真核细胞起始因子3a与妇科恶性肿瘤关系的研究进展

近年来,宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌三大妇科恶性肿瘤发病率呈上升趋势,严重影响女性患者的生命健康,而妇科肿瘤的发生发展与蛋白功能的调控有关。真核细胞起始因子3(eIF3)a是eIF3最大的组成亚基,是参与蛋白质形成的重要因子,eIF3a在宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌组织中均呈高表达,并通过多种机制参与肿瘤的发生发展及转移,同时与肿瘤化疗药物、放疗反应密切相关,影响患者预后。未来eIF3a有望成为妇科恶性肿瘤治疗的新靶点,对改善治疗效果及患者预后具有重要意义。

真核细胞翻译起始因子与肿瘤发生发展的研究进展

目的:探讨eIF4E的功能和调控及其作为细胞信号通路的结点,分析其治疗肿瘤策略的研究情况和存在的问题及前景。方法:以肺部肿瘤、eIF4E和靶向治疗为关键词检索万方全文数据库、PubMed和PMC数据库,筛选2002～2008年相关文献。重点是有关研究较多的eIF4E的功能、调控、作为细胞通路的结点,细胞翻译为肿瘤治疗靶点及相关研究。最终选择其中25篇文献作为研究。结果:eIF4E是细胞翻译中的重要限速因子,具有潜在广泛的抗瘤谱,针对eIF4E的靶向治疗策略非常具有吸引力。eIF4E在转录起始中、翻译和细胞核内mRNA生成和细胞增殖中起作用,受4E-BPs、磷酸化、PML、组织特异性因子所调控;是RAS和MAP激酶信号通路,PI3K激酶信号通路,TSC、RHEB和mTOR信号通路的结点,靶向此结点可设计直接和间接两种途径,目前在人类肿瘤移植物中,用第二代反义寡核苷酸(ASOs)能有效下调肿瘤中eIF4E的含量及蛋白质的表达,诱导凋亡,抑制VEGF、CyclinD1、c-myc、Bcl-2和Survivin的表达,抑制类血管结构形成。结论:eIF4E在恶性肿瘤靶向治疗中地位突出,其治疗应用有很大的研究空间。

头颈部肿瘤组织中真核细胞翻译起始因子的表达及意义

采用免疫组化SABC法检测40例头颈部恶性肿瘤及10例头颈部良性病变组织中的真核细胞翻译起始因子(eIF4E)。结果显示,恶性肿瘤eIF4E表达均为阳性,良性病变为阴性或弱阳性表达,恶性肿瘤eIF4E积分与其TNM分期、病理分级相关(P均<0.05)。认为eIF4E在头颈部肿瘤的发生、发展及转移中发挥重要作用,可作为判断头颈部肿瘤恶性程度和预后的指标之一。

真核细胞翻译起始因子在头颈部肿瘤中的表达

目的探讨真核细胞翻译起始因子(eIF4E)在头颈部肿瘤中的表达及其临床意义。方法采用免疫印迹方法(Western Blot)检测40例头颈部恶性肿瘤和10例头颈部良性病变中eIF4E抗原的表达。结果所有头颈部恶性肿瘤均有eIF4E蛋白表达,而良性病变组织中eIF4E蛋白表达较少,所有的特异性条带均位于25.0 KD的位置,二者差异有统计学意义(P<0.05)。在头颈部恶性肿瘤中eIF4E表达与患者年龄、性别、病变部位及病理类型无关(P>0.05);eIF4E表达与TNM分期、病理分级相关(P<0.05)。初诊病例与复发病例之间eIF4E表达有统计学意义(P<0.05)。结论eIF4E在头颈部肿瘤的发生、发展及转移中可能起重要作用。

GPC5过表达对人肺腺癌A549肿瘤起始细胞生物学功能的影响

目的:探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-5(glypican 5,GPC5)基因对人肺腺癌A549肿瘤起始细胞(cancer-initiating cells,CICs)生物学功能的影响。方法 :采用前期构建的过表达GPC5慢病毒载体稳定转染的细胞株GPC5-A549,无血清培养方法富集A549细胞中的CICs微球,通过定量分析检测微球大小,流式细胞术检测CD133阳性细胞比率,Matrigel和Tanswell小室检测细胞侵袭迁移能力,Western blot检测上皮细胞间质化相关蛋白表达。结果:与对照组相比,过表达GPC5后A549细胞中CICs微球形成数目明显减少,体积变小,CD133阳性率明显下降(P<0.05);细胞侵袭、迁移能力显著降低(P<0.05);E-cadherin的蛋白表达明显上调,Vimentin、N-cadherin的表达显著被抑制(P<0.05)。结论:GPC5过表达能够抑制肺腺癌细胞株A549中CICs的发生、侵袭和迁移,调控上皮细胞间质化相关蛋白表达。

