胞脂肪变性及点状坏死较模型对照组减轻;正常对照组肝组织PPAR-γ普遍表达而TNF-α和IL-6几乎不表达;实验组肝组织PPAR-γ表达强于模型对照组,而TNF-α和IL-6表达低于模型对照组。结论 15d-PGJ2可以缓解NAFLD大鼠肝细胞脂肪变性和坏死、降低肝组织TC和TG水平,这种效果可能是通过增加肝脏PPARγ和减少TNF-α、IL-6的表达来实现的。

重叠延伸PCR法构建人肿瘤坏死因子前体水解酶系列突变重组体及稳定转染HeLa细胞株的建立

目的构建人肿瘤坏死因子前体水解酶(TACE)系列真核表达载体,转染HeLa细胞,建立稳定转染的HeLa细胞系。方法以THP1细胞cDNA为模板,PCR扩增人TACE基因的全长cDNA编码区序列,将其插入pMD18T载体中,构建出pMD18T-FL-TACE载体。在此基础上,应用重叠延伸PCR扩增出缺失解整合素区的TACE重组cDNA和缺失酶区的TACE重组cDNA,利用DNA重组技术将其分别定向插入真核表达载体pIRES2.0-EGFP中,同时TACE全长也构建入pIRES20.-EGFP。这3种真核表达载体经酶切和测序鉴定后,用脂质体法转染HeLa细胞,经过G418筛选,获得稳定转染的HeLa细胞株,采用RT-PCR、Westernblot及荧光法检测表达。结果成功构建了pIRES2.0-EG-FP/FL-TACE、pIRES20.-EGFP/disΔ-TACE、pIRES20.-EGFP/metΔ-TACE真核表达载体,并建立了稳定转染的HeLa细胞株,成功地表达了目的基因。结论真核表达载体的构建和稳定转染HeLa细胞株的建立为进一步研究TACE功能奠定了必要的实验基础。

肿瘤坏死因子转换酶在炎性气道黏液高分泌中的作用

目的:探讨肿瘤坏死因子转换酶(TNF-αconverting enzyme,TACE)对炎症条件下气道上皮细胞形成黏液高分泌过程的影响。方法:通过不同剂量人中性粒细胞弹性蛋白酶(human neutrophil elastase,HNE)刺激人肺腺癌的气道上皮细胞A549,构建炎症条件下气道黏液高分泌模型,以TACE抑制剂-1(TNF-αconverting enzyme inhibitor-1,TAPI-1)进行干预,观察TACE、黏蛋白(mucin,MUC)5AC的表达。将A549细胞分为5组:对照组,HNE(15,25,50 nmol/L)组,TAPI-1组。RT-PCR检测各组TACE和MUC5AC m RNA的表达;Western印迹检测TACE蛋白的表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)观察MUC5AC蛋白的表达。结果:各剂量HNE处理后,TACE和MUC5AC的m RNA和蛋白表达均较对照组明显升高(P<0.01),且呈现剂量依赖性。而给予TAPI-1预处理后,与HNE刺激组比,各指标明显下调(P<0.01)。结论:TACE参与了黏液高分泌的细胞转导途径,并可促成炎性气道黏液高分泌的形成。

宫颈癌及癌前病变患者人乳头瘤病毒与血清可溶性肿瘤坏死因子受体关系的研究

目的了解血清可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR)和肿瘤坏死因子(TNF)在人乳头瘤病毒(HPV)引发宫颈癌前病变及宫颈癌中的变化。方法经过阴道镜下活检、病理检查证实的宫颈癌50例作为宫颈癌组,宫颈上皮内瘤变58例作为宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组。取两组病例少量的宫颈上皮组织,用定量聚合酶链反应(PCR)法检测HPV16、18型;采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中TNF-α、sTNFRⅠ和sTNFRⅡ。结果在宫颈上皮内瘤变患者中,HPV感染引起血清TNF、sTNFRⅠ显著升高(P<0.01),而sTNFRⅡ没有明显变化。在宫颈癌患者中,HPV感染后其血清TNF、sTNFRⅠ、sTNFRⅡ均显著升高(P<0.01)。结论TNF和sTNFR在HPV感染及与之密切相关的CIN、宫颈癌的发生发展中有一定的作用。

