生存素(Survivin)的克隆表达及生物医学意义初步探讨

目的 :克隆、表达肿瘤特异性凋亡抑制因子 (生存素 ,Survivin) ,并对其生物学意义进行研究。方法 :从人白血病细胞系HL60提取总RNA ,用RT PCR方法扩增出SVV基因片段。将SVV基因片段插入载体pGEM TEasy中 ,经全自动序列分析仪测序正确后用NdeⅠ /XhoⅠ双酶切 ,亚克隆到原核表达载体 pRSET C中 ,构建重组表达载体 pRSET c SVV ,并转化大肠杆菌BL2 1菌株。取工程菌 ,经IPTG诱导表达 ,对表达产物进行SDS PAGE鉴定并初步纯化。结果 :经RT PCR测序和酶切鉴定 ,成功地克隆了人SVV基因 ;经IPTG诱导的重组质粒pRSET c SVV表达出相对分子质量约为 165 0 0U的蛋白 ,与预期的结果相符。结论 :成功克隆了人肿瘤细胞的抗凋亡基因SVV ,并在大肠杆菌BL2 1中表达出SVV蛋白。该基因的高效表达为进一步探讨以SVV为基础的肿瘤诊、治奠定了实验基础。

叶酸修饰的重组Apoptin对胃癌治疗作用的实验研究

目的研究叶酸修饰的重组Apoptin(以下简称rApoptin)在体内外对胃癌的治疗作用。方法体外采用MTT法测定rApoptin对胃癌细胞生长抑制率;体内用胃癌荷瘤裸鼠研究rApoptin对肿瘤体积增长抑制作用及对裸鼠体重的影响。结果体外实验证明rApoptin对胃癌细胞有显著的生长抑制作用,并有明显的量效关系;对体内肿瘤体积亦有显著的抑制作用(P<0.01),病理结果显示,与对照组比较,实验组的肿瘤组织细胞发生大面积坏死或凋亡。结论 rApoptin胃癌组织细胞具有很强的杀伤作用。