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肿瘤坏死因子转换酶在炎性气道黏液高分泌中的作用 被引量:1
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作者 李雪霖 邬海桥 陈霞 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1228-1232,共5页
目的:探讨肿瘤坏死因子转换酶(TNF-αconverting enzyme,TACE)对炎症条件下气道上皮细胞形成黏液高分泌过程的影响。方法:通过不同剂量人中性粒细胞弹性蛋白酶(human neutrophil elastase,HNE)刺激人肺腺癌的气道上皮细胞A549,构建炎症... 目的:探讨肿瘤坏死因子转换酶(TNF-αconverting enzyme,TACE)对炎症条件下气道上皮细胞形成黏液高分泌过程的影响。方法:通过不同剂量人中性粒细胞弹性蛋白酶(human neutrophil elastase,HNE)刺激人肺腺癌的气道上皮细胞A549,构建炎症条件下气道黏液高分泌模型,以TACE抑制剂-1(TNF-αconverting enzyme inhibitor-1,TAPI-1)进行干预,观察TACE、黏蛋白(mucin,MUC)5AC的表达。将A549细胞分为5组:对照组,HNE(15,25,50 nmol/L)组,TAPI-1组。RT-PCR检测各组TACE和MUC5AC m RNA的表达;Western印迹检测TACE蛋白的表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)观察MUC5AC蛋白的表达。结果:各剂量HNE处理后,TACE和MUC5AC的m RNA和蛋白表达均较对照组明显升高(P<0.01),且呈现剂量依赖性。而给予TAPI-1预处理后,与HNE刺激组比,各指标明显下调(P<0.01)。结论:TACE参与了黏液高分泌的细胞转导途径,并可促成炎性气道黏液高分泌的形成。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子转换酶 黏蛋白5AC 人中性粒细胞弹性蛋白 肿瘤坏死因子转换酶抑制剂-1
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肿瘤坏死因子前体转换酶前肽结构域对TACE活性调节作用 被引量:1
2
作者 李小鸥 阎媛 +2 位作者 黄巍 杨渝珍 王宏伟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期783-787,共5页
目的:探讨肿瘤坏死因子前体转换酶(TACE)的前肽结构域在TACE成熟过程中所起的作用,为人工干预炎症过程提供依据和手段。方法:以pIRES2-EGFP质粒为载体,利用DNA重组技术分别构造含信号肽结构域+前肽结构域、全长结构域及缺失前肽结构域... 目的:探讨肿瘤坏死因子前体转换酶(TACE)的前肽结构域在TACE成熟过程中所起的作用,为人工干预炎症过程提供依据和手段。方法:以pIRES2-EGFP质粒为载体,利用DNA重组技术分别构造含信号肽结构域+前肽结构域、全长结构域及缺失前肽结构域的真核表达重组体,根据其碱基数目分别命名为pIRES2-EGFP/T648、pIRES2-EGFP/T2472、pIRES2-EGFP/T57-T1824;真核转染U937细胞;LPS刺激转染细胞后,用ELISA法及流式细胞技术检测TNF-α。结果:pIRES2-EGFP/T648的真核表达能显著抑制TACE的活性,减少sTNF-α分泌,抑制率达61.09%;pIRES2-EGFP/T57-T1824的真核表达对sTNF-α的分泌无影响;pIRES2-EGFP/T2472的真核表达能显著增加sTNF-α分泌。结论:前肽结构域在TACE的成熟过程中起了双重作用,TACE抑制剂的研制和开发为抗炎药物的设计和改造提供了新的依据和方法。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子转换酶 Pro区域
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肿瘤坏死因子-α转换酶基因金属蛋白酶区的克隆及表达
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作者 张玉心 马涛 +1 位作者 陈治文 夏俊 《蚌埠医学院学报》 CAS 2006年第1期4-6,共3页
