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肿瘤增殖病毒的研究热点及潜在风险 被引量:1
1
作者 钱其军 《中国肿瘤》 CAS 2002年第2期94-96,共3页
肿瘤增殖病毒是近十年兴起的一种肿瘤治疗新方案,现已进行了少量临床试验,其结果令人鼓舞。本文结合自已的研究结果,介绍了该研究领域值得关注的几个问题,包括如果提高肿瘤增殖病毒在肿瘤细胞内感染及复制特异性、治疗的有效性及寻找新... 肿瘤增殖病毒是近十年兴起的一种肿瘤治疗新方案,现已进行了少量临床试验,其结果令人鼓舞。本文结合自已的研究结果,介绍了该研究领域值得关注的几个问题,包括如果提高肿瘤增殖病毒在肿瘤细胞内感染及复制特异性、治疗的有效性及寻找新型作用机制的肿瘤增殖病毒的原则等 。 展开更多
关键词 肿瘤 病毒 增殖 基因治疗 肿瘤增殖病毒 肿瘤治疗方案
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肿瘤增殖病毒及其在头颈部鳞癌治疗中的应用
2
作者 蒋灿华 陈万涛 张志愿 《国外医学(口腔医学分册)》 2005年第3期214-215,218,共3页
肿瘤增殖病毒能在肿瘤细胞内特异性增殖并杀灭肿瘤细胞,这是近十年来肿瘤生物治疗的新策略。本文主要就肿瘤增殖病毒靶向性的调控、裂解肿瘤细胞的主要机制及其在头颈部鳞癌治疗中的应用现状作一综述。
关键词 肿瘤增殖病毒 鳞癌治疗 头颈部 肿瘤生物治疗 肿瘤细胞 特异性增殖 细胞内 新策略 靶向性
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肿瘤选择性增殖腺病毒CNHK300联合紫杉醇对HER-2高表达乳腺癌细胞的杀伤作用 被引量:3
3
作者 李月敏 宋三泰 +5 位作者 江泽飞 徐建明 张琪 苏长青 钱炎珍 钱其军 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第2期98-102,共5页
目的:观察肿瘤选择性增殖腺病毒CNHK300对HER-2高表达乳腺癌细胞株的杀伤作用。方法:用TRAP- ELISA方法检测乳腺癌细胞株(MDA-MB-453、SK-BR-3)和正常成纤维细胞株MRC-5的端粒酶活性;进行病毒增殖实验和细胞生长抑制实验,并与野生型... 目的:观察肿瘤选择性增殖腺病毒CNHK300对HER-2高表达乳腺癌细胞株的杀伤作用。方法:用TRAP- ELISA方法检测乳腺癌细胞株(MDA-MB-453、SK-BR-3)和正常成纤维细胞株MRC-5的端粒酶活性;进行病毒增殖实验和细胞生长抑制实验,并与野生型腺病毒wtAd5进行对比,验证CNHK300选择性复制和选择性杀伤能力;用细胞生长抑制实验进一步考察CNHK300与化疗药物紫杉醇联合应用对乳腺癌细胞的杀伤作用;用Western blot检测腺病毒E1A在细胞中的表达。结果:乳腺癌细胞株端粒酶均为阳性,而MRC-5正常成纤维细胞株端粒酶为阴性。CNHK300在乳腺癌细胞中的病毒增殖能力与野生型腺病毒相似,两者也具有相似的肿瘤细胞杀伤能力。在MRC-5正常成纤维细胞中,CNHK300病毒增殖能力较wtAd5明显减弱,同时对正常成纤维细胞的杀伤力明显减弱。CNHK300病毒和紫杉醇联合应用,较同样剂量的两者单独应用,细胞存活率明显下降。CNHK300病毒E1A可以选择性地在端粒酶阳性的乳腺癌细胞中表达,在端粒酶阴性的正常成纤维细胞中不表达。结论:肿瘤选择性增殖腺病毒CNHK300可选择性地在某些端粒酶阳性的乳腺癌细胞中复制,并产生溶瘤作用。与化疗药物紫杉醇联合应用可产生协同作用。 展开更多
关键词 肿瘤增殖病毒 乳腺癌 基因治疗 病毒治疗
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特异性增殖型腺病毒CNHK200-mIFN-γ表达mIFN-γ及体外肿瘤杀伤实验 被引量:1
4
作者 陈洁 钱其军 +7 位作者 达万明 欧英贤 薛惠斌 崔贞福 苏长青 李林芳 姜梨华 吴红平 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2004年第2期114-118,共5页
