肿瘤特异性CTLs的制备及其对乳腺癌骨髓微转移的治疗效果

目的：制备乳腺癌患者自体肿瘤特异性细胞毒T淋巴细胞（auto-tumor specificcytotoxicity T lymphocytes，CTLs），观察其对乳腺癌患者骨髓微转移的治疗作用。方法：以CK18、CK19为标志物、应用流式细胞术检测河北医科大学第四医院外一科2007年3-12月间治疗的82例原发性乳腺癌（Ⅰ～Ⅲ期）术前患者（参加本实验的患者全部知情同意）骨髓微转移状况，将23例术前骨髓微转移阳性的乳腺癌患者随机分为2组：肿瘤特异性CTLs治疗组17例，IL-2治疗对照组6例。术中取治疗组患者腋下淋巴结及外周血体外诱导培养肿瘤特异性CTLs，于术后10—14d回输，观察特异性CTLs对乳腺癌骨髓微转移的治疗效果。结果：本组82例乳腺癌患者中23例（28．05％）骨髓微转移阳性，骨髓微转移的阳性率随临床分期、组织学分级的增加而增高，随ER、PR蛋白表达增强而降低。自乳腺癌患者外周血中成功分离、诱导培养出树突状细胞（dendriticcells，DCs），并经自体肿瘤抗原致敏，与患者腋窝淋巴结来源的淋巴细胞共培养后诱导产生自体肿瘤特异性CTLs。治疗组17例患者经特异性CTLs治疗后，14例转为阴性，转阴率为82．35％；对照组6例中仅1例转为阴性，转阴率为16．67％；肿瘤特异性CTLs的治疗效果显著高于对照治疗（P=0．00028）。结论：成功制备的肿瘤特异性CTLs对乳腺癌骨髓微转移有较好的治疗效果。

体外培养系统中各细胞组分在IL-18诱导的肿瘤特异性CTL中的作用

应用rhIL 18在体外培养系统 (coculturesysteminvitro ,CCS )中诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞 (cytotoxicTlympho cyte ,CTL ) ,探索不同细胞在IL 18起动和促进肿瘤特异性免疫应答方面的作用。采用StemSepTM免疫磁性细胞分离法分离人外周血NK细胞、T细胞及树突细胞 (DC ) ,流式细胞仪分析细胞表型 ,12 5I UdR标记的细胞毒实验检测杀伤活性。结果表明 ,在肿瘤抗原存在的条件下 ,CCS中rhIL 18能够诱导并促进CTL介导的肿瘤特异性杀伤效应 ;并且 ,在rhIL 18诱导肿瘤特异性CTL的过程中 ,rhIL 18、NK细胞、DC及T细胞均起着十分重要的作用 ,缺少任一组份 ,均对诱导肿瘤特异性CTL有明显差异 (P <0 0 1)。提示在CCS中 ,rhIL 18诱导的NK细胞快速杀伤效应及DC的抗原提呈作用 ,在肿瘤特异性CTL产生过程中 ,均起着决定性的作用。

EBV-LMP2多肽所激活的特异性CTL对鼻咽癌细胞杀伤活性的研究

[目的]研究EB病毒编码的LMP2多肽片段所激活的肿瘤特异性CTL对鼻咽癌细胞的杀伤作用,探讨利用LMP2多肽对鼻咽癌进行免疫治疗。[方法]通过细胞免疫方法鉴定鼻咽癌细胞(CNE2)中的LMP2蛋白是否表达;外周血分离树突状细胞(DC)体外培养,以LMP2多肽片段负载DC激活产生特异性CTL;通过流式细胞仪、MTT法检测特异性CTL对CNE2细胞杀伤活性。[结果]在CNE2中表达LMP2蛋白,LMP2多肽所激活的肿瘤特异性CTL对鼻咽癌细胞具有杀伤活性。[结论]LMP2多肽片段所激活的肿瘤特异性CTL在体外对鼻咽癌细胞具有杀伤作用。

人转移乳腺癌肿瘤相关淋巴细胞的肿瘤特异性及HLA—A2限制性杀伤作用

肿瘤特异性细胞毒T细胞(CTL)免疫应答在黑色素瘤、肾癌和卵巢癌中已被证实。乳腺癌中肿瘤特异性CTL的存在仍有争论。作者研究了六例组织学上证实为乳腺癌转移胸膜瘤胸膜渗出液中肿瘤相关淋巴细胞(TAL)有肿瘤特异性及HLA—A2限制性杀伤作用,4例淋巴细胞培养为HLA—A2^+,2例HLA—A2^-。从胸水中分离淋巴细胞和自体瘤细胞,

