肿瘤睾丸抗原45在卵巢癌组织中的表达水平和血清免疫原性与预后的关系

目的评估肿瘤睾丸抗原45(CT45)在上皮性卵巢癌(EOC)组织中的表达水平和血清免疫原性与预后的关系。方法选取2018年11月至2020年1月在该院妇产科接受手术治疗的121例EOC患者(EOC组)和60例良性卵巢病变患者(对照组)作为研究对象,采集其组织和血清标本。采用实时荧光定量聚合酶链反应和免疫组织化学法检测CT45在EOC组织、正常卵巢组织中的表达水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清标本中抗CT45自身抗体水平,采用Western blot试验进一步证实ELISA的检测结果。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清抗CT45自身抗体对EOC的诊断价值。结果EOC组CT45A1 mRNA表达水平[1.80(1.10,3.65)]明显高于对照组[0.99(0.68,1.32)],差异有统计学意义(Z=11.883,P<0.001)。46.28%(56/121)的EOC组织均表现出CT45蛋白高表达(++/+++)。CT45蛋白高表达水平与高国际妇产科联盟分期和化疗反应均有关(P<0.05)。EOC组血清抗CT45自身抗体水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,当抗CT45自身抗体最佳截断值设置为中位数(0.37)时,39.67%(48/121)的EOC患者血清标本中可检测到抗CT45自身抗体,其鉴别EOC组和对照组的曲线下面积为0.705,灵敏度和特异度分别为72.51%和68.95%。在48份ELISA检测阳性血清样本中,有81.25%(39/48)的EOC组织CT45蛋白呈高表达。Western blot试验证实了ELISA的检测结果与EOC血清中CT45的免疫原性。组织CT45蛋白高表达(P=0.006)或血清抗CT45自身抗体阳性(P=0.029)患者3年累计总生存率明显更低。结论CT45在EOC组织中表达水平上调,并且在EOC患者中诱导体液免疫反应,表明CT45是EOC的潜在预后生物标志物和肿瘤免疫治疗的靶点。

肿瘤睾丸抗原CT45-5在DNA损伤应答中的作用

目的:用建立的CT45-5-siRNA研究肿瘤睾丸抗原CT45-5在DNA损伤应答中的作用。方法:通过靶向CT45-5基因小干扰RNA(siRNA)下调CT45-5的表达,用MTT比色法检测经喜树碱和依托泊苷处理后细胞对DNA损伤诱导剂的敏感性,用流式细胞技术检测电离辐射后细胞周期的变化。结果:在DNA损伤诱导剂处理后,在脆性组氨酸三联体(Fhit)高表达细胞中下调CT45-5的表达可以使细胞表现出更强的G2期阻滞及对DNA损伤诱导剂更耐受,而在Fhit缺失表达的细胞中却没有此现象。结论:CT45-5可能是以Fhit依赖的途径参与了DNA损伤应答。

肿瘤睾丸抗原CT45-5基因小干扰RNA表达载体的构建及干扰效果鉴定

目的:构建肿瘤睾丸抗原CT45家族中5号成员基因(CT45-5)的小干扰RNA(siRNA),并检测其对HeLa及HeLa/Fhit细胞内源性CT45-5基因及外源脆性组氨酸三联体(Fhit)基因表达的干扰效果。方法:根据CT45-5基因序列,通过生物信息学方法对靶向CT45-5基因的siRNA进行预测,从中筛选出2对合理的CT45-5-siRNA,将其克隆到siRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 Hygro中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆进行测序鉴定;将构建的CT45-5-siRNA重组载体转染人宫颈癌细胞HeLa及HeLa/Fhit细胞,Western印迹检测siRNA对HeLa及HeLa/Fhit细胞内源性CT45-5及外源Fhit基因表达的干扰效果。结果:构建了2个CT45-5-siRNA重组质粒,其中一条对CT45-5基因具有明显的干扰作用,并且Fhit基因表达也被抑制。结论:构建的CT45-5-siRNA为与CT45-5功能相关的基因研究奠定了基础。

