白细胞介素抑制剂与肿瘤坏死因子-α抑制剂治疗银屑病的有效性及安全性比较的Meta分析

银屑病是一种慢性、复发性、炎症性、系统性疾病,斑块状银屑病是其常见的类型。目前认为辅助性T细胞与白细胞介素(interleukin,IL)-23/IL-17轴是其发病的关键免疫学机制[1]。目前,治疗银屑病的生物制剂主要分为两大类,一类是肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α抑制剂,主要包括依那西普、阿达木单抗、英夫利西单抗和培塞利珠单抗;另一类是IL抑制剂,主要包括IL-12/23抑制剂(乌司奴单抗).

聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子在预防恶性肿瘤患者化疗后骨髓抑制中的疗效观察

目的探讨预防恶性肿瘤化疗后骨髓抑制的方法。方法将化疗后发生过骨髓抑制的110例恶性肿瘤患者随机分为观察组(60例)和对照组(50例),本次化疗结束48 h后,观察组单次皮下注射PEG-rhG-CSF,对照组不预防给药。观察两组中性粒细胞减少程度及不良反应情况。结果观察组中性粒细胞降低发生率为46.67%,高于对照组的80%(χ^(2)=12.84,P<0.01);两组不良反应发生率比较无统计学意义(χ^(2)=0.01,P=0.913)。结论恶性肿瘤患者化疗后应用PEG-rhG-CSF可减轻骨髓抑制,安全性高。

白血病抑制因子在肿瘤发生发展中的作用与靶向治疗策略

白血病抑制因子(LIF)属IL-6家族,是一种多效性细胞因子,因最早被发现能够抑制小鼠髓系M1白血病细胞增殖并诱导其终末分化而得名。LIF广泛参与器官、神经发育与再生和免疫调节等反应,对于肿瘤的发展同样具有重要的作用。与抑制白血病细胞生长的作用相反,LIF通常促进多种类型实体瘤的发展,高表达的LIF能够促进肿瘤的发生发展、转移、耐药和肿瘤免疫逃逸等,与患者的不良预后相关。聚焦LIF生理和病理的功能作用及其所调控信号通路的整体性,寻找新的靶向药物,对于LIF通路靶向治疗策略的开发具有重要意义。

超声内镜、巨噬细胞抑制因子-1、糖类抗原19-9联合诊断胰腺癌的临床价值分析

目的探究超声内镜、巨噬细胞抑制因子-1(MIC-1)、血清肿瘤标志物糖类抗原19-9(CA19-9)联合诊断胰腺癌的临床价值。方法选取2019年3月至2022年3月在南京医科大学附属苏州市立医院行超声内镜检查的100例高度疑似胰腺癌患者作为观察组,同期来院进行体检的50例健康志愿者作为对照组。采用化学发光法检测CA19-9水平,采用酶联免疫法检测MIC-1水平并进行组间比较。以术后患者的病理检查结果为金标准,比较超声内镜、MIC-1、CA19-9分别及联合应用对胰腺癌的诊断价值。结果2组研究对象的血清CA19-9、MIC-1水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。与健康对照组相比较,观察组患者的血清CA19-9、MIC-1水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。超声内镜、MIC-1、CA19-9三者联合诊断的敏感度(84.21%)均低于三者分别诊断(92.11%、90.79%、90.79%),特异度(91.67%)均高于三者分别诊断(79.17%、83.33%、75.00%)。三者联合诊断的阳性预测值为96.97%,阴性预测值为64.71%。结论在对胰腺肿瘤进行良恶性诊断时,采用超声内镜、MIC-1、CA19-9联合诊断可以有效提高其诊断效能。

藏药甘青铁线莲黄酮诱导肿瘤细胞凋亡及对肿瘤免疫抑制因子影响的实验研究

以甘青铁线莲黄酮提取液为研究材料,小鼠的几种肿瘤细胞为研究对象,通过CCK-8法和流式细胞术等方法,探究甘青铁线莲黄酮对肿瘤细胞增殖、细胞形态、细胞膜完整性、细胞凋亡和肿瘤细胞分泌免疫抑制因子的影响.结果显示,甘青铁线莲黄酮能够抑制S180肿瘤细胞增殖、破坏细胞膜使细胞形态发生改变、诱导其凋亡的发生和抑制分泌免疫抑制因子的分泌.结果表明,藏药甘青铁线莲黄酮通过诱导S180肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞分泌免疫抑制因子等途径,从而实现抗肿瘤的作用,该研究结果为甘青铁线莲的药理学研究提供数据参考.

