儿童病毒性肺炎血清肿瘤坏死因子超家族成员14、甲壳质酶蛋白40、可溶性白细胞介素2受体水平变化与短期预后的相关性

目的探讨儿童病毒性肺炎血清肿瘤坏死因子超家族成员14(TNFSF14)、甲壳质酶蛋白40(YKL-40)、可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)水平变化与短期预后的关系。方法选取2019年1月—2020年6月在西安国际医学中心医院儿科接受治疗的病毒性肺炎患儿120例(观察组)。另选取这一时期在该院体检健康儿童80例(对照组)。采用酶联免疫吸附法检测血清TNFSF14、YKL-40、sIL-2R水平,并分析其与患者病情程度及预后的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线,分析TNFSF14、YKL-40、sIL-2R对病毒性肺炎患儿临床预后的诊断效能。结果观察组血清TNFSF14、YKL-40、sIL-2R水平分别均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。重度组血清TNFSF14、YKL-40、sIL-2R水平分别高于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清TNFSF14、YKL-40、sIL-2R水平分别高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清TNFSF14、YKL-40、sIL-2R分别与急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ)的评分呈正相关(P<0.05)。ROC曲线结果示:血清TNFSF14、YKL-40、sIL-2R联合检测预测患儿不良预后的AUC为0.921(95%CI:0.867~0.984,P<0.001),灵敏度和特异度分别为0.905和0.816。多因素logistic回归分析结果示:APACHEⅡ评分(95%CI:1.001~3.268,P=0.005)及血清CRP(95%CI:1.755~6.143,P=0.001)、TNFSF14(95%CI:1.427~5.619,P=0.001)、YKL-40(95%CI:1.109~3.525,P<0.001)、sIL-2R(95%CI:1.265~4.173,P=0.002)是病毒性肺炎患儿不良预后的独立危险因素。结论血清TNFSF14、YKL-40、sIL-2R水平变化与病毒性肺炎患儿的病情严重程度及临床预后密切相关,也是影响患儿不良预后的重要危险因素,且对评估患儿的临床结局有较高参考价值。

Krüppel样因子5和肿瘤坏死因子受体超家族成员11a在宫颈癌组织及细胞中的表达及其作用

目的探讨Krüppel样因子5(KLF5)和肿瘤坏死因子受体超家族成员11a(TNFRSF11a)在宫颈癌组织中的表达及对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。方法利用基因芯片筛查宫颈组织中细胞应答炎症反应的相关基因mRNA的表达。采用实时荧光定量PCR对芯片检测的结果进行验证。免疫双荧光染色检测宫颈组织中KLF5和TNFRSF11a的共表达。在人宫颈癌He La细胞中,采用脂质体转染特异性小分子干扰RNA分别敲低KLF5和TNFRSF11a的表达,构建KLF5超表达腺病毒,感染细胞过表达KLF5。Western blot检测细胞内相关蛋白水平变化。采用双荧光素酶报告基因检测转录因子KLF5对TNFRSF11a的表达调控作用。CCK8和Transwell实验检测细胞增殖和迁移侵袭情况。临床分析TNFRSF11a的mRNA表达与宫颈癌临床病理参数的关系。结果基因芯片结果证实宫颈鳞癌组织中基因TNFRSF11a、KLF5较正常宫颈组织表达上调(P=0.002,P=0.045),实时荧光定量PCR结果证实与正常宫颈组织相比,宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ、CINⅡ-Ⅲ、宫颈鳞癌组织中KLF5和TNFRSF11a的mRNA表达结果均上调(KLF5:F=32.79,P=0.018,P=0.014,P=0.011;TNFRSF11a:F=36.72,P=0.013,P=0.010,P=0.009)。免疫双荧光染色结果证实与正常宫颈组织相比,CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ、宫颈鳞癌组织中KLF5和TNFRSF11a的蛋白表达结果均上调(KLF5:F=42.38,P=0.014,P=0.008,P=0.002;TNFRSF11a:F=35.42,P=0.021,P=0.012,P=0.004)。体外实验证实KLF5靶向调控TNFRSF11a的表达并促进宫颈癌细胞的增殖和迁移侵袭。临床分析显示TNFRSF11a的mRNA表达与肿瘤病理分级、临床分期、肌层浸润深度、淋巴结转移正相关(P<0.05)。结论 KLF5和TNFRSF11a与宫颈癌相关;KLF5通过上调TNFRSF11a的表达促进宫颈癌细胞的增殖和侵袭、转移。