目的:克隆和构建含有肿瘤坏死因子-α转换酶金属蛋白酶区(m etalloprote inase dom ain of hum an tumor necrosis factor-αconverting enzym e,TACEmp)基因表达载体,并在大肠埃希菌中高效表达。方法:用RT-PCR方法,从THP-1细胞中扩增出... 目的:克隆和构建含有肿瘤坏死因子-α转换酶金属蛋白酶区(m etalloprote inase dom ain of hum an tumor necrosis factor-αconverting enzym e,TACEmp)基因表达载体,并在大肠埃希菌中高效表达。方法:用RT-PCR方法,从THP-1细胞中扩增出TACEmp基因片段,插入表达载体pET-D sbAmut,用限制性酶切和DNA测序进行鉴定;转化到大肠埃希菌BL21中进行诱导表达,通过SDS-PAGE电泳分析表达产物。结果:克隆TACEmp基因并构建重组表达载体pET-D sbAmut-TACEmp转化入BL21,IPTG诱导后获得高效表达的TACEmp融合表达蛋白。结论:利用分子伴侣融合蛋白技术使TACEmp在原核表达系统中获得了高效可溶性表达。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子转换 二硫键异构 基因克隆 原核表达
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非异羟肟酸类肿瘤坏死因子转化酶抑制剂的研究进展 被引量:2
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作者 孙宇 钟武 +1 位作者 李松 贾丽丹 《国际药学研究杂志》 CAS 2009年第3期172-174,共3页
类风湿性关节炎属自身免疫性疾病,全球约有1%~2%的人群受该病困扰。肿瘤坏死因子转化酶(TACE)是治疗类风湿性关节炎的潜在的靶点,当前TACE抑制剂主要分为异羟肟酸类和非异羟肟酸类抑制剂两类。本文对近几年来出现的新型非异羟肟酸类TAC... 类风湿性关节炎属自身免疫性疾病,全球约有1%~2%的人群受该病困扰。肿瘤坏死因子转化酶(TACE)是治疗类风湿性关节炎的潜在的靶点,当前TACE抑制剂主要分为异羟肟酸类和非异羟肟酸类抑制剂两类。本文对近几年来出现的新型非异羟肟酸类TACE小分子抑制剂进行介绍,使读者对当前高活性、高选择性非异羟肟酸类TACE抑制剂的发展和设计研究现状有个总体的了解。 展开更多
关键词 药物化学 肿瘤坏死因子转换酶抑制剂 非异羟肟酸类 类风湿性关节炎
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甲钴胺对VZV病毒感染施万细胞中朊蛋白和TNF-α转换酶表达的影响 被引量:1
5
作者 许纲 周朝生 +5 位作者 唐维桢 张雨 徐刚 程超 许洁 王晓梅 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 2022年第2期171-178,共8页
目的:探究感染水痘-带状疱疹病毒(VZV)对人施万细胞(hSC)朊蛋白(PrP^(C))、肿瘤坏死因子-α转换酶(TACE)和肿瘤坏死因子-α受体1(TNFR1)表达的影响,及甲钴胺(MCbl)的调节作用。方法:将传代培养的hSC分为:空白对照组、VZV感染组、VZV感染... 目的:探究感染水痘-带状疱疹病毒(VZV)对人施万细胞(hSC)朊蛋白(PrP^(C))、肿瘤坏死因子-α转换酶(TACE)和肿瘤坏死因子-α受体1(TNFR1)表达的影响,及甲钴胺(MCbl)的调节作用。方法:将传代培养的hSC分为:空白对照组、VZV感染组、VZV感染加MCbl干预组、VZV感染PrP^(C)基因(Prnp)siRNA转染细胞组、VZV感染Prnp-siRNA转染细胞加MCbl干预组。设计合成Prnp的siRNA序列转染hSC,构建PrP^(C)表达下调的hSC模型。以感染复数为1.0的VZV分别感染后4组细胞3 d后,加药组分别加入250μg/ml的MCbl干预。感染7 d后采用CCK-8法评估细胞活力,real time RT-PCR检测Prnp mRNA表达,Western Blot分析PrP^(C)糖基化的变化,免疫荧光双染检测TACE和TNFR1的表达,TACE试剂盒检测其酶活性的变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞上清液中可溶性TNFR1(sTNFR1)的浓度。结果:与对照组比较,感染组细胞活力明显下降(P<0.05)。感染组细胞Prnp的mRNA表达与对照组相比上调了2.7倍,PrP^(C)的单糖基化条带密度明显增加。TACE染色颗粒明显变小,TACE活性为对照组的36%,TNFR1表达与对照组比较明显增多,sTNFR1含量为(16.77±4.57)pg/ml。感染加药组Prnp mRNA表达上调3.7倍,显著高于感染组,PrP^(C)向单糖基化迁移的比例较感染组明显减少。TACE染色颗粒变大,且TACE的活性为对照组的76%,TNFR1表达较感染组减少,sTNFR1水平达到(231.23±41.04)pg/ml,较感染组明显增加。Prnp-siRNA转染细胞感染VZV后,TACE和TNFR1等表达及活性与VZV感染组比较无明显差异,sTNFR1含量与感染组比较无明显差异。Prnp-siRNA转染细胞感染VZV加药组对TACE和TNFR1的表达及活性调节作用不明显,sTNFR1含量与感染组比较无明显差异。结论:VZV可诱导hSC中PrP^(C)稳定性下降,TACE活性降低。而MCbl可稳定PrP^(C),调节TACE活性,促进TNFR1的脱落,从而增强hSC的抗TNF-α神经毒性能力。 展开更多