肿瘤坏死因子受体相关因子6高表达对子宫内膜癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响

目的:探究肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)高表达对子宫内膜癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响。方法:将Ishikawa细胞随机分为三组:对照组(子宫内膜癌细胞Ishikawa未转染)、NC组(子宫内膜癌细胞Ishikawa转染空载质粒)和TRAF6高表达组(子宫内膜癌细胞Ishikawa转染TRAF6过表达质粒);实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测TRAF6 mRNA以及蛋白表达情况;Transwell实验、划痕实验以及裸鼠移植瘤实验检测细胞侵袭、迁移能力;WB检测上皮间质转化标志蛋白E型钙黏蛋白(E-cadherin)、闭合蛋白(Occludin)、N型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平。结果:相较于人子宫内膜上皮细胞,子宫内膜癌细胞Ishikawa中TRAF6 mRNA和蛋白表达显著降低(均P<0.05)。相较于对照组和NC组,TRAF6高表达组的TRAF6 mRNA水平和蛋白表达显著升高,细胞侵袭、迁移能力和Vimentin、N-cadherin蛋白表达显著降低,Occludin、E-cadherin蛋白表达显著升高(均P<0.05);对照组和NC组上述指标比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:上调子宫内膜癌细胞中TRAF6的表达,可抑制上皮间质转化过程,减弱子宫内膜癌细胞的侵袭和迁移能力,TRAF6在子宫内膜的发生发展中具有重要的调节作用。

肿瘤侵袭抑制因子-2对基因重组肝细胞生长因子诱导的人肺癌细胞运动和侵袭的抑制作用

应用基因重组肝细胞生长因子（HGF）可诱导人肺癌细胞运动和侵袭，通过细胞离散、集落扩散和基底膜侵袭实验证明，侵袭抑制因子-2（ⅡF-2）可明显地抑制由HGF诱导的作用。该抑制作用可被抗ⅡF-2抗体所阻断，表明ⅡF-2在肿瘤转移的预防和治疗方面可能具有重要意义。

巨噬细胞迁移抑制因子与肿瘤关系的研究进展

巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)作为一种多效性细胞因子和宿主免疫的调节分子,在机体免疫和疾病中发挥重要作用。MIF具有癌基因特性,其高表达可促进癌细胞存活、增殖、迁移、侵袭、转移、血管生成并抑制凋亡。MIF与抗肿瘤免疫密切相关,基于MIF为靶点的特异性抑制剂目前尚未得到广泛应用。本文就MIF在肿瘤发生和进展中的作用、机制、治疗靶点等方面的研究进展进行综述,展望基于MIF为靶点的抑制剂运用在肿瘤防治中的意义。

肿瘤细胞减灭术后预防性应用重组人粒细胞集落刺激因子对晚期卵巢癌患者骨髓抑制继发感染的影响

目的 分析肿瘤细胞减灭术(CRS)后预防性应用重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对晚期卵巢癌患者骨髓抑制继发感染的影响。方法 将154例行CRS治疗的晚期卵巢癌患者按随机数字表法分为观察组与对照组,每组77例。两组患者在CRS后均开展新辅助化疗,化疗方案为顺铂+紫杉醇,对照组每次化疗结束后1周时复查血常规,依据白细胞计数(WBC)、绝对中性粒细胞计数(ANC)水平皮下注射rhG-CSF直至WBC、ANC恢复正常;观察组在对照组的基础上自化疗开始时预防性给予rhG-CSF。比较两组患者WBC、ANC水平及WBC、ANC恢复至正常的时间,并统计骨髓抑制继发感染发生情况及抗菌药物使用时间。结果 化疗7、9、13、15、17天,观察组患者WBC水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。观察组化疗期间WBC减少总发生率明显低于对照组,WBC恢复至﹥4.0×10^(9)/L的时间明显短于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。观察组患者ANC水平明显高于对照组,ANC恢复正常的时间明显短于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。两组患者骨髓抑制后继发感染发生情况与抗菌药物使用时间比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论CRS后预防性应用rhG-CSF虽未能对晚期卵巢癌患者骨髓抑制后继发感染风险产生显著的改善作用,但预防性应用rhG-CSF能减轻晚期卵巢癌患者WBC、ANC抑制,缩短其恢复至正常的时间,值得临床重视。

