肿瘤特异性凋亡基因诱导人淋巴瘤细胞凋亡的机制

目的:研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptingene)在诱导人淋巴瘤细胞U937凋亡时,cJun氨基末端激酶(JNK)信号通路的作用。方法:用含有apoptin基因的真核表达载体,瞬时转染体外培养的人淋巴瘤细胞U937。采用流式细胞仪、Westernblot、台盼蓝染色及RTPCR等研究其在不同时间条件下诱导U937细胞凋亡的作用。结果:Apopin基因瞬时转染U937细胞48h,可出现明显的凋亡;而且凋亡细胞的数量与apoptin基因的转染时间有关。诱导后24h,U937细胞中出现磷酸化的JNK蛋白的表达,诱导后48h达高峰;而非磷酸化的JNK蛋白表达无明显变化。结论:Apoptin基因具有诱导U937细胞凋亡的作用。JNK信号通路的激活,可能在apoptin基因诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥着重要作用。

肿瘤特异性凋亡基因诱导人黑色素瘤细胞凋亡机制的研究

目的研究肿瘤特异性凋亡基因(Apoptin gene)在诱导人黑色素瘤细胞A375发生凋亡时,c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在细胞发生凋亡中的作用。方法用含有肿瘤特异性凋亡(Apoptin)基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色素瘤细胞A375;采用流式细胞仪、免疫印迹法(W estern b lot)、台盼蓝染色法及RT-PCR等方法研究其在不同时间条件下对人黑色素瘤细胞A375诱导凋亡的作用。结果Apoptin基因瞬间转染的人黑色素瘤A375细胞出现明显的细胞凋亡,凋亡细胞的数量随Apoptin转染时间延长而增多,磷酸化型JNK蛋白在转染Apoptin 24 h开始表达,48h和72h过表达,而非磷酸化型JNK蛋白表达无明显变化。结论Apoptin基因具有诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡的作用,JNK信号通路的激活可能在Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥作用。

肿瘤特异性凋亡基因对人黑色素瘤细胞A375凋亡诱导作用

为观察肿瘤特异性凋亡基因(apoptingene)对人黑色素瘤细胞A375的凋亡诱导作用,用含有凋亡基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色素瘤细胞A375,采用台盼蓝染色法、RT-PCR及DNA凝胶电泳等方法研究其在不同时间条件下对人黑色素瘤细胞A375诱导凋亡的作用。结果表明,凋亡基因瞬间转染的人黑色素瘤细胞A375可出现明显的细胞凋亡;而且凋亡细胞的数量与转染时间有关。结论:凋亡基因具有诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡的作用。

肿瘤特异性凋亡基因对荷瘤小鼠基因治疗的实验研究

为研究肿瘤特异性凋亡基因对肿瘤的基因治疗作用,以S-180肉瘤细胞的荷瘤小鼠为模型,用克隆了肿瘤特异性凋亡基因的真核表达载体直接进行基因治疗,同时以生理盐水、真核载体为对照。结果表明,与对照组相比,基因治疗组小鼠一般生长状态良好,体内肿瘤生长明显减缓(P<0.01),生存期延长,体重增加,在肿瘤组织中可检测到肿瘤特异性凋亡基因mRNA的表达。结论:肿瘤特异性凋亡基因在体内具有明显的抗肿瘤作用,对开展肿瘤的基因治疗有一定的临床意义。

肿瘤特异性凋亡基因对人黑素瘤细胞凋亡诱导作用的机制研究

为研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptin gene)在诱导人黑素瘤细胞A375发生凋亡时,c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在细胞发生凋亡中的作用,用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑素瘤细胞A375;采用流式细胞仪、蛋白印迹法(western blot)、锥虫蓝染色法及RT-PCR等方法研究其在不同时间对人黑素瘤细胞A375诱导凋亡的作用。结果表明,apoptin基因瞬间转染的人黑素瘤细胞A375可出现明显的细胞凋亡;而且凋亡细胞的数量与apoptin的转染时间有关;凋亡细胞内磷酸化型JNK蛋白随凋亡细胞数量的增加而增多,而非磷酸化型JNK蛋白表达无明显变化。结论:JNK信号通路的活化可能在apoptin诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥作用。

