肿瘤特异性抗原纳米乳剂的制备及抗肿瘤免疫效应

目的制备包裹基因工程MAGE1HSP70的纳米乳剂,研究其生物学特性及抗肿瘤免疫效应。方法采用界面聚合法,制备包裹MAGE1HSP70的纳米乳剂(NEMAGE1HSP70),于电镜下观察其形态并测量其粒径,凝胶层析法检测纳米乳剂包裹率、载药量、稳定性及体外释药特性。用NEMAGE1HSP70免疫小鼠,运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测了NEMAGE1HSP70激活机体细胞免疫反应的状况。结果成功地制备出粒径为(25±10)nm的纳米乳剂,包裹率为91%,载药量0091g·L-1,4℃放置6mon后性质稳定。体外释药特性显示有70%的蛋白释放在24h内完成。ELISPOT和LDH显示NEMAGE1HSP70可以激活机体免疫反应产生针对MAGE1的CTL,特异性杀伤表达MAGE1的肿瘤细胞。结论NEMAGE1HSP70具有良好的包裹率和载药量,性质稳定且具有缓释作用,可以有效激活机体免疫反应产生针对特异性抗原MAGE1的CTL,是一种很有希望的新型抗肿瘤疫苗。

肿瘤特异性抗原长循环纳米脂质体的制备及其抗肿瘤免疫效应

目的:制备包裹基因工程MAGE3/HSP70(简称M3H)融合蛋白的长循环纳米脂质体,研究其生物学特性及抗肿瘤免疫效应。方法:采用薄膜分散-超声法,制备包裹M3H的长循环纳米脂质体(简称NL M3H),观察其形态并测量其粒径,凝胶层析法检测纳米乳剂包裹率、载药量、稳定性及体外释药特性。用NL M3H免疫小鼠,运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测了NL M3H激活机体细胞免疫反应的状况。结果:成功地制备出平均粒径<100 nm的长循环纳米脂质体,包裹率为38%,载药量0.038 g/L,4℃放置6月后性质稳定。体外释药特性显示有74%的蛋白释放在24 h内完成。ELISPOT和细胞毒性杀伤实验显示NL M3H可以激活机体免疫反应产生针对MAGE3的CTL,特异性杀伤表达MAGE3的肿瘤细胞。结论:NL M3H具有良好的包裹率和载药量,性质稳定且具有缓释作用,可以有效激活机体免疫反应产生针对特异性抗原MAGE3的CTL,是一种很有希望的新型抗肿瘤疫苗。

肿瘤特异性抗原纳米脂质体的制备及特性鉴定

目的:制备包裹肿瘤特异性抗原MAGE3/HSP70-FITC的纳米脂质体,研究其特性及树突状细胞(DC)对其摄取的情况。方法:采用薄膜分散法,制备包裹MAGE3/HSP70-FITC的纳米脂质体(简称NEMH-FITC),观察其形态并测量其粒径,凝胶层析法检测纳米脂质体的包裹率和载药量,并检测其稳定性。将人外周血DC与NEMH-FITC共育后,用激光共聚焦显微镜观察DC摄取NEMH-FITC的情况。结果:成功地制备出平均粒径为95nm左右的纳米脂质体,其包裹率为37%,载药量为0.037g/L,于4℃放置6个月后性质稳定。激光共聚焦显微镜下观察到NEMH-FITC可被DC摄取。结论:纳米脂质体具有良好的包裹率和载药量,可有效地增强抗原递呈细胞对所载药物的摄取,可作为肿瘤抗原疫苗的新型载体。