巨噬细胞移动抑制因子、伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白及循环肿瘤细胞在骨肉瘤中的表达及临床意义

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)及外周血循环肿瘤细胞(CTC)在骨肉瘤中的表达及临床意义。方法 将132例骨肉瘤患者设为观察组,另选取同期的129例软骨瘤患者设为对照组。对比两组患者MIF、RECK、CTC阳性表达情况;对观察组患者随访2年,分析不同预后骨肉瘤患者MIF、RECK、CTC阳性表达情况;采用Cox多元回归分析对骨肉瘤患者预后影响因素进行分析。结果 观察组患者MIF、CTC阳性表达率均明显高于对照组,RECK阳性表达率明显低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。随访2年,132例骨肉瘤患者中,死亡58例,生存74例。死亡患者MIF、CTC阳性表达率均明显高于生存患者,RECK阳性表达率明显低于生存患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。发生肺部转移、低中分化、MIF阳性、RECK阴性、CTC阳性均为骨肉瘤患者预后死亡的危险因素(P﹤0.05)。结论 MIF、CTC、RECK可用于骨肉瘤患者早期诊断及预后评价中,能作为评估骨肉瘤患者预后的标志物。

乌梅丸对乳腺癌小鼠肺转移微环境免疫抑制性细胞因子的影响

目的 观察乌梅丸对乳腺癌小鼠肺转移微环境免疫抑制性细胞因子表达的影响。方法 选择8只Balb/c雌性小鼠作为正常组;另选择16只Balb/c雌性小鼠,采用4T1乳腺癌细胞于小鼠第2对乳腺脂肪垫内注射方法构建乳腺癌模型,将造模成功的16只小鼠随机分为乌梅丸组和模型组,每组8只。乌梅丸组给予乌梅丸16.44 g/kg灌胃,正常组和模型组给予等量灭菌饮用水灌胃,均干预1个月。干预完成后处死各组小鼠,分离肺组织,采用免疫荧光组织化学法观察肺组织中环氧化酶2(COX-2)、白细胞介素-6(IL-6)、转化生长因子-β(TGF-β)和血管内皮生长因子(VEGF)表达情况,分别采用RT-qPCR和Western blot法检测肺组织中COX-2、IL-6、TGF-β、VEGF mRNA和蛋白表达情况。结果 模型组肺组织中COX-2、IL-6、TGF-β、VEGF呈强阳性表达,乌梅丸组COX-2、IL-6、TGF-β、VEGF的荧光强度低于模型组。模型组肺组织中COX-2、IL-6、TGF-β、VEGF mRNA和蛋白相对表达量均明显高于正常组(P均<0.05),乌梅丸组COX-2、IL-6、TGF-β、VEGF mRNA和蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05)。结论 乌梅丸可能通过下调免疫抑制性细胞因子COX-2、IL-6、TGF-β、VEGF的表达而抑制乳腺癌肺转移。

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂治疗晚期表皮生长因子受体突变型非小细胞肺癌的效果及对免疫功能的影响

目的:探讨表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗晚期表皮生长因子受体(EGFR)突变型非小细胞肺癌的效果及对免疫功能的影响。方法:选取2021年1月-2022年1月菏泽医学专科学校附属医院收治的80例晚期EGFR突变型非小细胞肺癌患者,使用随机数字表法将其分为观察组(n=40)及对照组(n=40)。两组均接受盐酸吉西他滨和顺铂治疗,此基础上,对照组加用多西紫杉醇治疗,观察组加用吉非替尼治疗。对比两组客观有效率、疾病控制率、肿瘤标志物指标、免疫功能指标及不良反应发生率。结果:观察组客观有效率及疾病控制率均高于对照组(P<0.05)。治疗前,两组癌胚抗原(CEA)、鳞状细胞癌抗原(SCCA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、糖类抗原125(CA125)及血管内皮生长因子(VEGF)水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组以上各项指标均降低,且观察组均低于对照组(P<0.05)。治疗前,两组CD3+、CD4+、CD8+水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组CD3+、CD4+水平均升高,观察组均高于对照组,CD8+水平均降低,观察组低于对照组(P<0.05)。观察组不良反应发生率(5.00%)低于对照组(20.00%)(P<0.05)。结论:EGFR-TKI可显著降低晚期EGFR突变型非小细胞肺癌患者肿瘤标志物的表达水平、改善其免疫功能,减少不良反应的发生,安全有效。

