IL-18基因修饰增强肿瘤抗原多肽致敏的树突状细胞体内诱导的抗肿瘤免疫反应

目的 :研究肿瘤抗原多肽致敏的白细胞介素 18(IL 18)基因修饰的树突状细胞体内诱导的抗肿瘤免疫反应。方法 :①以Lewis 3LL肺癌细胞特异性抗原肽mut1冲击致敏IL 18基因修饰的骨髓来源的树突状细胞 (DC IL 18 mut1) ,每次用其 1× 10 5 只皮下免疫小鼠 2次 ,然后测定脾细胞的NK活性及CTL杀伤活性 ;②以DC IL 18 mut1每次 2× 10 5 只皮下免疫 1次 ,然后再以 5× 10 53LL细胞攻击 ,在诱导及效应阶段分别以单抗阻断不同免疫成份 ,观察肿瘤的生长。结果 :以DC IL 18 mut1皮下免疫后可诱导出比DC mut1等免疫组更高水平的 3LL肺癌细胞特异性CTL ,并使NK活性明显增加 ;单抗体内阻断实验提示在DC IL 18 mut1免疫诱导阶段 ,CD4 + T细胞和抗原共刺激分子、IFN γ均起到重要作用 ,而效应阶段CD8+ T、IFN γ、NK起作用 ,而CD4 + T则是非必需的。结论 :DC IL 18 mut1皮下免疫后可诱导高水平的抗肿瘤免疫活性 ,其机理与抗原有效提呈、特异性CTL诱导、NK活性增加以及CD4 + 、CD8+ T、NK细胞、IFN γ参与密切相关。

肿瘤抗原多肽诱导的CD8^+CTL的体内外抗瘤效应

利用海绵移植模型,将Friend小鼠白血病病毒gag编码的二个多肽CCLCLTVFL(gPr80 gag 85-93)和RSPTNLAKV(Pr65 gag P30 131-139)分别注入正常或经FBL-3肿瘤细胞免疫过的C57BL/6小鼠皮下的植入海绵中,10天后,收集海绵中浸润淋巴细胞,在体外用免疫肽周期性刺激培养扩增。实验结果表明:用多肽体内免疫正常或经FBL-3免疫的B6小鼠均能诱导出对免疫多肽特异的CD8^+CTL。其中,P85-93多肽诱导的CD8^+CTL除能杀伤该多肽致敏的同系靶细胞外,还能特异性杀伤FBL-3瘤细胞.抗原多肽诱导的CD8^+CTL在体外经用免疫多肽致敏的同系小鼠脾细胞作周期性刺激并在低浓度IL-2的条件下培养,可长期生长并大量扩增。用体外培养扩增的P85-93多肽特异性CD8^+CTL过继转输治疗FBL-3荷瘤小鼠,能有效治愈FBL-3白血病荷瘤小鼠。上述结果表明,用肿瘤抗原多肽替代肿瘤细胞体内免疫动物可诱导特异性抗瘤效应的CD8^+CTL,并可在体外扩增用于肿瘤过继性免疫治疗。

热休克蛋白在递呈肿瘤抗原多肽中的作用

化学致癌剂诱发的肿瘤特异性移植抗原(TSTA)与热休克蛋白(HSP)相关联。HSP本身不是TSTA,而是作为抗原递呈分子或抗原递呈辅助分子把TSTA递呈给T杀伤细胞(CTL)。HSP能广泛地与胞浆内多肽结合并表达在瘤细胞表面,直接激活γ/δ^+CD8^+细胞,也能把多肽转运给经典MHC I(MHC Ia)类分子和类似I类(MHC Ib)分子,后两者分别激活α/β和γ/δ^+CD8^+T细胞,并使这两种CTL细胞发挥抗肿瘤效应。由于HSP在结合和递呈抗原时,不受MHC分子的限定性,因此用HSP-肿瘤多肽复合物作瘤苗,要比HLA-多肽瘤苗有更大应用价值。