关键词 水痘-带状疱疹病毒 细胞型朊蛋白 肿瘤坏死因子转换 肿瘤坏死因子-α受体1 甲钴胺 施万细胞
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去整合素-金属蛋白酶17在消化系统恶性肿瘤中的研究现状 被引量:1
6
作者 徐榕 康海锋 +1 位作者 刘宏斌 钱俊波 《世界华人消化杂志》 CAS 2020年第19期986-991,共6页
去整合素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloproteinase 17,ADAM17)即肿瘤坏死因子α转换酶,在哺乳动物细胞中广泛分布,与细胞黏附、细胞迁移、白细胞募集、蛋白水解等功能密切相关.ADAM17在恶性肿瘤发生发展中起重要作用,一方面... 去整合素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloproteinase 17,ADAM17)即肿瘤坏死因子α转换酶,在哺乳动物细胞中广泛分布,与细胞黏附、细胞迁移、白细胞募集、蛋白水解等功能密切相关.ADAM17在恶性肿瘤发生发展中起重要作用,一方面通过介导膜蛋白脱落激活信号通路,参与细胞增殖、血管生成等;另一方面,通过降解细胞基底膜和细胞外基质,在肿瘤的侵袭和转移中发挥重要作用.因此,ADAM17可能作为肿瘤治疗的潜在靶点,本文就ADAM17在消化系统恶性肿瘤中的相关研究进行综述. 展开更多
关键词 去整合素-金属蛋白17 肿瘤坏死因子α转换 消化系统 恶性肿瘤
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电针对类风湿性关节炎大鼠膝关节滑膜组织肿瘤坏死因子-α转换酶/核转录因子-κB信号通路的影响 被引量:24
7
作者 李佳 李静 +1 位作者 唐宏图 朱广为 《针刺研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期215-219,246,共6页
目的:观察电针对类风湿性关节炎(RA)大鼠膝关节滑膜组织肿瘤坏死因子-α转换酶/核转录因子-κB(TACE/NF-κB)的影响,探讨电针抗RA的可能机制。方法 :SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组和非穴位组,每组10只,采用皮内注射牛Ⅱ型胶原诱... 目的:观察电针对类风湿性关节炎(RA)大鼠膝关节滑膜组织肿瘤坏死因子-α转换酶/核转录因子-κB(TACE/NF-κB)的影响,探讨电针抗RA的可能机制。方法 :SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组和非穴位组,每组10只,采用皮内注射牛Ⅱ型胶原诱发RA模型。电针组电针"足三里""悬钟"和"肾俞"穴,1次/d,共19d。非穴位组取穴位外侧旁开5mm进行针刺,方法与电针组相同。Westergren法检测血浆红细胞沉降率(ESR),速率散射比浊法检测血清C反应蛋白(CRP)和类风湿因子(RF),免疫印迹法检测膝关节滑膜组织TACE及NF-κB蛋白含量。结果:与正常组相比,模型组大鼠血浆ESR、血清CRP和RF显著升高,膝关节滑膜组织中TACE及NF-κB蛋白表达增加(P<0.01);与模型组相比,电针组大鼠ESR、CRP和RF显著降低,膝关节滑膜组织中TACE及NF-κB蛋白表达均降低(P<0.05);非穴位组与模型组比较,各项指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:电针能有效调节RA大鼠关节炎性损伤状况,降低RA大鼠膝关节滑膜组织中的TACE及NF-κB蛋白表达,这可能是电针通过调节TACE/NF-κB改善RA的信号调节机制之一。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 电针 足肿胀度 关节滑膜炎性反应 肿瘤坏死因子转换/核转录因子-κB信号系统
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跨膜肿瘤坏死因子α转换酶与肿瘤坏死因子-α相互关系及抑制调控的研究 被引量:1
8
作者 邓军卫 佘鸥 《华西医学》 CAS 2009年第10期2810-2813,共4页