白屈菜红碱对人卵巢癌SKOV3细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响

目的:探讨白屈菜红碱(CHE)对人卵巢癌SKOV3细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的抑制作用,阐明其相关作用机制。方法:体外培养SKOV3细胞,分为对照组和2.5、5.0、10.0、20.0及40.0μmol·L^(-1)CHE组,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖抑制率。体外培养SKOV3细胞,分为对照组、转移生长因子β1(TGF-β1)组、TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组,采用细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数,Westren blotting法检测各组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平,免疫荧光染色法检测各组细胞中E-cadherin和N-cadherin荧光强度。结果:MTT法,与对照组比较,5.0、10.0、20.0和40.0μmol·L^(-1)CHE组细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05或P<0.01)。细胞划痕实验,与对照组比较,TGF-β1组细胞迁移率明显升高(P<0.01);与TGF-β1组比较,TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组细胞迁移率明显降低(P<0.01)。Transwell小室实验,与对照组比较,TGF-β1组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.01)。Westren blotting法,与对照组比较,TGF-β1组细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与TGF-β1组比较,TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。免疫荧光染色,与对照组比较,TGF-β1组细胞中E-cadherin荧光强度明显降低,N-cadherin荧光强度明显升高;与TGF-β1组比较,TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组细胞中E-cadherin荧光强度明显升高,N-cadherin荧光强度明显降低。结论:CHE能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。

免疫细胞和免疫因子在子宫内膜癌中的作用

子宫内膜癌是常见的妇科恶性肿瘤,严重威胁女性的生活质量和生命健康。近年研究显示,在子宫内膜癌免疫微环境中,树突状细胞等免疫细胞与免疫增强因子相互作用可增强抗肿瘤的免疫效应,而肿瘤相关巨噬细胞等免疫细胞与免疫抑制因子通过抑制免疫应答可发挥促肿瘤的免疫效应。综述子宫内膜癌免疫微环境中部分免疫细胞、免疫抑制因子及免疫增强因子的研究进展,为深入研究子宫内膜癌的发病机制及免疫治疗方法提供新思路。

巨噬细胞游走抑制因子在卵巢癌侵袭中的作用与意义

背景与目的:巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)与肿瘤的恶性进展密切相关。本研究探讨MIF基因对卵巢癌HO-8910和OVCAR-3细胞侵袭和增殖能力的影响及其在卵巢癌组织中表达的意义。方法:瞬时转染小干扰RNA(small interferingRNA,siRNA)靶向敲除MIF基因,RT-PCR和Westernblot检测MIF在mRNA和蛋白水平的表达,通过体外迁移、侵袭实验和噻唑蓝比色法(MTT)分析MIF对HO-8910和OVCAR-3细胞迁移、侵袭和增殖能力的影响;免疫组织化学检测MIF蛋白在卵巢癌组织中的表达情况。结果:与阴性对照组细胞比较,瞬时转染MIFsiRNA的HO-8910和OVCAR-3细胞中MIF基因表达水平明显降低。MTT结果显示,转染MIFsiRNA的两株卵巢癌细胞增殖率显著低于阴性对照组(P<0.05)。转染MIFsiRNA的HO-8910细胞穿膜细胞数(MIF-si1:48.0±7.3;MIF-si2:38.0±3.6)与阴性对照组(78.0±8.5)比较差异有统计学意义(P<0.05),其穿过铺了Matrigel膜的细胞数(MIF-si1:35.0±5.0;MIF-si2:30.0±5.6)也显著少于阴性对照组(P<0.05)。同样,转染了MIFsiRNA的OVCAR-3细胞穿膜细胞数(MIF-si1:40.0±4.5;MIF-si2:42.0±3.0)与阴性对照组(65±2.1)比较,差异也有统计学意义(P<0.05),其穿过铺了Matrigel膜的细胞数(MIF-si1:25.0±3.0;MIF-si2:27.0±3.4)也明显低于阴性对照组(P<0.05)。53.6%(37/69)卵巢癌组织中有MIF蛋白表达,MIF蛋白表达与肿瘤临床分期呈显著正相关(P<0.01)。结论:MIF基因可能通过促进肿瘤细胞的增殖和侵袭能力在卵巢癌的发生发展中发挥重要作用,有可能成为分子靶向治疗卵巢癌的潜在靶点。

