非小细胞肺癌小活检标本质量与EGFR基因突变检出率关系分析

背景与目的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)是非小细胞肺癌(non-small celllungcancer,NSCLC)患者中突变率最高的基因,准确检测出其突变类型有助于指导患者接受靶向药物治疗从而延长患者生存期。为了得到准确的检查结果,基因检测平台对标本质量有一定要求。已有文献报道标本的肿瘤细胞数量及其比例等会影响EGFR基因突变检出率,本研究旨在分析NSCLC小活检标本质量与突变扩增系统(amplification refractory mutation system, ARMS)法检测EGFR基因突变检出率的关系。方法收集299例小活检肺腺癌病例的临床特征、在显微镜下评估切片的肿瘤细胞数量及比例、标本提取的DNA浓度、EGFR基因突变检测结果,分析标本质量与EGFR基因突变检出率的关系。结果肿瘤细胞数≤500组与>500组EGFR基因突变阳性率分别为40.7%(11/27)、43.8%(119/272),两者间无统计学差异(P=0.764)。DNA浓度≤20.4 ng/μL组及>20.4 ng/μL组的基因突变阳性率分别为42.7%(64/150)、44.3%(66/149),两者间无统计学差异(P=0.776)。肿瘤细胞比例≤30%及>30%组的阳性率分别为29.4%(20/68)、47.6%(110/231),两者间存在统计学差异(P=0.008)。多因素Logistic分析显示男性、甲状腺转录因子1(thyroid transcription factor-1, TTF-1)阴性、有吸烟史及肿瘤细胞比例<30%是影响EGFR基因突变低检出率的主要因素。结论在达到检测的最低要求后,肿瘤细胞比例仍可影响EGFR基因突变检出率。有必要在基因检测切片后再次评估最后一张切片的肿瘤细胞比例,对于肿瘤细胞比例过低的标本,建议通过显微切割等方法富集肿瘤细胞,提高其肿瘤细胞比例,得出更准确的检测结果。对于无法进行肿瘤细胞富集的标本,可行循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA, ct DNA)检测作为补充,若结果仍为阴性才需考虑再次活检获取足够的肿瘤标本进行分子检测。

去除N-连接糖基化对食管鳞状细胞癌及转移淋巴结中PD-L1表达影响

目的探讨N-连接糖基化修饰对食管鳞状细胞癌(ESCC)组织程序性死亡受体-配体1(PD-L1)表达影响及其与临床病理特征关系。方法使用PD-L122C3抗体标记,ESCC组织芯片、MCF-7及NCI-H226细胞切片,分别采用标准处理或经肽N-糖苷酶F(PNGase F)处理后进行免疫组化染色。采用肿瘤细胞比例评分(TPS)、联合阳性评分(CPS)或组织化学评分(H-score)评估组织和细胞切片中PD-L1表达水平。TPS≥1%、CPS≥10定义为PD-L1表达阳性。分析原发灶与转移淋巴结组织PD-L1表达一致性;同时分析原发灶组织PD-L1表达与人口学及临床病理学特征关系。结果50例患者组织样本中有24例正常食管黏膜组织、48例原发灶组织及32例转移淋巴结组织可行PD-L1表达评价。标准处理后正常食管黏膜组织PD-L1均呈阴性表达;原发灶组织PD-L1 TPS、CPS阳性率及中位H-score分别为50.00%、29.17%和1.41分;转移淋巴结组织PD-L1 TPS、CPS阳性率及中位H-score分别为50.00%、68.75%和2.02分。PNGase F处理后5例正常食管黏膜组织出现局灶性PD-L1表达;原发灶组织PD-L1 TPS、CPS阳性率及中位H-score分别为56.25%、52.08%和3.55分;转移淋巴结组织PD-L1 TPS、CPS阳性率及中位H-score分别为59.38%、81.25%和10.33分。PNGase F处理后原发灶与转移淋巴结组织PD-L1 TPS、CPS及H-score均高于标准处理,均P<0.001。PNGase F处理后NCI-H226细胞的PD-L1 TPS和H-score均高于标准处理,t值分别为-18.087和-33.588,P值分别为0.003和0.001。标准处理和PNGase F处理后32例患者原发灶及其转移淋巴结组织PD-L1 TPS及CPS阳性表达一致率均较差。PNGase F处理后原发灶和(或)转移淋巴结组织PD-L1 TPS和CPS阳性患者比例分别为78.13%和87.50%。PNGase F处理并联合检测原发灶组织TPS阳性率高于标准处理,χ^(2)=5.497,P=0.019;CPS阳性率高于标准处理,χ^(2)=23.127,P<0.001。不同性别、年龄、肿瘤最大径、病理分级、N分期和淋巴结转移原发灶组织PD-L1 TPS和CPS阳性率差异均无统计学意义,P>0.05。结论PNGase F处理可提升PD-L122C3抗体的染色强度,PD-L1表达在食管癌原发灶与转移淋巴结组织间具有异质性,对食管癌组织进行PNGase F处理同时评估原发灶及转移淋巴结组织可以提高PD-L1阳性检出率。