肿瘤坏死因子受体超家族成员4(TNFRSF4)敲除和人源化小鼠模型的建立

目的建立肿瘤坏死因子受体超家族成员4(TNFRSF4)基因人源化小鼠模型,同时建立TNFRSF4基因敲除小鼠模型,为针对TNFRSF4靶点的肿瘤治疗性抗体研发和筛选提供有效的小鼠模型,并为研究TNFRSF4在免疫过程中的作用机制提供小鼠模型。方法利用CRISPR/Cas9技术,建立TNFRSF4基因人源化和敲除小鼠模型,利用PCR、RT-PCR、免疫组织化学、流式细胞术等方法鉴定及比较分析人源化小鼠、敲除小鼠和野生型小鼠的差异。结果获得表达人源TNFRSF4基因小鼠和TNFRSF4基因敲除小鼠。在TNFRSF4人源化小鼠中稳定表达人源TNFRSF4,未检测到小鼠TNFRSF4表达。在TNFRSF4敲除小鼠中未检测到TNFRSF4表达。TNFRSF4人源化及敲除小鼠出生后6个月内均正常存活,组织病理学表型及免疫系统未见明显异常。结论利用CRISPR/Cas9技术构建TNFRSF4人源化小鼠及敲除小鼠,可用于筛选及评估与TNFRSF4基因相关的治疗性抗体及药物或研究TNFRSF4在免疫过程中作用机制。

肿瘤坏死因子受体超家族成员21在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的基于生物信息学分析探讨肿瘤坏死因子受体超家族成员21(TNFRSF21)在肝细胞癌(HCC)中的表达和预后价值、潜在的生物学功能及对免疫微环境的影响。方法从高通量基因表达(GEO)数据库获取HCC细胞株数据集筛选共交集基因。从癌症基因组图谱(TCGA)数据库获取HCC样本数据信息,分析TNFRSF21表达与总生存时间(OS)、临床病理特征的关系,以及在癌组织和癌旁组织中的表达情况。收集2009年7月至2010年10月手术切除的67例HCC组织及配对癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测TNFRSF21水平,分析HCC组织中TNFRSF21表达水平及与HCC患者OS的关系。通过STRING构建蛋白互作网络,采用基因本体(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析,探讨TNFRSF21的生物学功能和肿瘤相关通路。使用TIMER和TISIDB数据库分析HCC中TNFRSF21表达与肿瘤免疫浸润细胞的相关性。结果基于GEO数据集,筛选出CSN5基因敲低的HepG2、Huh7细胞株与COP1基因敲低的HepG2、Huh7细胞株共同的差异表达基因TNFRSF21、CROT、APPBP2和CPD。基于TCGA数据库,TNFRSF21在50例癌旁组织中的中位表达量为3.125,而在374例HCC组织中为3.953(P<0.001)。HCC组织中TNFRSF21 mRNA的相对表达量为1.77±1.60,高于配对癌旁组织的1.07±0.83(P=0.002)。生存分析显示,仅TNFRSF21基因表达与OS有关(P=0.030)。67例HCC患者中,TNFRSF21低表达组的中位OS未达,显著优于高表达组的35.0个月(P=0.039)。根据TCGA数据库TNFRSF21表达中位值2.678将374例HCC患者分为TNFRSF21高表达组和低表达组,发现TNFRSF21表达与血清AFP水平(P<0.001)和血管侵犯(P=0.029)有关。STRING及富集分析发现,TNFRSF21可能通过APP、TARDD等配体参与NF-κB及JNK信号通路调控肿瘤的发生发展。TIMER分析显示,TNFRSF21表达与B细胞(r=0.299,P<0.001)、CD8+T细胞(r=0.242,P<0.001)、CD4+T细胞(r=0.417,P<0.001)、巨噬细胞(r=0.527,P<0.001)、中性粒细胞(r=0.389,P<0.001)及树突细胞(r=0.363,P<0.001)免疫浸润呈正相关;TISIDB分析显示,TNFRSF21表达与活化的树突状细胞(r=0.271,P<0.001)、滤泡辅助性T细胞(r=0.333,P<0.001)、肥大细胞(r=0.270,P<0.001)和CD4+中央记忆性T细胞(r=0.393,P<0.001)丰度呈正相关。结论TNFRSF21在HCC组织中表达升高,高表达者预后不良。TNFRSF21可能通过内皮细胞坏死和肿瘤免疫浸润细胞改变肿瘤微环境,促进HCC的发生发展,有望成为HCC预后不良的分子标记物。

