微小RNA-103a-3p通过肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1/P53对骨质疏松症的影响

目的探讨微小RNA(miR)-103a-3p调控细胞肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1(TRIAP1)对成骨细胞分化以及去卵巢小鼠骨量的影响。方法MC3T3-E1细胞分为正常对照(NC)组、miR-103a-3p-NC组、miR-103a-3p模拟(mimc)组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1-NC组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1 mimic组。Real-time PCR检测细胞miR-103a-3p、TRIAP1、P53的mRNA表达,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡,免疫荧光染色和茜红素染色检测细胞骨架F-actin表达和矿化情况,ELISA检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性。24只雌性小鼠设为sham组、骨质疏松症(OP)组、miR-103a-3p antagonist-NC组和miR-103a-3p antagonist组,每组6只摘取双侧卵巢制备OP模型,sham组仅分离卵巢组织周围脂肪。测定骨组织miR-103a-3p、TRIAP1、P53、ALP、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达,microCT测定骨密度(BMD)、骨矿物质含量(BMC),HE染色观察骨组织病理改变。结果细胞转染miR-103a-3p mimic后,miR-103a-3p及P53表达升高、TRIAP1表达降低,细胞增殖降低、凋亡增加,F-actin表达减弱,钙结节数量减少,ALP活性降低(P<0.01);而在增加转染TRIAP1 mimic后,以上miR-103a-3p mimics导致的结果均得到显著逆转(P<0.01)。OP组小鼠骨组织miR-103a-3p、P53表达升高,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达降低,BMD、BMC降低,骨组织结构破坏(P<0.05);miR-103a-3p antagonist组小鼠骨组织miR-103a-3p及P53表达降低,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达升高,BMD、BMC升高,骨组织结构改善(P<0.05)。结论MiR-103a-3p可介导TRIAP1/P53抑制成骨细胞增殖及矿化,而miR-103a-3p拮抗治疗可减少OP小鼠骨量丢失。

微RNA-132-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡

目的 研究微RNA(miR)-132-3p在葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡中的作用及其作用机制。方法 该研究起止时间为2018年2月至2019年7月。定量聚合酶链反应(qPCR)检测正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19和葡萄膜黑色素瘤细胞SP6.5、M23中miR-132-3p表达。SP6.5细胞中转染miR-132-3p干扰质粒(anti-miR-132-3p)、第10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)过表达质粒(pcDNA3.1-PTEN)或共转染anti-miR-132-3p和PTEN干扰质粒(si-PTEN),MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法检测PTEN、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,生物信息学预测结合双萤光素酶报告实验分析miR-132-3p与PTEN的靶向关系。结果 与ARPE-19细胞相比,SP6.5、M23细胞中miR-132-3p表达量(0.26±0.02比0.94±0.09、0.81±0.08)明显升高(P<0.05)。与anti-miR-132-3p阴性对照(anti-miR-NC)组相比,anti-miR-132-3p组24 h、48 h、72 h的细胞活性(0.51±0.05比0.30±0.03、0.97±0.09比0.45±0.05、1.40±0.14比0.76±0.07)、cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量显著降低(P<0.05),细胞凋亡率[(8.03±0.68)%比(21.51±2.06)%]、P21、Bax水平明显提高(P<0.05),与过表达PTEN相同。miR-132-3p与PTEN之间有靶向调控关系。抑制PTEN能逆转抑制miR-132-3p对SP6.5细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用。结论 miR-132-3p通过直接靶向PTEN调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡。

