肺癌组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白水平检测及其临床价值探讨

背景与目的:肺癌发病机制具有多样性,但一经确认,往往已错过最佳治疗时机,本文通过探讨肺癌组织和外周血中抑癌基因(p53)、蛋白基因产物(PGP9.5)、转录因子(SOX2)、肿瘤相关基因编码蛋白(GAGE7)、解旋酶(GBU4-5)和黑色素瘤抗原(MAGE A1)蛋白水平的相关性,同时分析其在肺癌诊疗中的应用价值。方法:回顾并分析2018年5月—2020年5月在复旦大学附属肿瘤医院确诊的100例肺癌患者的病历资料,临床TNM分期Ⅰ期25例,Ⅱ期45例,Ⅲa期30例;非小细胞肺癌80例,小细胞肺癌20例;取手术切除的肿瘤组织和癌旁组织,采用免疫组织化学染色法检测上述6种蛋白的水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)法检测其基因表达,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测外周血中6种蛋白的抗体阳性情况。结果:肿瘤组织中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平均明显高于癌旁组织(P<0.05);将其与肿瘤的临床病理学特征进行相关分析发现,肿瘤组织和外周血中的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平与肿瘤TNM分期和分化级别有关(P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤直径、病理学类型无关(P>0.05)。肿瘤组织中6种蛋白的表达水平与外周血清表达具有较好的一致性(P>0.05)。结论:肺癌肿瘤组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白表达阳性与肿瘤TNM分期及分化级别密切相关。

LMP7、TAP2基因多态性与云南汉族非小细胞肺癌的相关性

目的:探讨低相对分子量蛋白酶体7基因(LMP 7)及抗原处理相关转运体2基因(TAP 2)中的单核苷酸多态性(SNP)与云南汉族人群非小细胞肺癌的相关性。方法:选取云南汉族非小细胞肺癌患者467例作为病例组、同期健康正常人群488例作为对照组,采用Taq Man探针基因分型方法对TAP2基因的SNP位点rs241447及LMP7基因的SNP位点rs2071543进行基因分型,分析rs241447和rs2071543等位基因和基因型在病例组和对照组间的分布差异,分析这两个SNP位点在肺癌不同临床分期的中分布差异。结果:rs241447在对照组和病例组中基因型的分布频率比较,差异有统计学意义(P=0.015);在超显性遗传模式下,rs241447基因型C/C-T/T可能是云南汉族人群非小细胞肺癌的风险因素(OR=1.38,95%CI为1.07~1.78,P=0.014),rs2071543的等位基因和基因型在对照组和病例组中的分布频率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TAP2基因中的SNP位点rs241447可能与云南汉族人群非小细胞肺癌的易感性相关。

肿瘤转移相关基因MTA1与肿瘤关系的研究进展

转移是恶性肿瘤致死的主要原因之一,它是一系列有序事件的复杂演进过程,受着多种基因正负作用的调控。因此了解肿瘤转移所涉及的基因和基因产物是目前国内外一项重要的研究课题,并取得了一定进展。本文就目前已经成功分离出的肿瘤转移相关基因MTA1(metastasis-associated 1,MIA1)的结构与功能、MTA 1基因家族及其与肿瘤的关系等方面研究进展进行综述。

长链非编码RNA MicroRNA155宿主基因和微RNA-128-5p在慢性阻塞性肺疾病病人中的表达

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA) MicroRNA155宿主基因(MIR155HG)、微RNA(miR)-128-5p水平与慢性阻塞性肺疾病(COPD)病人的关系及临床意义。方法 选取2019年5月至2021年5月北京市第一中西医结合医院收治的COPD病人100例,其中急性加重期COPD病人为A组(n=52),稳定期COPD病人为B组(n=48),选取同期来该院体检且与病人一般资料匹配的健康人群为C组(n=50)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清LncRNA MIR155HG、miR-128-5p表达水平;Pearson法分析COPD病人血清LncRNA MIR155HG与miR-128-5p表达水平的相关性;受试者操作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA MIR155HG、miR-128-5p水平诊断急性加重期COPD病人的价值。结果 COPD加重期和稳定期病人血清中LncRNA MIR155HG(3.59±0.82、2.35±0.55)与miR-128-5p(0.33±0.11、0.51±0.12)的表达相较于健康人群(1.06±0.27、0.95±0.13)中升高,差异有统计学意义(F=230.26、356.75,P<0.05);COPD病人血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、降钙素原、超敏C反应蛋白(hsCPR)、白细胞水平均上升,第一秒用力呼吸容积(FEV1)%、FEV1/用力肺活量(FVC)水平均下调,差异有统计学意义(P<0.05);血清中LncRNA MIR155HG与TNF-α、降钙素原、hs-CPR、白细胞呈正相关,与FEV1%、FEV1/FVC呈负相关(P<0.05);miR-128-5p与TNF-α、降钙素原、hs-CRP、白细胞呈负相关,与FEV1%、FEV1/FVC呈正相关(P<0.05);COPD病人血清LncRNA MIR155HG和miR-128-5p表达呈明显负相关(r=-0.49,P<0.05);ROC结果显示,LncRNA MIR155HG、miR-128-5p二者联合诊断急性加重期COPD病人的曲线下面积(AUC)为0.98,95%CI:(0.93,1.00),显著高于LncRNA MIR155HG、miR-128-5p单独诊断。结论 LncRNA MIR155HG在COPD病人血清中明显高表达,miR-128-5p呈低表达,二者呈明显负相关,且与病情严重程度密切相关,二者联合检测对评估急性加重期COPD病人的临床价值高于单一指标,可作为诊断急性加重期COPD病人的潜在血清标志物。