肿瘤相关抗原CT45的HLA-A2/A3限制性CTL表位的预测

目的:预测肿瘤相关抗原CT45的HLA-A2/A3限制性CTL表位,为CTL表位肽的合成和活性筛选提供依据。方法:基于新近发现的CT45抗原的氨基酸序列,用NetCTL 1.2 Server人工神经网络法远程预测系统进行HLA-A2/A3限制性CTL表位预测打分,挑选出分值较高的作为候选表位。结果:共预测出了5个潜在的HLA-A2限制性CTL表位九肽,15个潜在的HLA-A3限制性CTL表位九肽,所有这些表位均为首次报道。结论:NetCTL 1.2 Server人工神经网络法能高效的预测CTL表位肽,基于新近发现的CT45抗原,我们通过该系统成功预测出了5个潜在的HLA-A2限制性CTL表位,15个潜在的HLA-A3限制性CTL表位,可以对其进行进一步的研究。

小剂量5-脱氧杂氮胞苷诱导HepG2肝癌细胞新生肿瘤-睾丸抗原CT10和SSX1表达及其意义

目的探讨小剂量5-脱氧杂氮胞苷(5-aza-CdR)诱导HepG2肝癌细胞肿瘤-睾丸抗原(nCTAs)的CT10和SSX1表达及其意义。方法采用RT-PCR方法检测HepG2、SMMC-7721、BEL-7402、MHCC97L和MHCC97M3肝癌细胞株MAGE1、MAGE3、CT10、CTp11、NE-ESO-1和SSX16种CTAs的mRNA表达,挑选不表达CT10和SSX1的HepG2细胞作为nCTAs表达的研究对象;用0、0.5、1.0、1.5μmol/L 5-aza-CdR处理HepG2细胞,不含5-aza-CdR为对照组,从低到高浓度分别为实验1、2、3组;分别采用RT-PCR和Western blot检测CT10和SSX1 mRNA和蛋白表达。结果5株肝癌细胞均存在不同的nCTAs表达,表达呈异质性改变,其中HepG2表达MAGE1、MAGE3、CTp11和NY-NSO-1,MHCC97L和MHCC97M3表达MAGE1、MAGE3、CT10、CTp11和SSX1,BEL-7402表达MAGE1、MAGE3和CTp11,而SMMC-7721只表达MAGE1、MAGE3。实验1、2、3组均能诱导新生CTA-CT10和SSX1表达,其中0.5μmol/L小剂量的实验1组也能诱导nCTAs的表达;实验3组诱导的nCTAs相对表达量显著高于实验1、2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不同的肝癌细胞表达不同的nCTAs,小剂量5-aza-CdR能诱导肝癌细胞株表达nCTAs。

肝细胞癌组织和外周血中肿瘤/睾丸抗原SSX-2和SSX-5的表达

目的:检测SSX家族中SSX-2和SSX-5mRNA在肝细胞癌(HCC)组织和外周血中的表达情况及其与临床指标之间的关系,评价其作为肝癌免疫治疗特异性靶位的可能性, 及作为肝癌辅助诊断和监测预后、复发指标的可能性. 方法:用一步法逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)方法对HCC患者26例的癌组织、相应癌旁组织和外周血及对照(肝硬化和正常肝组织)中SSX-2,SSX-5mRNA 的表达进行了检测,为验证结果的可靠性,随机选取每一种抗原RT-PCR呈阳性的产物1例进行DNA序列测定,并对检测结果与AFP,HBSAg,肿瘤直径, TNM分期等临床指标之间的相关性进行分析. 结果:26例HCC肝癌组织SSX-2和SSX-5基因表达阳性率分别为34.6%和46.2%,两种基因同时表达的有4例(15.4%),至少有一种基因表达的有17例(65.4%), 癌旁组织表达的阳性率皆为0%;在26例HCC患者外周血中,SSX-2mRNA的表达率为19.2%,在组织呈阳性的患者外周血中的表达率为55.6%;SSX-5mRNA的表达率为23.1%,在组织呈阳性的患者外周血中的表达率为50%;两种基因同时表达者为7.7%,至少有一种表达者为34.6%.对照组中12例肝硬化和10例非肿瘤肝组织及外周血均未检测到SSX-2和SSX-5的表达.二者均取1例DNA测序,结果表明RT—PCR产物为SSX-2 和SSX-5 cDNA.SSX-2和SSX-5的表达与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、AFP水平、HBV感染等无显著相关性(P>0.05).部分AFP正常(<20 ng/L)HCC患者外周血中存在SSX-2或/和SSX-5基因的表达. 结论:SSX-2和SSX-5基因在HCC中呈高频率、高特异表达,二者可同时在HCC中表达,可以作为肝癌免疫治疗特异性靶位.二者的表达与年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、血清AFP水平、肝炎病毒感染无显著相关性;SSX-2,SSX-5基因的表达可用于HCC的辅助诊断和作为监测复发和预后的指标.