N-端脑钠肽前体与肿瘤坏死因子-α对慢性阻塞性肺疾病急性加重期及合并全身炎症反应综合征诊断的意义

目的探讨N-端脑钠肽前体(NT-proBNP)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对于慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)及合并全身炎症反应综合征(SIRS)患者的诊断意义。方法选取2018年1月1日至2019年12月31日收治北京市垂杨柳医院的患者,依据病历资料选取AECOPD患者(AECOPD组,n=108例),同期同年龄段门诊稳定期COPD患者(稳定期COPD组,n=52)以及健康对照组(n=48),对NT-pro BNP及TNF-α水平进行比较。AECOPD组根据患者是否合并SIRS分为伴SRIS组(78例)及不伴SIRS组(30例)两个亚组,比较两组NT-pro BNP及TNF-α水平,评估伴SIRS组患者NT-pro BNP与TNF-α的相关性。结果比较同期同年龄段健康对照组,AECOPD组及稳定期COPD组患者NT-pro BNP及TNF-α水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。AECOPD组比较稳定期COPD组NT-pro BNP及TNF-α水平升高更为显著,差异有统计学意义(P<0.05)。而伴SIRS组患者NT-pro BNP及TNF-α水平更高于不伴SIRS组,差异有统计学意义(P<0.05),伴SIRS组NT-proBNP与TNF-α水平呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论检测血清中NT-pro BNP与TNF-α水平有助于COPD急性加重及合并SIRS的识别。

男女腹部皮下和网膜脂肪中脂联素、肿瘤坏死因子α、过氧化物酶体增殖物激活受体γ_2 mRNA表达的比较

目的比较男女腹部皮下脂肪组织、网膜脂肪组织中脂联素、肿瘤坏死因子-a（TNF-a）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ2（PPARγ2）mRNA表达。方法选择30例择期外科手术患者，男15例，女15例，用RT-PCR法检测腹部皮下脂肪组织和网膜脂肪组织中脂联素、TNF-a、PPARγ2 mRNA表达。结果（1）男性皮下脂肪组织中脂联素mRNA显著低于女性，网膜脂肪组织中TNF-a mRNA显著高于女性（均P〈0．05）。（2）女性皮下脂肪组织中脂联素mRNA表达高于其网膜脂肪组织，男女网膜脂肪组织中TNF-a mRNA均高于各自的皮下脂肪组织（P〈0．05～0．01）。（3）男女间皮下脂肪组织和网膜脂肪组织中PPARγ2 mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论人腹部皮下脂肪组织和网膜脂肪组织中脂联素、TNF-a mRNA的表达可能存在性别差异，而PPARγ2 mRNA表达的性别差异则不明显。

肿瘤坏死因子-α转换酶基因金属蛋白酶区的克隆及表达

目的:克隆和构建含有肿瘤坏死因子-α转换酶金属蛋白酶区(m etalloprote inase dom ain of hum an tumor necrosis factor-αconverting enzym e,TACEmp)基因表达载体,并在大肠埃希菌中高效表达。方法:用RT-PCR方法,从THP-1细胞中扩增出TACEmp基因片段,插入表达载体pET-D sbAmut,用限制性酶切和DNA测序进行鉴定;转化到大肠埃希菌BL21中进行诱导表达,通过SDS-PAGE电泳分析表达产物。结果:克隆TACEmp基因并构建重组表达载体pET-D sbAmut-TACEmp转化入BL21,IPTG诱导后获得高效表达的TACEmp融合表达蛋白。结论:利用分子伴侣融合蛋白技术使TACEmp在原核表达系统中获得了高效可溶性表达。