象大多数解整连蛋白-金属蛋白酶(a disintegrin and metalloprotease,ADAMS),肿瘤坏死因子α转换酶(tumor necrosis factor-α converting enzyme,TACE)是一种多结构域的Ⅰ型跨膜蛋白,具有显著的金属蛋白酶水解活性。其主要功能是将膜... 象大多数解整连蛋白-金属蛋白酶(a disintegrin and metalloprotease,ADAMS),肿瘤坏死因子α转换酶(tumor necrosis factor-α converting enzyme,TACE)是一种多结构域的Ⅰ型跨膜蛋白,具有显著的金属蛋白酶水解活性。其主要功能是将膜结合型肿瘤坏死因子α(mTNF-α)前体水解,产生具有生物活性的可溶性TNF-α(sTNF-α),而对TACE这一在胞外脱落机制还不十分清楚,其在生物体内调节方式及各结构域的相互作用还有待进一步研究。而TACEC末端区域能否结合信号分子及其位点如何,对研究其结构和与其结合的蛋白质的信号转导以及转换的机制将有着重要的意义。找出其在胞膜外脱落的原因,是否与C末端结合的膜蛋白或蛋白水解酶有关,这已成为研究的热点。C末端尾部(694~824)为胞浆内段,包含一个潜在的磷酸化位点和一个结合同源物3区(Srchomology3do-main,SH3)的位点,有趣的是TACE胞内区很可能具有信号转导的功能。本文就近年来TACE在其生物学结构、特性和与疾病关系方面的研究进行综述。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子α转换 肿瘤坏死因子Α 跨膜蛋白 基质金属蛋白 膜结合型
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肿瘤坏死因子-α转换酶的研究进展 被引量:1
9
作者 曹国永 周跃 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期443-446,共4页
关键词 肿瘤坏死因子转换 研究进展 单核细胞 巨噬细胞
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LPS对金属蛋白酶的诱导表达及中药热毒清的保护机制 被引量:1
10
作者 张玉心 马涛 +2 位作者 韩玲 丁廷波 杨渝珍 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2006年第4期294-297,共4页
背景与目的:以肿瘤坏死因子(Tumournecrosisfactor-α,TNF-α)前体向分泌型TNF-α转化过程为目标,探讨HL-60细胞中金属蛋白酶(Metalloproteinases,MPs)家族的基质金属蛋白酶(Matrixmetalloproteinases,MMPs)和解整合素金属蛋白酶(Adisin... 背景与目的:以肿瘤坏死因子(Tumournecrosisfactor-α,TNF-α)前体向分泌型TNF-α转化过程为目标,探讨HL-60细胞中金属蛋白酶(Metalloproteinases,MPs)家族的基质金属蛋白酶(Matrixmetalloproteinases,MMPs)和解整合素金属蛋白酶(Adisintegrinandmetalloproteases,ADAM)两亚类成分参与炎症因子分泌的机理以及中药热毒清(Reduqing,RDQ)抗炎保护功效的分子机制。材料与方法:采用细胞毒性-MTT检测法、原位杂交、PAG-底物(明胶)电泳等方法分别检测HL-60、U937和小鼠腹腔巨噬细胞在大肠杆菌内毒素(LPS)及RDQ的作用下,MMPs、ADAM17、TNF-α基因转录水平和酶活性的变化。结果:①LPS刺激后,不同类型细胞的MMPs的表达量及电泳酶谱随刺激时间的延长变弱,而HL-60细胞培养上清的酶谱变化正好相反;②在HL-60细胞中与MMPs相比,ADAM17在前体TNF-α(pro-TNF-α)向分泌型TNF-α(s-TNF-α)转换中起着重要作用;③RDQ在细胞杀伤效应上、在ADAM17mRNA表达水平上均能明显抑制LPS所诱导的s-TNF-α表达和分泌的增高作用(P<0.01)。结论:①在LPS刺激的TNF-α分泌中,MPs家族的ADAM17起主要作用,而针对解整合素结构域(Disintegrin)的探针对排除MMPs的干扰,真实反映ADAM17mRNA表达水平更具特异性;②纯中药注射液RDQ的抗炎、解毒作用的靶标之一是拮抗LPS诱导的TACEmRNA活性增加。ADAM17成为炎症机制和治疗研究的新靶标。 展开更多
关键词 基质金属蛋白 肿瘤坏死因子转换酶 肿瘤坏死因子 大肠杆菌内毒素 热毒清
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以重组TACE胞外功能域从噬菌体随机肽库中筛选TACE的抑制肽
11
作者 黄巍 李凌波 +2 位作者 韩玲 张慧 杨渝珍 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期30-35,共6页
