利用恒溶氧-补料分批技术高密度培养大肠杆菌生产重组肿瘤导向多肽LTL-TNF

目的 探讨重组肿瘤导向多肽 L TL - TNF工程菌的大规模培养与表达方法以获取重组 L TL TNF.方法 首先在试管和三角瓶中探讨工程菌的生长和表达规律 ,筛选其最适宿主菌、最佳培养及诱导表达条件 ,然后在 5 L 自控发酵罐中进行分批补料培养 .结果 保持培养过程中 30 %～ 40 %的溶解氧和限制性流加葡萄糖 ,工程菌 DH5 α/ p BV- L TL TNF在5 L 发酵罐中培养至终密度 A6 0 0 nm 40～ 5 0时 ,目的蛋白的表达最高 ,可达菌体总蛋白的 5 0 % ,L TL - TNF的含量达到5 .12 g· L- 1 ,发酵总时间在 12 h左右 .结论 确定了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺 ,为重组肿瘤导向多肽L TL TNF工程菌的工业化生产奠定了基础 .

随机肽库技术在肿瘤导向治疗中的应用

目前肿瘤导向治疗的临床效果尚不理想 ,关键的问题在于缺乏高效导向性的载体系统。而用肿瘤治疗中的目标受体从随机肽库中筛选出相应结合肽 ,并对其结构进行分析 ,得到该目标受体的模拟配体 ,并利用其与目标受体有强亲和力的特性可以将药物定向地输送到肿瘤细胞 ,改善治疗的效果。通常应用的随机肽库为噬菌体肽库。噬菌体肽库由于具有表型与基因型的统一 ,可以大量扩增 ,并能用于蛋白质二级结构的研究 ,而且操作方法具有快速、有效、简便等特点 。

膀胱肿瘤导向肽NYZL1的体内外分子动力学特征

目的探讨膀胱肿瘤导向肽NYZL1的功能及体内外分子动力学特征。方法采用竞争性抑制法检测其与细胞结合，噻唑蓝（MTr）法确定NYZLI的抗肿瘤功能；细胞免疫荧光技术、组织免疫荧光技术和活体荧光成像技术研究NYZL1-异硫氰酸荧光素（FITC）分子探针与肿瘤细胞结合的内化作用及探针在肿瘤微循环和全身器官的动态分布的动力学特征。结果单纯加入不同浓度组NYZL1-FITC荧光值为4／6．00±13．20、966．85±20．20和1751．45±16．40，先加入NYZL1再加入NYZL1-FITC荧光值为180．45±12．40、696．30±16．30、1253．24±11．50，组间差异有统计学意义（P〈0．05）；在25μmol／L和100μmol／L浓度下NYZL1和NYZL1-FITC组的吸光度（A）值分别为0．613±0．055、0．646±0．061和0．647±0．063、0．664±0．070，计算各组相对抑制率均低于30％；探针进入细胞，5min出现绿色荧光，10-20min时细胞核显影，4h细胞内荧光强度最强；静脉注射裸鼠后，探针一部分经肝胆循环和肾脏排泄，另外一部分经血液循环向肿瘤组织靶向浓聚，4-6h肿瘤组织浓聚达高峰，但探针在组织中的分布与肿瘤的血管分布密切相关，探针能够同时标记肿瘤血管和细胞。结论NYZL1不具有抗肿瘤效应，能够携带荧光染料进行膀胱肿瘤的靶向光学分子成像。

肿瘤导向肽的研究进展

恶性肿瘤是造成人类死亡的主要原因之一,其早期诊断和早期治疗很关键。鉴于目前大多数抗癌药物无法区分肿瘤细胞和正常细胞,研究有效的肿瘤特异性药物输送系统很有必要。应用噬菌体展示技术,已经发现一类能够特异识别并结合到肿瘤细胞或肿瘤血管的多肽——肿瘤导向肽,它能够靶向在体肿瘤,特异性地传递抗癌药物、显像剂、无机纳米粒子、脂质体等到达肿瘤组织。肿瘤导向肽作为目前研究的热点,相比于抗体导向药物具有相对分子质量小、渗透性高、特异性高、成本低等诸多优点,已经在肿瘤靶向诊断和治疗方面显示出独特的优势。本文将对肿瘤导向肽的研究进展进行较为全面的综述。