卵巢癌组织及细胞株中肿瘤特异性抗原MAGE、GAGE、BAGE基因表达的研究

目的:观察卵巢上皮性癌组织及细胞株中肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE基因的表达,以探讨基因表达与诊断、治疗及预后的关系,评价基因产物作为卵巢癌标志物以及卵巢癌免疫治疗靶位的可行性。方法:采用RT-PCR分析10例正常卵巢2、0例卵巢良性肿瘤、47例卵巢上皮性癌组织及3种卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、COC1中MAGE-1、MAGE-3、GAGE-1/2及BAGE基因mRNA水平的表达。结果:正常卵巢组织中MAGE、GAGE、BAGE基因无表达,良性肿瘤中仅有MAGE-1基因表达,阳性率为15%(3/20)。卵巢癌组织MAGE-1、MAGE-3的表达率较高,分别为51.1%(25/47)、34%(16/47),GAGE-1/2及BAGE基因在卵巢癌组织中的表达率分别为25.5%(12/47)和14.9%(7/47)。卵巢癌转移灶仅有MAGE-1、BAGE基因表达,阳性表达率分别为28.6%(2/7)、14.3%(1/7)。浆液性囊腺癌MAGE-1、MAGE-3基因阳性表达率明显高于其它类型卵巢恶性肿瘤(P<0.05)。结论:肿瘤特异性抗原MAGE、GAGE、BAGE基因在卵巢癌中有较高表达,其表达与有无淋巴结转移无关,MAGE-1、MAGE-3基因的阳性表达与肿瘤分化程度及临床分期密切相关,伴有腹水的卵巢癌患者BAGE表达的阳性率较高。卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、COC1的表达谱不尽相同,但至少有一种基因表达,其可作为卵巢癌免疫治疗的特异性靶点。

肿瘤特异性抗原(MAGE)在肿瘤免疫治疗中的作用

目前,已经发现肿瘤特异性抗原Mage基因家族有55个成员,其中MageA、B和C三个亚家族在各种组织来源的恶性肿瘤中特异性表达,正常组织(睾丸除外)均不表达。所以,Mage抗原作为肿瘤的特异性标志,在肿瘤的检测和免疫治疗方面具有很大的应用潜力。本文介绍了Mage家族的基因定位,Mage蛋白的特性,Mage基因的作用。同时,总结了近年来Mage基因家族在临床方面的应用研究结果。

展示肿瘤特异性抗原表位的噬菌体在小鼠体内引起的细胞免疫变化

以含有肿瘤特异性抗原表位的杂合型噬菌体(TSPA-M-A1)作为抗原,免疫C57BL/6J小鼠,观察免疫4周后小鼠的细胞免疫变化.结果表明:抗原TSPA-M-A1在小鼠体内能够提高T淋巴细胞对ConA刺激的反应性,使NK细胞杀伤活性明显增高,产生了特异性T淋巴细胞(CTL)反应,引起了较强的迟发型超敏反应.这些结果为肿瘤的免疫治疗提供了实验依据.

肿瘤特异性抗原基因克隆技术的新进展

肿瘤特异性抗原的获得、鉴别一直是肿瘤免疫研究的热点之一 ,分子生物学技术的飞速发展 ,给这一领域带来了勃勃生机。本文综述了应用分子生物学技术分离肿瘤特异性基因 ,并用免疫学方法鉴定其抗原性 。

应用基因重组病毒表达产物筛选FBL3小鼠白血病肿瘤特异性抗原表位

肿瘤特异性抗原是肿瘤免疫研究的中心课题，众多的研究表明Ｔ细胞在肿瘤免疫中起重要作用，因而寻找Ｔ细胞所识别的肿瘤特异性表位并以此为瘤苗的靶抗原有重要的研究价值。以一系列重组Ｆ－ＭｕＬＶｇａｇ病毒载体，用已建立的ＦＢＬ３－ＣＴＬ克隆筛选，并通过Ｈ－２Ｉ类分子结合实验，精确地测得Ｆ－ＭｕＬＶｇａｇ中一个能被为ＦＢＬ３－ＣＴＬ克隆所识别的表位（ＣＣＬＣＬＴＶＦＬ，ｐ８５～９３）。并以此ｐ８５～９３合成肽免疫动物成功诱导出能识别亲本ＦＢＬ３肿瘤细胞。

3种肿瘤特异性抗原联合检测应用于胃癌的价值分析

目的探讨3种肿瘤特异性抗原联合检测应用于胃癌的价值。方法选择2016年1月‐2018年1月该院收治的42例胃癌患者作为胃癌组,选择同期该院收治的42例良性胃部疾病患者作为良性胃病组,选择同期于该院进行体验且无胃部疾病的42例健康受检者作为对照组。3组受检者均进行血清糖类抗原199(CA199)、癌胚抗原(CEA)与糖类抗原724(CA724)肿瘤特异性抗原联合检测。结果胃癌组CA199、CEA与CA724水平、单项阳性率与联合检测的阳性率显著高于良性胃病组与对照组(P <0.01)。良性胃病组CA199、CEA与CA724水平、单项阳性率与联合检测的阳性率高于对照组(P <0.05)。结论 3种肿瘤特异性抗原联合检测在胃癌中具有显著的应用效果,进一步保证患者的诊断质量。

