肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因mRNA在人胰腺癌组织中表达的临床意义

目的:探讨人胰腺癌肿瘤相关钙信号传导蛋白2(tumo-associated calcium signal transducer-2,TROP-2)基因在胰腺癌组织中表达及其临床意义。方法:提取56例人胰腺癌及癌旁正常组织中总mRNA,采用实时荧光定量逆转录聚酶链反应(RT-PCR)法检测其中TROP-2 mRNA表达情况;并分析其表达与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分化程度和TNM分期相关性。结果:以2^(-ΔΔCt)≥2为阳性标准,TROP-2在胰腺癌组织中阳性表达率为75.0%(42/56),而癌旁正常组织未见TROP-2 mRNA表达,两者差异有统计学意义(P<0.001)。TROP 2 mRNA过表达与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期显著相关(均P<0.01),而与患者年龄和肿瘤分化程度无关(均P>0.05)。结论:TROP-2基因表达与胰腺癌进展密切相关,可能是反映胰腺癌侵袭、转移的重要指标之一。

肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因对乳腺癌细胞转移能力的影响

目的探讨TROP-2基因小干扰RNA（siRNA）对乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响。方法培养人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA—MB-468及ZR75-1细胞株，以荧光实时定量PCR方法检测TROP-2基因mRNA表达；筛选出TROP-2表达最高者。采用TROP-2基因小干扰RNA转染乳腺癌细胞，分别以荧光实时定量RT-PCR和免疫荧光方法观察TROP-2基因mRNA和蛋白水平，然后以四唑蓝（MTT）比色法检测细胞黏附性，以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力。结果7株乳腺癌细胞中，TROP-2均有不同程度的表达，以MCF-7细胞最高；以TROP-2siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后，癌细胞TROP-2基因mRNA和蛋白水平明显下降，且呈浓度依赖性；黏附试验结果显示，5、10、20nMsiRNA组黏附率分别为（52．9±2．5）％、（25．6±2．3）％、（12．8±2．2）％（P〈0．01）；Transwell试验结果显示，5、10和20nMsiRNA组穿过滤膜的细胞分别为（78±17）、（39±15）、（19±16），而对照组分别为（136±25）、（139±21）（P〈0．01）。结论TROP-2基因在乳腺癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用；以siRNA转染乳腺癌细胞，可抑制乳腺癌细胞黏附和侵袭能力。

肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因对人乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响

目的观察肿瘤相关钙信号传导蛋白-2（TROP-2）基因小干扰RNA（siRNA）对乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响。方法培养人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468及ZR75—1细胞株，以荧光实时定量聚合酶链反应（PCR）方法检测TROP-2基因mRNA表达；筛选出TROP-2表达最高者。采用TROP-2基因siRNA转染乳腺癌细胞，分别以荧光实时定量RT—PCR和免疫荧光方法观察TROP-2基因mRNA和蛋白水平，然后以噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞黏附性，以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力。结果人乳腺癌Bcap-37、LCCl、MCF-7、MDA-MB-231、MDA—MB435、MDA—MB468及ZR75-1细胞株TROP-2 mRNA分别是1．362±0．057、2．207±0．056、2．997±0．052、0．136±0．045、0．122±0．025、0．194±0．028和2．706±0．039，以MCF．7细胞最高；以TROP^siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后，癌细胞TROP-2基因mRNA和蛋白水平明显下降，且呈浓度依赖性；黏附实验结果显示，5、10、20nmol/L siRNA组黏附率分别为（52．9±2．5）％、（25．6±2．3）％、（12．8±2．2）％（P〈0．01）；Transwell实验结果显示，5、10和20nmoFLsiRNA组穿过滤膜的细胞分别为78±17、39±15、19±16，而对照组分别为136±25、139±21（P〈0．01）。结论TROP-2基因在乳腺癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用；以siRNA转染乳腺癌细胞，可抑制乳腺癌细胞黏附和侵袭能力。

