无血清悬浮法培养MCF-7细胞系并筛选该细胞系中肿瘤干细胞相关亚群的初步研究

目的:研究无血清培养基悬浮培养MCF-7乳腺癌细胞系,筛选并鉴定MCF-7乳腺癌细胞系中的肿瘤干细胞相关亚群。方法:应用乳腺癌培养基在无血清的条件下悬浮培养MCF-7乳腺癌细胞系。通过无血清培养筛选乳腺癌细胞系肿瘤干细胞相关亚群,将其接种于含血清培养基,观察分化。应用单克隆形成实验、表面标志检测、HOECHST33342染色检测来确定培养出的细胞中肿瘤干细胞的比例及其培养后肿瘤干细胞含量的变化。结果:乳腺癌MCF-7细胞系中有约2.12%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖,形成自由漂浮的细胞球。细胞球可连续传代,若重新接种于含血清培养基中可重新贴壁分化,贴壁分化后细胞形态与直接在含血清培养基中培养的MCF-7无明显差别。流式细胞仪表面标志检测,细胞球中约含83.13%表达CD24-CD44+的细胞,HOECHST33342染色提示细胞球中约含10.06%的侧亚群(sidepopulation)细胞。结论:MCF-7细胞系可在含生长因子的无血清培养基中悬浮生长,并维持细胞系。该细胞系中含有比例较低的具有增殖和分化能力的乳腺癌干细胞相关亚群。表面标志以及HOECHST33342检测差异提示细胞球中仅约1/8细胞具有干细胞的功能。

MTA2、FGFRL1在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

【目的】探讨转移相关蛋白2(MTA2)、成纤维细胞生长因子受体样蛋白1(FGFRL1)在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义。【方法】选取2019年2月至2020年2月本院收治的85例宫颈鳞状细胞癌患者,收集患者癌组织和对应癌旁组织标本,采用免疫组化法检测MTA2、FGFRL1表达水平,采用计算机图像分析技术测定其积分光密度(IOD)值。比较癌组织和癌旁组织MTA2、FGFRL1的IOD值;随访2年,统计宫颈鳞状细胞癌患者预后情况,比较死亡患者与存活患者的临床特征;采用Logistic回归分析宫颈鳞状细胞癌患者预后的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析MTA2、FGFRL1的IOD值对宫颈鳞状细胞癌患者预后的预测价值。【结果】宫颈鳞状细胞癌患者癌组织中MTA2、FGFRL1的IOD值均高于癌旁组织(P<0.05);死亡患者淋巴结转移、分化程度构成比以及MTA2、FGFRL1的IOD值与存活患者比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic多因素回归分析结果显示:淋巴结转移、MTA2的IOD值、FGFRL1的IOD值均是影响宫颈鳞状细胞癌患者预后的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线分析结果显示:癌组织中MTA2、FGFRL1的IOD值预测宫颈鳞状细胞癌患者预后的最佳截断点分别为0.63和9.88,灵敏度分别为78.12%和75.00%,特异度分别为78.43%和80.39%,曲线下面积(AUC)分别为0.706和0.767,二者联合的特异度和AUC分别为96.08%和0.831。【结论】宫颈鳞状细胞癌患者癌组织MTA2、FGFRL1的IOD值均异常升高,癌组织MTA2、FGFRL1均是影响宫颈鳞状细胞癌患者预后的独立危险因素,其可作为预测患者预后的敏感指标。