5-杂氮脱氧胞嘧啶对卵巢癌细胞株增殖和肿瘤特异性抗原表达的影响

目的探讨5-杂氮脱氧胞嘧啶(DAC)对卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、COC1增殖和肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE表达的影响。方法将处于对数生长期的卵巢癌细胞系与5-杂氮脱氧胞嘧啶(DAC)共同培养,观察细胞生长指数并利用流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡情况,应用RT-PCR法检测卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、COC1在DAC作用前后肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE表达的变化。结果DAC能抑制卵巢癌细胞株的增殖,使大多数细胞阻滞在G0期,并使肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE阳性表达率提高。结论DAC可以提高卵巢癌细胞株中肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE的阳性表达率,扩大卵巢癌免疫治疗的应用范围。

肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE在子宫内膜癌组织中表达的研究

目的:研究MAGE、BAGE、GAGE基因在子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中的表达,并探讨其肿瘤特异性抗原作为子宫内膜癌免疫治疗特异性靶位的可能性。方法:采用逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)技术,检测35例子宫内膜癌组织和15例正常子宫内膜组织中MAGE-1、MAGE-3、BAGE和GAGE1-2基因的表达情况,以-βactin作内参照。结果:35例子宫内膜癌组织中,MAGE-1、MAGE-3、BAGE、GAGE1-2表达阳性率分别为46%(16/35)、49%(17/35)、20%(7/35)和26%(9/35),有77%的标本至少表达其中一种基因。15例正常子宫内膜组织中MAGE-1、MAGE-3、BAGE、GAGE1-2基因表达均为阴性。结论:肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE基因在子宫内膜癌中有较高的表达,MAGE-1、MAGE-3、BAGE基因的表达与子宫内膜癌的病理分期及分级无相关性,GAGE1-2与子宫内膜癌的分期无关,与分级有关。其可作为子宫内膜癌患者免疫治疗的特异性靶点。

树突状细胞介导的肿瘤相关抗原特异性T淋巴细胞治疗多发性骨髓瘤和非霍奇金淋巴瘤的临床研究

目的:初步探究靶向肿瘤相关抗原特异性T淋巴细胞(TAA-CTL)治疗多发性骨髓瘤(MM)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)的安全性和有效性。方法:采集患者自身外周血单个核细胞(PBMNC),使用含有多种肿瘤相关抗原(TAA)(NY-ESO-1,MAGE-A3,MAGE-A4,WT1,Survivin,PRAME,LMP2A和LMP1)的混合多肽,负载树突状细胞(DC),刺激共培养细胞毒性T细胞(CTL),测定细胞产物表型,并对7例回输后的患者进行病情评估。同时,利用IFN-γELISpot试验检测输注前、后患者外周血中TAA-CTL含量的变化。结果:平均82.98%的TAA-CTL产物为CD3^+T细胞,包括42.09%的CD4^+T细胞和25.32%的CD8^+T细胞,其中70%表达效应记忆标记(CD45RO^+CD62L^-CCR7^-)。每例患者接受1-4次TAA-CTL回输,均无明显不良反应;5例患者的临床症状、实验室检查或影像学检查提示一定的疗效;细胞治疗后,患者外周血斑点形成细胞(SFC)数高峰期常出现在输注后2-3周左右。结论:TAA-CTL初步显示了其对MM和NHL患者的安全性和有效性,但还需更大样本量以探讨其临床应用价值。

肿瘤的主动特异性免疫治疗研究进展

肿瘤特异性抗原的发现和基本确认,机体对肿瘤免疫耐受的原因及克服途径,细胞因子相互作用及其调节机体免疫功能的深入认识,以及分子生物学技术的发展及应用,使肿瘤的主动特异性免疫治疗有了迅猛的发展,并日益接近临床现实.