转染人核糖核酸酶抑制因子基因对B16黑色瘤细胞及肿瘤转移的影响(英文)

人核糖核酸酶抑制因子 (humanribonucleaseinhibitor ,RI)是一种细胞质中分子质量为 5 0ku的酸性糖蛋白 .RI能抑制核糖核酸酶A (RNaseA)的活性 ,RNaseA与血管生成因子 (angiogenin ,Ang)的氨基酸有着高度保守的同源序列 .Ang是RNaseA超家族的一员 ,RI通过与RNaseA和Ang的紧密结合而抑制其活性 .血管生成及新血管的形成 ,是肿瘤发生和转移的必要条件 .所以抗血管生成将是一种很有希望的对抑制肿瘤生长和转移的有效方法 .实验显示RI能有效地抑制肿瘤诱导血管的生成 .RI由含有许多亮氨酸重复序列的多肽组成 .含有这样重复序列的 10 0多种蛋白质显示了广泛的功能 ,包括细胞周期调节 ,DNA修复 ,对细胞外基质相互作用以及抑制酶活性等 .RI被认为是胚胎发育 ,创伤愈合及肿瘤发生中新血管形成的一种调节因子 .RI定位于染色体的 11p15 5 ,与ras基因邻近 ,在肿瘤病人中经常存在染色体 11p15 5部位的变异和异常 .RI可能与细胞的生长和分化有关 ,因此 ,RI可能还具有尚未知的生物学作用 .为了进一步了解RI的潜在功能以及探讨RI与肿瘤侵润、转移的关系 ,将人的核糖核酸酶抑制因子基因的cDNA通过逆转录包装细胞PA317,并转染到B16小鼠黑色瘤细胞中 ,用转染空载体和未转染的B16细胞作为对照 .通过PCR ,RT PCR 。

脓毒症大鼠血清巨噬细胞移动抑制因子和肿瘤坏死因子-α表达的相关性及肝素对其水平的影响

目的:观察脓毒症大鼠血清巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达及其相关性;并观察小剂量肝素对两者的影响。方法:雌性Wistar大鼠49只,随机分为假手术组(7只)、脓毒症组(21只)、肝素干预组(21只),以CLP法复制大鼠脓毒症模型,于不同时间点测定大鼠血清MIF及TNF-α水平。结果:脓毒症组及肝素干预组大鼠血清MIF和TNF-α水平显著高于假手术组(均P<0.05),肝素干预组各时间点大鼠血清MIF及12、24h时间点TNF-α水平显著低于相应脓毒症组(均P<0.05),两组血清MIF与TNF-α水平变化呈正相关(脓毒症组r=0.859,肝素干预组r=0.711)。结论:脓毒症大鼠血清MIF及TNF-α水平均显著升高,早期应用小剂量肝素可减轻炎症反应,两种炎性因子的变化呈正相关。