肿瘤蛋白53靶基因1靶向微小RNA-33a对胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨肿瘤蛋白53靶基因1(TP53TG1)对胶质瘤细胞增殖、凋亡及迁移侵袭的影响和机制。方法本研究起止时间为2019年1—6月,人正常神经胶质细胞(HA)和神经胶质瘤细胞U251购于上海斯信生物科技有限公司。实时定量PCR(qRT-PCR)检测HA和U251细胞中TP53TG1的表达水平。构建过表达TP53TG1的U251细胞株,噻唑蓝(MTT)法用于评估细胞增殖能力,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell法测定迁移和侵袭数,Western blotting检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白激酶抑制剂(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl相关x蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、E钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平。双荧光素酶报告基因实验和Western blotting验证TP53TG1和微小RNA-33a(miR-33a)的靶向关系。结果与人正常神经胶质细胞HA比较,神经胶质瘤细胞U251中TP53TG1的表达水平[(1.03±0.10)比(0.28±0.03)]显著降低。过表达TP53TG1能够显著抑制U251细胞活力,下调Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白水平,减少细胞迁移数[(138±14.01)个比(72±7.26)个]和侵袭数[(126±12.54)个比(65±6.63)个],上调P21、Bax和E-cadherin蛋白表达,促进细胞凋亡[(8.16±0.86)%比(22.57±2.65)%]。TP53TG1能够靶向负性调控miR-33a的表达。过表达miR-33a能够逆转miR-33a对U251细胞增殖、凋亡[(22.68±2.69)%比(11.36±1.20)%]、迁移[(70±7.05)个比(108±11.37)个]和侵袭[(70±7.05)个比(108±11.37)个]的影响。结论TP53TG1通过靶向miR-33a抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

PARP-1蛋白抑制剂降低TNF-α介导的人心肌细胞生长抑制和凋亡

目的:研究PARP-1蛋白抑制剂对由肿瘤坏死因子α(TNF-α)介导的人心肌细胞生长抑制和凋亡的干预作用。方法:MTT比色法检测TNF-α抑制人心肌细胞HCM细胞株生长的IC_(50)浓度,以及PARP-1蛋白抑制剂干预对HCM细胞生长抑制率的影响;流式细胞术检测TNF-α和PARP-1蛋白抑制剂对HCM细胞的细胞凋亡比率的影响;RT-PCR和Western blot分析PARP-1蛋白抑制剂干预对PARP-1基因的mRNA和蛋白水平表达影响。结果:TNF-α对HCM细胞具有明显细胞增殖抑制和细胞凋亡诱导作用,并且上调PARP-1基因mRNA水平,促进PARP-1蛋白裂解(P<0.05);PARP-1蛋白抑制剂干预后,TNF-α对HCM细胞的生长抑制和诱导细胞凋亡作用均减弱(P<0.05),PARP-1基因表达下调(P<0.05),PARP-1蛋白和其裂解产物与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:通过PARP-1蛋白抑制剂阻断PARP-1蛋白活性和基因的转录水平可以减弱TNF-α对HCM的细胞生长抑制和细胞凋亡诱导作用。

XPO1抑制剂KPT-330对人胰腺癌细胞株MIA PaCa-2增殖和凋亡的影响

背景:XPO1(exportin 1)是核质转运的重要介质之一,在多种人类恶性肿瘤中表达增高,参与肿瘤发生、发展进程,是恶性肿瘤的潜在治疗靶点。目的:探讨XPO1在人胰腺癌细胞中的表达、定位以及XPO1抑制剂KPT-330对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:以蛋白质印迹法检测6株人胰腺癌细胞株和2株人永生化正常胰腺导管上皮细胞株中的XPO1表达,选择XPO1表达量最高的人胰腺癌细胞株MIA PaC a-2进行后续实验。予MIA PaC a-2细胞不同浓度KPT-330(0. 03、0. 3、3μmol/L)或DMSO处理,免疫荧光实验检测XPO1在细胞中的分布,CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞分析检测细胞周期和细胞凋亡,蛋白质印迹法检测XPO1和凋亡相关蛋白caspase-3、PARP表达变化。结果:XPO1主要聚集分布于MIA PaC a-2细胞的核膜,经KPT-330处理后,XPO1的核膜高聚现象消失。与DMSO组相比,KPT-330可抑制MIA PaC a-2细胞的XPO1表达,并能抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,作用呈浓度依赖性。机制研究显示KPT-330可诱导MIA PaC a-2细胞发生细胞周期S期阻滞,上调cleavedcaspase-3、cleaved-PARP表达。结论:XPO1抑制剂KPT-330可能通过调节细胞周期分布、诱导细胞凋亡而抑制人胰腺癌细胞增殖。