目的:构建增殖型腺病毒CNHK200-mIFN-γ和增殖缺陷型腺病毒AdEasy—mIFN-γ,比较两者在肿瘤细胞中表达mIFN-γ蛋白的能力以及CNHK200-mIFN-γ,ONYX-015及野生型腺病毒Ad5在正常及肿瘤细胞中的增殖力,进一步观察其抗瘤效果。方法:以病毒... 目的:构建增殖型腺病毒CNHK200-mIFN-γ和增殖缺陷型腺病毒AdEasy—mIFN-γ,比较两者在肿瘤细胞中表达mIFN-γ蛋白的能力以及CNHK200-mIFN-γ,ONYX-015及野生型腺病毒Ad5在正常及肿瘤细胞中的增殖力,进一步观察其抗瘤效果。方法:以病毒增殖试验检测病毒在细胞中的增殖能力;透射电镜观察CNHK200-mIFN-γ在Hep3B细胞中的增殖复制;检测病毒感染肿瘤细胞后mIFN-γ的表达;CPE实验观察增殖病毒对细胞的杀伤效应。结果:CNHK200-mIFN-γ和ONYX-015仅在肿瘤细胞中增殖,且前者增殖力较强。CNHK200-mIFN-γ在肿瘤细胞中表达mIFN-γ,且表达量与病毒增殖密切相关,而AdEasy—mIFN-γ在肿瘤细胞中的mIFN-γ表达几乎不能测到。ONYX-015与CNHK200-mIEN-γ对正常的细胞无杀伤性,但能有效地杀伤癌细胞。结论:外源基因mIFN-γ的插入没有改变增殖病毒在肿瘤细胞中选择性增殖的特性。增殖型腺病毒CNHK200-mIFN-γ具有良好的肿瘤选择性及增殖性,且可以有效表达mIFN-γ,并且有效杀伤癌细胞,显示其良好的临床应用前景。 展开更多
关键词 肿瘤特异性增殖病毒 病毒 基因 干扰素 病毒基因治疗
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肿瘤特异增殖型腺病毒穿梭质粒pAd-delE1b55kD的构建 被引量:2
5
作者 王春毅 傅仲学 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第3期314-317,共4页
目的:构建一种对肿瘤细胞有特异靶向性的高效载体-肿瘤特异增殖型腺病毒的穿梭质粒pAd-delE1b55kD。方法:利用二步法PCR等基因重组技术,将质粒pXC1编码E1B-55kD蛋白的基因区域缺失,并保留一个BglII酶切位点,以便插入外源性基因;利用凝... 目的:构建一种对肿瘤细胞有特异靶向性的高效载体-肿瘤特异增殖型腺病毒的穿梭质粒pAd-delE1b55kD。方法:利用二步法PCR等基因重组技术,将质粒pXC1编码E1B-55kD蛋白的基因区域缺失,并保留一个BglII酶切位点,以便插入外源性基因;利用凝胶图像分析和基因测序验证所构建质粒的正确性。结果:质粒pXC1的基因序列中,编码E1B-55kD蛋白的基因区中的2279~3326bp区域缺失,该区域上游的序列中第2024位碱基C点突变为T,第2252位碱基C点突变为T及第2261位碱基G点突变为T,从而在该区域上游插入了终止密码子TGA、TAG和TAA。在终止密码子下游,保留了一个BglII酶切位点。结论:成功构建了肿瘤特异增殖型腺病毒穿梭质粒载体pAd-delE1b55kD,为肿瘤的基因治疗提供了一种对肿瘤细胞有特异靶向性的高效载体的穿梭质粒。 展开更多
关键词 肿瘤 基因治疗 肿瘤特异增殖型腺病毒 穿梭质粒
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肿瘤增殖型腺病毒介导的shRNA干扰结肠癌细胞HT-29 Survivin基因的时效性研究
6
作者 王春毅 傅仲学 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期924-928,共5页
