肿瘤抑素T7肽溶液的稳定性研究

目的考察水溶性肿瘤抑素T7肽在脂质体制备及贮存条件下的稳定性。方法将T7肽溶液置于室温下,HPLC法测定6 h内峰面积减小百分比,确定溶剂。再将T7肽溶液分别置于4℃和25℃下,绘制降解曲线,确定贮存条件。最后将不同pH值、含不同缓冲盐的T7肽溶液于65℃下保温1 h,检测保温前后溶液中T7肽含量,优化制备条件。结果以重蒸水和灭菌注射用水为溶剂的T7肽溶液在6 h内峰面积减少分别为79.66%和18.31%,于4℃或25℃贮存6 h后的降解率分别约为10%与20%,在pH值4.0～9.0的溶剂中降解率分别为39.67%、42.55%、37.71%、13.44%、7.34%和23.76%,与各种缓冲液接触后质量浓度均降至初始质量浓度的40%以下。结论 T7肽溶液应以弱碱性的灭菌注射用水为溶剂,现用现配,制剂制备过程中应避免与缓冲液接触,并于4℃下贮存。

肿瘤抑素T_7肽及其衍生物T_7-NGR载体构建及表达

目的为了提高作用靶向性,将导向肽NGR与肿瘤抑素T_7肽的C端连接,获得T_7肽及其衍生物T_7-NGR的载体。方法通过PCR和合成基因序列方法分别构建了肿瘤抑素T_7肽及T_7-NGR的克隆载体pMD-T_7和pMD-T_7N,经酶切和测序鉴定后,将2种载体分别双酶切,经低熔点琼脂糖凝胶电泳分离后,切下目的片段与酶切回收的质粒载体pET28a在低熔点琼脂糖中直接进行连接反应。阳性克隆经酶切和测序鉴定,转化感受态E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。结果酶切和测序鉴定结果正确,分别成功构建表达载体pET-T_7和pET-T_7N,经IPTG诱导,完成了表达条件的优化。Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,当IPTG浓度为1mmol/L时,25℃诱导8h,分别获得了T_7肽和T_7-NGR的表达产物。结论已经成功构建T_7肽和T_7-NGR的表达载体,获得了表达产物,为下一步的小肽活性实验奠定了基础。

99mTc标记T7肽及其在裸鼠非小细胞肺癌模型体内的生物分布研究

背景与目的肺癌是一种死亡率极高的恶性肿瘤,针对肺癌的早期诊断和治疗有着重要的意义和价值,本研究旨在探讨羰基锝法标记的肿瘤抑素T7肽用作裸鼠肺癌早期显像剂的初步研究。方法采用羰基锝法标记T7肽,薄层色谱法检测99mTc-T7的放化纯度与稳定性,丙酮作展开系统。测定99mTc-T7与NCI-H157细胞的亲和力。研究99mTc-T7于0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h在荷人非小细胞肺腺癌裸鼠体内的生物分布特性,并计算肿瘤(T)与非肿瘤组织(NT)放射性比值。结果 99mTc对T7肽标记率高,放化纯度达90%以上,不需进一步纯化,体外稳定性好。99mTc-T7与NCI-H157细胞的平衡解离常数为196.1 nM。99mTc-T7在裸鼠体内主要通过内脏器官代谢,血液清除较快,在肿瘤部位有一定程度聚集,肿瘤/肌肉比值随时间延长而增加,可达到5以上,在4 h-8 h之间取值较为理想。99mTc-T7在肺内存在一过性聚集。结论 99mTc-T7制备方法简便,标记率高,稳定性好,并能在肺癌肿瘤部位聚集,有望用作肺癌SPECT/CT显像剂。