抗肿瘤药物的基因导向性个体化治疗

遗传药理学与药物基因组学的发展对于开展肿瘤的个体化治疗具有非常重要的意义。药物基因组学的发展使得多种影响肿瘤药物的遗传变异得以阐明,并进一步影响肿瘤治疗过程中的新药研发与个体化治疗。本文针对目前明确的能够影响抗肿瘤药物疗效的常见遗传变异进行综述,以促进抗肿瘤药物个体化治疗模式的推广。

超声导向注射肿瘤坏死因子治疗肝癌100例报告

原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，目前外科手术使肝癌术后近期疗效有明显提高，但术后复发等因素，长期疗效仍不理想。临床确诊时绝大多数病人为中晚期，治疗效果甚差。我院自1991-06／1999-06经B超引导向注射肿瘤坏死因子(TNF)治疗肝癌100例，效果满意，现报告如下。

抗体工程与导向治疗

以单克隆抗体(单抗)为载体的肿瘤导向治疗的研究已有近20年的历史．从研究角度看，成果累累，百余种性状良好的肿瘤单抗的制备及数十种肿瘤相关抗原(TAA)的鉴定，以及成功的临床前研究方案，为肿瘤导向治疗的临床研究提供了坚实的基础．从实际效果看，战绩平平，尽管有数十个临床研究方案正在积极进行，

抗人B淋巴细胞白血病导向药物生物活性的研究

抗肿瘤新药表阿霉素（ＥＰＩ）通过葡聚糖Ｔ１０与抗人Ｂ淋巴细胞白血病单抗（Ｂ１５９）连接制备免疫结合物。该结合物保持了原有的抗体活性，在体外对人Ｂ淋巴母细胞Ｒａｊｉ显示出特异的杀伤作用，并具有良好的稳定性。

二硫键稳定单链抗体融合PE38免疫毒素的构建及活性分析

目的构建二硫键稳定单链抗体(B3dsscFv)融合PE38原核表达载体,实现其高效表达,并对初步纯化后的复性产物的稳定性、对肿瘤细胞的结合和杀伤活性进行测定。方法重叠PCR连接B3抗体的VH和VL片段,并将PCR产物克隆至pET22b表达载体(B3dsscFv-pET22b)。测序正确的PE38基因片段经酶切连接至B3dsscFv-pET22b,构建B3dsscFv-PE38-pET22b表达载体。IPTG诱导转化菌,将表达的包涵体进行变性、复性后用阳离子柱Q-Sepharose进行了初步纯化,ELISA测定此融合蛋白中单链抗体的结合活性及其在37℃的稳定性,并采用MTT法检测其对B3抗原表面阳性细胞HT-29的杀伤作用。结果双酶切鉴定表明成功地构建了B3dsscFv-PE38-pET表达载体,表达产物以包涵体形式存在,占总蛋白量的45%左右。复性后的B3dsscFv-PE38保持单链抗体的结合活性,并且对结肠癌HT-29细胞具有一定的杀伤作用,最大杀伤率可达96%。该蛋白在37℃孵育16h后,仍能保持大部分活性。结论所获B3dsscFv-PE38免疫毒素具备导向和杀伤肿瘤细胞的双重功能和良好的稳定性,为其研制有效的肿瘤免疫治疗靶向药物提供一定的基础。

利用噬菌体随机肽库对神经胶质瘤母系SWO-38进行全细胞筛选

目的和方法 :用噬菌体随机 7肽库对神经胶质瘤母细胞 (SWO - 38)进行全细胞筛选 ,并通过竞争结合实验检验所筛选出的克隆的结合特异性。结果 :经过 3轮“吸附 -洗脱 -扩增” ,噬菌体高度富集 ,并得到两个特异性较强的克隆。结论 :利用噬菌体肽库可以简便。

