β-榄香烯对肿瘤细胞上清液诱导的大鼠骨髓来源内皮祖细胞VEGF及VEGFR-2表达的影响

目的观察β-榄香烯对肿瘤细胞上清液诱导的大鼠骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)血管内皮生长因子(VEGF)及其受体mRNA表达的影响,进一步探讨β-榄香烯在抑制肿瘤血管形成过程中的作用。方法原代培养大鼠EPCs。胃腺癌细胞株SGC-7901培养上清液诱导EPCs 12 h后,分别用0、5、10、20μg/mLβ-榄香烯干预48 h,用20μg/mLβ-榄香烯干预0、12、24、48 h。采用RT-PCR法检测各组EPCs VEGF和VEGFR-2的mRNA表达水平。结果随着β-榄香烯浓度及作用时间的增加,EPCsVEGFR-2的表达明显下降;当β-榄香烯浓度增加至10μg/mL及作用时间延长至24 h,EPCs VEGF的表达水平较对照组明显降低(P<0.05)。结论β-榄香烯可降低EPCs VEGF及VEGFR-2 mRNA的表达水平,从而减少EPCs的动员,进一步抑制EPCs参与肿瘤血管的形成。

不同浓度肿瘤细胞上清液对成纤维细胞生长及表型转化的影响

目的利用含不同浓度肿瘤细胞上清液的条件培养液培养成纤维细胞,观察其对成纤维细胞的生长及表型变化的影响。方法用MTT法和流式细胞凋亡术测定成纤维细胞的生长变化与凋亡率。用RT-PCR检测成纤维细胞转化为肌成纤维细胞后α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与转化生长因子β1(TGF-β1)的表达。用Western blot检测α-SMA、TGF-β1蛋白的表达。结果 MTT法发现肿瘤细胞上清液与2×DMEM∶F12比例为1∶1时,对成纤维细胞的生长有明显的促进作用,其生长速度快于其他浓度(P<0.05)。流式细胞凋亡术检测表明随着肿瘤细胞上清液浓度的提高,成纤维细胞的凋亡率也上升,1∶1的凋亡率与1.5∶1时有差异(P<0.05)。RT-PCR、Western blot表明普通培养液培养的成纤维细胞α-SMA与TGF-β1的表达高峰在第5天,第7天下降明显(P<0.05)。当比例为1∶1时,α-SMA与TGF-β1的表达增加,高峰提前到第3天(P<0.05),第3天以后α-SMA的表达稳定(P=0.96,P=0.21)。结论当肿瘤细胞上清液与2×DMEM∶F12比例为1∶1时,能有效促进成纤维细胞的生长,并促使成纤维细胞向肌成纤维细胞稳定的转化。

β-榄香烯对肿瘤细胞上清夜诱导的大鼠骨髓来源的内皮祖细胞增殖、管腔形成能力及细胞周期的影响

目的探讨β-榄香烯对内皮祖细胞(EPCs)参与肿瘤血管形成的抑制作用。方法原代培养大鼠骨髓来源内皮祖细胞,胃癌细胞株SGC-7901培养上清液刺激与β-榄香烯干预,四唑氮蓝还原反应(MTT)法检测内皮祖细胞增殖;碘化丙啶(PI)标记流式细胞仪检测细胞周期,Matrigel检测细胞管腔形成能力。结果β-榄香烯抑制肿瘤细胞上清液诱导的内皮祖细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖性。细胞周期检测结果显示,β-榄香烯干预后,G1期细胞增多,进入S期及G2期细胞减少,细胞周期被阻滞于G1期;接种于Matrigel的内皮祖细胞形成管腔数目减少。结论β-榄香烯可抑制内皮祖细胞的增殖,阻滞其从G1期进入S期,并降低其形成管腔的能力。