胃癌中肿瘤/睾丸抗原的表达研究及NY-ESO-1蛋白的自身抗体检测

目的: 分析胃癌中11种CT抗原(cancer/testisantigen)基因的表达分布及NY ESO 1蛋白引发的自身体液免疫应答,为胃癌的特异性肿瘤疫苗治疗提供依据。方法: 利用RT-PCR方法,检测101例胃癌患者肿瘤标本和对应正常胃黏膜中11种CT抗原基因的表达。ELISA方法检测抗NY ESO 1抗体。利用NY ESO 1的单抗E978,应用免疫组化方法检测组织切片中NY ESO 1抗原物质。结果: 101例胃癌患者中, 74. 3%的患者至少表达1种检测的CT抗原基因。12例患者表达NY ESO 1mRNA, 5例可以检测到NY ESO 1抗原蛋白以及针对NY ESO 1抗原的体液免疫反应。结论: 胃癌中表达多种CT抗原基因,表达率较高的MAGE 3,SSX 4和NY ESO 1 /LAGE 1蛋白等可作为肿瘤疫苗的备选抗原,其中NY ESO 1蛋白的免疫原性得到验证。CT抗原的多价肿瘤疫苗在胃癌治疗中具有一定的可行性。

癌-睾丸抗原OIP5的研究进展

癌-睾丸抗原（cancer-testis antigen,CTA）是一类具有特异性表达模式的肿瘤相关抗原,自从VANDER BRUGGEN等[1]发现首个CTA（MAGE-A1）后,多种CTA相继被发现,目前已有200多个CTA在CTA数据库中注册（http：//www.cta.lncc.br/）。由于CTA能在多种肿瘤组织中表达,

癌-睾丸抗原MAGE-C1及其在肿瘤免疫方面的研究进展

癌-睾丸抗原家族(Cancer testis antigens,CTAs)是一类能在多种肿瘤组织中表达,而睾丸、胎盘和胎儿卵巢以外的正常组织几乎不表达的抗原。这一表达特性使CTAs成为肿瘤免疫治疗的理想靶抗原。MAGE-C1/CT7(melanoma antigen family C1)是CTAs家族中一个新的亚家族,近几年在肿瘤免疫领域研究较多。本文就MAGE-C1/CT7在肿瘤免疫方面的研究进展作一综述。

肿瘤-睾丸抗原CT45-5的表达纯化及多克隆抗体的制备

目的:原核表达、纯化肿瘤-睾丸抗原CT45-5基因,并制备多克隆抗体,以研究其在Fhit特异的信号通路中的作用。方法:设计出特异针对CT45-5的引物,通过RT-PCR扩增出CT45-5的编码基因,测序正确后插入到含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,经ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性。结果:原核表达和纯化了CT45-5,并获得了其多克隆抗体,抗体效价达到1∶12800,Western印迹结果显示,该抗血清能够特异识别原核及真核细胞表达的CT45-5蛋白。结论:肿瘤-睾丸抗原CT45-5能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究CT45-5的功能奠定了基础。