结肠癌中肿瘤相关钙信号转导蛋白-2的表达及其临床意义

目的检测肿瘤相关钙信号转导蛋白-2(TROP-2)在结肠癌组织及结肠癌细胞中的表达水平,探讨TROP-2与结肠癌进展的相关性及其对临床预后的意义。方法应用免疫组织化学法检测TROP-2蛋白在结肠癌组织、癌旁组织及正常结肠组织中的表达情况,回顾患者的临床资料,分析TROP-2蛋白表达水平与不同临床病理特征的相关性及其对临床预后的意义。应用蛋白质印迹法检测TROP-2蛋白在新鲜结肠癌组织标本中的表达情况,并应用免疫荧光法观察TROP-2蛋白的定位。结果TROP-2蛋白主要定位于肿瘤细胞的细胞膜,在细胞质、细胞核则少量表达或不表达。结肠癌组织中TROP-2蛋白表达水平高于癌旁组织和正常组织,差异有统计学意义(P<0.01);结肠癌组织中TROP-2蛋白表达与患者的性别、年龄、肿瘤分化程度无相关性(P>0.05),而与淋巴结转移情况及Dukes分期有明显相关性(P<0.05);伴淋巴结转移的患者结肠癌组织TROP-2蛋白阳性率高于无淋巴结转移者,差异有统计学意义(P<0.05);随着肿瘤Dukes分期的进展,结肠癌组织中TROP-2表达水平逐渐升高;TROP-2蛋白的高表达是结肠癌患者不良预后的独立因子。结论结肠癌中存在TROP-2的高表达,其在结肠癌侵袭和转移过程中可能发挥着重要作用。

核转录因子-κB、细胞外信号调节激酶1/2、转移相关蛋白-3在乳腺肿瘤组织中的表达研究

目的分析核转录因子-κB(NF-κB)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、转移相关蛋白-3(MTA-3)在乳腺肿瘤中的表达。方法选取我院2017年8月至2019年3月收治的60例乳腺肿瘤患者作为观察组,另取30例同期乳腺增生患者作为对照组。比较两组患者组织样本NF-κB、ERK1/2和MTA-3水平。结果观察组NF-κB、ERK1/2阳性检出率高于对照组;MTA-3阳性检出率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);临床分期越高者、肿瘤直径越大者,NF-κB、ERK1/2阳性检出率越高,MTA-3阳性检出率低越低,差异有统计学意义(P<0.05)。Luminal A型、Luminal B型及HER2阳性分子分型患者NF-κB、ERK1/2阳性检出率高于三阴型,MTA-3阳性检出率低于三阴型,差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移患者NF-κB、ERK1/2阳性检出率高于对照组,MTA-3阳性检出率低于无转移患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在乳腺肿瘤组织中存在NF-κB和ERK1/2的高阳性表达和MTA-3和低表达,并且与乳腺增生患者病理组织表达有明显差异,结合三者指标分析对鉴别诊断乳腺肿瘤、改善乳腺肿瘤干预时机有重要意义。

细胞因子信号传导抑制蛋白1对肿瘤坏死因子-α诱导的肾小管细胞凋亡的影响

目的观察细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HKC),应用脂质体2000分别转染pCR3.1/SOCS-1表达质粒和pCR3.1空质粒载体,G418筛选阳性克隆。给予TNF-α(20μg.L-1)进行刺激。采用Western blot检测SOCS-1、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、Caspase-3、Janus酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导和转录活化因子1(STAT1)、磷酸化JAK2(p-JAK2)和磷酸化STAT1(p-STAT1)的表达;流式细胞术和原位缺口末端标记法(TUNEL)观察HKC细胞凋亡情况。结果与对照组相比,TNF-α组肾小管上皮细胞凋亡明显增加,凋亡相关Cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,Bax/Bcl-2蛋白比率升高;SOCS-1过表达能够抑制TNF-α刺激引起的HKC细胞的凋亡,下调JAK2和STAT1的磷酸化水平及Cleavedcaspase-3蛋白的表达,降低Bax/Bcl-2蛋白比率。结论 SOCS-1过表达抑制TNF-α诱导的肾小管上皮细胞凋亡可能是通过抑制JAK/STAT信号通路活化实现的。