目的探讨携带针对人Survivin的shRNA的肿瘤增殖型腺病毒Ad-delE1b55KD-shRNA/Survivin-EGFP介导的RNA干扰对结肠癌细胞HT-29中Survivin基因的时效性。方法用Ad-delE1b55KD-shRNA/Survivin-EGFP转染结肠癌细胞株HT-29(以携带相同shRNA的... 目的探讨携带针对人Survivin的shRNA的肿瘤增殖型腺病毒Ad-delE1b55KD-shRNA/Survivin-EGFP介导的RNA干扰对结肠癌细胞HT-29中Survivin基因的时效性。方法用Ad-delE1b55KD-shRNA/Survivin-EGFP转染结肠癌细胞株HT-29(以携带相同shRNA的增殖缺陷型腺病毒和脂质体载体为对照),于转染后1d、7d、14d、28d分别检测其携带的外源性EGFP基因的表达及被转染HT-29细胞中Survivin mRNA和Survivin蛋白的表达。结果在转染后第7d,实验各组的外源性EGFP基因均有较高表达,Survivin mRNA及Survivin蛋白的表达被抑制,Ad-delE1b55KD-shRNA/Survivin-EGFP组的EGFP基因表达明显高于其他两种载体;在转染后第14d,后二者EGFP基因表达、Survivin mRNA及Survivin蛋白表达的抑制作用显著下降,而Ad-delE1b55KD-shRNA/Survivin-EGFP组的上述作用仍然很强;转染后28d,后二者EGFP基因表达、Survivin mRNA及Survivin蛋白表达的抑制作用基本消失,而Ad-delE1b55KD-shRNA/Survivin-EGFP组仍然保持很高的EGFP表达率和RNA干扰效率。结论Ad-delE1b55KD-shRNA/Survivin-EGFP介导RNA干扰能长时间高效沉默结肠癌细胞HT-29中的Survivin基因。 展开更多
关键词 肿瘤增殖型腺病毒 RNA干扰 SURVIVIN 结肠癌 凋亡
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肿瘤增殖腺病毒ONYX-015的实验研究及临床研究进展 被引量:1
7
作者 李月敏 《国外医学(肿瘤学分册)》 2003年第2期89-91,共3页
肿瘤增殖病毒在肿瘤细胞内的感染、复制及溶解细胞作用增强 ,而在正常细胞内这种能力减弱甚至消失。E1b5 5kD蛋白缺失的肿瘤增殖病毒是第 1个用于肿瘤临床的增殖病毒 ,也是最成功的肿瘤病毒治疗系统 ,并于 1999年进入Ⅲ期临床试验。现综... 肿瘤增殖病毒在肿瘤细胞内的感染、复制及溶解细胞作用增强 ,而在正常细胞内这种能力减弱甚至消失。E1b5 5kD蛋白缺失的肿瘤增殖病毒是第 1个用于肿瘤临床的增殖病毒 ,也是最成功的肿瘤病毒治疗系统 ,并于 1999年进入Ⅲ期临床试验。现综述ONYX 0 展开更多
关键词 肿瘤增殖病毒 0NYX-015 病毒治疗 实验研究 临床研究
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肿瘤特异增殖病毒的研究进展
8
作者 华汉巨 滕理送 《国外医学(肿瘤学分册)》 2004年第3期189-192,共4页
经转录调节修饰的肿瘤特异增殖病毒可特异性地杀伤肿瘤细胞 ,具有临床治疗肿瘤的潜在价值 ,是近年来肿瘤研究的热点之一 ,并取得了很大的进展 。
关键词 肿瘤特异增殖病毒 研究进展 细胞凋亡 肿瘤病毒 肿瘤细胞
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选择性增殖腺病毒CNHK500治疗乳腺癌的实验研究 被引量:7
9
作者 李月敏 宋三泰 +6 位作者 江泽飞 徐建明 张琪 李明颖 钱炎珍 崔贞福 钱其军 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2005年第2期124-128,共5页