LITAF、RAB7、LMNA和MTMR2基因在中国人腓骨肌萎缩症患者的突变分析

为了分析LITAF、RAB7、LMNA和MTMR2基因在中国人腓骨肌萎缩症(Charcot-Marie-Tooth disease,CMT)的突变特点,文章分别应用PCR结合DNA序列分析方法和PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)结合DNA序列分析方法对6个常染色体显性遗传家系先证者和27个散发病例进行LITAF和RAB7基因突变分析;应用PCR-SSCP结合DNA序列分析方法对14个常染色体遗传的CMT家系先证者和27个散发患者进行LMNA和MTMR2基因突变分析。结果发现:LITAF基因c.269G→A、c.274A→G序列变异和LMNA基因c.1243G→A、c.1910C→T序列变异,未发现RAB7和MTMR2基因的序列变异。其中LITAF基因c.269G→A、LMNA基因c.1243G→A和c.1910C→T为新发现的单核苷酸多态;LITAF基因c.274A→G为已知多态。说明LITAF、RAB7、LMNA和MTMR2基因突变在中国人CMT患者中罕见。

食管癌预后相关肿瘤标记物研究进展

食管癌是常见恶性肿瘤,预后差,随着分子生物学的发展,已发现多种肿瘤标记物与食管癌的发生、发展及预后密切相关。综述了食管癌预后相关肿瘤标记物的研究进展,并探讨了食管癌相关分子生物学特点。

食管鳞癌患者血清中lncRNA-TUSC7、lncRNA-UCA1表达与血管生成拟态的关系及意义

目的探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)患者血清长链非编码肿瘤抑制候选基因-7(lncRNA-TUSC7)、长链非编码尿路上皮癌相关基因1(lncRNA-UCA1)表达与血管生成拟态(VM)的关系及意义。方法回顾性分析2020年3月至2021年12月经该院确诊为ESCC的133例患者,按照是否形成VM将其分为有VM组76例及无VM组57例,实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测两组患者血清lncRNA-TUSC7、lncRNA-UCA1表达;分析lncRNA-TUSC7、lncRNA-UCA1表达与ESCC患者不同临床参数之间的关系;Spearman相关系数分析lncRNA-TUSC7、lncRNA-UCA1表达与VM生成之间的相关性;受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析联合lncRNA-TUSC7、lncRNA-UCA1检测对ESCC患者形成VM的预测效能。结果相比于无VM组,VM组患者lncRNA-TUSC7表达显著降低,而lncRNA-UCA1表达显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA-TUSC7与ESCC患者肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移情况及是否发生VM具有密切联系(均P<0.05);lncRNA-UCA1与ESCC患者肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移情况、浸润程度及是否发生VM具有密切联系(均P<0.05);Spearman相关系数显示,lncRNA-TUSC7与VM生成之间呈负相关(r=-0.782,P<0.001),而lncRNA-UCA1与VM生成之间呈正相关(r=0.766,P<0.001)。ROC曲线显示lncRNA-TUSC7、lncRNA-UCA1联合检测的曲线下面积显著高于单一检测(Z=2.428,P<0.05),灵敏度为89.40%,特异度为83.20%,对ESCC发生VM具有较高的诊断效能。结论通过定时监测ESCC患者lncRNA-TUSC7、lncRNA-UCA1表达能够对其是否合并VM做出有效评估,并对及时采取治疗措施预防奠定了可信的生物标志物基础,同时也为日后靶向治疗ESCC合并VM患者提供了可能的治疗靶点,具有较为深远的临床意义。