基于公共数据库分析肿瘤坏死因子受体超家族成员-4在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的 通过多个数据库资料结合临床样本分析喉鳞状细胞癌(鳞癌)患者中肿瘤坏死因子受体超家族成员(TNFRSF)4表达水平的变化,研究TNFRSF4在喉鳞癌发生发展中的作用。方法 根据高通量基因表达(GEO)数据库和癌症基因组图谱(TCGA)数据库转录组表达谱数据筛选出差异表达的基因,结合基因表达谱数据动态分析(GEPIA)数据库对差异基因TNFRSF4进行表达水平预测和生存分析;同时通过3例患者的喉鳞癌组织与癌旁组织标本进行qRT-PCR和Western blot验证,基于TCGA的临床数据绘制K-M生存曲线图并进行Cox回归分析。采用基因集富集分析探究与TNFRSF4在喉鳞癌中作用有关的信号通路。结果 数据库和临床样本中,喉鳞癌组中TNFRSF4的表达高于正常组(P<0.05),且TNFRSF4高表达组的生存率高于TNFRSF4低表达组(P<0.01)。多因素的Cox回归分析显示,TNFRSF4表达水平(HR:0.430,95%CI:0.229~0.806,P=0.009)、性别(HR:0.424,95%CI:0.204~0.882,P=0.022)、淋巴结分期(HR:2.010, 95%CI:1.055~3.831,P=0.034)和远处转移(HR:3.706, 95%CI:1.152~11.922,P=0.028)四个因素共同对患者的总生存时间产生影响。基因集富集分析的结果显示,与TNFRSF4表达最显著相关的信号通路有细胞黏附分子、JAK-STAT信号通路、T细胞受体信号通路、B细胞受体信号通路、原发性免疫缺陷和自身免疫性甲状腺疾病。结论 TNFRSF4高表达可能是喉鳞癌患者预后良好的生物标志物。

肿瘤坏死因子超家族成员14调控炎症反应和脂质代谢的作用机制

目的探讨肿瘤坏死因子超家族成员14(LIGHT)在脂质代谢中的作用,为高脂血症相关疾病的临床治疗提供参考。方法冠心病患者32例,其中不稳定型心绞痛组和稳定型心绞痛组各16例;健康人16例作为正常对照组。检测LIGHT在不同阶段冠心病患者中的表达变化,观察脂质代谢相关酶和炎症相关蛋白在氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导单核巨噬细胞(THP-1)中的表达。结果LIGHT在冠心病患者中表达水平显著高于健康人;LIGHT增强清道夫受体(SR-A),乙酰辅酶A乙酰转移酶1(ACAT1),脂肪基因(SREBP-1c、ACS)和促炎细胞因子[白细胞介素(IL)-6、人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、一氧化氮合酶(iNOS)]的表达(P<0.05),该作用可被淋巴毒素β受体(LTβR-Ig)阻止;SN50显著抑制核转录因子(NF)-κB、p65、IL-6和脂肪基因的表达(P<0.05)。结论LIGHT通过激活NF-κB信号通路促进炎症反应和脂质累积,可为高脂血症相关疾病的治疗提供一个新的潜在靶点。

肿瘤坏死因子受体（TNFR）超家族三聚体

肿瘤坏死因子受体（TNFR）超家族的信号转导系统依赖于三聚配体复合物结构的形成，该复合物能激活受体，引起系列生化反应。复合物中几种TNF家族成员与其同源受体的结构表明，每种三聚配体与三种单体受体链相互作用。近期有文章分别报道了利用小分子激动剂和拮抗剂靶向作用于TNFR超家族成员的一种新方法。