目的:观察选择性增殖腺病毒CNHK500对乳腺癌的特异性杀伤作用。方法:行病毒增殖实验和细胞生长抑制实验,验证CNHK500选择性复制和杀伤能力;Westernblot检测腺病毒E1A和E1B在细胞中的表达。结果:CNHK500在乳腺癌细胞中复制能力与野生型... 目的:观察选择性增殖腺病毒CNHK500对乳腺癌的特异性杀伤作用。方法:行病毒增殖实验和细胞生长抑制实验,验证CNHK500选择性复制和杀伤能力;Westernblot检测腺病毒E1A和E1B在细胞中的表达。结果:CNHK500在乳腺癌细胞中复制能力与野生型腺病毒wtAd5相似,较ONYX-015增殖能力强。在正常成纤维细胞中CNHK500病毒增殖能力明显减弱,较wtAd5增殖能力弱1000倍左右。CNHK500可有效杀伤乳腺癌细胞株;而CNHK500对正常成纤维细胞的杀伤力较wtAd5减弱约100倍。CNHK500病毒的E1A可以选择性在端粒酶阳性的乳腺癌细胞株中表达,在端粒酶阴性的正常成纤维细胞株BJ中不表达,CNHK500可以选择性地在缺氧条件下表达E1B。动物实验结果显示,静脉注射CNHK500可以显著抑制MCF-7乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的生长,治疗效果与给药剂量相关。结论:肿瘤选择性增殖腺病毒CNHK500可选择性在端粒酶阳性的乳腺癌细胞中复制,并产生体内外杀伤作用。 展开更多
关键词 肿瘤增殖病毒 乳腺癌 基因治疗 端粒酶 HRE
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肿瘤生物治疗的新策略——基因-病毒治疗 被引量:2
10
作者 钱其军 吴孟超 岑信棠 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期474-476,共3页
关键词 肿瘤治疗学 生物疗法 肿瘤增殖病毒 基因-病毒治疗
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肿瘤增殖型腺病毒介导的shRNA干扰结肠癌细胞HT-29内Survivin基因的时效性研究(英文)
11
作者 Chunyi Wang Zhongxue Fu 《The Chinese-German Journal of Clinical Oncology》 CAS 2008年第8期460-464,共5页
Objective: To investigate the effect of RNAi-mediated Survivin gene with conditionally replicating adenovirus silencing on Survivin gene in colon carcinoma cell lines HT-29 lastingly. Methods: We transfected Ad-delE1b... Objective: To investigate the effect of RNAi-mediated Survivin gene with conditionally replicating adenovirus silencing on Survivin gene in colon carcinoma cell lines HT-29 lastingly. Methods: We transfected Ad-delE1b55KD-shRNA / Survivin-EGFP to HT-29 (control was replication defective adenovirus and liposome vector which was contained the same shRNA as Ad-delE1b55KD-shRNA / Survivin-EGFP). The expressions of EGFP, Survivin mRNA and Survivin protein in HT- 29 were detected at the 1st, 7th, 14th and 28th days after transfection. Results: The expression of EGFP, the inhibition of Survivin mRNA and Survivin protein in HT-29 were high in each group at the 7th day after transfection, among the total, the effect of Ad-delE1b55KD-shRNA / Survivin-EGFP group was