胃癌早期诊断相关血清肿瘤标志物的研究进展

早期诊断是降低胃癌患者不良预后的关键,使用血清肿瘤标志物检测胃癌更加方便、安全。胃癌相关血清肿瘤标志物包括DNA甲基化、非编码RNA、胃蛋白酶原、胃泌素、骨桥蛋白、乳腺癌转移抑制基因、胃癌相关抗原、糖类抗原72-4等。分析表明,DNA甲基化、非编码RNA在肿瘤诊断中的灵敏度及特异度仍较低,但在胃癌肿瘤细胞分化、侵袭、转移等具有一定的价值,且可改善胃癌预后及提供新的治疗靶点。胃蛋白酶原在胃癌早期筛查中灵敏度较低、特异度较高,而胃蛋白酶原联合胃泌素17有较高的灵敏度及特异度,联合检测对筛查早期胃癌意义重大。骨桥蛋白诊断胃癌的灵敏度低、特异度高,用于诊断胃癌有一定的参考价值。胃癌相关抗原诊断胃癌有较高的灵敏度及特异度。乳腺癌转移抑制基因在判断淋巴结转移具有一定的价值,但其灵敏度及特异度仍待进一步的研究。CEA、CA199、CA242及CA724诊断胃癌的灵敏度均偏低,但特异度均极高,四者联合检测具有较高的灵敏度及特异度,为胃癌早期诊治提供强有力的参考依据。

沉默lncRNA ST7-AS1通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭影响的实验研究

目的:探讨沉默长链非编码RNA(lncRNA)致癌性抑制基因7反义RNA1(ST7-AS1)通过Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:肝癌细胞系HCCLM3分成Control组、Vector组、ST7-AS1组、sh-NC组、sh-ST7-AS1组和sh-ST7-AS1+Wnt/β-catenin通路激动剂(SKL2001)组。结果:与Control组比较,ST7-AS1组HCCLM3细胞的吸光度(A570)值及N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vemintin)、Wnt1和β-catenin的表达升高,克隆数量和迁移、侵袭数目增多,上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)和GSK-3β的表达降低(P<0.05)。Wnt/β-catenin通路激动剂SKL2001可部分逆转沉默ST7-AS1对HCCLM3细胞增殖、迁移、侵袭的影响(P<0.05)。结论:沉默ST7-AS1可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。

纤维蛋白原相关蛋白1-淋巴细胞活化基因3与长链非编码RNA-T细胞免疫球蛋白黏蛋白3共调控增强CD8^(+)T细胞抑制肝细胞癌肿瘤生长

目的体外研究协同抑制纤维蛋白原相关蛋白1(FGL1)-淋巴细胞活化基因3(LAG-3)与长链非编码RNA(lncRNA)-T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim3)双免疫逃逸通路,联合增强T淋巴细胞活性,显著抑制HCC肿瘤细胞恶性增殖和肿瘤生长的效用及机制。方法构建敲除、稳定转染的5组人肝癌细胞株HepG2、HepG2-FGL1-KO、HepG2-FGL1-KO-Tim3(-)、HepG2-LAG-3-KO、HepG2-LAG-3-KO-Tim3(-),并以此构建5组细胞株移植瘤免疫系统人源化小鼠成瘤模型。通过质量细胞计数法测定淋巴细胞CD8+T亚群表达水平,并测定肿瘤生长大小体积变化。采用t和χ^(2)检验。结果实验期间,5组中位肿瘤生长速率分别为149、136、81、75、68 mm^(3)/d。5组中位肿瘤体积分别为1.18、0.91、0.37、0.45、0.29 g。与HepG2组比较HepG2-FGL1-KO组和HepG2-LAG-3-KO组动物瘤体积显著小于HepG2组(t=7.582,P<0.05),HepG2-FGL1-KO-Tim3(-)和HepG2-LAG-3-KO-Tim3(-)组动物肿瘤体积又显著小于单独敲除组(t=3.953,P<0.05)。同时,5组中位CD8+T细胞亚群表达量分别为2.1×107、2.9×107、3.8×107、7.7×107、13.2×107。HepG2-FGL1-KO-Tim3(-)和HepG2-LAG-3-KO-Tim3(-)组CD8+T细胞亚群表达活性显著高于FGL1和LAG-3单抑制组(t=2.988,P<0.05),而两个单抑制组的CD8+T细胞亚群表达活性又显著高于HepG2对照组(t=6.416,P<0.05)。结论单一免疫检查点的抑制对于遏制肿瘤逃避免疫杀伤存在局限性,多个免疫检查点因子信号通路联合抑制相较于单一通路的单控,将显著调控细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的激活和对肿瘤细胞的敏感性毒性表达。