肿瘤坏死因子转换酶 (TACE)是加工裂解TNF α前体的关键酶 ,参与了许多炎症的发生发展过程。为通过肽库筛选得到TACE的抑制肽 ,首先制备筛选靶分子 ,用RT PCR从人外周血单核细胞中分别扩增出TACE的催化区 (T80 0 )和整个胞外区 (T130 0 ... 肿瘤坏死因子转换酶 (TACE)是加工裂解TNF α前体的关键酶 ,参与了许多炎症的发生发展过程。为通过肽库筛选得到TACE的抑制肽 ,首先制备筛选靶分子 ,用RT PCR从人外周血单核细胞中分别扩增出TACE的催化区 (T80 0 )和整个胞外区 (T130 0 ) ,然后分别克隆至pET 2 8a和pET 2 8c中 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达出带有His tag的目的蛋白 ,两者均为包涵体 ,变性复性后过Ni2 + NTA亲和层析柱得到纯度达 90 %的重组蛋白。以纯化的重组T80 0和T130 0分别筛选噬菌体展示随机 15肽库 ,对筛选克隆进行ELISA检测、竞争抑制实验和序列分析。从两个独立的筛选过程中得到一个相同的阳性克隆序列“TRWLVYFSRPYLVAT” ,固相Fmoc法合成该短肽 ,观察其在LPS诱导人单核细胞产生sTNF α中的作用。结果表明 ,筛选到的短肽可显著抑制TACE的活性 ,减少TNF α的分泌 ,抑制率可达 6 0 3% ,为抗炎小分子药物的设计和改造提供线索和依据。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子转换酶 胞外功能域 噬菌体展示 抑制肽
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TACE蛋白在动情周期和围着床期小鼠子宫内膜的表达规律
12
作者 杨洁玉 杨戎 +1 位作者 张谭 郗强 《中国计划生育学杂志》 北大核心 2008年第10期603-606,共4页
目的:初步探讨肿瘤坏死因子转换酶(TACE)蛋白在动情周期和早孕小鼠子宫内膜的表达规律。方法:用免疫组化SP法检测动情周期和早孕小鼠子宫内膜TACE蛋白的表达。结果:TACE蛋白在各期小鼠子宫内膜呈规律性表达,动情周期中动情期与其它3期... 目的:初步探讨肿瘤坏死因子转换酶(TACE)蛋白在动情周期和早孕小鼠子宫内膜的表达规律。方法:用免疫组化SP法检测动情周期和早孕小鼠子宫内膜TACE蛋白的表达。结果:TACE蛋白在各期小鼠子宫内膜呈规律性表达,动情周期中动情期与其它3期相比表达明显增强(P<0.001),妊娠期比动情期表达显著增强(P<0.001),孕d3、d4、d5、d6与孕d1、d2、d7相比表达显著增强(P<0.001)。结论:TACE可能通过裂解多种细胞表面分子促进子宫内膜同步发育、胚胎粘着、侵袭等过程,在胚泡植入中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子转换酶 子宫内膜 免疫组化
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LPS刺激对TACE基因表达和对TNF-α前体加工的影响 被引量:1
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作者 李凌波 朱孔黎 +1 位作者 杨渝珍 龚非力 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期690-693,共4页
目的 :研究LPS刺激对肿瘤坏死因子转换酶 (TACE)基因转录和表达的影响及其与TNF α前体加工的关系。方法 :采用Dot blotting、Dot ELISA、间接免疫荧光和FACS等方法分别检测HL 6 0细胞在LPS刺激的不同时间段TACE、TNF α基因转录表达和... 目的 :研究LPS刺激对肿瘤坏死因子转换酶 (TACE)基因转录和表达的影响及其与TNF α前体加工的关系。方法 :采用Dot blotting、Dot ELISA、间接免疫荧光和FACS等方法分别检测HL 6 0细胞在LPS刺激的不同时间段TACE、TNF α基因转录表达和膜分子分布情况。结果 :①HL 6 0细胞构成性高表达有活性TACE ,主要分布于细胞膜和核周边。②LPS刺激TNF α基因转录表达 ,但由于TACE的作用 ,膜TNF α(TM TNF α)下降 ,而分泌型TNF(sTNF α)增加 ;TACE的反义寡核苷酸 (ODN)显著抑制TNF α这种前体转换作用。③LPS同样刺激TACE基因表达增加 ,而且TACE酶解作用增强 ,但其蛋白表达和膜分子分布反而下降 ,推测TACE在发挥其催化膜蛋白作用后 ,其分子结构形式发生改变。结论 :炎症时分泌型TNF α增加不仅是该细胞因子基因表达增高所致 ,更受到TACE基因表达水平和活性状态的约束。 展开更多
关键词 基因表达 前体加工 LPS 肿瘤坏死因子 TNF-Α 肿瘤坏死因子转换酶 TACE
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TACE基因shRNA真核表达载体的构建及其对HeLa细胞生物学活性的影响
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作者 章杰 闫媛 +1 位作者 杨渝珍 杨业金 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期426-430,共5页