the highest; at the 14th day, the effects of replication defective adenovirus group and liposome vector group were decreased obviously, and it was still high in Ad-delE1b55KD-shRNA / Survivin-EGFP group; at the 28th day, the effects of control groups were disappeared, and it was still high in Ad-delE1b55KD- shRNA / Survivin-EGFP group like before (P < 0.05). Conclusion: RNAi-mediated Survivin gene with conditionally replicating adenovirus can silence Survivin gene in colon carcinoma cell lines HT-29 lastingly. 展开更多
关键词 肿瘤增殖型腺病毒介导 SHRNA干扰 结肠癌细胞 HT-29 SURVIVIN基因
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溶瘤腺病毒联合不同浓度阿霉素对肝癌细胞增殖的抑制 被引量:1
12
作者 吕晨 钱程 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2008年第5期559-563,共5页
研究肿瘤特异性增殖腺病毒联合不同浓度化疗药物阿霉素(ADM)对肝癌细胞增殖的抑制作用。肿瘤特异性增殖腺病AdCN103分别联合不同浓度的阿霉素处理肝癌细胞和正常肝细胞,用实时定量PCR分析腺病毒增殖能力,MTT法检测细胞存活率。结果... 研究肿瘤特异性增殖腺病毒联合不同浓度化疗药物阿霉素(ADM)对肝癌细胞增殖的抑制作用。肿瘤特异性增殖腺病AdCN103分别联合不同浓度的阿霉素处理肝癌细胞和正常肝细胞,用实时定量PCR分析腺病毒增殖能力,MTT法检测细胞存活率。结果表明,对于试验细胞株,不同浓度阿霉素存在时AdCN103的复制能力与AdCN103单独感染均没有显著差异。0.6.1~16ng/mL ADM对肿瘤杀伤力弱;80~400ng/mL ADM杀伤肿瘤细胞作用随浓度升高增强,并显著高于AdCN103或ADM单独施药组(p〈0.05);但是过高浓度的ADM对正常细胞毒性大,并且与溶瘤病毒联用时失去协同作用。所以,溶瘤腺病毒与适当浓度阿霉素联合用药能显著提高对肝癌细胞的杀伤作用。 展开更多
关键词 肿瘤特异性增殖病毒 阿霉素 肝癌细胞 联合抑癌
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53基因及CAR受体对ONYX-015肿瘤杀伤作用的影响 被引量:1
13
作者 陈洁 达万明 +2 位作者 钱其军 苏长青 崔贞福 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2005年第2期113-116,共4页
目的:利用肿瘤特异性增殖型腺病毒ONYX-015分别感染具有柯萨奇病毒和腺病毒联合受体(CAR)水平正常、p53正常或突变的,以及CAR水平低下、p53突变的肿瘤细胞株,研究ONYX 015对这些肿瘤细胞的特异性增殖及杀伤能力。方法:以正常的肝细胞株... 目的:利用肿瘤特异性增殖型腺病毒ONYX-015分别感染具有柯萨奇病毒和腺病毒联合受体(CAR)水平正常、p53正常或突变的,以及CAR水平低下、p53突变的肿瘤细胞株,研究ONYX 015对这些肿瘤细胞的特异性增殖及杀伤能力。方法:以正常的肝细胞株L02作为对照,用细胞病变效应(CPE)实验观察ONYX-015对细胞的选择性杀伤效应;病毒增殖实验检测野生型腺病毒(Ad5)、ONYX 015在多种肿瘤细胞中的增殖能力。