肿瘤来源自噬小体刺激B细胞活化的实验研究

目的:研究肿瘤来源自噬小体(TDA)刺激B细胞的增殖与活化的作用。方法:分离小鼠脾脏细胞,在体外与10μg/ml TDA共孵育,同时用10μg/ml细胞裂解液刺激组作为对照,第3天收获细胞,流式细胞仪检测B细胞表面MHCⅠ、Ⅱ类分子和共刺激分子CD86、CD40的表达;第5天,检测B细胞的增殖作用;抗CD43磁珠分选法分离小鼠脾脏B细胞,在体外分别与10μg/ml TDA和细胞裂解液共孵育,第7天收获细胞培养上清,ELISA法检测总Ig M含量。结果:与细胞裂解刺激组相比,TDA体外能显著刺激小鼠B细胞增殖(TDA组28.6%、细胞裂解液刺激组4.4%),并且上调B细胞表面MHCⅠ和Ⅱ类分子及共刺激分子CD86、CD40的表达;TDA刺激B细胞分泌总Ig M的水平显著高于细胞裂解液刺激组(P<0.05)。结论:肿瘤来源的自噬小体作为一种颗粒性抗原载体,体外能有效刺激B细胞的增殖、活化,并刺激Ig M的分泌。

B细胞表面TLR2受体在肿瘤来源自噬小体活化B细胞过程中的作用

目的研究B细胞表面TLR2受体在肿瘤来源自噬小体活化B细胞过程中的作用。方法抗CD43磁珠分选法分离小鼠脾脏B细胞,用不同质量浓度TLR2抗体(0、3、10、30μg/ml)与B细胞共孵育,再用肿瘤来源自噬小体(DRs)刺激B细胞72 h,流式细胞术检测B细胞表面MHCⅡ类分子及共刺激分子CD86的表达情况;第3天收取上清ELISA检测细胞培养上清中IL-6和IL-10的表达;第7天收取上清液,ELISA检测细胞培养上清液中Ig M的表达。结果与未预处理的B细胞组相比,DRs活化TLR2抗体封闭的B细胞组上调B细胞表面MHCⅡ类分子和CD86表达的作用明显降低;DRs刺激TLR2抗体封闭B细胞组分泌IL-6和IL-10的水平显著降低;DRs刺激TLR2抗体封闭的B细胞产生Ig M水平显著低于未预处理的B细胞组。结论 B细胞的TLR2受体在DRs诱导B细胞活化、分泌细胞因子及产生Ig M过程中发挥了重要作用。

PEI修饰的氢氧化铝纳米颗粒联合肿瘤来源自噬小体抗肿瘤作用的初步研究

目的探讨聚乙烯亚胺(PEI)修饰的氢氧化铝纳米颗粒(RehydragelHS)联合肿瘤来源自噬小体(DRibbles)的抗肿瘤作用。方法PEI修饰的HS(HS/PEI)联合卵清蛋白(OVA)抗原后与树突状细胞(DCs)共孵育,流式细胞仪检测DCs对HS/PEI-OVA的摄取,Western blotting检测不同孵育时间DCs中泛素化OVA蛋白的表达;与B_(3)Z细胞(表达LacZ的H-2K_(b)-OVA_(257-264)特异性CD8^(+)T细胞杂交瘤)共孵育后,氯苯酚红-β-D-吡喃半乳糖苷(CPRG)法检测DCs对OVA抗原递呈能力的改变。DCs负载HS/PEI-DRibbles(OVA^(+))后与B_(3)Z细胞共孵育,CPRG方法检测DCs对DRibbles抗原递呈能力的改变。皮下接种小鼠黑色素瘤细胞B16-OVA构建小鼠黑色素瘤模型,探讨负载HS/PEI-DRibbles(OVA^(+))的DCs疫苗的抗肿瘤作用。结果与HS/PEI-OVA孵育6 h后DCs对OVA抗原摄取、递呈能力显著增强,DCs中泛素化OVA蛋白的表达显著增加。HS/PEI能显著增强DCs对DRibbles抗原的递呈能力。小鼠的B16-OVA皮下移植瘤模型中,DCs-HS/PEI-DRibbles(OVA^(+))疫苗可显著抑制小鼠的肿瘤生长并延长小鼠的生存时间且在体内诱导有效的抗原特异性免疫应答。结论DCs-HS/PEI-DRibbles疫苗能诱导高效的抗肿瘤应答,为今后DCs疫苗的临床应用及肿瘤的免疫治疗提供了新策略。

TLR2-MyD88通路在B细胞交叉提呈肿瘤来源自噬小体抗原过程中作用的初步研究

为研究B细胞表面TLR2在B细胞交叉提呈肿瘤来源自噬小体(tumor derived-autophagosome,DR)抗原诱导效应T细胞再活化过程中的作用,DR经淋巴结注射方式免疫C57BL/6小鼠,收获免疫小鼠的淋巴结细胞作为效应T细胞;以负载DR的C57BL/6、TLR2^(-/-)和MyD88^(-/-)及TLR2抗体封闭的小鼠脾脏B细胞作为pAPC。DR分别与分离纯化的WT C57BL/6、TLR2^(-/-)和MyD88^(-/-)及TLR2抗体封闭后的小鼠B细胞共孵育,然后与免疫小鼠CD4^+T和CD8^+T细胞共孵育,流式细胞术及ELISA法检测IFN-γ的分泌水平。结果显示,与WT C57BL/6小鼠B细胞组相比,负载DR的TLR2^(-/-)B细胞和MyD88^(-/-)B细胞及TLR2抗体封闭的B细胞活化效应CD8^+T和CD4^+T细胞产生的IFN-γ水平显著降低。以上结果提示B细胞交叉提呈DR抗原、诱导效应T细胞活化依赖于TLR2/MyD88信号通路。