TP53诱导的糖酵解和凋亡调控子在胰腺癌组织中的表达及其与预后的关系

目的探讨TP53诱导的糖酵解和凋亡调控子(TIGAR)在胰腺癌组织中的表达及其与胰腺癌患者预后的关系。方法收集2015年1月至2016年12月中国医科大学附属盛京医院110例行胰腺癌根治手术患者的癌组织和相应癌旁组织,采用免疫组织化学法检测TIGAR的表达情况,并分析其与临床病理指标的关系。应用Kaplan-Meier生存曲线分析TIGAR表达水平与预后的关系。结果免疫组织化学检查结果显示,TIGAR蛋白主要表达于癌细胞胞质中;癌组织中TIGAR高表达率明显高于癌旁组织[67.3%(74/110)比20.9%(23/110)],差异有统计学意义(P<0.05)。TIGAR表达与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤分化程度、肿瘤最大直径无关(P>0.05),而与淋巴结转移有关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,TIGAR高表达患者中位生存期明显短于TIGAR低表达患者(11个月比27个月),差异有统计学意义(P<0.01)。结论TIGAR在胰腺癌组织中高表达,且与淋巴结果转移有关,TIGAR高表达的胰腺癌患者预后不良。

血清中TIGAR的ELISA建立及初步临床试验

目的建立肿瘤蛋白53(TP53)诱导的糖酵解和凋亡的调控子(TIGAR)的定量酶联免疫吸附试验(ELISA),并探讨血清中TIGAR定量测定在肿瘤患者诊断中的临床应用。方法构建TIGAR原核表达载体并诱导蛋白表达,纯化蛋白后免疫家兔获得多克隆抗体,以此兔抗TIGAR多克隆抗体为包被抗体,以生物素-辣根过氧化物酶标记链霉亲和素(SA-HRP)检测系统,建立TIGAR定量检测的双抗体夹心ELISA。测定40例肿瘤患者及40名对照者的血清TIGAR含量,并探讨其与肿瘤的关系。结果建立的TIGAR定量ELISA拟合曲线的相关系数(r)=0.99,肿瘤患者血清TIGAR含量高于对照组,差异有统计学意义(S=954.5,P<0.01)。结论本研究成功建立了TIGAR定量ELISA,血清TIGAR含量测定对某些肿瘤的研究和临床检测可能有一定价值。

TIGAR基因真核表达载体的构建及在HepG_2细胞中的作用初探

目的:构建TP53诱导的糖酵解和凋亡调控子(TIGAR)全长cDNA的真核表达载体pEGFP-TIGAR,观察TIGAR在人肝细胞HepG2中的作用。方法:RT-PCR技术扩增获得TIGAR全长cDNA,将扩增的产物克隆,经酶切、DNA测序鉴定正确,构成pEGFP-TIGAR的真核表达重组质粒。利用脂质体将重组质粒转染入HepG2细胞,流式细胞仪和TUNEL法检测细胞凋亡、流式细胞仪检测细胞周期、MIB-1(Ki-67抗原测定)法检测细胞增殖、实时荧光PCR检测mRNA表达和Western-blot检测蛋白质的表达。结果:构建完成的真核表达重组质粒pEGFP-TIGAR,经DNA测序与GenBank中的人TIGARcDNA序列一致。荧光显微镜观察到转染重组质粒的细胞中有绿色荧光蛋白的表达。检测结果显示,转染pEGFP-TIGAR质粒的HepG2晚期凋亡细胞明显减少(P<0.05);S期细胞百分数则明显增加(P<0.05),增殖能力明显增高(P<0.05)。结论:本实验成功构建了pEGFP-TIGAR真核表达质粒,过表达的TIGAR可降低HepG2细胞发生晚期凋亡和促进细胞增殖,为进一步研究TIGAR基因在肿瘤细胞中作用提供了基础。

P53家族新成员P63

p53 基因作为广泛存在的肿瘤抑制基因,在肿瘤发生发展中起着重要作用。最近发现两类与 P53 蛋白具有较大同源性的家族成员:P63 和P73。它们都能激活 P53 相关靶基因,抑制增殖,诱导凋亡,但它们在肿瘤发生及细胞生长发育的调控中各自起着既相关又特别的作用。