结果:ONYX 015对正常的肝细胞L02无杀伤性,但能够有效地杀伤p53突变的肝癌细胞Hep3B、p53正常的肝癌细胞HepG2及肺癌细胞A549,不能杀伤p53突变的人乳腺癌细胞株MDA-MB 231。在CAR受体水平正常的癌细胞株Hep3B、HepG2和A549中,Ad5和ONYX-015均可增殖。在CAR受体水平低下、p53突变的人乳腺癌细胞株MDA-MB 231中,两种病毒均不增殖。结论:CAR受体对ONYX-015的增殖力起着至关重要的作用。在CAR受体水平正常的前提下,无论肿瘤细胞的p53基因正常与否,ONYX-015均可以有效增殖并杀伤细胞;相反,如果CAR受体水平低下,即使该种肿瘤细胞p53基因突变,ONYX-015在该细胞中的增殖力也会受到限制。ONYX-015不杀伤CAR受体及p53基因均正常的正常肝细胞。 展开更多
关键词 肿瘤特异性增殖病毒 ONYX-015 P53基因 柯萨奇病毒和腺病毒联合受体(CAR)
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癌症的靶向基因—病毒治疗 被引量:6
14
作者 顾锦法 刘新垣 《自然杂志》 北大核心 2005年第2期85-89,共5页
肿瘤的单纯基因治疗或单纯肿瘤特异性增殖病毒治疗,都取得了一定的疗效,但都无重大突破。本文提出一种癌症的靶向基因病毒治疗新策略(targetinggene virotherapyofcancer),即将基因治疗与病毒治疗各自的优点结合起来,取得的疗效比上述... 肿瘤的单纯基因治疗或单纯肿瘤特异性增殖病毒治疗,都取得了一定的疗效,但都无重大突破。本文提出一种癌症的靶向基因病毒治疗新策略(targetinggene virotherapyofcancer),即将基因治疗与病毒治疗各自的优点结合起来,取得的疗效比上述任何单一的治疗都好。实验所用的载体是改造过的腺病毒ZD55或hTERT Adv,但单用一个基因还不足以完全消灭实验动物的肿瘤,因此进一步采用双基因治疗方案,即targetingdualgene virotherapyofcancer。如果两个基因选择恰当,当它们有协同效应或互补作用时,如Trail与K5,Trail与Smac,则基本可以全部消灭实验动物所荷肿瘤。此外,要取得癌症治疗的好结果,靶向性也很重要,故一种新的双靶向病毒调控双基因的癌症治疗策略被创造出来,并取得了很好的效果,申请了专利。无肠腺病毒为第三代腺病毒载体,它容量大,可克隆入很大的基因,又无免疫原性,可长期使用,如将前面各种良好肿瘤治疗策略结合运用到无肠腺病毒载体中,一定会构建出最好的肿瘤治疗方案,会使肿瘤治疗取得极好的效果。 展开更多
关键词 癌症治疗 靶向基因 病毒 肿瘤特异性增殖病毒 无肠腺病毒
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携带mda-7/IL-24的双调控溶瘤腺病毒和丝裂霉素联合治疗癌症的研究
15
作者 张磊 骆菁菁 +3 位作者 庄强 田雪君 钱程 刘立 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2009年第4期571-577,共7页
研究端粒酶逆转录酶启动子和缺失24bp双调控的溶瘤腺病毒联合化疗药物对人肺癌、宫颈癌的体外杀伤作用。采用流式细胞术检测化疗药物对病毒感染宫颈癌细胞株Hela、肺癌细胞株H460的影响;采用MTT法检测病毒联合化疗对两种肿瘤细胞以及人... 研究端粒酶逆转录酶启动子和缺失24bp双调控的溶瘤腺病毒联合化疗药物对人肺癌、宫颈癌的体外杀伤作用。采用流式细胞术检测化疗药物对病毒感染宫颈癌细胞株Hela、肺癌细胞株H460的影响;采用MTT法检测病毒联合化疗对两种肿瘤细胞以及人正常细胞株L02增殖的抑制作用;利用Hoechst 33342染色对病毒联合化疗疗法诱导的肿瘤细胞凋亡进行形态学观察;用实时定量PCR分析丝裂霉素对腺病毒增殖能力的影响。结果表明AdCN205-IL-24或携带报告基因的AdCN205-EGFP联合适当剂量的丝裂霉素后,其对Hela、H460的杀伤作用显著提高(P<0.05),相同条件下对L02无明显抑制作用,并且其复制能力不因丝裂霉素的存在而发生明显变化。 展开更多
