TP63对非小细胞肺癌细胞吉非替尼耐药性及DSC3/DSG3基因表达的影响

目的探讨肿瘤蛋白(TP)63对非小细胞肺癌细胞吉非替尼耐药性及桥粒芯胶蛋白(DSC)3/桥粒芯糖蛋白(DSG)3的影响。方法体外培养人非小细胞肺癌吉非替尼敏感细胞株PC9、吉非替尼耐药细胞株PC9/GR,将PC9/GR细胞随机分为对照组、TP63-siRNA组(转染TP63-siRNA)和NC-siRNA组(转染NC-siRNA),用细胞计数试剂盒(CCK)-8法检测转染后细胞吉非替尼半数抑制浓度(IC50)和细胞增殖情况;流式细胞术检测PC9/GR细胞凋亡情况;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室法检测细胞侵袭;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞TP63、DSG3、DSC3 mRNA表达;蛋白印迹分析法检测各组细胞TP63、DSG3、DSC3蛋白表达。结果与PC9细胞相比,耐药细胞PC9/GR中TP63 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与对照组和NC-siRNA组相比,TP63-siRNA组PC9/GR细胞IC50值,细胞增殖、迁移、侵袭能力,TP63、DSG3、DSC3 mRNA及蛋白表达显著下降,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论TP63在PC9/GR细胞中高表达,干扰TP63表达可抑制DSC3/DSG3表达,逆转PC9/GR对吉非替尼耐药性。

人乳头瘤状病毒阳性患者PAX1、TP63基因启动子甲基化状态检测及临床意义

目的探究宫颈人乳头瘤状病毒(human papilloma virus,HPV)感染阳性患者宫颈病变程度与配对盒家族基因1(paired box-1,PAX1)、肿瘤蛋白63(tumor protein 63,TP63)基因启动子甲基化状态的关系,分析其检测的临床意义。方法收集2021年12月—2022年12月于琼海市人民医院就诊的128例疑似宫颈病变合并HPV感染阳性患者的宫颈组织细胞标本,根据病理检查结果分为低级别鳞状上皮内病变组(low grade squamous intraepithelial lesion,LSIL,n=43)、高级别鳞状上皮内病变(high grade squamous intraepithelial lesion,HSIL,n=51)和宫颈癌组(n=34)。采用第二代杂交捕获法检测HPV病毒定量,亚硫酸氢盐测序法检测PAX1、TP63基因启动子甲基化度,实时定量PCR法检测宫颈组织PAX1、TP63相关mRNA表达;评估PAX1、TP63甲基化程度对宫颈上皮内瘤样病变2+(cervical intraepithelial neoplasia 2+,CIN2+)的诊断效能。结果各组HR-HPV定量结果比较,差异有统计学意义(P>0.05)。128例患者中,共检出PAX1基因启动子甲基化49例(38.28%),TP63基因启动子甲基化55例(42.97%)。宫颈癌组PAX1、TP63基因启动子甲基化率分别为67.65%、73.53%,HSIL组分别为43.14%、49.02%,LSIL组分别为9.30%、11.63%,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组PAX1、TP63 mRNA表达水平分别为(0.34±0.08)、(0.45±0.13),HSIL组分别为(0.72±0.11)、(0.63±0.09),LSIL组分别为(1.04±0.09)、(0.87±0.11),差异有统计学意义(P<0.05)。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析结果显示,PAX1、TP63基因启动子甲基化及其联合检测诊断CIN2+病变的曲线下面积(area under curve,AUC)值分别为0.793、0.842和0.857,灵敏度分别为77.78%、83.33%和77.78%,特异度分别为80.85%、85.11%和93.62%;联合检测可提高CIN2+病变诊断的特异度。结论PAX1、TP63基因启动子甲基化水平与HPV感染阳性患者的宫颈病变关系密切,可作为临床诊断CIN2+病变的潜在辅助指标。