Nrf2-Keap1-ARE信号通路与肿瘤耐药相关性

肿瘤耐药是影响肿瘤化学治疗的主要问题。肿瘤细胞产生耐药的机制及如何逆转耐药是亟待解决的重要问题。已知肿瘤耐药机制包括:肿瘤细胞内药物泵出增多、体内非特异解毒过程加强、DNA损伤修复能力增强、细胞凋亡抑制等。但主导机制或者说关键基因还是困扰耐药研究的主要难题。新近研究发现,以NF-E2相关因子2(Nrf2)为主体的该信号通路可能与多种耐药机制相关联,从而解释多种肿瘤耐药的原因。简述Nrf2-Keap1-ARE信号通路的组成及其与肿瘤耐药的相关性研究。

瑞舒伐他汀钙强化治疗对非ST段抬高型急性冠状动脉综合征高危患者血清脂蛋白相关磷脂酶A2及炎性因子水平的影响

目的探讨瑞舒伐他汀钙强化治疗对非ST段抬高型急性冠状动脉综合征(NSTE-ACS)高危患者血清脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)及炎性因子水平的影响。方法选择2013年7月至2015年2月在黄冈市中心医院住院治疗的NSTE-ACS高危患者86例,根据治疗方法分为观察组和对照组,每组43例。对照组患者给予瑞舒伐他汀钙标准治疗(10 mg),观察组患者给予瑞舒伐他汀钙强化治疗(20 mg);分别于治疗前及治疗48 h后测定2组患者血清Lp-PLA2、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;治疗后随访3个月,记录不良反应发生情况。结果治疗前2组患者血清Lp-PLA2、CRP、TNF-α及IL-6水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后2组患者血清Lp-PLA2、CRP、TNF-α及IL-6水平均显著低于治疗前(P<0.05);治疗后观察组患者血清Lp-PLA2、CRP、TNF-α及IL-6水平均显著低于对照组(P<0.05)。治疗前及治疗后2组患者血清ALT、AST水平比较差异均无统计学意义(P>0.05),2组患者治疗后血清ALT、AST水平与治疗前比较差异均无统计学意义(P>0.05)。2组患者均未出现肌痛、横纹肌溶解、过敏等不良反应。结论瑞舒伐他汀钙强化治疗NSTE-ACS高危患者能够有效减轻机体炎症反应,稳定动脉粥样硬化斑块,且有较高的安全性。