肿瘤特异性凋亡基因诱导A375细胞凋亡信号转导机制研究

为研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptin)在诱导人黑素瘤细胞A375凋亡中的信号转导机制,用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑素瘤细胞A375;采用流式细胞术检测A375细胞的凋亡;以比色法检测caspase-8和caspase-3的相对活性;Western印迹检测凋亡细胞中细胞色素C的表达量。结果表明,Apoptin基因瞬间转染的A375细胞凋亡率明显高于其他各组(P<0·01);caspase-3的活性升高,但caspase-8活性没有明显变化;细胞色素C释放量明显增多。结论:Apoptin基因可能通过促进线粒体释放细胞色素C激活caspase-3,进而诱导人黑素瘤细胞A375凋亡。

肿瘤特异性凋亡基因诱导人结肠癌细胞凋亡机制的探讨

目的:研究肿瘤特异性凋亡蛋白基因(apoptin)在诱导人结肠癌细胞凋亡过程中的信号转导机制。方法:用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人结肠癌细胞;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测人结肠癌细胞的凋亡;Westernblot检测Bcl-2/Bax蛋白表达,SPSS13.0统计软件进行数据分析。结果:Apoptin基因瞬间转染的结肠癌细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带;流式细胞术检测发现,实验组细胞凋亡率〔(40.45±0.76)%〕明显高于正常对照组〔(3.25±0.16)%〕和载体对照组〔(3.55±0.12)%〕(P<0.01);Bax的活性升高,但bcl-2蛋白含量无明显变化。结论:Apoptin基因可通过激活Bax诱导结肠癌细胞凋亡。

肿瘤特异性凋亡基因诱导人宫颈癌细胞凋亡作用

目的研究肿瘤特异性凋亡蛋白基因(apoptin)在诱导人宫颈癌细胞凋亡过程中信号转导机制。方法用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人宫颈癌细胞(hela);采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测hela细胞的凋亡;以比色法检测胱天蛋白酶-8(caspase-8)和胱天蛋白酶-3(caspase-3)的相对活性。结果 Apoptin基因瞬间转染的hela细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带;流式细胞术检测发现,实验组细胞凋亡率〔(40.45±0.76)%〕明显高于正常对照组〔(3.25±0.16)%〕和载体对照组〔(3.55±0.12)%〕(P<0.01);caspase-3的活性升高,但caspase-8活性无明显变化。结论 Apoptin基因可通过激活caspase-3诱导hela细胞凋亡。

Caspase-3在Apoptin基因诱导Hela细胞凋亡中的作用

目的:研究Caspase-3在Apoptin gene诱导Hela细胞凋亡中的作用。方法:用含有Apoptin基因的真核表达载体pcDNAA3瞬间转染体外培养的Hela细胞;Hela细胞瞬间转染后0、24、48、72和96h,分为正常的Hela细胞对照组,pcD-NA3.1质粒转染对照组和实验组。分别采用RT-PCR、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测Hela细胞的凋亡;以比色法检测Caspase-3的相对活性。结果:以转染后24、48和72hHela细胞的总RNA为模板,经RT-PCR均可扩增出Apoptin cDNA,正常Hela细胞和空载体转染细胞均为阴性表明Apoptin已在转染细胞中表达;Apoptin基因瞬间转染的Hela细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带,表明有凋亡发生;FCM检测发现,以Apoptin基因转染后48h,在DNA直方上的G1峰前,即出现1个明显的亚2倍体峰(亚G1峰,即凋亡峰),并随着转染时间延长而增强。细胞凋亡率与对照组相比较差异显著(P<0.05)。Hela细胞经pcDNAA3质粒转染后24h实验组Caspase-3的活性开始升高,72h达高峰,明显高于正常细胞对照组和pcDNA3.1对照组(P<0.01)。结论:Apoptin基因可通过激活Caspase-3诱导Hela细胞凋亡。