肿瘤坏死因子受体2突变载体对巨噬细胞炎症反应的影响

目的探讨肿瘤坏死因子受体超家族1B(TNFRSF1B)196位基因多态性(T突变为G)与巨噬细胞TNF/TNFR2信号通路介导炎症反应的相关性。方法运用基因重组技术构建真核表达载体pcDNA6.0-TNFR2196Met和pcDNA6.0-TNFR2196Arg,采用脂质体转染法分别转染至巨噬细胞中,转染48 h后使用杀稻瘟菌素抗性筛选4周,建立稳定转染细胞系。将酶消化法培养的巨噬细胞分为四组:空白对照组、pcDNA6.0空质粒组、pcDNA6.0-TNFR2196Met组及pcDNA6.0-TNFR2196Arg组。采用酶切及测序法鉴定重组质粒,RT-PCR检测肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)、cIAP1、cIAP2mRNA的变化;Western blot检测p-JNK、cIAP1、cIAP2、TNFR2及核因子κB(NF-κB)的蛋白表达;ELISA检测细胞上清液可溶性TNFR2(sTNFR2)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)水平。结果酶切测序结果显示成功构建了TNFR2基因196Met和196Arg表达载体。转染到巨噬细胞后,与空白对照组和pcDNA6.0空质粒组比较,pcDNA6.0-TNFR2196Arg组、pcDNA6.0-TNFR2196Met组TNFR2、cIAP1、cIAP2、IL-1β、IL-6和p-JNK的表达增高(P<0.05);与pcDNA6.0-TNFR2196Met组比较,pcDNA6.0-TNFR2196Arg组TNFR2、cIAP1、cIAP2、IL-1β、IL-6和pJNK的表达明显降低(P<0.05),TNFR2196Arg介导的NF-κB活性显著降低。结论成功构建稳定表达TNFR2196Met、TNFR2196Arg载体,TNFR2突变通过TNF/TNFR2信号通路介导炎症反应,可能是参与慢性炎症性疾病的作用机制。

肿瘤坏死因子受体超家族1B基因多态性与HCV感染结局的相关性

目的探讨肿瘤坏死因子受体超家族1B(TNFRSF1B)基因多态性与丙型肝炎病毒(HCV)感染结局的相关性。方法纳入1 645例无HCV感染者,545例HCV清除者,783例HCV慢性化者,采用TaqMan探针法对rs1061622(T > G)和rs1061624(G > A)两个单核苷酸多态性位点(SNP)进行基因分型,并构建单倍型,评估其与HCV感染结局的相关性。结果经logistic回归分析均两个SNPs与HCV感染的易感性和慢性化无相关性(P值均> 0.05)。单倍型分析显示,携带TA单倍型可增加HCV感染的易感性[调整后比值比(OR)= 1.15,95%可信区间(CI):1.01~1.30,P = 0.038)],携带TA和GG单倍型均有利于HCV感染慢性化(调整后OR = 1.28,95% CI:1.08~1.53,P = 0.006;OR = 1.31, 95% CI:1.03~1.66,P = 0.026)。结论TNFRSF1B基因rs1061622和rs1061624的共同效应可增加HCV感染和慢性化的风险。

肿瘤坏死因子受体超家族成员-14在鼻咽癌中表达水平及其与预后相关性分析

目的探讨肿瘤坏死因子受体超家族成员-14(TNFRSF14)在鼻咽癌中的表达水平及其与预后的相关性。方法选取广东医科大学附属医院自2017年1月至2019年12月收治的90例鼻咽癌患者为研究对象。采用免疫组织化学法检测患者鼻咽癌组织及癌旁组织的TNFRSF14表达水平;采用χ~2检验分析鼻咽癌组织TNFRSF14表达水平与鼻咽癌患者临床病理特征的相关性;采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析鼻咽癌组织TNFRSF14表达水平与鼻咽癌患者预后的关系;采用Cox风险模型分析鼻咽癌患者的预后影响因素。结果鼻咽癌组织的TNFRSF14阳性表达率(75.6%,68/90)显著高于癌旁组织(26.7%,24/90),差异有统计学意义(P<0.05)。TNFRSF14表达水平与鼻咽癌患者的肿瘤最大径、临床分期、分化程度、淋巴结转移存在相关性(P<0.05),而与年龄、性别、家族史无关(P>0.05)。TNFRSF14阳性表达患者的中位存活期为37个月,而TNFRSF14阴性表达患者的中位存活期为45个月,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤最大径、临床分期、TNFRSF14表达为鼻咽癌患者的预后影响因素(P<0.05)。结论TNFRSF14表达水平可作为一种预测鼻咽癌患者预后的潜在指标。