肿瘤相关钙信号传感器2在结直肠癌组织的表达及其调控因子分析

目的探讨肿瘤相关钙信号传感器2在结直肠癌组织的表达变化及其上游微小RNA(miRNA,miR)对其表达水平的调控。方法选取2020年1月至2023年1月新乡医学院第一附属医院收治的58例结直肠癌临床标本和癌旁组织作为研究对象,采用双向电泳技术分析结直肠癌和癌旁组织差异表达的蛋白,选取肿瘤相关钙信号传感器2作为研究对象,采用蛋白质印迹法(Western blot)分析癌旁组织和结直肠癌组织肿瘤相关钙信号传感器2表达水平。免疫组织化学分析两组组织细胞增殖抗原(PCNA)的阳性率;相关性分析肿瘤相关钙信号传感器2与细胞增殖的关系。转录组学分析癌旁组织和结肠癌组织miRNA,筛选差异靶向肿瘤相关钙信号传感器2的miRNA,并采用双荧光素酶报告基因验证分析miRNA的靶向性。组间计量数据比较采用t检验。结果双向电泳筛选10个差异的蛋白质,本研究选择差异显著的蛋白肿瘤相关钙信号传感器2作为研究对象。癌旁组织中肿瘤相关钙信号传感器2蛋白表达水平(0.92±0.14)明显低于结直肠癌组织(1.62±0.20),差异有统计学意义(t=14.320,P<0.05)。PCNA表达阴性患者肿瘤相关钙信号传感器2蛋白表达水平(1.33±0.13)明显低于结直肠癌组织(1.69±0.16),差异有统计学意义(t=6.092,P<0.05)。癌旁组织和结直肠癌组织总计差异miRNA共1218个,其中上调表达732个,下调486个。发现5个与肿瘤相关钙信号传感器2存在互补的miRNA,分别为miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p。癌旁组织中miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p表达水平(1.07±0.08、1.07±0.09、1.11±0.15、1.01±0.10、1.15±0.15)明显高于结直肠癌组织(0.28±0.05、0.30±0.07、0.45±0.08、0.54±0.09、0.69±0.12),差异有统计学意义(t=21.050、26.350、14.850、12.600、9.165,P<0.05)。miRNA对照和荧光素酶报告基因共转染细胞荧光素酶活性(0.96±0.07、0.94±0.03、0.92±0.06、0.91±0.08、0.95±0.05)明显高于miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p模拟物和荧光素酶报告基因共转染细胞荧光素酶活性(0.22±0.06、0.24±0.07、0.34±0.09、0.45±0.08、0.60±0.12),差异有统计学意义(t=23.541、23.102、18.208、14.231、12.514,P<0.05)。结论肿瘤相关钙信号传感器2在结直肠组织中表达显著上调,受miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p等miRNA调控。

TROP-2基因小干扰RNA转染对前列腺癌细胞黏附、迁移和侵袭的影响

目的观察肿瘤相关钙信号转导蛋白-2(TROP-2)基因小干扰RNA(siRNA)转染对前列腺癌细胞黏附、迁移和侵袭的影响。方法以TROP-2基因siRNA转染人前列腺癌PC-3细胞后,分别用实时荧光定量PCR和Western blot法检测细胞TROP-2 mRNA和蛋白,用MTT法检测PC-3细胞吸光度值(以此判断细胞黏附力),以Tr-answell小室实验观察细胞的迁移、侵袭情况。结果与空载对照组相比,TROP-2 siRNA组TROP-2 mRNA的表达明显下降(P均<0.01)并呈浓度和时间依赖性(P均<0.01);与空白对照组及空载对照组相比,TROP-2 siRNA组TROP-2蛋白的表达明显下降(P均<0.01)并呈浓度和时间依赖性(P均<0.01);与空白对照组相比,TROP-2 siR-NA组细胞黏附力下降(P<0.01)并呈浓度、时间依赖性(P均<0.05);与空白对照组及空载对照组相比,TROP-2siRNA组细胞迁移、侵袭数明显减少(P均<0.01)并呈浓度依赖性(P均<0.01)。结论 TROP-2基因siRNA转染可抑制前列腺癌PC-3细胞黏附、迁移和侵袭。

Trop-2表达下调对食管鳞癌EC9706细胞增殖和细胞迁移的影响

目的:研究肿瘤相关钙信号传导蛋白2(tumor-associated calcium signal transducer-2,Trop-2)表达下调对食管鳞癌EC9706细胞增殖和细胞迁移的影响,并探讨其可能的分子机制.方法:将Trop-2siRNA和对照siRNA转染食管鳞癌EC9706细胞,利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测转染Trop-2siRNA后食管鳞癌EC9706细胞中Trop-2mRNA和蛋白的表达.利用CCK-8试剂分析转染Trop-2siRNA后EC9706细胞的增殖变化,接着采用Boyden小室研究下调Trop-2对EC9706细胞迁移的影响,最后利用Western blotting技术分析与细胞迁移相关基因MMP-7表达的变化.结果:转染Trop-248h,Trop-2siRNA组中Trop-2mRNA和蛋白的表达显著低于未处理组和对照siRNA组(P<0.05).Trop-2表达下调能明显抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖(P<0.05).此外,Boyden小室结果表明,与未处理组(119.27±4.63)及对照siRNA组(112.81±5.01)相比,Trop-2siRNA组中EC9706细胞的穿膜数(65.29±4.33)明显降低.Western blotting结果表明,Trop-2siRNA能明显降低食管鳞癌EC9706细胞中MMP-7的表达.结论:Trop-2表达下调能抑制食管鳞癌细胞的增殖和迁移,其介导的迁移能力的降低可能与MMP-7表达的下调密切相关,操纵Trop-2有望成为食管鳞癌的分子治疗靶点.