蓖麻毒素的研究与应用

对蓖麻毒素的结构、毒性作用机理、纯化方法及其在肿瘤导向治疗和生物杀虫方面的应用进行了简述。

噬菌体随机肽库中与神经胶质瘤细胞系SWO-38特异性靶向结合短肽的筛选

神经胶质瘤的常规治疗尚难取得令人满意的效果,寻找高效和高特异性杀伤肿瘤细胞的药物已成为提高其治愈率的研究热点。本研究旨在利用噬菌体随机肽库找到与神经胶质瘤细胞系SWO-38特异性结合并内化人细胞的短肽序列。方法:利用噬菌体随机12肽库对肿瘤细胞进行5轮全细胞筛选,分析筛选后单克隆对神经胶质瘤细胞的特异性结合能力并进行免疫荧光分析。提取单克隆DNA,测序,得出短肽序列进行比对分析。结果:通过5轮筛选后的噬菌体库及所挑选的表面及内化部分各13个单克隆均显示对胶质瘤细胞有较高的特异性结合,并测序得到三条重复性高的多肽序列。免疫荧光分析显示噬菌体大量聚集在细胞表面并能够内化进入到细胞内。结论:通过噬菌体随机肽库对肿瘤细胞进行全细胞筛选得到的噬菌体多肽能高特异性与胶质瘤瘤细胞SWO-38结合,可作为肿瘤导向药物研究的载体。

用于放免治疗的核素研究进展

放射免疫治疗肿瘤具有独特优势,许多新的核素被用于制备肿瘤放免治疗药物。高能α、β粒子及抗肿瘤导向载体的应用促进了放免治疗药物的发展。本文介绍了用于放射免疫治疗的核素最新研究进展,归纳了用于放射免治疗的常用放射性核素,并比较了各自的优缺点,指出了放射性核素用于放射免疫治疗过程中存在的问题、可能的解决方法及今后的发展趋势。

白喉毒素-白细胞介素2重组嵌合毒素的克隆表达及特异性细胞毒作用的研究

应用PCR技术分别扩增出编码白喉毒素氨基端 389个氨基酸 (DT3 89)的基因片段及人IL 2全基因 ,将两基因串连插入 pET3a载体 ,构建成含有DT3 89 IL 2融合基因的表达载体 ,转化大肠杆菌BL2 1,经表达、纯化后 ,用3 H Leucine掺入法测定其对HUT 10 2细胞的蛋白合成抑制作用。SDS PAGE电泳分析表明 ,表达产物分子质量 (Mr)约为 5 8kD ;重组嵌合毒素能够特异性地抑制高表达IL 2受体的HUT 10 2细胞的蛋白生物合成 ,且有一定的剂量反应关系 ,其细胞半数抑制浓度 (IC50 )约为 3 3× 10 -11mol/L。为进一步研制特异性的抗IL 2受体高表达肿瘤和相关疾病的药物打下了基础。

我院参加华东地区第二届神经外科

我院鲍耀东教授等8人参加了华东地区第二届神经外科学术会议。参加大会交流论文共19篇,其中颅内肿瘤方面的有:抗肿瘤导向药物的研究、新的抗胶质瘤药物筛选方法学研究、OK425对脑胶质瘤的作用研究、抗脑胶质瘤细胞单克隆抗体 SZ36及其识别抗原的生化特征等;颅脑损伤方面的有:甘露醇局部应用对颅脑损伤组织保护作用的实验与临床报导等;外伤性颅内血肿非手术治疗方面的有:附一院脑神经外科分部的163例非手术疗法的分析报告;脑血管疾病方面的有:五羟色胺、自由基在蛛网膜下脑出血对致脑血管痉挛的实验研究,其中包括 PGI2