乳腺癌中黏着斑激酶、抑癌基因PTEN编码蛋白的表达与生物学行为相关性分析

目的研究乳腺癌组织中黏着斑激酶(FAK)和PTEN蛋白的表达与肿瘤分化、浸润转移的关系,揭示细胞信号转导系统与乳腺癌发生发展的关系,同时为乳腺癌的基因治疗提供依据。方法应用免疫组织化学SP法检测92例乳腺癌组织和30例乳腺良性病变组织中FAK、PTEN的表达情况及其与临床病理参数的关系。结果(1)在92例乳腺癌中FAK和PTEN的阳性表达率分别为69.6%和51.1%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);(2)FAK表达与乳腺癌肿瘤大小、腋窝淋巴结转移、临床分期呈正相关(P<0.01),PTEN表达与乳腺癌组织学分级、腋窝淋巴结转移、临床分期呈负相关(P<0.05);(3)乳腺癌组织FAK表达与PTEN表达呈负相关(P<0.01)。结论乳腺癌FAK的高表达和PTEN的缺失表达与肿瘤发生发展、浸润转移密切相关;检测这些指标,有助于判断乳腺癌的恶性程度及生物学行为。

MCF-7/BCRP细胞系的建立及其生物学特征

目的:建立表达乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的耐药细胞系MCF-7/BCRP。方法:提取MCF-7细胞的总RNA,设计BCRP基因上下游引物,用RT-PCR法克隆出BCRP基因全长并连接到真核表达载体pcDNA3.1穴-雪上,转染MCF-7细胞后以G418筛选细胞。采用米托蒽醌外排实验、细胞毒性实验、细胞群体倍增时间、免疫荧光法鉴定构建的耐药细胞系。结果:MCF-7/BCRP对米托蒽醌耐药指数增加至14.72;外排米托蒽醌的作用增强;细胞群体倍增时间较亲代细胞延长;MCF-7/BCRP细胞能表达一定量的BCRP。结论:MCF-7/BCRP细胞能够表达BCRP并具有BCRP的耐药表型。

microRNA-145在肿瘤中的作用

microRNA（miRNAs）是一类非编码蛋白质的单链小RNA，由内源基因编码，主要功能是负性调节靶基因的表达。目前发现microRNA多定位于肿瘤相关的脆性位点，与肿瘤的发生密切相关。miR-145是近年来新发现的一类具有肿瘤抑制作用的microR-NA，可以靶向多个肿瘤相关基因，参与肿瘤生长、转移侵袭和肿瘤血管生成。并且，miR-145可以调控细胞重新编程基因OCT4、SOX2、KLF4和C-MYC的表达，由于这些基因也具有癌基因的特性，因此miR-145在肿瘤干细胞中的作用也受到关注。本文就miR-145在肿瘤中的这些作用进行综述。

P-糖蛋白抑制剂的研究进展

多药耐药是由于一系列没有相关性且结构及功能不同的肿瘤化疗药物的频繁临床使用而产生的,它是临床上肿瘤化疗失败的主要原因之一[1-2]。多药耐药的产生机制很多,其中研究最为广泛的机制就是多药耐药基因1（MDR1）基因编码,依赖于三磷酸腺苷（ATP）供能,

lncRNA UCA1、VEGF、PKCα于肾上腺良恶性肿瘤中表达变化及与预后的关系

目的探讨长链非编码RNA尿路上皮相关基因(lncRNA UCA1)、血管生长内皮因子(VEGF)、蛋白激酶Cα(PKCα)在肾上腺良恶性肿瘤中表达变化及与预后的关系。方法选取2014年1月至2018年5月本院肾上腺恶性肿瘤患者74例为恶性组、肾上腺良性肿瘤患者31例为良性组。比较两组及恶性组不同病理特征患者lncRNA UCA1、VEGF、PKCa相对表达量,分析上述指标之间关系、与恶性组患者病理特征的相关性、对肾上腺良恶性肿瘤的鉴别价值及与预后的关系。结果恶性组lncRNA UCA1、VEGF、PKCa mRNA表达水平高于良性组,差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA UCA1与VEGF、PKCa mRNA均呈正相关性,VEGF m RNA与PKCa mRNA呈正相关性(P<0.05);lncRNA UCA1、VEGF、PKCαmRNA与恶性组肿瘤最大直径、T分期、包膜浸润、远处转移呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05);lncRNA UCA1、VEGF、PKCa mRNA联合鉴别肾上腺恶性肿瘤的曲线下面积(AUC)最大,为0.907;lncRNA UCA1、VEGF、PKCa mRNA高表达患者3年生存率低于低表达患者(P<0.05)。结论lncRNA UCA1、VEGF、PKCa在肾上腺恶性肿瘤中呈高表达,联合检测可为临床鉴别肾上腺肿瘤良恶性、评估肿瘤恶性程度、预测预后提供科学指导。

