YB-1对乳腺癌MCF-7细胞CD44表达和细胞侵袭及成球能力的影响

目的:观察Y-盒结合蛋白1(Y-box binding protein-1,YB-1)对乳腺癌MCF-7细胞CD44表达及细胞迁移、成球能力的影响。方法:应用基因重组技术将YB-1基因及其siRNA构建于腺病毒载体pADeasy-1,重组腺病毒及腺病毒空载体转染乳腺癌细胞株MCF-7;通过蛋白质印迹法,RT-PCR和免疫荧光的方法检测YB-1和CD44的表达;MTT法检测转染后细胞生长速度,并绘制生长曲线;并通过Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力;细胞使用无血清培养基培养,并加入表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)后,观察YB-1对细胞成球能力的影响。结果:蛋白质印迹法和RT-PCR结果显示,转染YB-1重组腺病毒载体的MCF-7细胞中,YB-1和CD44的表达明显高于转染腺病毒空载体组和未转染组;相反,转染YB-1 siRNA重组腺病毒载体的MCF-7细胞中,YB-1和CD44表达明显低于对照腺病毒空载体组和未转染组;免疫荧光也证实CD44蛋白水平与YB-1表达正相关。细胞生长曲线表明,转染YB-1重组腺病毒载体组的细胞生长速度最快,而且其侵袭、迁移和成球能力最强。结论:YB-1可能通过调控CD44的表达影响人乳腺癌细胞MCF-7的侵袭及成球能力。

PPZ与5-FU对胃癌细胞生长、自我更新能力的影响及相互作用

目的探讨泮托拉唑(PPZ)、5-氟尿嘧啶(5-FU)在调控胃癌细胞及胃癌干细胞生长、自我更新能力中的影响及其相互作用。方法将SGC-7901和HGC-27细胞分为3组实验:5-Fu处理组、PPZ处理组和5-Fu+PPZ组。通过细胞成球实验检测PPZ加药前后胃癌细胞系(SGC7901、HGC-27)中胃癌细胞及胃癌干细胞自我更新能力的变化,观察PPZ对胃癌细胞系成球能力干扰情况;MTT法检测PPZ、5-FU对胃癌细胞及胃癌干细胞增殖能力的影响,观察PPZ对5-FU药物敏感性的调节作用。结果PPZ加入后胃癌细胞系(SGC7901、HGC-27)和胃癌干细胞系(SGC7901-SP、HGC-27-SP)自我更新率比PPZ加入前的自我更新率下降(P<0.01);PPZ、5-FU对胃癌细胞(SGC7901、HGC-27)增殖均有抑制作用,而5-Fu+PPZ联合组抑制最为明显,抑制增殖的作用在24 h开始出现,96 h最低,均低于0 h。PPZ对胃癌干细胞(SGC7901-SP、HGC-27-SP)增殖均有抑制作用,在48 h逐渐明显;加入PPZ后,胃癌干细胞(SGC7901-SP、HGC-27-SP)两个细胞系酶标仪检测到的吸光值在48 h、72 h、96 h时均下降。72 h和96 h时,加与不加PPZ的吸光值比较,统计学意义显著(P<0.01)。不同浓度(0~50μg/ml)5-FU对胃癌干细胞(SGC7901-SP、HGC-27-SP)增殖抑制的差异不显著;而加入PPZ 100μg/ml后,随着5-FU浓度的增加增殖抑制作用逐渐增强,在40~50μg/ml浓度的5-FU对胃癌干细胞(SGC7901-SP、HGC-27-SP)增殖抑制更加明显;加入PPZ后,40μg/ml及50μg/ml浓度的5-FU作用下胃癌干细胞(SGC7901-SP、HGC-27-SP)酶标仪检测到的吸光值均降低。结论PPZ能有效抑制胃癌细胞及胃癌干细胞的自我更新能力,抑制其增殖,并可提高其对5-FU的化疗敏感性。PPZ有望成为逆转胃癌耐药的一类联合治疗药物应用于临床。