化痰通络颗粒对脑梗死患者外周血细胞因子信号转导抑制因子-3及肿瘤坏死因子-α的影响

目的观察化痰通络颗粒对风痰瘀阻型急性脑梗死(ACI)患者外周血细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS-3)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法 66例发病72 h内的风痰瘀阻型ACI患者随机分为两组,治疗组34例口服化痰通络颗粒加基础治疗,对照组32例仅基础治疗;用酶联免疫分析法(ELISA)测定两组ACI患者治疗前及治疗后第3、7天血清SOCS-3水平,用化学发光法检测两组治疗前及治疗后第7天血清TNF-α水平,并与20名健康人作比较,同时用Barthel指数、NIHSS评分法评价两组治疗前及治疗后第7、14、21天神经功能缺损程度的变化。结果两组患者治疗前及治疗后第3、7天血清SOCS-3、治疗前及治疗后第7天TNF-α水平均显著高于健康人组(P<0.05)。治疗第7天时治疗组SOCS-3水平(ng/L,360.98±123.31)高于对照组(281.87±133.66,P<0.05),TNF-α水平(ng/L,35.72±19.94)低于对照组(49.86±34.79,P<0.05);治疗第7、14天时治疗组NIHSS评分低于对照组(P<0.05),Barthel指数评分治疗组治疗后第14、21天高于对照组(P<0.05)。结论化痰通络颗粒促进风痰瘀阻型ACI患者神经功能恢复的作用可能与上调炎症抑制因子SOCS-3与下调促炎因子TNF-α水平,减轻脑缺血继发的炎症损伤等机制密切相关。

核糖核酸酶抑制因子过表达抑制B16细胞的侵袭和转移

目的构建人核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)真核表达载体,检测其对B16细胞侵袭和转移能力的影响。方法提取人7703细胞中的总RNA,RT-PCR特异性扩增RI编码区序列,利用基因重组技术将其克隆到载体pIRES2-EGFP中,稳定转染B16细胞以后,经G418筛选出阳性克隆。根据转染质粒不同分别命名为B16细胞组(未转染组)、空质粒对照组(pIRES2-EGFP组)和实验组(pIRES2-EGFP-RI组)。RT-PCR检测B16细胞中RI mRNA水平的表达,并通过Western blot和细胞免疫化学检测RI蛋白水平的表达;HE染色观察细胞形态的改变,黏附实验、划痕实验和Transwell法检测细胞黏附、迁移和侵袭能力的变化;Western blot检测MMP-2、MMP-9和nm23-H1以及E-cadherin的表达;建立C57BL/6小鼠肺转移模型,观察肺上肿瘤转移灶的变化。结果酶切和测序结果证明重组质粒构建成功,实验组细胞RI的mRNA和蛋白的表达较B16细胞组和空质粒对照组显著升高(P<0.05);HE染色结果显示,细胞铺展良好,核质比减小;转染pIRES2-EGFP-RI质粒的实验组细胞的黏附、迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05);与两对照组相比,实验组细胞MMP-2和MMP-9的表达水平明显降低,nm23-H1和E-cadherin的表达水平明显升高(P<0.05);动物实验结果显示与对照组相比,实验组的肺转移灶明显减少。结论成功构建的RI真核表达质粒能升高RI基因及蛋白水平的表达,显著抑制了B16细胞的转移和侵袭能力。

分化抑制因子Id2和Id3在肿瘤细胞中的表达

目的:研究分化抑制因子(Id)基因家族在不同肿瘤细胞及健康人外周单个核细胞(PBMC)中的表达情况,为探讨Id基因与肿瘤生长的关系提供实验依据。方法:提取血液病患者和健康人PBMC、人Burk itt’s B淋巴瘤细胞(Daud i)、人T淋巴细胞性白血病细胞(Jurkat)、人慢性髓性白血病细胞(K562)、人组织细胞性淋巴瘤细胞(U937)、人前列腺癌细胞(PC-3)、人胃癌细胞(SGC)、人肺癌细胞(SPC),人卵巢癌细胞(COC2)的细胞总RNA,根据Id2和Id3 cDNA全长序列合成两对引物,运用RT-PCR方法,对以上细胞中Id2和Id3 mRNA的表达进行半定量分析。结果:不同的Id基因在不同人肿瘤细胞中的表达具有一定差异性:Id2在健康人PBMC和各类肿瘤细胞中均呈普遍表达趋势;Id3在健康人淋巴细胞中未见表达或表达水平极弱,而在不同肿瘤细胞中的表达有差异,Id3在PC-3中的表达最高,K562中最低。不同的Id基因在同种细胞中的表达的差异性也较大,Id2 mRNA的表达水平显著高于Id3mRNA的表达水平。Id2、Id3mRNA在血液病患者PBMC中均有不同程度的的表达。结论:不同的Id基因在不同的肿瘤细胞中有不同的表达水平,Id3的异常表达在肿瘤细胞增殖及肿瘤的发生中可能发挥一定的作用。