肿瘤特异性细胞毒T细胞对B16细胞的杀伤作用

目的研究肿瘤特异性细胞毒Ｔ细胞对其靶细胞的杀伤作用。方法研究采用丝裂霉素致半数死亡的黑色素瘤传代细胞株Ｂ１６为肿瘤特异性抗原，与Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠脾淋巴细胞在ｒＩＬ－２的共同作用下。结果诱导出的Ｂ１６细胞特异杀伤Ｔ细胞，对Ｂ１６细胞在形态上和功能上有明显的杀伤作用。

岩藻糖基转移酶介导的标记平台可标记和捕获抗原特异性T细胞

在过去的十年中,获得过诺贝尔奖的免疫检查点抑制剂和基于过继细胞转移(adoptive cell transfer,ACT)疗法的发展使癌症治疗发生了革命性的变化[1]。这些方法的关键都在于肿瘤特异性T细胞——要么激活肿瘤特异性T细胞,要么从体外提供大量肿瘤特异性T细胞,对癌症发起攻击。然而,这些成功仅限于相对较小数量的患者和癌症类型[2]。检查点阻断免疫治疗后成功的抗肿瘤免疫反应依赖于肿瘤特异性抗原(tumor-specific antigen,TSA)反应性T细胞的重新激活和克隆扩增。患者对免疫治疗反应的不可预测性部分归因于肿瘤免疫微环境的异质性和单个肿瘤中肿瘤免疫淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocytes,TILs)的表型特征[3]。

纳米肿瘤疫苗的制备工艺的优化及特性鉴定

目的:制备无明显毒性、高效的恶性肿瘤基因工程纳米疫苗。方法:纯化融合蛋白MH,薄膜分散-超声法制备包裹MH的纳米脂质体肿瘤疫苗NL(MH),并评价其粒径、包裹率及稳定性;观察NL(MH)免疫组小鼠的急性毒性反应,及重要脏器的病理学改变。结果:成功制备出粒径为(80±250)nm的纳米脂质体,其药物包裹率为30%,于4℃放置6个月后或3000r/min10min离心后无分层,证明其稳定性良好;与PBS对照组相比,免疫组小鼠未见明显毒性反应。结论:该恶性肿瘤基因工程纳米疫苗具有良好的理化性质,未见毒性反应。

肿瘤抗原MAGE-A4在乳腺癌组织和细胞系中的表达及其作用

目的检测正常乳腺组织及乳腺癌组织中MAGE-A4(melanoma antigen-A4)mRNA的表达,探讨其与乳腺癌临床参数、生物学行为的关系以及对乳腺癌细胞增殖的影响。方法用RT-PCR方法检测77例正常乳腺组织及乳腺癌组织中MAGE-A4 mRNA的表达状况,用χ2检验分析其表达与乳腺癌临床参数及生物学行为的关系;用集落形成实验研究MAGE-A4对乳腺癌细胞增殖的影响。结果77例正常乳腺组织中没有检测到MAGE-A4 mRNA的表达;77例乳腺癌组织有33例MAGE-A4 mR-NA阳性表达,阳性率为42.9%。60(含60岁)岁以上乳腺癌患者MAGE-A4 mRNA阳性表达率明显高于60岁以下患者(P<0.05);但MAGE-A4 mRNA表达与乳腺肿瘤的大小、临床分期、病理类型、组织学分级、淋巴结转移、有无瘤栓、ER/PR及HER-2状态之间无明显相关性(P>0.05)。乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231均不表达MAGE-A4 mRNA,而乳腺癌细胞系MDA-MB-436中MAGE-A4 mRNA呈高表达。转染MAGE-A4基因可以抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞克隆的形成(P<0.05)。结论MAGE-A4在正常乳腺组织不表达,在乳腺癌组织中表达率为42.9%,提示MAGE-A4是一种肿瘤特异性抗原。该基因的表达与乳腺癌患者的年龄有关,与其他临床参数及生物学行为无明显相关性。在MAGE-A4阴性表达的乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中转染MAGE-A4基因可抑制该细胞的克隆形成。

重组减毒单核细胞增多性李斯特菌作为疫苗载体在抗肿瘤中的研究进展

将细菌疫苗用于肿瘤的治疗和预防已取得多方面的进展,单核细胞增多性李斯特菌(LM)能在专职吞噬细胞和非专职吞噬细胞内生存繁殖,可同时引起机体的细胞免疫和体液免疫。将外源性肿瘤特异性抗原导入减毒LM,可以显著诱导抗肿瘤的细胞免疫应答,是非常有效的疫苗载体。文章主要从具有胞内茵特殊优势的单核细胞增多性李斯特菌的生物学特性、做为抗肿瘤疫苗载体的优点等方面的研究进展进行了阐述。