幽门螺杆菌改变人肝细胞系HepG2蛋白质表达谱

目的研究H.pylori作用后肝细胞系HepG2蛋白质表达谱的改变,通过对差异蛋白质点的鉴定与分析,以探讨H.pylori对肝细胞的病理作用。方法采用体外肝细胞和H.pylori共培养,应用双向凝胶电泳分离H.pylori处理前后细胞总蛋白,筛选出差异表达的蛋白质点,并进行质谱分析鉴定。结果鉴定出7种表达上调的蛋白质点,包括整合素-β1、蛋白激酶C-α、LIM同源盒蛋白Lhx1、真核翻译起始因子2-β亚单位、PINCH蛋白、MAPK激酶3、Ras相关蛋白Rab-37等。这些蛋白质参与了基因表达调控、细胞免疫、细胞生长、信号传导等众多事件。结论H.pylori可能通过介导这些蛋白质的上调而发挥对HepG2细胞的病理作用。这种蛋白质组的差异分析有助于进一步研究H.pylori与人类肝胆疾病的关系。

萝卜硫素对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌保护作用及色氨酸-犬尿氨酸通路的影响

目的探究萝卜硫素(SFN)对心肌缺血再灌注(I/R)损伤大鼠色氨酸(TRP)-犬尿氨酸(KYN)信号通路及心肌损伤的影响。方法研究于2019年7月至2020年6月进行,将SD雄性大鼠随机分为假手术组(Control)、模型组(I/R)、SFN低(I/R+L SFN)、高(I/R+H SFN)剂量组。术后24 h,ELISA检测各组大鼠血清中炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;HE染色观察各组大鼠心肌组织病理变化;TUNEL检测各组大鼠缺血心肌细胞凋亡情况;HPLC检测各组大鼠心肌组织中TRP、KYN浓度;蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组大鼠心肌组织B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、活化胱天蛋白酶3(cleaved-capase3)、吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)蛋白表达情况。结果与Control组相比,I/R大鼠心肌细胞破碎、坏死,细胞排列不规则,心肌纤维断裂,伴有炎性细胞浸润,血清中炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量、心肌细胞凋亡指数[(32.85±3.13)比(1.07±0.08)]、心肌组织TRP[(783.75±30.32)pmol/L比(402.23±23.55)pmol/L]、KYN浓度[(567.54±28.18)pmol/L比(215.31±20.03)pmol/L]、KYN/TRP比值、cleaved-capase3、Bax、IDO蛋白水平显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05);与I/R相比,I/R+L SFN、I/R+H SFN剂量组心肌细胞上述病理症状明显减轻,大鼠血清中炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量、心肌细胞凋亡指数、心肌组织TRP、KYN浓度、KYN/TRP比值、Bax、cleaved-capase3、IDO蛋白水平依次降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论SFN可减少心肌细胞凋亡,缓解机体炎症反应,对心肌损伤有保护作用可能与TRP-KYN信号通路有关。