NO-1886对过氧化体增殖物激活型受体、脂蛋白脂肪酶和肿瘤坏死因子α基因表达的影响

为了探讨脂蛋白脂肪酶活化剂NO 1886对高脂高糖饮食喂养贵州小香猪过氧化物体增殖物激活型受体、脂蛋白脂肪酶及肿瘤坏死因子α表达的影响 ,选择雄性贵州小香猪 15头 ,随机分为 3组。正常对照组喂普通饲料 ;高脂高糖组喂高脂高蔗糖饲料 ;治疗组喂高脂高蔗糖饲料 4个月后加 1%NO 1886治疗。 8个月后处死动物 ,采用Trizol提取组织总RNA ,逆转录聚合酶链反应检测过氧化体增殖物激活型受体、脂蛋白脂肪酶及肿瘤坏死因子αmRNA的表达。结果发现 ,正常对照组肌肉组织和肝脏过氧化体增殖物激活型受体α的表达较低。高脂高糖组肌肉组织和肝脏过氧化体增殖物激活型受体α的表达增强 ,NO 1886使高脂高糖喂养增强肌肉组织和肝脏过氧化体增殖物激活型受体α表达的作用减弱 ;在脂肪组织 ,治疗组脂蛋白脂肪酶的表达水平最高 ,分别比正常对照组和高脂高糖组高 2 7%和 2 0 % ;NO 1886抑制高脂高糖喂养小香猪脂肪组织肿瘤坏死因子α的表达。结果提示 ,NO 1886能促进小香猪脂肪组织脂蛋白脂肪酶的表达 ,显著抑制脂肪组织肿瘤坏死因子α基因表达 ,高调脂肪组织过氧化体增殖物激活型受体γ ,减弱肝脏和肌肉过氧化体增殖物激活型受体α的表达 ,是NO 1886有效降低血浆游离脂肪酸和肿瘤坏死因子α水平可能的机制。

肿瘤坏死因子受体1、颗粒蛋白前体表达与糖尿病肾病进展危险因素的相关性分析

目的通过对糖尿病肾病(DN)患者肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)、颗粒蛋白前体(PGRN)表达与DN进展危险因素的相关性分析,为指导患者及时调整诊疗方案提供依据。方法选择2型糖尿病肾病(DN)患者79例,按照肾小球滤过率(eGFR)分为3组:eGFR<30 mL/(min·1.73 m^2),eGFR 30~60 mL/(min·1.732),eGFR>60 mL/(min·1.73 m^2);采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNFR1、PGRN,将TNFR1、PGRN与DN患者其他生化指标行相关性分析。结果DN患者TNFR1平均为(1378.82±945.86)pg/mL,eGFR<30组(1777.91±1040.33)pg/mL,eGFR 30~60组(1299.43±619.49)pg/mL,eGFR>60组(597.02±270.85)pg/mL,3组对比差异有统计学意义(P<0.05);TNFR1与eGFR、24 h尿蛋白、尿酸、胱抑素C、β2-微球蛋白、血沉、超敏C反应蛋白的相关性分析差异有统计学意义(P<0.05);TNFR1与24 h尿蛋白、尿酸、胱抑素C、β2-微球蛋白、血沉、超敏C反应蛋白呈正相关性,与eGFR呈负相关性;TNFR1是eGFR的独立影响因素。DN患者PGRN水平(21.44±27.19)ng/mL,eGFR<30组为(27.30±29.66)ng/mL,eGFR 30~60组(21.85±28.37)ng/mL,eGFR>60组(5.54±6.21)ng/mL。3组对比差异无统计学意义(P>0.05);PGRN与糖化血清蛋白、eGFR、尿酸、胱抑素C、β2-微球蛋白、血沉的相关性分析差异有统计学意义(P<0.05);PGRN与尿酸、胱抑素C、β2-微球蛋白、血沉呈正相关性,与糖化血清蛋白、eGFR呈负相关性;PGRN无独立影响因素。结论TNFR1、PGRN与DN的进展危险因素有相关关系,可能成为预测糖尿病肾病进展的生物学标志物。