人脑胶质瘤中OIP5和CTCFL的表达及临床意义

目的检测癌-睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA)OIP5和CTCFL mRNA在人脑胶质瘤(以下简称胶质瘤)中的表达,探讨OIP5和CTCFL作为胶质瘤免疫治疗靶抗原的可能性。方法用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法,检测92例胶质瘤组织中OIP5和CTCFL mRNA的表达水平;分析其表达与胶质瘤患者临床病理特征的相关性。结果在92例胶质瘤组织中,OIP5和CTCFL mRNA的阳性表达率分别为18.47%(17/92)和20.65%(19/92);DNA测序结果证实RT-PCR产物为OIP5和CTCFL基因c DNA的扩增片段。OIP5和CTCFL mRNA的表达与胶质瘤患者的性别、年龄、病理分级、组织学类型和卡氏评分等临床指标均无关(P>0.05)。结论OIP5和CTCFL mRNA在胶质瘤组织中的阳性表达率不高,能否作为胶质瘤免疫治疗的新靶点有待进一步评估。

敲减XAGE-1b基因表达降低ACCM和A673肿瘤细胞的增殖能力

XAGE是通过生物信息学方法发现的新一类肿瘤-睾丸抗原(cancer/testis antigen,CT抗原)基因,其主要表达亚型为XAGE-1b.已有的研究表明,该基因可能与肿瘤细胞的生长相关.本研究构建了针对XAGE-1b进行RNA干扰的重组腺病毒载体Adv-Sh1和Adv-Sh2.半定量和定量RT-PCR显示,Adv-Sh1比Adv-Sh2对XAGE-1b的干扰效率更高.细胞荧光干扰实验显示,Adv-Sh1对XAGE-1b有显著的干扰作用.在细胞增殖和集落形成实验中,感染Adv-Sh1后的细胞增殖能力显著降低(P<0.01),形成的单克隆集落数也显著减少.研究结果表明,下调XAGE-1b基因表达使ACCM和A673肿瘤细胞的增殖能力均有降低,提示XAGE-1b在肿瘤生长过程中可能发挥重要作用.本研究为进一步深入研究XAGE-1b的功能和致癌机制打下了良好基础.

4种肿瘤-睾丸抗原在肝细胞癌中的表达

目的 观察肿瘤睾丸(CT)抗原MAGE1、SSX-1、CTp11及HCA587基因mRNA在肝细胞癌(HCC)中的表达并探讨其对HCC免疫治疗的意义。方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法对HCC患者癌组织和对照组织中的目的基因mRNA进行检测。结果在检测的105例HCC组织中,MAGE-1、SSX-1、CTp11、HCA 587基因mRNA阳性率分别是75.2％、72.4％、62.9％和56.2％:至少表达1种CT抗原者达93.3％;对照组仅有3例癌旁组织SSX-1基因mRNA表达为弱阳性。结论MAGE-1、SSX-1、CTp11及HCA 587基因mRNA在HCC中呈高比例、高特异表达,是HCC免疫治疗的理想靶位;多个CT抗原同时在HCC中表达;为HCC多价瘤苗的研制提供了实验依据。

5-杂氮-2′-脱氧胞苷诱导肝癌细胞株癌/睾丸抗原基因表达的研究

目的探讨使用5杂氮2′脱氧胞苷(5DC)诱导肝癌细胞株癌/睾丸抗原(cancer/testis,CT)基因的可行性。方法使用5DC处理前后,用RTPCR方法检测肝癌细胞株QGY7703、HepG2215、HepG2、SMMC7721、HLE、BEL7402、Huh7、BEL7404中CT抗原基因MAGEA1、A3、A6和A10表达;Southern杂交检测细胞株基因组DNA去甲基化状态。结果CT抗原家族中MAGEA1在QGY7703、SMMC7721、BEL7402、HLE、BEL7404中表达,MAGEA3在HepG2、HLE中表达,MAGEA4和MAGEA10表达均为阴性,而MAGEA6表达均为阳性;使用5DC后,MAGEA4在QGY7703、HLE中出现表达,MAGEA10在HepG2和HLE出现表达。去甲基化后基因组DNA相对去甲基化程度明显升高(t=-4.966,P<0.01)。结论尽管5DC使肝癌细胞株基因组去甲基化程度明显升高,但不能有效地诱导CT抗原基因广泛表达。