目的构建靶向肿瘤坏死因子转换酶(TACE)的小发夹结构RNA(shRNA)的真核表达载体,观察干扰TA-CE表达对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法设计针对TACE基因的4个shRNA序列,构建真核表达载体shR-NA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4。通过酶切和... 目的构建靶向肿瘤坏死因子转换酶(TACE)的小发夹结构RNA(shRNA)的真核表达载体,观察干扰TA-CE表达对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法设计针对TACE基因的4个shRNA序列,构建真核表达载体shR-NA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4。通过酶切和测序等方法进行鉴定。转染HeLa细胞后,用Realtime PCR的方法检测其对HeLa细胞TACE基因表达的影响;用ELISA检测细胞分泌的sTNF-α,间接反映干扰TACE的效果;用MTT法检测细胞增殖活性;用DNA ladder和流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功构建和筛选出了针对TACE基因的3个有效的特异性真核表达载体,且均在不同程度上抑制了HeLa细胞TACE基因的表达。ELISA检测结果与Realtime PCR实验结果相符。同时发现干扰TACE基因后,HeLa细胞的生长受到抑制,凋亡率升高,与对照组相比差异有显著性意义(P〈0.05)。实验组转染shRNA1~3后72h可见特征性的基因组DNA ladder条带。结论所构建的TACEshR-NA真核表达载体能显著抑制TACE的表达。干扰TACE基因的表达可有效抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子转换酶 小发夹结构RNA HELA细胞 细胞凋亡
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重组TACE前肽蛋白对小鼠内毒素血症抑制作用的实验研究 被引量:1
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作者 李小鸥 阎媛 +2 位作者 周玉 杨渝珍 王宏伟 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期247-251,共5页
目的建立小鼠内毒素血症模型,观察肿瘤坏死因子前体转换酶(TACE)前肽结构域对其催化结构域的自身抑制作用,为人工干预炎症过程提供依据和手段。方法首先利用DNA重组技术分别构建含前肽结构域和催化结构域的重组载体:用PCR方法扩增出TAC... 目的建立小鼠内毒素血症模型,观察肿瘤坏死因子前体转换酶(TACE)前肽结构域对其催化结构域的自身抑制作用,为人工干预炎症过程提供依据和手段。方法首先利用DNA重组技术分别构建含前肽结构域和催化结构域的重组载体:用PCR方法扩增出TACE的胞外结构域(T1300)和前肽结构域(T591),并克隆至载体pET-28a(+)中,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达出带有His-tag的目的蛋白,两者均为包涵体,变性复活后经Ni2+-NTA亲和层析柱对表达的重组蛋白进行纯化。对纯化后的蛋白进行Western印迹分析。构建TACE信号肽+前肽结构域(T648)的真核表达质粒(pEGFP-N1/T648),将其瞬时转染HeLa细胞,通过观察绿色荧光蛋白的表达观察pEGFP-N1/T648转染后在细胞中分布情况。建立小鼠内毒素血症模型组,前肽重组蛋白治疗组和PBS对照组,通过流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞mTNF-α的表达,并取肝,肺,肾组织行HE染色,观察纯化的前肽蛋白对炎症的抑制作用。结果成功构建了pEGFP-N1/T648真核表达载体,在体外转染HeLa细胞,可见荧光主要分布在细胞膜上。流式细胞技术证明重组前肽蛋白可明显对抗LPS诱发的sTNF-α分泌增加,使小鼠腹腔巨噬细胞膜表面mTNF-α增加,常规病理切片HE染色显示该蛋白可降低LPS诱发的小鼠肝,肾,肺组织的炎症反应。结论TACE前肽重组蛋白降低了sTNF-α的分泌,对炎症有明显的抑制作用,为抗炎药物的设计和改造提供了新的依据和方法。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子Α 肿瘤坏死因子α转换 前肽结构域 抑制剂
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板蓝根对脂多糖致HL-60细胞产生TNF-α及TACE的影响 被引量:1
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作者 胡娅 王贵林 唐曦 《长江大学学报(自科版)(下旬)》 CAS 2006年第2期216-218,共3页