山奈酚对大鼠肝癌细胞CBRH7919的增殖抑制及诱导凋亡作用

【目的】观察山奈酚对大鼠肝癌细胞CBRH7919增殖抑制、诱导凋亡和细胞周期的影响。【方法】选用CBRH7919肝癌细胞株,传代培养24 h后,加入不同浓度山奈酚处理,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,4,′6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞凋亡形态,彗星电泳技术和流式细胞术检测药物对细胞DNA的作用。【结果】山奈酚体外能抑制大鼠肝癌细胞CBRH7919的增殖,以6.25、12.5、25、50、100μmol/L浓度的山奈酚处理细胞72 h,对CBRH7919细胞的增殖抑制率显著升高,呈明显的剂量效应关系。用50、100μmol/L浓度的山奈酚作用于细胞24、48、72、96 h,对细胞的增殖抑制作用显著增强,呈明显的时间效应关系,即药物作用时间越长,抑制作用越强。DAPI染色显示不同浓度山奈酚组的细胞均有明显的细胞凋亡特征。彗星电泳显示30、60、120μmol/L浓度的山奈酚作用于细胞72 h后,细胞后面均呈现长度不等的拖尾,平均光密度值较空白对照组显著降低(P<0.01),彗星尾距较空白对照组显著增加(P<0.01),且两者改变与药物浓度相关。流式细胞仪检测结果显示30、60、120μmol/L浓度的山奈酚作用于细胞72 h出现亚二倍体凋亡峰,细胞周期被阻滞于S期,不同浓度山奈酚组凋亡率较空白对照组均明显增高。【结论】山奈酚可能通过抑制大鼠肝癌细胞CBRH7919的增殖及诱导其凋亡而产生抗肿瘤作用。

虫草素钌(Ⅱ)配合物的合成及其对大鼠肝癌细胞杀伤作用的初步研究

【目的】探讨虫草素钌(Ⅱ)配合物的合成及其对大鼠肝癌细胞株CBRH7919的杀伤作用。【方法】以虫草素(Cordycepin)为主要配体,联吡啶(2′,2′-bipyridine)为辅助配体合成钌配合物,将产品初步分离提纯后,以空白组、虫草素组、钌前体组、虫草素与钌前体等摩尔浓度混合的混合物组作为对照组,各组均设0.2、1.0、5.0、25.0、125.0 mg/L共5个浓度,分别作用于大鼠肝癌细胞CBRH7919,72h后进行光镜下形态学观察,并采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定癌细胞存活率。【结果】经初步分离的粗产品(浓度为0.2～25.0 mg/L)作用后的癌细胞存活率均低于相对应浓度的各对照组,72h半数抑制浓度(ρ_I_(50))为48.9 mg/L,并在25.0 mg/L以上浓度使癌细胞发生了明显的形态学改变。虫草素组72h的ρ_I_(50)为51.4mg/L。【结论】虫草素与钌形成配合物后对癌细胞生长抑制作用有所增强,并出现了特殊的形态改变。

肺癌细胞A549线粒体的动态分布与侵袭性和趋化性的关系

目的初步探讨肿瘤细胞内线粒体动态分布的极性变化与肿瘤细胞侵袭和趋化性之间的关系。方法将表达CXCR4受体的含有线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的肺腺癌A549细胞和缺乏mtDNA的ρ0A549细胞常规培养,施加趋化因子CXCL12刺激,利用Transwell技术检测趋化前后A549和ρ0A549的侵袭性和趋化性改变。另外,以MitoTracker标志线粒体,Hoechst标志核,利用荧光倒置显微镜观测CXCL12处理前后线粒体在细胞内的动态分布的极性变化。结果对于A549(mtDNA+)肿瘤细胞,CXCL12处理后细胞迁移力明显高于CXCL12处理前细胞穿透数(P<0.05),但CXCL12不能增强ρ0A549(mtDNA-)的侵袭性和趋化性。CXCL12处理前就已经有部分A549细胞内线粒体分布呈极性改变(0.25±0.05),但在CXCL12处理后这种呈极性改变的细胞比例明显增多(0.76±0.14,P<0.05)。结论肿瘤细胞的侵袭和趋化性可能与线粒体在肿瘤细胞内的动态分布的极性变化有关。

Ezrin、CD44v6在皮肤基底细胞癌和鳞状细胞癌组织中的表达及意义

【目的】探讨埃兹蛋白（Ezrin）及变异型 CD44分子6（CD44v6）在皮肤基底细胞癌（BCC）和鳞状细胞癌（SCC）组织中的表达及意义。【方法】采用 SP 法检测 Ezrin、CD44v6在 BCC、SCC 及正常皮肤组织中的表达,并分析其与临床特征的相关性。【结果】Ezrin 在正常组、BCC 和 SCC 组织中的阳性表达率分别为10%、60.0%、84.4%,组间比较有显著性差异（P＜0.05）；CD44v6在正常皮肤和 BCC、SCC 组织中阳性表达率分别为100%、26.7%、59.4%,各组比较也有显著性差异（P ＜0.05）。Ezrin 的表达水平随着肿瘤分级程度增高而增高（P ＜0.05）,有淋巴转移的比无淋巴转移的表达强（P ＜0.05）；CD44v6的表达水平随病理分级的增加表达强度下降（P ＜0.05）,且有淋巴转移的阳性率表达比无淋巴转移低（P ＜0.05）,Spearman 相关性分析显示两者表达有相关性（P ＜0.05）。【结论】Ezrin、CD44v6可作为 BCC 发生、发展的分子生物学标志。联合检测可作为研究和判断皮肤 SCC 生物学行为和预后的重要指标。