低剂量X射线照射对小鼠肝癌H-22细胞膜相关抗原肽提取物抑瘤作用的影响

目的:观察低剂量X射线照射对小鼠肝癌H22细胞膜相关抗原肽(TAP)提取物抑瘤作用的影响,为低剂量辐射与肿瘤疫苗联合治疗肿瘤提供实验依据。方法:采用微酸洗脱法制备分子量≤3000的细胞膜TAP提取物,皮下免疫小鼠,免疫前12h给予75mGyX射线全身照射,检测胸腺细胞周期时相、脾细胞ConA反应性及脾T细胞CD4、CD8亚组的变化,同时观察体内抑瘤效应。结果:TAP提取物免疫小鼠后,移植肿瘤的发生率降低,平均出现时间延迟,生长速度减慢;脾细胞ConA反应性增强,胸腺细胞周期百分数无显著变化。小鼠免疫前12h给予75mGy全身照射可增强TAP提取物的抑瘤效应,与单纯TAP组相比,胸腺细胞S期百分数明显增加,脾细胞CD8+T细胞百分数增高。结论:低剂量辐射能进一步激发免疫系统功能,增强小鼠肝癌H22细胞膜TAP提取物的抑制肿瘤作用。

基于骨髓瘤抗原sp17的伪病毒肿瘤疫苗的制备和鉴定

目的:探讨制备、鉴定基于sp17的伪病毒肿瘤疫苗,为肿瘤的生物治疗策略提供新的方法。方法:在特定的条件下将肿瘤抗原多肽和DNA制备成模拟病毒样结构的颗粒,并以电镜、DNA阻滞试验、DNaseⅠ保护试验和免疫印迹(Western blot)对该疫苗进行制备鉴定。结果:在一定浓度的氯化钠溶液中,电荷比为2的制备条件下,该疫苗能形成均匀的颗粒样结构,并可有效介导瘤苗所携带基因的表达。结论:该研究成功制备了基于sp17的伪病毒肿瘤疫苗,为新型的肿瘤疫苗的设计提供了新的思路。

致敏DC诱导CTL特异性杀伤HL-60细胞的实验研究

目的 :探讨来自外周血单个核细胞的树突状细胞 (DC)负载冻融或弱酸洗脱的HL 6 0多肽抗原 ,体外诱导产生细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)对HL 6 0细胞的杀伤作用。方法 :应用GM CSF、TNF α和IL 4自外周血单个核细胞诱导出DC ,使其负载两种HL 6 0多肽抗原 ,致敏同种T淋巴细胞 ,产生CTL。以胃癌细胞系SGC790 1为对照组 ,观察DC∶CTL∶HL 6 0 /SGC 790 1为 1∶10 0∶2 ,CTL对HL 6 0特异性免疫杀伤活性。结果 :弱酸洗涤法或冻融法所提取的抗原多肽致敏DC诱导的CTL对HL 6 0细胞的杀伤率分别为 6 8.2 9%± 11.37%和4 5 .95 %± 8.4 7% ,二者差异有极显著性意义 (P <0 .0 1)。对SGC 790 1细胞的杀伤率分别为 2 4 .6 0 %± 4 .4 0 %和 16 .0 9%± 4 .98% ,二者差异有极显著性意义 (P <0 .0 1)。结论 :相对于冻融HL 6 0细胞抗原多肽 ,DC可更有效地提呈酸洗HL 6 0抗原多肽 ,并通过特异性CTL产生对HL 6

生物治疗在肝癌临床中的地位

生物治疗被誉为肿瘤的第四种疗法，它已成为肿瘤研究的热点，并在肝癌临床中同样具有重要的战略地位。肝癌治疗的发展史中，曾使5年生存率有较大幅度提高的有50～60年代的大肝癌切除，70—80年代的小肝癌切除和目前的不能切除肝癌的缩小后切除。前两者是外科起主导作用的；后者则乃放、化疗、外科综台起作用，生物疗法亦参与起作用。预期在2000年前后，生物疗法将在肝癌治疗中着起举足轻重的作用。