不可手术Ⅲ期非小细胞肺癌患者免疫治疗研究进展

长久以来,同步化放疗一直是局部晚期不可手术非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)治疗的基石。在晚期患者免疫治疗与靶向治疗飞速发展的时代,Ⅲ期不可手术NSCLC的治疗困局也由此展开。2017年PACIFIC研究的横空出世为这部分患者带来新希望的同时,也衍生出一些悬而未决的问题。全文就Ⅲ期不可手术NSCLC的最佳治疗模式,特殊人群(表皮生长因子受体突变及肿瘤细胞阳性比例分数<1%)的免疫治疗研究进展作一综述。

多目标系统化学习的PD-L1切片分析方法

在肿瘤尤其是如肺鳞癌(lung squamous cell carcinoma,LUSC)的非小细胞肺癌的治疗中,基于程序性死亡受体-配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)染色切片的阳性肿瘤细胞比例评分(tumor proportion score,TPS)可为治疗方案的选择提供重要依据。肿瘤细胞(tumor cell,TC)的许多参数对癌症诊断至关重要。虽然可以通过计算分析来预测这些参数,但很少有一个统一的框架可以同时获得细胞的不同病理信息。为此,提出了一种多目标学习框架(multi-objective learning pipeline,MOLP),从LUSC的PD-L1切片中预测TPS、细胞数目、细胞核轮廓和类别。主干网络包括两个分支:一个分支通过细胞分析估算TPS,另一个分支直接通过回归分析估算TPS。MOLP通过最小化两个分支的TPS预测差值来提高其鲁棒性。细胞分析支路可实现细胞核分割、分类和计数,不仅增强了TPS估计的可信度,还使得MOLP能够估计肿瘤细胞的外观参数以用于LUSC诊断。在大规模图像集上的实验结果证明了MOLP的可行性和有效性。MOLP预测的TPS与病理医师的评分呈现出统计学上的显著相关性:平均绝对误差仅为4.97(95%置信区间:-0.56~10.49),皮尔逊相关系数为0.97(p<0.001)。

帕博利珠单抗对比多西他赛治疗PD-L1阳性的经治晚期非小细胞肺癌:KEYNOTE-010研究及5年生存更新数据解读

KEYNOTE-010研究是一项随机对照、开放标签、全球多中心、Ⅱ~Ⅲ期研究,比较帕博利珠单抗2 mg/kg、10 mg/kg与多西他赛在PD-L1阳性的经治晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者中的疗效和安全性。该项研究的主要研究终点包括总人群和细胞程序性死亡配体1(PD-L1)肿瘤细胞阳性比例分数(tumor cell proportion score,TPS)≥50%患者的总生存期(overall survival,OS)及无进展生存期(progression-free survival,PFS)。在PD-L1 TPS≥50%的人群及总人群中,帕博利珠单抗不同剂量组的OS均显著性优于多西他赛组。在PD-L1 TPS≥50%的人群中,帕博利珠单抗不同剂量组的PFS均显著性优于多西他赛组。在总人群中,帕博利珠单抗不同剂量组与多西他赛组间的PFS均无显著性差异。在安全性方面,帕博利珠单抗不同剂量组的3~5级不良事件发生率均低于多西他赛组。在5年生存数据更新报告中,PD-L1 TPS≥1%的人群中,帕博利珠单抗组和多西他赛组的5年生存率分别为15.6%和6.5%;PD-L1 TPS≥50%的人群中,帕博利珠单抗组和多西他赛组的5年生存率分别为25.0%和8.2%。在79例完成了35个周期/2年帕博利珠单抗治疗的患者中,5年OS率达到83.0%。KEYNOTE-010研究结果奠定了帕博利珠单抗在PD-L1阳性晚期NSCLC患者二线及以上治疗的地位。

宫颈鳞癌中PD-L1不同抗体免疫组织化学染色的一致性分析

目的探讨宫颈鳞癌中程序性死亡配体1(PD-L1)表达情况及22C3、SP263、E1L3N 3种抗体免疫组化染色的一致性。方法收集解放军总医院两个医学中心89例复发或转移性宫颈鳞癌样本,用PD-L13种克隆号抗体22C3、SP263、E1L3N进行染色,并采用联合阳性评分(CPS)、肿瘤细胞比例评分(TPS)两种评分标准,在不同阈值下对抗体的一致性进行统计学分析。结果宫颈鳞癌在CPS阳性阈值为1时,PD-L1阳性率从高到低依次为22C3(98.31%)、E1L3N(97.75%)、SP263(93.90%);CPS为10时,阳性率依次为E1L3N(76.40%)、22C3(72.88%)、SP263(69.51%);TPS阈值为1%时,阳性率依次为E1L3N(95.51%)、22C3(93.22%)、SP263(92.68%);TPS为10%时,阳性率依次E1L3N(65.17%)、22C3(64.41%)、SP263(60.98%)。当CPS为1或10时、TPS为1%或10%时,E1L3N与22C3、SP263与22C3、SP263与E1L3N均表现较好的一致性(Kappa=0.66~0.98)。无论使用CPS或TPS,组内相关系数检验显示3个克隆号抗体判读数据有高度一致性(ICC分别为0.987、0.984)。结论E1L3N、SP263与22C3之间具有较高的可互换性,为临床检测PD-L1在宫颈癌组织中的表达情况,提供了更多选择。