P53凋亡刺激蛋白2分子调控机制的研究进展

P53凋亡刺激蛋白家族(apoptosis stimulating pr-oteins of p53 family, ASPP)是英国科学家Sullivan和卢欣的团队在2001年发现的一类可以调控肿瘤细胞凋亡的家族,其成员包括P53凋亡刺激蛋白1(apop-tosis stimulating protein 1 of p53, ASPP1)、ASPP2和ASPP2家族抑制蛋白([inhibitory member of the ASPPfamily, iASPP)［1-2]。

p53-miR-34a-SIRT1反馈环在血管内皮祖细胞复制性衰老过程中的调控作用及机制

目的:研究p53-miR-34a-SIRT1反馈环在血管内皮祖细胞(EPC)复制性衰老过程中的调控作用及机制。方法:培养并鉴定由脐带血来源的EPC;观察第三代和第六代EPC在衰老、凋亡、周期和血管形成等方面的差异;检测第三代和第六代EPC中p53、乙酰化的p53(Ac-p53)、沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)的表达情况;构建携带微小核糖核酸(miR)-34a抑制因子的慢病毒载体,明确外源性miR-34a抑制因子能否延缓第六代EPC的凋亡。结果:成功培养了脐带血来源的EPC。第六代EPC的衰老率和凋亡率明显高于第三代EPC,细胞周期主要停留在G0/G1期;第六代EPC的p53表达量高于第三代EPC,Ac-p53和SIRT1表达则相对较低,组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。转染携带miR-34a抑制因子的慢病毒载体后,第六代EPC衰老情况有所改善,血管形成能力也增强,晚期凋亡率明显减少。结论:p53-miR-34a-SIRT1是EPC复制性衰老过程中的重要反馈调节机制,miR-34a抑制因子可能是延缓EPC衰老的靶点。

p33^(ING1)——一种新的肿瘤抑制蛋白

ｐ３３ＩＮＧ１——一种新的肿瘤抑制蛋白黄君富房殿春罗元辉（第三军医大学西南医院分子生物学实验室，重庆４０００３８关键词ｐ３３ＩＮＧ１ｐ５３细胞生长抑制细胞凋亡在肿瘤的发生、发展过程中，抑癌基因的失活起着重要作用。研究得最多的是ｐ５３基因。ｐ５３的失活...

p73肿瘤抑制蛋白的调控和抗癌途径的研究进展

p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因．p53家族中新成员p73的发现为癌症细胞生物学提供了新思路。p73蛋白不仅在结构上与p53相似，在功能上也极其相似。目前越来越多的治疗方法被描述为是通过选择性激活p73的促恶性肿瘤细胞凋亡。本文将阐述最有前景的p73肿瘤抑制蛋白的抗癌途径分子机制。

PRDX1抑制蛋白酶体抑制剂诱导人甲状腺癌细胞凋亡机制探讨

目的:初步探讨过氧化还原蛋白1(peroxirodoxin 1,PRDX1)抑制蛋白酶体抑制剂诱导人甲状腺癌细胞凋亡的机制。方法:选取人甲状腺癌细胞,设立随机序列核酸siRNA、siASK1、siPRDX1和siASK1+siPRDX1组,分别用培养液、lactacystin和MG132培养细胞;用蛋白印迹法检测PRDX1、ASK1、p38、JNK1/2、p-ASK1、p-P38和p-JNK1/2在各组甲状腺癌细胞中的表达;用微小RNA干扰技术转染细胞;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:MG132处理组中,p-ASK1是对照组的1.5倍(F=214.14,P<0.001),其下游效应子p-p38和p-JNK1/2分别为对照组的1.34(F=216.75,P<0.001)和1.94倍(F=1 601.68,P<0.001);siASK1下调MG132介导的p-ASK1为随机序列组的0.58倍(F=1 136.82,P<0.001),p-p38为随机序列组的0.73倍(F=507.00,P<0.001),p-JNK1/2为随机序列组的0.51倍(F=6 087.48,P<0.001)。甲状腺癌细胞凋亡率降低为34.25%,显著低于于随机序列组的51.98%,F=18.39,P=0.013。MG132处理组中,siPRDX1组甲状腺癌细胞凋亡率为68.99%显著高于随机序列组的49.58%和siPRDX1+siASK1联合组的41.28%,而siASK1组的甲状腺癌细胞凋亡率为31.85%,显著低于上述两组,组间差异有统计学意义,F=30.13,P<0.001。结论:PRDX1通过负向调节ASK1活性及ASK1-p38和ASK1-JNK通路,抑制ASK1介导的细胞凋亡进而消减MG132对甲状腺癌细胞毒性效应。