液体活检在中枢神经系统肿瘤中的应用

目前用于中枢神经系统肿瘤诊断和监测的标准临床手段具有一定的局限性。而液体活检的出现为监测中枢神经系统恶性肿瘤提供一种具有前景且侵袭性较小的手段。脑脊液中循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)及循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)的检测可用于实体肿瘤脑膜转移的辅助诊断,敏感度和特异度均高于标准临床手段。而且由于血脑屏障的存在,脑脊液循环于脑室和脊髓池,含有大量中枢神经系统代谢物质,脑脊液中非肿瘤源性DNA水平较低,所以脑脊液中CTCs与ctDNA的含量较血浆丰富,且携带不同于组织与血浆的基因突变,对脑脊液反复取样能够及早发现耐药基因突变,可以辅助诊断中枢系统原发肿瘤及脑实质的转移。脑脊液CTCs及ctDNA的动态监测可以反映治疗效果。

原发性大唾液腺鳞状细胞癌预后因素分析

目的探讨下颌下腺及舌下腺在内的原发性大唾液腺鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)预后相关因素。方法通过对美国国立癌症研究所监测、流行病学和结果数据库(Surveillance,Epidemiology,and End Results,SEER)中2004年至2016年病理诊断为原发性大唾液腺SCC患者进行回顾性分析,研究原发性大唾液腺SCC的人口统计学特征、临床病理特征及预后因素,并分析不同部位肿瘤的预后差异。结果共998例患者纳入研究,其中腮腺来源883例(88.5%)、下颌下腺来源111例(11.1%)及舌下腺来源4例(0.4%)。多数患者为白人(93.1%)、≥72岁(56.0%)、已婚(56.0%)和男性(79.8%)。多因素分析表明,年龄≥72岁、肿瘤大小≥2 cm、较高的T分期(T3~4)及远处转移是生存预后的阴性预测因素(均P<0.05),已婚、放疗、原发灶及区域淋巴结手术是预后较好的预测因素(均P<0.05)。下颌下腺SCC的5年生存率与腮腺SCC比较,差异无统计学意义(34.5%vs 41.1%,P=0.249)。在cN0患者中,选择性区域淋巴结清扫较无清扫者中位生存时间改善(62.0个月vs 17.0个月,P<0.01)。在Ⅳ期患者中,接受化疗者较无化疗者中位生存时间改善(33.0个月vs 22.0个月,P=0.005)。结论多数原发性大唾液腺SCC在确诊时即为Ⅲ期或Ⅳ期。存在高T分期及分级等高危因素的cN0患者,选择性区域淋巴结清扫可改善预后。在Ⅳ期患者中,系统性化疗可改善长期生存。

神经纤毛蛋白-1在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

【目的】探讨神经纤毛蛋白-1（Neuropilin-1，NRP-1）在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义。【方法】收集42例口腔鳞状细胞癌、癌旁正常组织作为实验标本，用免疫组织化学方法检测NRP-1原位表达情况，采用RT—PCR检测NRP—1 mRNA在口腔鳞状细胞癌、癌旁组织中的表达情况。【结果】本组42例口腔鳞状细胞癌组织中NRP-1均为高表达，42例癌旁正常组织中的NRP-1表达均呈阴性；癌组织NRP-1mRNA为（0．59±0．15），显著高于癌旁正常组织（0．43±0．17），且两者相比较差异具有显著性（P〈0．05）；〉3am的口腔鳞状细胞癌NRP-1 mRNA为（0．63±0．1）显著高于≤3cm的组织；周围组织及淋巴结转移的NRP-1 mRNA表达为（0．67±0．20），显著高于局部无转移的组织，且两者相比较差异具有显著性（P〈0．05）。【结论】口腔鳞状细胞癌中NRP-1为高表达，且可能参与口腔鳞状细胞癌的生长、转移过程中。