非小细胞肺癌中circ-SOX4调控起始细胞干性并通过Wnt通路促进肿瘤进展的机制探讨

目的探讨circ-SOX4表达与非小细胞肺癌(NSCLC)起始细胞(TICs)干性的关系以及其促进NSCLC进展的机制。方法利用数据库获得NSCLC原发肿瘤的环状RNA(circRNA)表达信息并验证。采用分子生物学技术检测circ-SOX4对肺癌TICs干性、增殖及凋亡的影响,并检测不同通路抑制剂对上述作用的影响。结果数据库结果显示:在ALDH1^(+)肿瘤细胞中,hsa_circ_0000497、hsa_circ_0018082、hsa_circ_0024105、hsa_circ_0044360及hsa_circ_0131457表达显著上调。实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测结果显示:相较于CD133-肺癌细胞,hsa_circ_0131457(circ-SOX4)在CD133^(+)细胞中的表达显著上调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与阴性对照相比,过表达circ-SOX4使CD133-H-1944/Calu-1细胞中CD133表达显著上调,而敲减circ-SOX则显著下调CD133^(+)细胞中CD133表达,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与阴性对照相比,敲减circ-SOX4能显著抑制体外培养48、72、96 h时CD133^(+)H-1944/Calu-1细胞的增殖,减少CD133^(+)H-1944/Calu-1细胞的克隆形成,增加CD133^(+)H-1944/Calu-1细胞的凋亡,下调干性基因OCT4、Nanog、SOX2和SOX4的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与阴性对照相比,过表达circ-SOX4能显著促进体外培养48、72、96 h时CD133-Calu-1细胞的增殖,增加CD133-Calu-1细胞克隆形成,抑制CD133-Calu-1细胞凋亡,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Wnt通路抑制剂KYA1797 k可逆转过表达circ-SOX4对上述细胞的影响。相较于单纯过表达circ-SOX4,过表达circ-SOX4联合KYA1797 k能显著抑制体外培养48、72和96 h时CD133-Calu-1细胞的增殖,减少CD133-Calu-1细胞克隆形成,并增加CD133-Calu-1细胞凋亡,差异均具有统计学意义(P<0.05)。而RO4929097(Notch通路抑制剂)、LY294002(PI3K/AKT通路抑制剂)和CHS828(NF-kB通路抑制剂)对上述转染细胞的增殖和凋亡无显著影响,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论circ-SOX4在NSCLC起始细胞中表达显著上调并正向调控TICs干性,circ-SOX4通过Wnt通路促进NSCLC增殖并抑制其凋亡。

力达霉素对肝肿瘤起始细胞表型的调控作用及机制探讨

目的探讨力达霉素对肝肿瘤起始细胞表型的调控作用及机制。方法运用裸鼠皮下移植瘤模型,对力达霉素治疗肝癌Huh7肿瘤起始细胞效果展开检测,回顾相关作用机制。结果力达霉素可使肿瘤体积缩小,将肿瘤的发生时间推迟。深入研究示,力达霉素在肿瘤起始细胞作用的可能分子机制为:力达霉素在体内或体外,均可使CSK3β/β-catenin通路活性下调。结论力达霉素可在体内、体外对Huch7肝肿瘤起始细胞抑制,并使CSK3β/β-catenin通路活性下调,对肿瘤起始细胞被力达霉素抑制的可能分子机制有所揭示,为临床实验提供参考依据。

真核细胞起始因子4E与C-myc在甲状腺乳头状癌中的表达

目的观察真核细胞起始因子4E(eukaryotic initiation factor4E,eIF4E)及C-myc在甲状腺乳头状癌中的表达,并探讨两者间的相关性及它们与甲状腺乳头状癌的侵袭、转移等临床病理特征间的关系。方法采用免疫组化EnVin-sion法检测66例甲状腺乳头状癌、20例结节性甲状腺肿伴乳头状增生及上述病例的病变周围正常甲状腺组织中eIF4E和C-myc的表达情况。结果在正常甲状腺、结节性甲状腺肿伴乳头状增生及甲状腺乳头状癌中,eIF4E的阳性率分别为11.6%(10/86)、50.0%(10/20)和84.8%(56/66)(P<0.01),C-myc的阳性率分别为21.0%(18/86)、50%(10/20)和78.8%(52/66)(P<0.01)。eIF4E仅与乳头状癌的腺外侵袭和淋巴结转移有关(均P<0.05),C-myc仅与乳头状癌的淋巴结转移有关(P<0.01)。eIF4E及C-myc在乳头状癌中的表达呈正相关(rs=0.327,P<0.05)。结论与癌旁正常组织和良性病变相比,eIF4E和C-myc在甲状腺乳头状癌中存在过表达。eIF4E的过表达与甲状腺乳头状癌的腺外侵袭和淋巴结转移有关,C-myc的过表达与甲状腺乳头状癌的淋巴结转移有关,提示二者在甲状腺乳头状癌的进展中可能发挥重要的作用。