非异羟肟酸类肿瘤坏死因子转化酶抑制剂的研究进展

类风湿性关节炎属自身免疫性疾病,全球约有1%～2%的人群受该病困扰。肿瘤坏死因子转化酶(TACE)是治疗类风湿性关节炎的潜在的靶点,当前TACE抑制剂主要分为异羟肟酸类和非异羟肟酸类抑制剂两类。本文对近几年来出现的新型非异羟肟酸类TACE小分子抑制剂进行介绍,使读者对当前高活性、高选择性非异羟肟酸类TACE抑制剂的发展和设计研究现状有个总体的了解。

肿瘤坏死因子(TNF)基因的体外扩增

获得目的基因的方法很多，如构建cDNA文库，构建基因组文库，人工合成目的基因，PCR(聚合酶链反应)合成及差异显示与基因陷阱等。本实验采用PCR法从已知TNF(肿瘤坏死因子，从上海第二军医大学获得)的全基因序列中扩增获得。

肿瘤坏死因子α对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞的去分化作用及调控机制

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞(OF)分化的影响及其机制。方法收集2019年12月至2020年8月在天津医科大学眼科医院诊断为TAO且拟行眼眶减压术的患者6例6眼,术中收集眼眶脂肪结缔组织,组织块培养法分离培养OF并进行波形蛋白免疫荧光鉴定。诱导OF成脂分化并油红O染色鉴定。分别采用含0、0.1、1.0、10.0μg/L TNF-α的完全培养液诱导眼眶成熟脂肪细胞去分化。分别收集原代、分化14 d和去分化20 d细胞,通过实时荧光定量PCR检测过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)、细胞外调节蛋白激酶1(ERK1)、ERK2及脂肪包被蛋白1(perilipin1)mRNA相对表达量;采用Western blot法检测PPARγ、P-ERK1/2、perilipin1蛋白相对表达量。结果体外成功培养人TAO来源OF,细胞呈梭形或多角形,呈旋涡状紧密排列,波形蛋白免疫荧光染色呈阳性。OF成脂分化诱导后,部分细胞的细胞质中可出现脂滴样结构,油红O染色可见细胞质内被着染的脂滴结构,证实分化后所得到细胞为脂肪细胞。0.1μg/L、1.0μg/L、10.0μg/L TNF-α诱导脂肪细胞发生去分化,且随诱导时间的延长,细胞质中的脂滴体积缩小,含脂滴细胞数量也逐渐减少,并在去分化20 d胞质内脂滴基本消失,细胞变为长梭形,紧密排列,去分化为成纤维样细胞。实时荧光定量PCR检测结果显示,分化14 d组细胞PPARγ、ERK1、ERK2、perilipin1 mRNA相对表达量分别为4.26±0.09、2.01±0.09、3.23±0.10和8.69±0.33,明显高于原代组的1.00±0.09、1.05±0.19、1.00±0.10和1.05±0.07以及去分化20 d组的1.06±0.03、1.15±0.11和6.27±0.09,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Western blot检测结果显示,分化14 d组PPARγ、ERK1/2、perilipin1蛋白表达量分别为1.07±0.03、1.00±0.03和1.13±0.02,明显高于原代组的0.37±0.02、0.29±0.02和0.00±0.00以及去分化20 d组的0.20±0.02、0.38±0.06和0.00±0.00,差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论TNF-α对TAO眼眶脂肪细胞有去分化作用,其机制可能与下调ERK1/2-PPARγ-perilipin1信号通路有关。