目的:探讨板蓝根对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)致HL-60细胞释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)及肿瘤坏死因子α转换酶(TACE)的影响。方法:采用ELISA方法及RT-PCR技术,观察板蓝根对LPS诱导HL-60细胞分泌炎性细胞因子--TNF-α及TACEmRNA表... 目的:探讨板蓝根对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)致HL-60细胞释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)及肿瘤坏死因子α转换酶(TACE)的影响。方法:采用ELISA方法及RT-PCR技术,观察板蓝根对LPS诱导HL-60细胞分泌炎性细胞因子--TNF-α及TACEmRNA表达的影响。结果:板蓝根能有效抑制LPS诱导HL-60细胞释放的TNF-α(抑制率92.59%),并对LPS刺激TACEmRNA表达增加具有明显的抑制效果。结论:板蓝根能通过抑制TNF-α过度释放和TACE表达增加发挥其抗炎作用。 展开更多
关键词 板蓝根 脂多糖 肿瘤坏死因子Α 肿瘤坏死因子α转换
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大鼠局灶性脑缺血再灌注后TACE mRNA表达变化的研究
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作者 徐海清 资晓宏 +2 位作者 郭科 范学军 宋治 《现代医学》 2005年第5期326-328,共3页
目的研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后不同时间脑皮质半暗带和中心区肿瘤坏死因子转换酶(TACE)转录水平的表达规律.方法用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,切取缺血半暗带及中心区皮质组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定TAC... 目的研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后不同时间脑皮质半暗带和中心区肿瘤坏死因子转换酶(TACE)转录水平的表达规律.方法用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,切取缺血半暗带及中心区皮质组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定TACE mRNA水平的变化.结果在脑皮层缺血半暗带及中心区脑组织,TACE mRNA表达变化有两个高峰,分别在脑缺血再灌注后3 h、12~24 h(P<0.01),在脑缺血再灌注后72 h表达低于正常对照组(P<0.05或P<0.01),7、14 d未检测到TACE mRNA水平,21 d出现低水平表达.结论TACE mRNA过度表达可能对脑缺血再灌注后早期神经元死亡起促进作用. 展开更多
关键词 脑缺血 肿瘤坏死因子转换酶 半暗带
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三类TACE抑制剂的作用机理探讨 被引量:6
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作者 朱孔黎 杨渝珍 +2 位作者 韩玲 王震 丁廷波 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期752-756,共5页
目的 :以脂多糖 (LPS)刺激的HL 6 0细胞系为天然模型 ,筛选肿瘤坏死因子α转换酶的抑制剂 ,为人工干预炎症过程提供依据和手段。方法 :分时相刺激HL 6 0细胞后 ,用分子生物学和细胞学技术在蛋白质和mRNA水平上研究TACE表达和活性的改变... 目的 :以脂多糖 (LPS)刺激的HL 6 0细胞系为天然模型 ,筛选肿瘤坏死因子α转换酶的抑制剂 ,为人工干预炎症过程提供依据和手段。方法 :分时相刺激HL 6 0细胞后 ,用分子生物学和细胞学技术在蛋白质和mRNA水平上研究TACE表达和活性的改变。结果 :中药热毒清 (RDQ)能明显降低LPS诱导的TACEmRNA增加 (与对照组比 ,P <0 .0 1) ;针对TACEmRNA的反义寡核苷酸 (anti ODN)在翻译水平上抑制TACE表达 ,抑制率达 78.9% ;化学合成的针对TACE催化域的小分子底物模拟肽可抑制LPS诱导的TACE表达增加 ,从而抑制sTNFα分泌增加 ,削弱LPS诱发的炎性病理反应强度。结论 :3种不同类型的抑制 (RDQ、anti ODN、底物模拟肽 )在不同层次上调节TACE的表达 ,最终均抑制了sTNFα的分泌 ,为控制炎症提供了明确的治疗靶标。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子Α 肿瘤坏死因子α转换 反义寡核苷酸 热毒清 小分子类肽抑制剂 TACE抑制剂 作用机理