转录信号传导子与激活子3在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨转录信号传导子与激活子3(signal transducers and activation of tran-scription3,Stat3)在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达与临床病理特征的关系。方法:用免疫组织化学SP法检测49例宫颈鳞状细胞癌、10例宫颈原位癌、10例正常宫颈组织中Stat3的表达水平,并对实验结果进行统计学分析。结果:Stat3在宫颈鳞状细胞癌中高表达率为79.6%,明显高于宫颈原位癌(10.0%),P<0.05;亦明显高于正常宫颈组织(0),P<0.01;同时发现Stat3表达率与组织分化程度有关,χ2=12.864,P=0.012。结论:Stat3的过度表达可能在宫颈鳞状细胞癌的发生、发展及分化过程中起重要作用。

喉鳞癌组织Cyclin G1基因表达及其临床意义的研究

目的:探讨CyclinG1基因在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法:取40例喉鳞癌组织、10例癌旁正常喉黏膜组织及10例声带息肉组织,应用RT-PCR方法检测CyclinG1基因mRNA的表达,并分析表达结果与患者临床病理特征之间的关系。结果:喉癌组织中的CyclinG1mRNA表达明显高于癌旁正常黏膜组织及声带息肉组织中的表达,P<0.05。中、低分化与高分化喉癌比较,后者CyclinG1表达较低,差异有统计学意义,P<0.05。有淋巴结转移组比无淋巴结转移组喉癌组织Cyc-linG1表达显著增高,P<0.05。CyclinG1的表达与癌组织分化及颈淋巴结转移有关。结论:CyclinG1在喉癌组织中有异常高表达,并与喉癌发生发展有一定联系,其高表达可能是喉癌预后不良的因素之一。

脐尿管癌的诊断与治疗(附12例报告)

目的探讨脐尿管癌的诊断与治疗的方法,提高对脐尿管癌的认识及诊治水平。方法总结12例脐尿管癌的诊治经验。结果1年生存率66.7%(8/12)、3年生存率41.7%(5/12)、5年生存率16.7%(2/12)。结论最常见的临床表现是耻骨上肿块、血尿、尿频和尿中有黏液。CT、膀胱镜检查是诊断脐尿管癌的最好方法。治疗应行扩大性膀胱部分切除术,强调不仅切除膀胱顶部,且将覆盖肿瘤的腹膜以及与R etz ius间隙相连的组织一起切除。脐尿管癌的预后较差。联合放疗、化疗和免疫治疗可望提高远期生存率。

GTD/GTN诊治进展和争议问题

现今妇科肿瘤诊治指南或规范不断涌现，虽可供参考使用，也必然引起某些争议。争议问题宜贯彻“百花齐放，百家争鸣”方针，应有循证和精准医学的依据，也应结合国情，绝不能照搬硬抄或一言堂。为此本刊组织国内多位专家就主要妇科良、恶性肿瘤诊治进展和有关争议问题进行笔谈，各抒已见，以飨读者，引起思考。

酸浆苦素B的体外抗肿瘤活性研究

【目的】研究苦蘵中提取的酸浆苦素B(physalin B,Ph B)的体外抗肿瘤活性。【方法】采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和细胞形态观察法研究Ph B对2种肿瘤细胞株Hep G2和SGC7901增殖的抑制作用及形态的影响,并与抗癌药物羟基喜树碱(hydroxycamptothecine,HCTP)作对照比较;采用4’6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法观察Ph B诱导Hep G2和SGC7901细胞凋亡。【结果】MTT实验结果显示Ph B对Hep G2和SGC7901的生长均有明显的抑制作用,并具有一定的时间剂量依赖关系,且高浓度时作用优于阳性对照药HCTP,倒置相差显微镜结果也显示其显著改变了细胞形态,并能够证实MTT实验结果的可靠性;DAPI染色结果表明Ph B可促进Hep G2和SGC7901细胞凋亡。【结论】苦蘵提取物Ph B对肿瘤细胞Hep G2和SGC7901具有一定的增殖抑制作用。