Apoptin基因通过激活caspase-3诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡

目的研究caspase-3在肿瘤特异性凋亡基因诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡中的作用。方法用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色瘤细胞A375;采用RT-PCR、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测A375细胞的凋亡;以比色法检测caspase-3的相对活性。结果Ap-optin基因瞬间转染的A375细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带;流式细胞术发现实验组细胞凋亡率明显高于其他各组(P<0.01);转染后24h实验组caspase-3的活性开始升高,72h达高峰,明显高于其他各组(P<0.01)。结论Apoptin基因可通过激活caspase-3诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡。

Apoptin基因诱导A375细胞凋亡信号转导机制

目的研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptin)在诱导人黑色素瘤细胞A 375凋亡中的信号转导机制。方法用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色素瘤细胞A 375;采用RT-PCR、DNA凝胶电泳、流式细胞仪分析检测A 375的细胞的凋亡;以比色法检测半胱天冬蛋白酶8(caspase-8)和caspase-3的相对活性。结果Apoptin基因瞬间传染的A 375细胞可出现典型的细胞凋亡所具有DNA梯状带;流式细胞术发现实验组细胞凋亡率明显高于其他各组(P<0.01);Cas-pase-3的活性升高,但caspase-8活性没有明显变化。结论Apoptin基因可通过激活caspase-3诱导人黑色素瘤细胞A 375凋亡。

氨基末端激酶信号通路在Apoptin基因诱导Hela细胞凋亡中的作用

目的:探讨肿瘤特异性凋亡基因(Apoptingene)在诱导Hela细胞凋亡时,c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在细胞发生凋亡中的作用。方法:用含有肿瘤特异性凋亡(Apoptin)基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的Hela;采用流式细胞仪、免疫印迹法(Westernblot)、苔盼蓝染色法及RT-PCR等方法研究其在不同时间条件下Hela细胞诱导凋亡的作用。结果:Apopin基因瞬间转染的Hela细胞可出现明显的细胞凋亡;而且凋亡细胞的数量与Apoptin的转染时间有关;凋亡细胞内磷酸化型JNK蛋白随凋亡细胞数量的增加而增多,而非磷酸化型JNK蛋白表达无明显变化。结论:Apoptin基因具有诱导Hela细胞凋亡的作用,JNK信号通路的激活可能在Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥作用。

鸡贫血病毒vp3基因融合表达载体的构建及表达

为构建鸡贫血病毒vp3基因(肿瘤特异性凋亡基因)的原核融合表达载体,并在大肠杆菌中进行表达,采用常规分子克隆技术,将vp3基因克隆入融合表达载体pGEX-4T-2中,氯化钙法转化大肠杆菌DH5α。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导、用SDS-PAGE检测表达产物。经限制性内切酶酶切和PCR扩增,表明vp3基因成功地克隆到原核表达载体上,分子量为380 bp;SDS-PAGE电泳显示,构建的表达载体表达出分子量(Mr)约为39 600的融合蛋白,与预期的结果相符。结论:采用上述方法可成功地构建vp3蛋白的融合表达载体,并在大肠杆菌中获得有效表达,对于vp3蛋白的大量制备、深入研究其诱导肿瘤细胞的性质具有实际意义。

细胞色素C在apoptin诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用

目的研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptin)在诱导Hela细胞凋亡中的信号转导机制。方法用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的Hela细胞;采用MTT法检测Hela细胞的凋亡;以比色法检测caspase-8和caspase-3的相对活性;Western blotting检测凋亡细胞中细胞色素C的表达量。结果 MTT法证明ap-optin基因瞬间转染的Hela细胞凋亡率明显高于其他各组(P<0.01);caspase-3的活性升高,但caspase-8活性没有明显变化;细胞色素C释放量明显增多。结论 Apoptin基因可能通过促进线粒体释放细胞色素C激活caspase-3,进而诱导Hela细胞凋亡。