TNFRSF10B在直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨肿瘤坏死因子受体超家族成员(TNFRSF)10B在直肠癌组织中的表达及临床意义,以期为直肠癌预后判断提供理论依据。方法选取2013年9月至2017年7月在唐山市中医医院进行手术治疗的直肠癌患者87例为研究对象,采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学染色法检测患者直肠癌组织及癌旁组织中TNFRSF10B mRNA及蛋白的表达情况,分析TNFRSF10B蛋白表达与直肠癌患者临床病理特征及预后的关系。结果癌旁组织中TNFRSF10B mRNA的表达水平明显低于直肠癌组织中TNFRSF10B mRNA的表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。癌旁组织中TNFRSF10B蛋白的高表达率为13.79%,明显低于直肠癌组织中TNFRSF10B蛋白的高表达率(54.02%),差异有统计学意义(P<0.05)。TNFRSF10B蛋白表达与直肠癌患者临床分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移、远处转移有关(P<0.05)。TNFRSF10B蛋白高表达、临床分期Ⅲ+Ⅳ期、淋巴结转移是影响直肠癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论TNFRSF10B在直肠癌组织中高表达,与直肠癌的发生、发展相关,对直肠癌患者预后评估有一定的指导意义。

微小RNA-203b-3p调控多发性骨髓瘤细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的 观察微小RNA-203b-3p(miR-203b-3p)通过调节肿瘤坏死因子超家族成员13b(TNFSF13B)对多发性骨髓瘤(MM)细胞的影响,探讨miR-203b-3p抑制MM的相关机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹分析(Western blot)检测miR-203b-3p和TNFSF13B在骨髓瘤肿瘤和细胞中的表达情况。miR-203b-3p与TNFSF13B的关系采用双荧光素酶报告实验进行验证。Lipofectamine 2000试剂用于MM细胞转染。miR-203b-3p和TNFSF13B对MM细胞生物功能的影响采用克隆形成试验、划痕试验和Transwell试验进行分析。结果 与癌旁组织及正常细胞比较,MM组织和细胞中miR-203b-3p的表达量相对较低,而TNFSF13B在MM肿瘤和细胞中的表达量与正常组织和细胞相比升高,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果表明,TNFSF13B是miR-203b-3p的直接靶点。miR-203b-3p在MM细胞中的过量表达能够抑制细胞的增殖和转移,差异有统计学意义(P<0.05),而TNFSF13B的表达上调则促进了MM细胞的增殖、迁移和侵袭,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-203b-3p可能通过下调TNFSF13B抑制MM细胞的增殖、侵袭和转移。

DcR3在消化道恶性肿瘤中的作用

诱骗受体3(DcR3)是新近发现的肿瘤坏死因子受体超家族成员,其基因的表达和扩增与人类多种恶性肿瘤的发生、发展及肿瘤的免疫逃逸密切相关,对进一步研究消化道肿瘤发病机理以及肿瘤诊断和治疗方法有一定的指导意义。就DcR3在消化道恶性肿瘤中的作用作一综述。

免疫因子表达异常促进宫颈癌微环境免疫失衡

目的评估叉头蛋白3(Fox P3)、趋化因子配体22(CCL22)、肿瘤坏死因子受体超家族成员40(OX40)和SMAD家族成员3(Smad3)在宫颈癌免疫微环境中的调节作用和对肿瘤发生的影响。方法采用qRT-PCR方法检测宫颈癌癌灶、癌旁和正常宫颈组织中Fox P3、CCL22、OX40和Smad3的mRNA表达水平。结果与正常宫颈组织相比,Fox P3和CCL22 mRNA在癌灶(P=0.000,P=0.002)和癌旁(P=0.048,P=0.040)的表达显著升高,两者在高级别鳞癌癌灶(P=0.019,P=0.020)和癌旁(P=0.023,P=0.031)中的表达明显高于低级别鳞癌。OX40和Smad3的mRNA在癌灶中的表达明显低于正常宫颈(P=0.000,P=0.015),两者在高级别鳞癌癌灶(P=0.018,P=0.030)和癌旁(P=0.027,P=0.014)中的表达明显低于低级别鳞癌。在宫颈癌灶和癌旁中,OX40 mRNA与Smad3 mRNA(r=0.384,P=0.002;r=0.288,P=0.023)、Fox P3 mRNA与CCL22 mRNA均呈正相关(r=0.353,P=0.000;r=0.307,P=0.000),CCL22 mRNA与OX40 mRNA呈负相关(r=-0.288,P=0.031;r=-0.263,P=0.037)。Fox P3和CCL22mRNA在HPV阳性的宫颈癌灶(P=0.024,P=0.039)和癌旁(P=0.032,P=0.034)中的表达明显高于阴性组,Smad3在HPV阳性宫颈癌灶中的表达明显低于HPV阴性组(P=0.017)。结论在宫颈癌发生的微环境中,存在免疫因子Fox P3、CCL22、OX40和Smad3的转录表达异常,这种表达偏移可能导致宫颈癌局部OX40和Smad3的正性调节被削弱,而Fox P3和CCL22的免疫抑制作用增强的免疫模式,共同参与促成局部免疫失衡和肿瘤的发生。