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腔内治疗对腹主动脉瘤患者体内Notch1和TACE蛋白表达的影响 被引量:1
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作者 黄宝骏 杨澄宇 +2 位作者 骆曦图 张茅平 陈俊伟 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2019年第3期502-504,共3页
目的:探讨腔内治疗对腹主动脉瘤患者体内Notch1蛋白和肿瘤坏死因子前体转换酶(TACE)蛋白表达的影响。方法:选取2013年1月至2017年12月在我院治疗的腹主动脉瘤患者70例为观察组,均予腔内治疗,同时选取健康志愿者70例作为对照组,检测比较... 目的:探讨腔内治疗对腹主动脉瘤患者体内Notch1蛋白和肿瘤坏死因子前体转换酶(TACE)蛋白表达的影响。方法:选取2013年1月至2017年12月在我院治疗的腹主动脉瘤患者70例为观察组,均予腔内治疗,同时选取健康志愿者70例作为对照组,检测比较对照组和观察组术前、术后1周的血浆Notch1和TACE蛋白表达水平。结果:治疗前观察组血浆Notch1和TACE蛋白表达水平分别为(178.19±20.33)和(2401.28±321.15)pg·ml^-1,均高于对照组的(100.13±17.69)和(1 033.04±300.04)pg·ml^-1(P<0.05);治疗后观察组患者血浆Notch1蛋白和TACE蛋白表达水平分别为(120.02±18.28)和(1560.11±291.84)pg·ml^-1,均明显低于治疗前(P<0.05);瘤体直径>7.0cm的患者血浆Notch1和TACE表达水平明显高于直径<5.0cm及5.0~7.0cm的患者(P<0.05)。结论:腹主动脉瘤患者体内Notch1和TACE蛋白表达水平明显升高,且与瘤体直径有关;腔内治疗后患者血浆Notch1和TACE蛋白表达水平明显降低。 展开更多
关键词 腹主动脉瘤 NOTCH1 肿瘤坏死因子前体转换 腔内治疗
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TNF-α抑制剂对风湿性膝关节滑膜炎大鼠氧化应激抑制作用及下游信号通路的影响 被引量:5
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作者 刘冰山 阮昆鹏 +2 位作者 张登峰 武豪杰 赵清 《广东医学》 CAS 2020年第13期1313-1317,共5页
目的分析肿瘤坏死因子-α(TNF-α)抑制剂对风湿性膝关节滑膜炎大鼠氧化应激抑制作用及下游信号通路的影响。方法取36只SD大鼠,随机分为对照组(正常大鼠)、模型组(风湿性膝关节滑膜炎+生理盐水)、干预组(风湿性膝关节滑膜炎+TNF-α抑制... 目的分析肿瘤坏死因子-α(TNF-α)抑制剂对风湿性膝关节滑膜炎大鼠氧化应激抑制作用及下游信号通路的影响。方法取36只SD大鼠,随机分为对照组(正常大鼠)、模型组(风湿性膝关节滑膜炎+生理盐水)、干预组(风湿性膝关节滑膜炎+TNF-α抑制剂),每组12只。经苏木精-伊红染色行病理学检查,检测血清TNF-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和C反应蛋白;同时测定血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽和丙二醛水平;Western blot检测膝关节滑膜组织TNF-α转换酶(TACE)和核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达,并进行统计学分析。结果病理检查显示模型组、干预组大鼠关节组织出现明显病理变化。相比对照组,模型组和干预组血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MMP-9、C反应蛋白及丙二醛水平均明显升高,谷胱甘肽和SOD水平均明显降低(P<0.05);相比模型组,干预组血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MMP-9、C反应蛋白、丙二醛水平均明显降低,谷胱甘肽和SOD含量均明显升高(P<0.05)。模型组、干预组膝关节滑膜组织TACE和NF-κB蛋白表达水平较对照组均明显上调,干预组TACE和NF-κB蛋白表达明显低于模型组(P<0.05)。结论采用TNF-α抑制剂可有效减轻风湿性膝关节滑膜炎大鼠氧化应激和炎症状态,缓解膝关节损伤程度,其作用机制可能与TNF-α抑制剂可通过阻滞TACE/NF-κB信号通路而减轻大鼠风湿性膝关节滑膜炎密切相关。 展开更多
关键词 风湿性膝关节滑膜炎 肿瘤坏死因子α抑制剂 氧化应激 肿瘤坏死因子α转换/核转录因子-κB信号通路
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