肿瘤坏死因子α、高敏C反应蛋白与2型糖尿病合并冠心病慢性心力衰竭的相关性

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)与2型糖尿病(T2DM)合并冠心病慢性心力衰竭(CHF)的关系。方法:收集合并T2DM的冠心病CHF患者47例和未合并T2DM的冠心病CHF者48例。分别检测各患者氮末端-前体脑钠肽(NT-pro-BNP)、TNF-α、hs-CRP血浆水平。结果:(1)冠心病CHF的轻重程度与NT-pro-BNP、hs-CRP血浆水平显著相关(P值分别为0.002与0.012),而与年龄、TNF-α、糖化血红蛋白未见明显相关性。(2)与未合并糖尿病的重度心衰组相比,合并糖尿病的重度心衰组hs-CRP炎性指标的血浆水平显著增高(P值为0.019);TNF-α的血浆水平在两组之间差异虽无显著性,但在合并T2DM组中明显增高。结论:冠心病CHF患者疾病严重程度与体内NT-pro-BNP和hs-CRP的血浆水平呈正相关。合并糖尿病的冠心病CHF组hs-CRP炎性指标的血浆水平显著增高,可见合并T2DM的CHF患者体内具有更高水平的炎性活动,早期抗炎治疗及平稳调控血糖对改善冠心病CHF患者病情预后有重要意义。

血清可溶性肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子水平与扩张型心肌病患者左心室重构的关系

目的探讨扩张型心肌病(DCM)患者血清可溶性肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(sTWEAK)水平变化及其与血清N-末端脑钠肽前体(NT-proBNP)和左室质量指数(LVMI)的相关性。方法选取DCM患者100例(DCM组)和非心衰患者60例(对照组),以酶联免疫吸附法检测两组血清sTWEAK和血清NT-proBNP水平,应用超声心动图测定LVMI。结果 DCM组血清sTWEAK水平低于对照组,其血清NT-proBNP水平及LVMI均高于对照组(P均<0.05)。DCM组血清sTWEAK水平与其心功能NYHA分级无关,但与NT-proBNP、LVMI显著负相关(r分别为-0.524、-0.337,P均<0.05),在调整性别、年龄、体质量指数、总胆固醇、低密度脂蛋白、心率、心功能NYHA分级等影响因素后,上述相关性仍然存在;多元逐步回归分析显示,DCM患者血清sTWEAK水平受LVMI的影响。结论 DCM患者血清sTWEAK水平降低,并能反映DCM患者左室重构的严重程度。

胰岛素抵抗小鼠脂肪组织肿瘤坏死因子α和脂联素mRNA表达与有氧运动的影响

背景:有研究表明有氧运动可通过调节脂肪组织过氧化物酶体激活物增殖受体γ及其相关脂肪因子进而影响胰岛素敏感性,但其影响结果及作用机制至今少有报道。目的:观察有氧运动后,胰岛素抵抗C57BL/6小鼠脂肪组织过氧化物酶体激活物增殖受体γ、肿瘤坏死因子α和脂联素mRNA及蛋白表达水平的变化,分析有氧运动对胰岛素抵抗小鼠影响的作用机制。方法:C57BL/6小鼠经高脂饮食喂养10周后建立胰岛素抵抗动物模型,建模后将小鼠随机分为安静组与运动组。运动组进行为期6周,75%VO2max强度跑台运动;安静组同等条件下饲养不运动。使用RT-PCR和Western blot法检测两组脂肪组织过氧化物酶体激活物增殖受体γ,脂联素、肿瘤坏死因子αmRNA和蛋白表达。结果与结论:6周有氧跑台运动对小鼠脂肪组织过氧化物酶体激活物增殖受体γ表达差异无显著性意义(P>0.05),但可显著增加小鼠脂肪组织脂联素的表达(P<0.01),降低肿瘤坏死因子α的表达(P<0.05);并且可显著降低血液中三酰甘油、游离脂肪酸水平(P<0.05,P<0.01)。结果提示有氧运动可能通过调节过氧化物酶体激活物增殖受体γ相关脂肪因子-脂联素和肿瘤坏死因子α的表达来间接调节脂肪组织对胰岛素的敏感性。有氧运动可以显著增加机体组织对胰岛素的敏感性,从而改善C57BL/6小鼠胰岛素抵抗的症状。