β-榄香烯对肿瘤细胞上清液诱导的大鼠骨髓来源内皮祖细胞增殖与凋亡的影响

目的观察β-榄香烯对肿瘤细胞上清液诱导的大鼠骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)增殖与凋亡的影响,探讨β-榄香烯对EPCs参与肿瘤血管形成过程的作用。方法原代培养大鼠骨髓来源EPCs经胃腺癌细胞株SGC-7901培养上清液诱导EPCs 12h后,分为浓度效应组(β-榄香烯0、5、10、20mg.L-1干预48h)和时间效应组(20mg.L-1β-榄香烯干预0、12、24、48h)。检测各组EPCs的增殖和凋亡率。结果随着β-榄香烯剂量的增加和作用时间的延长,EPCs的增殖显著下降(P<0.05),当β-榄香烯浓度为5mg.L-1及作用时间为12h时,EPCs凋亡率变化不明显,当β-榄香烯浓度增加至10mg.L-1及作用时间延长为24h时,EPCs凋亡率显著上升(P<0.05)。结论β-榄香烯通过诱导EPCs的凋亡抑制其增殖,并可削弱EPCs在肿瘤血管发生中的作用。

人肿瘤细胞培养上清对树突状细胞表型和功能的影响

目的 :观察肿瘤细胞分泌的可溶性因子对树突状细胞表型和功能的影响 ,以进一步揭示肿瘤的免疫逃逸机制。 方法 :体外分离单核细胞 ,加入白细胞介素 4 (IL - 4 )、粒 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM- CSF)和肿瘤细胞培养上清体外培养树突状细胞 ,采用流式细胞术、同种异体混合淋巴细胞反应等方法观察肿瘤细胞上清对树突状细胞表型和功能的影响 ,并用逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)法检测了免疫抑制因子 IL - 10、血管内皮生长因子 (VEGF)和转化生长因子β1 (TGF-β1 )的 m RNA在人结肠、人卵巢和人肝脏肿瘤细胞中的表达。 结果 :当培养体系中加入人肿瘤细胞培养上清后 ,树突状细胞表面 MHC 类分子和 CD80等共刺激分子的表达较低 ,树突状细胞刺激 T细胞增殖能力下降 ,且 IL - 10 m RNA、VEGF m RNA和 TGF-β1 m RNA在 3种肿瘤细胞中均有不同程度的表达。 结论 :提示肿瘤细胞培养上清可能抑制树突状细胞的抗原提呈能力 ,肿瘤细胞分泌的免疫抑制因子可能是导致肿瘤微环境中的树突状细胞功能低下、机体的免疫系统无法有效激活和启动抗肿瘤免疫反应的原因之一。

CD11b+细胞诱导CD8+T细胞表达PD-1研究

目的探究肿瘤微环境中CD8+T细胞免疫抑制性受体PD-1的表达。方法使用小鼠肺癌细胞系3LL建立荷瘤小鼠模型,流式细胞术检测分析肿瘤微环境中各类免疫细胞的比例以及CD8+PD-1+T细胞比例;使用免疫磁珠细胞分选法MACS分别分选CD11b+细胞以及CD8+T细胞,两种细胞按照1∶1比例共培养,并加入3LL肿瘤细胞培养上清,培养48 h,流式细胞术检测分析CD8+T细胞PD-1表达水平。结果(1)肿瘤微环境中存在大量CD11b+细胞,此外还包含16.4%左右CD3+T细胞,肿瘤实质的重量与肿瘤微环境中T细胞比例呈负相关。(2)荷瘤小鼠淋巴结中CD8+PD-1+T比例升高(P<0.05);肿瘤微环境中CD8+PD-1+T细胞比例显著升高(P<0.01),占CD8+T细胞的40%左右,肿瘤微环境中CD8+T细胞还表达其他免疫抑制分子如TIM-3、LAG-3;(3)相比单独使用肿瘤细胞培养上清,CD11b+细胞加肿瘤细胞培养上清可诱导CD8+T细胞表达PD-1(P<0.05)。结论在肿瘤微环境中,CD11b+细胞可诱导CD8+T细胞表达免疫抑制性受体PD-1。