以保罗样激酶1为靶点的抗肿瘤药物的筛选及活性评价

目的利用酵母模型进行保罗样激酶1(Polo-like kinase 1,PLK1)抑制剂的高通量筛选,并初步评估活性化合物的体外抗肿瘤效果。方法采用噻唑蓝比色法(MTT法)检测初筛阳性化合物对不同细胞系增生的影响,酶联免疫吸附测定法(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)分析化合物对体外纯化的PLK1激酶的作用效果,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞周期分布和凋亡率,免疫印迹(Western blotting)检测化合物对周期蛋白B1(cyclin B1)和PLK1的作用。结果利用酵母模型初筛得到3个阳性化合物,MTT法检测显示1号和3号化合物能抑制多种肿瘤细胞的增生而对正常细胞的毒性很小,ELISA结果显示2号和3号化合物对体外纯化的PLK1几乎无抑制作用,FCM检测显示1号化合物处理组G2/M期细胞比例高于对照组,Western blotting表明1号化合物不影响PLK1的蛋白表达,能导致cyclin B1的表达增加。结论 1号化合物通过抑制PLK1激酶的活性发挥抗肿瘤作用而不影响PLK1的蛋白表达,有望成为靶向PLK1的抗肿瘤先导化合物。

干扰TRIAP1表达增强口腔鳞状细胞癌细胞对顺铂敏感性实验研究

目的:探讨肿瘤蛋白53调控的细胞凋亡抑制剂1(TRIAP1)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞顺铂(DDP)敏感性的影响及作用机制。方法:常规培养OSCC细胞系Cal-27细胞,采用分次DDP诱导递增法建立DDP耐药OSCC细胞株(DDP-Cal-27),MTS检测DDP-Cal-27细胞对DDP的敏感性,Western blot检测DDP-Cal-27细胞中TRIAP1的表达。并采用TRIAP1干扰慢病毒构建TRIAP1敲低的DDP耐药OSCC细胞株(sh-TRIAP1)及对照无关序列感染的DDP耐药OSCC细胞株(sh-NC),Western blot检测sh-TRIAP1细胞中TRIAP1的表达,MTS检测sh-TRIAP1细胞对DDP的敏感性。sh-NC组和sh-TRIAP1组细胞经DDP处理后,平板克隆检测各组细胞平板克隆形成能力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,Western blot检测各组细胞中凋亡蛋白Caspase 9和Caspase 3蛋白的表达,耐药相关蛋白P-gp和ABCG2的表达。结果:与Cal-27细胞相比,DDP-Cal-27细胞对DDP的敏感性降低,DDP-Cal-27细胞中TRIAP1的表达增加(均P<0.05)。TRIAP1干扰慢病毒感染DDP-Cal-27细胞后,与sh-NC组相比,sh-TRIAP1组细胞中TRIAP1的表达降低和对DDP的敏感性增强(均P<0.05)。与sh-NC组相比,DDP处理的sh-TRIAP1组细胞平板克隆形成能力降低,细胞凋亡率增加(均P<0.05),sh-TRIAP1组细胞中凋亡蛋白Caspase 9和Caspase 3蛋白的表达增加,耐药相关蛋白P-gp和ABCG2表达降低(P<0.05)。结论:TRIAP1可能通过调控凋亡相关蛋白增加OSCC细胞DDP敏感性,是治疗OSCC的潜在靶点。