肿瘤坏死因子-α对脂肪细胞脂联素和炎症因子mRNA表达的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在肥胖-炎症-胰岛素抵抗(IR)-2型糖尿病(T2DM)的病生理过程中的作用。方法:(1)培养前脂肪细胞3T3-L1细胞,并观察其诱导分化成熟过程中过氧化物酶体增殖活化受体-γ(PPAR-γ)mRNA、脂联素(ADPN)mRNA的表达情况。(2)以高浓度(20μg/L)的TNF-α处理分化成熟的脂肪细胞0.5、4、8、24h,提取总RNA,采用实时定量逆转录聚合酶链反应检测ADPN mRNA、PPAR-γmRNA、TNF-αmRNA、白细胞介素(IL)-6mRNA、IL-1βmRNA的表达情况。结果:(1)3T3-L1细胞诱导分化过程中ADPN mRNA的表达呈逐渐上升趋势,诱导后PPAR-γmRNA增加。(2)分化成熟的脂肪细胞中ADPN mRNA表达水平在TNF-α处理0.5、4、8h后随着时间延长逐渐下降,8h时降至最低(P<0.01)。0.5h后PPAR-γmRNA表达水平并未出现明显下降,4、8、24h时均低于对照组(P<0.01),4h时降至最低。TNF-α处理0.5h后TNF-αmRNA表达水平明显上升,并于4h时达峰值,各处理组均高于对照组(P<0.01);0.5h后IL-6mRNA表达水平明显升高,各处理组均高于对照组(P<0.01)。空白组、对照组和各TNF-α处理组IL-1βmRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本实验从分子生物学水平证实了TNF-α参与肥胖-炎症-IR-T2DM的过程。

肿瘤坏死因子α对人脂联素3T3-L1细胞PPARγ2 mRNA表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对稳定表达人脂联素3T3-L1细胞过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ2mRNA表达的影响,为进一步研究脂联素功能提供了实验基础。方法重组脂联素真核表达质粒(pcDNA3·1+-hADPN)脂质体法稳定转染3T3-L1细胞。用TNF-α(100ng/ml)处理未转染、转染空载载体、转染pcDNA3·1+-hADPN的3T3-L1细胞,RT-PCR检测PPARγ2mRNA的表达量。结果(1)稳定转染了pcDNA3·1+-hADPN的未分化和已分化3T3-L1细胞中,PPARγ2表达量较未转染组明显增加(P<0·01)。(2)TNF-α可明显抑制PPARγ2mRNA的表达(P<0·05)。(3)稳定转染pcDNA3·1+-hADPN可改善TNF-α抑制作用(P<0·05)。结论稳定转染pcDNA3·1+-hADPN可明显增加未分化和已分化的3T3-L1细胞PPARγ2mRNA表达。TNF-α抑制PPAR-γ2mRNA表达,而转染pcDNA3·1+-hADPN可改善TNF-α抑制作用。

PPARδ-87T/C基因多态性与糖代谢指标及肿瘤坏死因子浓度的研究

目的研究PPARδ-87T/C基因多态性与糖代谢相关指标及血浆肿瘤坏死因子浓度的关系。方法检测大连地区汉族人2型糖尿病(T2DM)组(286例)和空腹血糖正常(NFG)组(158例)的体重指数(BMI)、腰围、空腹血糖、血脂、胰岛素、肿瘤坏死因子浓度,以及PPARδ-87T/C基因多态性。结果T2DM组、NFG组基因型频率无统计学差异(P=0.012,P=0.994)。T2DM组,不同基因型间空腹血糖、体重指数、甘油三脂、胰岛素抵抗指数及血浆TNFα有统计学意义;NFG组中,不同基因型的空腹血糖及胰岛素抵抗指数有统计学意义。结论PPARδ-87T/C多态性与T2DM组的糖脂代谢、胰岛素敏感性及血浆TNFα相关;与NFG组胰岛素敏感性及空腹血糖相关。