关键词 肿瘤特异性增殖病毒 肿瘤治疗 化疗 联合抑癌 实时定量PCR
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肿瘤选择增殖型腺病毒载体研究进展
16
作者 王春毅 傅仲学 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2006年第10期724-727,共4页
近年来,人们利用肿瘤细胞与正常细胞之间某些生物学性状的差异,构建了肿瘤选择增殖型腺病毒(CRAd)。其仅在肿瘤细胞中增殖,对正常细胞损伤小,以其为载体具有特别的优势。现就肿瘤CRAd的研究进展作一综述。
关键词 肿瘤 基因 治疗 肿瘤选择增殖型腺病毒
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与CIK细胞结合的肿瘤特异性增殖腺病毒KGHV400的构建 被引量:1
17
作者 周新亮 姜英翰 +4 位作者 李静 冯强 黎贵芸 潘鑫艳 杨举伦 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期345-353,共9页
为了构建能与CIK细胞(Cytokine induced killer cell,CIK)结合的肿瘤特异性增殖腺病毒,我们用化学合成的35型腺病毒(Ad35)纤毛基因替换5型腺病毒(Ad5)骨架质粒的纤毛基因,获得5/35嵌合型腺病毒骨架质粒,然后与携带肿瘤特异性启动子hTERT... 为了构建能与CIK细胞(Cytokine induced killer cell,CIK)结合的肿瘤特异性增殖腺病毒,我们用化学合成的35型腺病毒(Ad35)纤毛基因替换5型腺病毒(Ad5)骨架质粒的纤毛基因,获得5/35嵌合型腺病毒骨架质粒,然后与携带肿瘤特异性启动子hTERT(端粒酶逆转录酶基因启动子)和HRE(缺氧反应元件启动子)的穿梭质粒在HEK293细胞中同源重组,获得能与CIK细胞结合的肿瘤特异性增殖腺病毒KGHV400。分离人外周血单个核细胞,诱导培养成CIK细胞,与KGHV400共培养获得荷载KGHV400的CIK细胞。建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型,经尾静脉注射荷载KGHV400的CIK细胞,在注射后第1d、2d、3d、5d、7d、14d解剖实验鼠,用免疫组化技术检测腺病毒六邻体蛋白在移植瘤、心、肝、脾、肾组织的表达。结果显示,构建的重组腺病毒KGHV400能高效率感染CIK细胞;荷瘤鼠尾静脉注射荷载KGHV400的CIK细胞后第1d,肿瘤细胞中即有腺病毒六邻体蛋白表达,之后表达逐渐增多,第14d仍有表达;脾脏在第1~14d检测到少量淋巴细胞中存在腺病毒六邻体蛋白;心、肝、肾组织未检测到该蛋白。对照组(尾静脉注射KGHV400)在注射后第1d、2d、3d、5d,肝、脾、肾组织中检测到存在腺病毒六邻体蛋白,但第7d后为转阴性;肿瘤细胞和心肌细胞未检测到腺病毒六邻体蛋白。我们的研究结果表明,重组腺病毒KGHV400是一种有用的肿瘤基因治疗载体。 展开更多
关键词 肿瘤特异性增殖病毒 CIK细胞 肿瘤 基因治疗
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高选择性RNA干扰抑制survivin基因对在体结肠癌的治疗作用 被引量:3
18
作者 王春毅 傅仲学 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第28期3339-3341,共3页