CDX-2和LI-cadherin蛋白在胃肿瘤及良性病变中的表达与意义

目的通过研究胃肿瘤及良性病变中尾相关同源异型盒转录因子-2(caudal type homeobox tran-scription factor-2,CDX-2)与肝肠钙黏蛋白(LI-cadherin)的表达,探讨两者在胃癌发生、发展过程中的可能作用。方法采用免疫组织化学方法分别检测28例正常胃黏膜、30例慢性浅表性胃炎、42例慢性萎缩性胃炎、58例肠化生胃黏膜、46例胃腺癌、30例癌旁组织以及10例胃间质瘤组织中CDX-2和LI-cadherin蛋白的表达,并结合临床病理特征进行分析。结果①CDX-2与LI-cadherin蛋白在正常胃黏膜、慢性浅表性胃炎、癌旁组织以及胃间质瘤组织中均不表达;在肠化生组织中表达阳性率分别为91.4%(53/58)和82.8%(48/58);在胃腺癌组织中表达阳性率分别为80.4%(37/46)和65.2%(30/46),其中肠型胃腺癌中CDX-2和LI-cadherin蛋白表达阳性率(90.6%,29/32;78.1%,25/32)明显高于弥漫型胃腺癌(57.1%,8/14;35.7%,5/14),P<0.05。②CDX-2蛋白表达与Lauren分型(P=0.015)和肿瘤分化程度(P=0.007)有关,而LI-cadherin蛋白表达与Lauren分型(P=0.008)、淋巴结转移(P=0.007)及临床分期(P=0.013)有关。③在肠化生胃黏膜中,细胞核中CDX-2蛋白与细胞膜或细胞浆中LI-cadherin蛋白共同表达阳性率为83.0%(44/53),在胃癌组织中CDX-2与LI-cadherin蛋白共同表达阳性率为67.6%(25/37)。尽管两者表现出很强的伴随关系,但相关性分析却表明两者并无相关性(r=238,P=0.115)。结论 CDX-2和LI-cadherin蛋白的异常表达可能分别与肠化生及胃腺癌的发生和发展有关,两者是否具有协同作用还需进一步研究。

骨质疏松分子生物学研究专家共识

骨质疏松分子生物学研究在骨代谢分子信号通路、骨质疏松易感基因、骨质疏松相关蛋白、骨质疏松靶向治疗等方向取得了很大进展。核因子κB受体活化因子/核因子κB受体活化因子配体/骨保护素(RANK/RANKL/OPG)信号通路、核因子κB受体活化因子(NF-κB)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)信号通路、钙离子(Ca^(2+))信号通路、酪氨酸激酶、蛋白激酶B(Src、Akt)信号通路、蛋白激酶C(PKC)信号通路等骨代谢重要通路,维生素D受体(VDR)基因、低密度脂蛋白相关蛋白5(LRP5)基因、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因、雌激素受体(ER)基因等易感基因,载脂蛋白E(Apo E)、Klotho蛋白(Klotho)、骨形态发生蛋白(BMP)、骨涎蛋白(BSP)等相关蛋白,以直接或间接的方式参与调控骨代谢,作用重叠相互联系,互为结果,已在本专业领域达成共识。

基于“肝肾相关”理论从Ca2+-CaM/CaMKⅡ-CREB信号转导途径探析黑逍遥散防治阿尔茨海默病的可行性

阿尔茨海默病(AD)是一种起病隐匿的增龄性神经退化性疾病,随着社会老龄化发展趋势而迅猛增加,严重威胁着人民群众健康,如果缺乏有效防治措施,将给社会经济和医疗保障体系造成巨大冲击。研究发现细胞信号转导异常是许多疾病发生的关键环节,细胞信号转导理论被广泛应用于阐明中医脏象实质和中医药作用机制的研究。"肝肾相关"是"五脏相关"理论的核心板块之一,适用于复杂疾病发病机制的阐释,解释多证候的相关性,及指导临证处方用药。黑逍遥散作为本研究组基于肝肾相关理论防治AD的首选复方,可通过疏肝养血、健脾益肾,通脑络利神窍而发挥防治AD作用。本文基于"肝肾相关"理论,从中医学角度阐述了AD的发病机制,通过查阅文献并结合前期研究,提出了从Ca2+-钙/钙调蛋白依赖性蛋白(CaM)/钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)-环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)细胞信号转导途径防治AD的方法与思路。