TRAIL及其受体在PCOS病人卵巢颗粒细胞表达

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体死亡受体4(DR4)和诱骗受体1(DcR1)在多囊卵巢综合征(PCOS)病人卵巢颗粒细胞的表达及其与PCOS发病的关系。方法收集PCOS病人30例及卵巢正常者(对照组)30例的卵巢颗粒细胞,RT-PCR方法分析两组TRAIL及其受体DR4、DcR1 mRNA表达情况,Western blot法检测两组TRAIL及其受体DR4、DcR1蛋白表达情况。结果 PCOS组TRAIL mRNA及蛋白表达较对照组明显增加(t=2.641、2.891,P<0.01),DcR1mRNA和蛋白表达较对照组明显降低(t=2.039、3.079,P<0.01),两组DR4mRNA和蛋白表达比较差异无显著性(P>0.05)。结论 PCOS病人卵巢颗粒细胞TRAIL及其受体异常表达,可能通过参与卵巢颗粒细胞凋亡调控导致PCOS发病。

对头颈鳞状细胞癌中高表达基质金属蛋白酶基因具有激活作用的人类膜蛋白基因筛选

目的对头颈部鳞状细胞癌中高表达的基质金属蛋白酶(MMP)基因(包括MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、MMP10、MMP12和MMP13)具有激活作用的人类膜蛋白基因进行筛选。方法构建上述7个备选MMP启动子报告基因质粒。用豆蔻酸佛波酰乙酯(PMA,一种蛋白激酶C激活剂)刺激7个备选MMP启动子报告基因质粒。用双荧光素酶检测系统检测各备选MMP启动子报告基因质粒PMA刺激前的活性及PMA刺激后的活性,以后者除以前者得出各备选MMP启动子报告基因质粒的相对荧光素酶活性值(RLA),RLA最大者选定为MMP启动子报告基因质粒。用人类膜蛋白基因质粒库中的722种质粒依次刺激MMP启动子报告基因质粒,刺激前后MMP启动子报告基因质粒RLA均数超过10确定为对MMP启动子报告基因质粒活性有明显激活作用的人类膜蛋白基因质粒。将筛选出的人类膜蛋白基因质粒以相同方法进行第二轮筛选,第二轮筛选出的人类膜蛋白基因质粒以相同方法进行第三轮筛选,最终确定对头颈部鳞状细胞癌中高表达的MMP有激活作用的人类膜蛋白基因。结果PMA刺激后MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、MMP10、MMP12、MMP13启动子报告基因质粒的RLA分别为4.53±0.72、1.47±0.28、23.28±1.96、2.37±0.46、8.81±1.35、2.15±0.51、3.47±0.99。MMP3启动子报告基因质粒的RLA明显高于其他MMP启动子报告基因质粒(P均<0.05),被选为MMP启动子报告基因质粒。全部722个质粒经3轮筛选,确定AXL受体酪氨酸激酶(AXL)、肿瘤坏死因子受体超家族成员10b(TNFRSF10B)和G蛋白耦联受体65(GPR65)质粒对MMP启动子报告基因质粒均有明显的激活作用。结论 GPR65、AXL、TNFRSF10B基因对头颈部鳞状细胞癌中高表达的MMP基因有激活作用。

TNFRSF19基因研究性进展

TNFRSF19基因是肿瘤坏死因子受体超家族成员之一,在检测的大多数组织中表达,但不参与免疫应答的调节。关于TNFRSF19基因的生物学研究已经取得了重要进展,目前发现该基因的表达与众多疾病具有相关性,例如在神经母细胞瘤、鼻咽癌、血管性痴呆等。