非肌层浸润性膀胱癌TURBT治疗患者血清UBC1和DJ-1表达水平及其对预后预测价值研究

目的研究非肌层浸润性膀胱癌(non-muscle invasive bladder cancer,NMIBC)患者血清长链非编码RNA尿路上皮癌相关基因1[(LncRNA)upregulated in bladder cancer 1,UBC1]、帕金森病相关蛋白-1(DJ-1)的表达情况,分析两者对NMIBC患者预后的影响。方法选择2018年2月~2019年2月于河南科技大学第一附属医院接受经尿道膀胱肿瘤电切(TURBT)治疗的120例NMIBC患者为研究对象(NMIBC组),以同期健康体检的60例健康人群为对照组。应用实时荧光定量PCR检测各组血清UBC1水平。应用酶联免疫吸附实验检测各组血清DJ-1水平。比较不同临床病理特征NMIBC患者血清UBC1和DJ-1表达差异。Kaplan-Meier生存曲线分析血清UBC1和DJ-1表达对NMIBC患者无进展生存预后的影响。单因素及多因素COX回归分析影响NMIBC患者无进展生存预后的因素。结果相比于对照组,NMIBC组血清UBC1(4.19±0.48 vs 1.27±0.29)和DJ-1(8.62±3.60 ng/ml vs 4.31±1.07 ng/ml)水平升高,差异具有统计学意义(t=43.300,12.117,均P<0.05)。肿瘤T1期、高级别NMIBC患者血清中UBC1(5.21±0.56,5.11±0.53),DJ-1(11.28±3.98 ng/ml,10.50±3.87 ng/ml)表达分别高于Ta/Tis期、低级别患者(3.79±0.43,3.64±0.44;7.34±3.04ng/ml,7.49±3.23 ng/ml),差异具有统计学意义(t=15.314,5.966;16.393,4.584,均P<0.05)。UBC1高表达组和低表达组患者的平均无进展生存时间分别为28.17±3.68个月和33.59±3.32个月。UBC1高表达组患者累积无进展生存时间低于UBC1低表达组患者,差异具有统计学意义(Log-Rank testχ^(2)=6.681,P<0.05)。DJ-1高表达组和低表达组平均无进展生存时间分别为27.34±3.29个月和34.27±3.54个月。DJ-1高表达组患者累积无进展生存时间低于DJ-1低表达组患者,差异具有统计学意义(Log-Rank testχ^(2)=11.262,P<0.05)。肿瘤分期T1期(HR=1.613,95%CI=1.223~2.126)、肿瘤分级高级别(HR=1.917,95%CI=1.314~2.799),UBC1高表达(HR=1.937,95%CI=1.229~2.745)和DJ-1高表达(HR=1.738,95%CI=1.246~2.426)是影响NMIBC患者无进展生存预后的独立危险因素。结论NMIBC患者血清UBC1和DJ-1表达升高,两者表达与肿瘤分期及肿瘤分级有关,是影响NMIBC患者无进展生存预后的独立因素。

5种单核苷酸多态性与厦门地区汉族人群类风湿关节炎易感性的关系

目的探讨5种单核苷酸多态性（SNP）与汉族人群类风湿关节炎（RA）易感性的关系。方法收集91例RA患者和100例健康人血液标本,利用基因测序法检测rs2230926、rs7574865、rs3761847、rs2228145和rs2234067等5种SNPs,同时用ELISA法检测RA患者的血清抗CCP。分为RA组和对照组进行病例对照研究。结果 （1）5种SNP在对照组和RA组中的分布均符合Hardy-Weinberg平衡（P〉0.05）。rs3761847和rs2228145的不同等位基因频率与RA的易感性显著相关[OR（95%CI）分别为1.61（1.07-2.41）、0.64（0.42-0.97）,P〈0.05],rs7574865、rs2234067及rs2230926与RA的易感性未见显著相关（P〉0.05）。（2）rs2228145与RA患者血清抗CCP反应性显著相关（P=0.014 9）,其C等位基因频率在两组中的差异有统计学意义（P〈0.05）;而rs2228145及rs3761847与RA患者血清RF反应性、rs3761847与RA患者血清抗CCP反应性均无显著相关（P〉0.05）。结论厦门地区汉族人rs3761847和rs2228145基因多态性可能与RA的易感性存在关联,而rs7574865、rs2234067及rs2230926则与RA的易感性可能无关。