硫氧还蛋白还原酶及其抑制剂在肿瘤治疗中的研究进展

硫氧还蛋白还原酶（TrxR）是巯基调节系统中重要的组成部分，其C末端的硒代半胱氨酸残基是催化位点，可与各类底物和抑制剂相结合。许多肿瘤细胞均高表达TrxR，其在肿瘤耐药方面也起着重要作用。大量天然和人工合成的TrxR抑制剂均有抗癌作用，可以诱导应激反应，导致细胞周期停滞，甚至引起凋亡，可单独、联合或辅助用于肿瘤治疗。

蛋白酶体抑制剂的抗肿瘤机制及其在白血病治疗中的应用

蛋白酶体抑制剂是一种新型的肿瘤靶向治疗药物,其通过阻断泛素-蛋白酶体通路,影响细胞内多个短周期蛋白的降解,诱导细胞凋亡,在体内、外均已显示出良好的抗肿瘤效应。研究表明蛋白酶体抑制刺主要通过抑制NF_(-k)B的激活、稳定P_(53)等蛋白的表达等机制促进细胞的凋亡。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275提高宫颈癌SiHa细胞放射敏感性实验研究

【目的】探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人宫颈癌SiHa细胞放射敏感性的影响及其可能的机制。【方法】应用MS-275体外作用于人宫颈癌SiHa细胞,定量PCR方法检测NF-kB基因和PUMA基因mRNA的表达,Western blotting法检测细胞乙酰化组蛋白H4的表达,应用6MV直线加速器,分别以0、2、4、6、8 Gy不同剂量的X线照射细胞,流式细胞仪检测SiHa细胞凋亡率,克隆形成实验检测SiHa细胞的放射敏感性。【结果】人宫颈癌SiHa细胞经MS-275体外作用后,乙酰化组蛋白H4表达增加,并随MS-275剂量的增加而增加,同时细胞PUMA基因mRNA表达随MS-275剂量升高而增加,NF-κB基因mRNA表达随MS-275剂量增加而降低。与对照组相比,MS-275各组细胞凋亡率增高,并随MS-275剂量的增加而升高,SF2值降低。【结论】MS-275体外能提高人宫颈癌SiHa细胞对放射线损伤的敏感性;增加乙酰化组蛋白H4表达,下调NF-κB基因表达和上调PUMA基因表达是其可能的作用机制。

组蛋白甲基转移酶在造血干细胞调控和白血病发生中的作用

组蛋白修饰是生物表观遗传中重要的调控机制之一，由组蛋白甲基转移酶参与的组蛋白甲基化不仅对造血干细胞的自我更新和维持起关键作用，而且可调节众多与白血病发生和发展有关的蛋白表达及活性，从而导致不同类型白血病的发生并影响其预后。应用组蛋白甲基转移酶抑制剂调控组蛋白甲基化水平，能够诱导肿瘤细胞凋亡从而抑制白血病的发生与发展，因此组蛋白甲基转移酶抑制剂的研究受到人们的广泛关注。我们从组蛋白甲基转移酶在造血干细胞调控及白血病发生中的作用以及组蛋白甲基转移酶抑制剂在白血病治疗中的作用等方面的研究进展综述如下。

X线辐射对大鼠卵巢形态与功能的影响

目的:探讨X线电离辐射对大鼠卵巢形态与功能的影响。方法:实验分0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0Gy剂量组,每组各10只大鼠。采用HE染色观察各级卵泡数目,免疫组化法观察P53、Bcl-2蛋白表达,TUNEL法测定颗粒细胞中凋亡小体的表达。结果:随大鼠机体接受X线照射剂量增加,始基卵泡、初级卵泡、次级卵泡数目随之减少(P<0.05或P<0.01),以始基卵泡减少为著;不同剂量X线照射后窦状卵泡数目与假照射组差异无统计学意义(P>0.05)。当吸收剂量为0.2Gy,卵巢颗粒细胞中P53蛋白及凋亡小体表达较假照射组减少,Bcl-2蛋白有所增多(P<0.05或P<0.01),而吸收剂量在0.4～1.0Gy时,P53蛋白及凋亡小体的表达水平随吸收剂量的增加而上升(P<0.05或P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平减少(P<0.01)。结论:X线可使大鼠卵巢组织中始基卵泡的数目有所减少,促进细胞发生凋亡,进一步影响颗粒细胞的内分泌功能。