共同沉默DcR3和EGFR基因对结肠癌细胞株SW480体外生长的影响

目的探讨共同沉默诱骗受体3(DcR3)和表皮生长因子(EGFR)基因对结肠癌细胞株SW480生长增殖的影响和诱导凋亡作用研究。方法根据DcR3、EGFR的cDNA序列构建3组针对DcR3和EGFR的siRNA,分别使用脂质体Lipofectamine 2000转染的方法将各个siRNA导入结肠癌细胞株SW480中,48h后通过实时荧光定量PCR检测各个siRNA对肿瘤靶基因mRNA表达的影响,采用Western-blot技术检测其靶基因蛋白的表达水平,筛选出对人结肠癌SW480细胞系中DcR3和EGFR抑制效果最强的siRNA,然后单独或联合转染SW480细胞,MTT法检测转染后对结肠癌细胞株SW480生长增殖活性的影响,流式细胞仪检测对结肠癌细胞株SW480的诱导凋亡作用。结果共同沉默DcR3和EGFR基因对SW480细胞增殖的抑制作用优于DcR3或EGFR单基因沉默组(P<0.05)。双基因共沉默组、DcR3单基因沉默组、EGFR单基因沉默组转染48h后转染细胞的凋亡率分别为(20.1±1.7)%,(16.5±2.2)%及(15.9±1.3)%,差别具有统计学意义(P<0.05)。结论DcR3和EGFR双基因共沉默能有效抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖并诱导其凋亡,且作用优于DcR3或EGFR单基因沉默。

吉兰-巴雷综合征外周血单个核细胞DcR3 mRNA表达

目的研究吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barrésyndrome,GBS)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中凋亡相关基因诱骗受体(DCR3)mRNA的表达水平。探讨DcR3与GBS疾病严重程度及脑脊液免疫球蛋白(CSF-Ig,包括IgGI、gA、IgM)水平之间的关联性。方法以36例GBS患者和20名健康人为研究对象,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周静脉血PBMCs DcR3 mRNA表达水平,并对GBS患者CSF-Ig水平与疾病严重程度和DcR3 mRNA表达的相关性进行分析。结果 GBS患者PBMCs中DcR3 mRNA表达水平(0.40±0.08)明显高于健康对照组(0.17±0.04)(P<0.01),但轻型组和重型组患者表达水平(分别为0.39±0.07、0.41±0.05)间比较无统计学差异(P>0.05)。GBS患者轻型组IgG、IgA、IgM表达水平分别为(0.123±0.113)、(0.016±0.012)和(0.012±0.011)g/L,与重型组〔IgGI、gA、IgM分别为(0.128±0.112)(、0.015±0.011)和(0.013±0.013)g/L〕比较无统计学差异(均P>0.05)。DcR3 mRNA表达与CSF-Ig水平异常无相关性(rIgG=0.0083,rIgA=0.0056,rIgM=0.0015,均P>0.05)。结论 GBS患者PBMCs DcR3 mRNA表达增加,提示DcR3可能与GBS免疫细胞凋亡异常和免疫调节紊乱有关,可能参与了GBS的发病过程。DcR3与GBS病情严重程度和CSF-Ig的异常无相关性。

微小RNA-152靶向DcR3对HepG2细胞相关信号通路的作用

目的研究微小RNA-152(mi R-152)与其潜在靶基因Dc R3在肝癌组织中表达的关系及mi R-152在肝癌细胞系Hep G2中对Dc R3及相关信号通路的影响。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)检测89例肝癌组织中的mi R-152表达水平,并使用免疫组织化学检测其Dc R3蛋白表达水平,对比二者相关性;使用生物信息学软件对二者潜在靶向关系进行预测;将mi R-152抑制剂及模拟物转染至肝癌细胞系Hep G2中,使用蛋白印迹法测Dc R3蛋白及相关基因Wnt-1,DNMT-1,ERK1/2及AKT表达情况。结果肝癌组织中,mi R-152与Dc R3蛋白表达水平呈负相关(r=-0.347,P=0.002);软件预测发现mi R-152与Dc R3 3′-UTR序列呈互补关系;使用mi R-152模拟物后,Dc R3蛋白水平明显下降,同时Wnt-1,DNMT-1,p-ERK1/2及p-AKT表达也明显下降。结论在肝癌中,Dc R3可能为mi R-152的靶基因,mi R-152可通过靶向Dc R3而影响相应的增殖及凋亡通路。