膀胱癌BIU-87细胞株导向肽NYZL1靶向性的实验研究

目的 验证导向肽NYZL1与膀胱癌BIU-87细胞株及其移植瘤结合的靶向特异性.方法 2014年4-12月固相合成导向肽NYZL1及阴性对照肽svNYZL1,采用异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）标记,制备实验组荧光分子探针FITC-氨基己酸-CSSPIGRHC（FITC-NYZL1）和对照组荧光分子探针FITC-氨基己酸-CRIGSPHSC（FITC-svNYZL1）.向膀胱癌BIU-87细胞株悬液中分别加入两种探针孵育,用流式细胞仪检测细胞平均荧光强度值,明确探针的亲和作用.将膀胱癌BIU-87细胞株爬片,分别加入两种探针孵育,用激光共聚焦显微镜（laser scanning confocal microscope,LSCM）观察探针与细胞结合的荧光图像,明确其亲和作用的特异性.选取16只SPF级BALB/c-nu雄性裸鼠.3～4周龄.体质量15 ～ 18 g.成功构建膀胱癌BIU-87细胞荷瘤裸鼠模型.采用完全随机分组法分为2组,每组8只,经尾静脉分别注入两种探针.4h后,实验组和对照组各取5只,剖取肿瘤组织、心、肝、脾、肺、肾、膀胱和胆囊,光学分子成像系统观察肿瘤及各组织的荧光图像;24 h后,实验组和对照组各取3只荷瘤裸鼠,剖取肿瘤组织、心、肝、脾、肺、肾和膀胱,制作冷冻切片,LSCM下观察肿瘤及各组织的荧光图像.结果 流式细胞仪检查实验组和对照组的平均荧光强度值分别为50.34±3.63和17.72±1.57,差异有统计学意义（P＜0.05）.LSCM观察实验组细胞可见明显的绿色荧光,对照组细胞未见明显的绿色荧光.体内研究发现,光学分子成像系统观察肿瘤组织、胆囊及膀胱可见明显荧光,其余器官如心、肝、脾、肺和肾等未见明显荧光.LSCM观察下实验组的肿瘤组织中可见明显绿色荧光,而实验组其他器官（心、肝、脾、肺、肾和膀胱）和对照组肿瘤组织及器官中未见绿色荧光.结论 膀胱肿瘤导向肽NYZL1能够与膀胱癌BIU-87细胞株及其移植瘤靶向性结合,并可携带荧光素标记肿瘤组织.

肿瘤新生血管及相关靶标

肿瘤血管导向治疗作为肿瘤治疗新策略已被广泛接受，其理论依据可归纳于两点：（１）肿瘤的持续生长和侵袭转移依赖于血管生成；（２）肿瘤新生血管不同于正常血管．后者是靶向治疗的关键．在肿瘤血管生成过程中，内皮细胞快速增殖及迁移，过度表达一些正常血管不表达或低表达的分子，内皮周细胞和血管基底膜缺乏，血管渗漏性高．肿瘤血管生成的每一个环节中出现的异常分子，理论上都可作为肿瘤导向治疗的靶标，大概可分为三类，即血管内皮细胞、细胞黏附分子和基底膜．

细胞因子-受体介导靶向杀伤白血病细胞的新策略

利用细胞因子受体介导重组细胞因子外毒素蛋白来选择性杀伤白血病细胞标志着肿瘤导向杀伤策略研究的最新进展之一，它屏弃并弥补了以抗原抗体为主体的第一代导向杀伤策略的诸多不足或缺陷［１，２］。近年来美国科学家开拓性地构建成功了数种以绿脓杆菌（ＰＥ）和白...

免疫毒素及其交联物的研究与展望

天然毒素的细胞强毒效应已被应用于杀伤肿瘤，但其非特异性却造成对正常细胞的损伤，通过改进毒素构造，运用化学交联制备出新型的免疫毒素，预示在肿瘤导向治疗方面又前进一步，在体外实验应用中疗效显著，尽管在临床方面还亟待改进，“生物导弹”仍将成肿瘤研究的热点课题。