TACSTD2调控食管鳞癌细胞对顺铂的敏感性

目的:观察干扰肿瘤关联钙信号转导因子2(tumor-associated calcium signal transducer 2,TACSTD2)表达对食管鳞癌细胞顺铂敏感性的影响及机制。方法:通过组织芯片检测食管鳞癌及癌旁组织中TACSTD2表达;选用人食管鳞癌细胞ECA 109、KYSE 30及其分别对应的顺铂(cisplatin,DDP)耐药株ECA 109/DDP、KYSE 30/DDP细胞,结合TACSTD2干扰技术,通过荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测TACSTD2 mRNA和蛋白表达;CCK8实验和流式细胞术检测顺铂半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)以及细胞凋亡变化;蛋白质印迹法分析4种细胞中TACSTD2、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance protein 1,MDR1)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)及p-MAPK蛋白表达。结果:食管鳞癌中TACSTD2表达强度高于癌旁组织(P <0. 01);食管鳞癌顺铂耐药株中TACSTD2表达水平高于对应的食管鳞癌细胞表达(P均<0. 01);干扰TACSTD2后可以显著下调4种细胞中TACSTD2表达及IC50值(P均<0. 01);结合1μg/m L顺铂处理,TACSTD2干扰后4种细胞凋亡率明显增加(P均<0. 01);靶向下调TACSTD2后可见4种细胞中MAPK信号通路的活化抑制及MDR1表达显著降低。结论:靶向干预TACSTD2可提高食管鳞癌的顺铂敏感性,其作用机制可能与MAPK信号活化以及MDR1表达抑制有关。

胃癌中TROP2的表达及意义

目的研究肿瘤相关钙信号传导蛋白2（TROP2）在胃癌组织中的表达，探讨TROP2在胃癌发生、发展所起的作用。方法应用半定量RT-PCR法和免疫组织化学法分别检测胃癌组织中的TROP2 mRNA及TROP2蛋白的表达。结果胃癌组织中的TROP2水平明显高于正常胃组织（P〈0．05）。结论TROP2在胃癌组织中呈高表达，可能与胃癌的发生、发展有关。

TNF-α在结肠癌细胞侵袭和迁移中的作用探讨

目的探讨肿瘤坏死因子(TNF)-α对肿瘤相关钙信号转导蛋白(TROP)-2表达的影响及其对细胞侵袭和迁移能力的影响。方法以0、10、20、30、50、100、200μg/L的TNF-α处理人结肠癌HCT-116细胞,采用噻唑蓝(MTT)实验检测细胞存活率。采用Western blot检测TROP-2的表达量。采用划痕实验和Transwell实验检测20μg/L TNF-α处理前后细胞侵袭和迁移能力。借助脂质体Lipofectamine^(TM)2000转染TROP-2 siRNA,实时荧光定量PCR和Western blot验证转染后TROP-2的mRNA和蛋白水平。划痕实验和Transwell实验再次检测TNF-α对转染TROP-2 siRNA细胞的侵袭和迁移能力的影响。结果 0、10、20、30、50μg/L的TNF-α处理24 h和48 h时细胞存活率差异无统计学意义。100、200μg/L与0μg/L比较,细胞存活率下降(P<0.05)。与TNF-α浓度为0μg/L比较,10、20、30、50μg/L时TROP-2的表达量均升高,20μg/L时TROP-2的表达量最高(P<0.05):而TNF-α浓度为100、200μg/L时TROP-2的表达量下降(P<0.05)。划痕实验和Transwell实验中,TNF-α组24 h时的细胞划痕愈合率和穿膜细胞数均较对照组增加(P<0.05)。转染TROP-2 siRNA后siRNA组中TROP-2的mRNA和蛋白水平均低于正常对照组和阴性对照组(P<0.05)。此外,siRNA组24 h时的细胞划痕愈合率和穿膜细胞数均较正常对照组下降(P<0.05)。结论低浓度炎症因子TNF-α可能通过上调TROP-2的表达来促进结肠癌HCT-116细胞的侵袭和迁移。