目的探讨肿瘤增殖型腺病毒Ad-delE1b55KD-shRNA/survivin-EGFP介导的针对survivin的高选择性RNA干扰对在体结肠癌细胞HT-29增殖和凋亡的影响。方法用携带针对人survivin的shRNA的肿瘤增殖型腺病毒Ad-delE1b55KDshRNA/survivin-EGFP转染... 目的探讨肿瘤增殖型腺病毒Ad-delE1b55KD-shRNA/survivin-EGFP介导的针对survivin的高选择性RNA干扰对在体结肠癌细胞HT-29增殖和凋亡的影响。方法用携带针对人survivin的shRNA的肿瘤增殖型腺病毒Ad-delE1b55KDshRNA/survivin-EGFP转染结肠癌细胞HT-29裸鼠移植瘤模型,以携带相同shRNA的复制缺陷型腺病毒和脂质体载体为对照,检测移植瘤体变化,以及TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡率。结果 Ad-delE1b55KD-shRNA/survivin-EGFP介导的高选择性RNA干扰使结肠癌裸鼠移植瘤的瘤体减小、移植瘤细胞凋亡率显著增加,且高于目前常用的复制缺陷型腺病毒载体和脂质体载体(P<0.05)。结论 Ad-delE1b55KD-shRNA/survivin-EGFP介导的高选择性RNA干扰能高效地诱导结肠癌细胞凋亡并抑制其增殖。 展开更多
关键词 肿瘤增殖型腺病毒 高选择性RNA干扰 SURVIVIN 结肠肿瘤 细胞凋亡
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Ad-delE1b55kD-shRNA/Survivin-EGFP的构建及鉴定 被引量:1
19
作者 王春毅 傅仲学 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第13期1293-1297,共5页
目的构建特异性强,转染率高,针对人Survivin进行RNA干扰的肿瘤增殖型腺病毒载体(Ad-delE1b55kD-shRNA/Survivin-EGFP)。方法将针对人Survivin的shRNA的基因序列及EGFP基因序列克隆至肿瘤增殖型腺病毒穿梭质粒pAd-delE1b55kD;HEK-293细... 目的构建特异性强,转染率高,针对人Survivin进行RNA干扰的肿瘤增殖型腺病毒载体(Ad-delE1b55kD-shRNA/Survivin-EGFP)。方法将针对人Survivin的shRNA的基因序列及EGFP基因序列克隆至肿瘤增殖型腺病毒穿梭质粒pAd-delE1b55kD;HEK-293细胞中包装出毒得到重组腺病毒Ad-delE1b55kD-shRNA/Survivin-EGFP并测序鉴定。用重组腺病毒感染结肠癌细胞HT-29并检测转染率,用RT-PCR和Westernblot分别检测转染后的HT-29细胞中SurvivinmRNA和蛋白表达的变化。结果序列测定证明针对人Survivin的shRNA序列及EGFP序列被成功构建到肿瘤增殖型腺病毒载体中;Ad-delE1b55kD-shRNA/Survivin-EGFP对结肠癌细胞HT-29的转染效率显著高于增殖缺陷型腺病毒载体和脂质体载体(P<0.01);而对肝细胞的转染率则显著低于对结肠癌细胞株HT-29的转染(P<0.01)。与复制缺陷型腺病毒载体和脂质体载体比较,转染Ad-delE1b55kD-shRNA/Survivin-EGFP后,HT-29细胞中SurvivinmRNA拷贝数及蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论构建成功携带针对人Survivin的shRNA的肿瘤增殖型腺病毒载体Ad-delE1b55kD-shRNA/Sur-vivin-EGFP,其能选择性地高效转染结肠癌细胞株HT-29并有效干扰Survivin,且较之增殖缺陷型腺病毒载体和脂质体载体具有更高的干扰效率。 展开更多
关键词 肿瘤增殖型腺病毒 RNA干扰 存活素 结肠癌
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卵巢癌生物治疗的研究进展 被引量:12
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作者 崔恒 钱和年 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期193-194,共2页
关键词 卵巢癌 生物治疗 基因治疗 肿瘤增殖病毒治疗 免疫治疗
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