热休克肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞瘤苗对原位接种结肠肿瘤的免疫预防作用

目的:研究热休克肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞的体内抗肿瘤作用以及对原位接种结肠肿瘤小鼠的免疫保护作用. 方法:肿瘤细胞CT-26经热休克处理后制备冻融抗原,体外负载树突状细胞,免疫同源小鼠(热休克组).以IFN-γELISPOT实验、LDH释放实验检测小鼠体内肿瘤特异性T细胞免疫反应,以原位接种结肠肿瘤的体积以及荷瘤小鼠的生存时间来评价该树突状细胞瘤苗对结肠原位接种CT-26小鼠的免疫保护作用,并与非热休克肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞的免疫效果(非热休克组)作一比较. 结果:热休克处理肿瘤细胞可提高肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞表面MHC-Ⅱ类分子(66.3% vs 59.1%)、共刺激分子CD86的表达(39.4% vs 36.7%);热休克组小鼠脾淋巴细胞中肿瘤特异性CTL数量高于非热休克组(P=0.001),相同效靶比下前者肿瘤特异性细胞毒活性强于后者:热体克组与非热休克组小鼠原位接种结肠肿瘤14 d后的肿瘤体积均明显小于单纯DC免疫组(P=0,000),但HSCT-26DC免疫组与CT-26 DC免疫组间差异无显著性(P=0.480).单纯DC免疫组50% (3/6)可见腹膜转移,CT-26 DC免疫组以及HSCT- 26DC免疫组均未见腹腔转移;热休克组小鼠荷瘤生存时间显著长于非热休克组(P=0.0384). 结论:热休克处理肿瘤细胞可以提高肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞的体内抗肿瘤作用,热休克肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞瘤苗对原位接种结肠肿瘤小鼠具有良好的免疫保护作用.

树突状细胞诱导的半相合CTL灭活后对小鼠移植肺癌的抑制作用

目的:探讨60Co灭活的树突状细胞(dendritic cell,DC)诱导的MHC半相合细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicity T lymphocyte,CTL)回输的抗小鼠移植肺癌作用。方法:体外培养CB6F1小鼠来源的DC,流式细胞术检测DC表型,用CB6F1-DC诱导针对C57BL/6小鼠来源的转移性肺癌细胞(Lewis lung cancer,LLC)的细胞毒性T细胞(cytotoxicity T lymphocyte,CTL),经60CO灭活的CTL回输给荷LLC瘤C57BL/6小鼠。细胞毒实验检测CTL细胞的抗肺癌效应,病理检测荷瘤小鼠肝、脾、小肠、皮肤变化,观察移植物抗宿主病(graft-versus-host-disease,GVHD)的发生及肺部肿瘤转移情况,观察荷瘤小鼠的存活时间。结果:流式细胞检测证实培养出成熟DC。DC诱导的CTL灭活后回输治疗LLC肺转移瘤小鼠后,小鼠肺质量显著降低[(0.27±0.06)vs(0.52±0.07)g,P<0.05],平均生存期显著延长[(78.10±16.50)vs(49.30±6.45)d,P<0.05]。荷瘤小鼠脾淋巴细胞对LLC细胞的杀伤活性随着效靶比的增加逐渐增强,最大杀伤率可达(32.7±1.64)%(效靶比100∶1)。病理检测结果显示,治疗组荷瘤小鼠未见明显GVHD。结论:灭活的半相合CTL回输可以诱导机体抗肿瘤反应,降低小鼠移植肺癌转移,未出现明显的GVHD。

树突细胞介导的独特型瘤苗的体外抗骨髓瘤作用

目的研究树突细胞(DC)介导的独特型瘤苗诱导骨髓瘤抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的抗肿瘤免疫反应。方法从多发性骨髓瘤(MM)患者外周血中分离获取DC前体细胞,使用GM-CSF、IL-4与TNF-α诱导分化促成熟。加入MM患者的M蛋白F(ab′)2片段(Id),诱导MM肿瘤特异性CTL。光学显微镜下观察其培养过程中形态特征变化,电镜观察其超微结构,间接免疫荧光观察其表型特征,采用MTT法检测致敏DC促自体T淋巴细胞增殖的能力以及患者CTL对自体骨髓瘤细胞的特异性细胞毒杀伤作用。结果GM-CSF、IL-4和TNF-α配伍可有效地从MM患者外周血单核细胞中诱导出大量成熟的功能性DC。MM患者自体血清Id冲击致敏的成熟DC能够显著地提高T细胞的增殖能力,并且使幼稚T细胞活化成为肿瘤独特型CTL,各个剂量的CTLs均能够产生针对自体MM细胞的抑制性杀伤反应。结论在MM患者外周血中可获得典型的DC,使用负载了Id的DC疫苗能够诱导出有效的抗肿瘤免疫应答反应,以DC为基础的疫苗可能在MM免疫治疗中发挥重要的作用。

转染肿瘤mRNA的树突状细胞疫苗诱导抗肝癌免疫研究

目的 探讨转染原发性肝癌(HCC)mRNA的树突状细胞(DC)能否诱导抗肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。方法 采用HCC患者外周血单核细胞(PBMC)体外刺激分化为DC细胞;从人肝癌HepG 2细胞和3例HCC患者的肝癌组织中体外扩增mRNA。以mRNA转染DC细胞,并与PBMC混合培养诱导扩增CTL。流式细胞计数仪检测培养细胞中CD3 +、CD4+、CD8+细胞的比例。51Cr释放法测定CTL的杀瘤活性。结果 经扩增人肝癌HepG 2mRNA和2例AFP(+ )患者的AFP(+ )HCCmRNA诱导3周后,CD3 +、CD8+细胞占淋巴细胞总数由诱导前的2 7.8%、2 6.5 %、2 9.6%升高至89.3 %、73 .6%、86.8% ;而经扩增AFP(-)HCCmRNA诱导3周后,CD3 +、CD8+细胞占淋巴细胞总数由诱导前的2 5 .4%升高至5 3 .6%。转染HepG 2细胞和AFP(+ )的患者HCCmRNA的DC诱导的CTL对HepG 2细胞杀瘤活性明显高于AFP(-)的患者,其杀瘤特性由MHC I限制的CD8+T细胞所介导。结论 HCCmRNA体外转染DC能诱导肿瘤特异性CTL 。