CD44分子对胃癌细胞腹膜种植影响的体外实验研究

目的体外研究CD44分子对胃癌细胞(MKN45)腹膜种植转移的影响。方法在体外预先将抗CD44S抗体与MKN45细胞在细胞培养箱中作用45 min,然后在24孔培养板或Boyden小室中与生长良好的间皮细胞共同培养不同时间, 在显微镜下直接计数与间皮细胞粘附的MKN45细胞,而用MTT法评估胃癌细胞在间皮细胞间的迁移和侵袭情况。结果在体外,抗CD44S抗体对MKN45细胞与间皮细胞间的粘附有明显的抑制作用(P<0.01),在高浓度时对迁移和侵袭也有一定的抑制作用。结论CD44分子参与了胃癌细胞腹膜种植转移过程,抗CD44S抗体对胃癌细胞腹膜种植转移有一定的抑制作用。

癌-睾丸抗原与卵巢癌

卵巢癌患者病死率居妇科肿瘤之首,近年来其发病率有上升趋势。卵巢癌患者总体5年生存率约为45%,不同期别的患者其预后差异很大：Ⅰ期或Ⅱ期的卵巢癌患者5年生存率可达70%～90%,而且术后无需化疗;但Ⅲ期或Ⅳ期的卵巢癌患者，其5年生存率仅为20％。由于卵巢癌的早期诊断率低，超过70％的卵巢癌患者在就诊时已处于Ⅲ期或Ⅳ期，

CT23基因在脑肿瘤中的表达情况及临床价值

目的检测和明确癌-睾丸相关抗原(CTA)CT23基因在人脑肿瘤中的表达情况,评估该基因潜在的临床价值。方法收集广西医科大学第一附属医院神经外科14例颅脑肿瘤病理标本,包括星形细胞瘤5例,髓母细胞瘤4例,胶质母细胞瘤5例,使用RT-PCR技术检测CT23基因在不同病理类型的脑肿瘤中的表达情况,比较其在不同类型脑肿瘤中的表达差异。结果14例脑肿瘤样本中13例CT23表达阳性,其中星形细胞瘤4例,胶质母细胞瘤5例,髓母细胞瘤4例,CT23基因在三类脑肿瘤样本中的表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论CT23基因作为一种肿瘤相关的基因,可表达于多种类型的人类脑肿瘤中,另外该基因的表达与脑肿瘤的发生、发展可能有关。

结肠癌组织中XAGE-1基因的表达及其临床意义

XAGE-1是一种在多种肿瘤组织中表达的癌一睾丸抗原（cancer—testisantigen，CT抗原），为了了解该抗原在结肠癌中的表达，我们采用巢式PCR方法检测了XAGE-1的4种不同剪接体基因在结肠癌组织中的表达情况，并分析XAGE-1b基因表达与结肠癌患者临床特点的关系，为结肠癌的肿瘤免疫治疗提供理论依据。

XAGE-1b腺病毒表达载体的构建及其功能研究

XAGE是通过生物信息学方法发现的新一类睾丸—肿瘤抗原(cancer/testis antigen,CT抗原)基因,XAGE-1是其主要成员.当前已获得了XAGE-1在多种肿瘤组织中较为详细的表达谱,并初步揭示了XAGE-1与病理进程及肿瘤亚型的关系,但关于其功能及表达调控机制的研究尚刚刚起步.构建了高效表达XAGE-1b的重组腺病毒载体Adv-1b;在细胞增殖、集落形成实验中,感染Adv-1b后的细胞增殖能力更强(P<0.01,studentt检验),形成的单克隆集落更大;软琼脂集落形成实验中,感染Adv-1b后的细胞集落形成率更高(P<0.01,卡方检验).研究结果初步证实:XAGE-1b对涎腺腺样囊性癌细胞的增殖及转移能力有一定的促进作用,为进一步深入研究XAGE-1b的功能和致癌机制打下了良好基础.