特异性脱氧核酶对喉癌真核细胞起始因子4E基因mRNA的体外切割作用

目的研究特异性脱氧核酶(10-23DNAzyme)对喉癌真核细胞起始因子4E(eukaryotici nitiation factor-4E,eIF4E)基因mRNA的体外切割作用。方法设计合成针对原癌基因eIF4EmRNA编码区的1102、1289、1226位点的3个10-23DNAzyme-eIF4E,用内切酶XhoI将含有eIF4E基因mRNA的pGEM-7zf+eIF4E质粒消化成线性。以此为模板体外转录出用[α-32P]UTP标记的靶eIF4E基因编码区mRNA。在37℃,pH7.5,Mg2+离子50mmol/L条件下,分别与3个10-23DNAzyme-eIF4E(1μmol/L)混合进行切割反应,并比较不同Mg2+离子浓度下酶对靶mRNA的切割活性。反应产物在8%变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离并行放射自显影,应用凝胶成像分析仪评价酶的切割效率。结果在设定条件下,3个10-23DNAzyme-eIF4E对eIF4E基因mRNA均有切割活性,且随着Mg2+浓度越高,酶的切割活性增强。结论3个10-23DNAzyme-eIF4E能有效切割eIF4E基因编码区mRNA,且切割效率与Mg2+浓度有关。

siRNA对人食管癌EC9706细胞真核起始因子4E表达的影响

目的探讨siRNA对人食管癌EC9706细胞中eIF4E表达的影响。方法针对GeneBank中eIF4E基因的不同靶点,设计并合成两条特异siRNA及一条无义siRNA寡核苷酸模板,利用体外转录法合成siRNA,在脂质体介导下以150ng/μl、200ng/μl和250ng/μl三种浓度转染EC9706细胞,分别培养24h、48h、72h,同时设正常对照组。采用免疫细胞化学及原位杂交技术检测转染前后EC9706细胞中eIF4E蛋白和mRNA的表达;应用流式细胞技术检测转染前后EC9706细胞周期的变化情况。结果转染siRNA后细胞形态发生明显改变。不同浓度的两条特异siRNA转染细胞后,eIF4E蛋白及mRNA表达量均较正常对照组降低,并且具有显著的剂量依赖性(P<0.05),但两转染组之间相比,差异无统计学意义(P>0.05);无义siRNA未表现出对eIF4E基因表达的抑制效应(P>0.05);两条特异siRNA转染组与无义siRNA转染组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。三种不同浓度siRNA转染细胞72h后与无义转染组及正常对照组相比,G0/G1期细胞比例显著增加,S期细胞比例相对减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论特异性siRNA能有效抑制人食管癌EC9706细胞中eIF4E基因的表达,抑制细胞增殖。

真核细胞翻译起始因子4E相关通路小分子抑制剂的研究进展

真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)在蛋白翻译起始过程中发挥重要作用,与肿瘤细胞的生长、增殖和分化等密切相关。随着对eIF4E功能及相关信号通路研究的不断深入,以eIF4E及相关信号通路为靶点的药物在肿瘤治疗中的作用日益引起重视。目前已有部分相关抗肿瘤药物上市或进入临床试验。本文综述了作用于eIF4E及相关通路的小分子抑制剂的研究进展。

真核细胞起始因子4E在喉鳞癌中的表达

目的通过检测真核细胞起始因子4E(eIF4E)在喉鳞癌中的表达,探讨其与喉鳞癌的关系。方法采用免疫组织化学法检测52例喉鳞癌组织、20例喉黏膜不典型增生组织、30例喉良性增生组织及10例正常喉黏膜组织中eIF4E基因蛋白的表达情况;用Western-blot法检测20例新鲜喉鳞癌标本的癌中心区(TC)、过渡区(TR)及病理证实的无癌区(TF)中eIF4E的表达情况。结果eIF4E在喉鳞癌中表达的阳性率为100%,显著高于对照组。eIF4E在喉鳞癌的无癌区、过渡区及中心区的表达水平呈进行性增高。结论过度表达的eIF4E是喉鳞癌恶性改变及判断其恶性程度的一个分子标志。

真核细胞翻译起始因子4E与头颈鳞癌关系的研究进展

真核细胞翻译起始因子4E在细胞质和细胞核中均起着重要作用,它在头颈鳞癌中表现为强特异性过度表达,并与头颈鳞癌的发生发展及预后密切相关,可作为检测头颈鳞癌的可靠指标,判断其恶性度及预测复发有高敏感性,并可作为基因治疗的新靶点。

肿瘤相关蛋白EIF4G1亚型的B细胞表位预测

目的预测肿瘤相关蛋白EIF4G1亚型的B细胞表位。方法下载EIF4G1蛋白各种亚型的氨基酸序列,以单参数(亲水性、可及性、柔韧性、抗原性)预测为基础,结合ABCpred和二级结构预测筛选等方法综合筛选EIF4G1蛋白质亚型特异性的B细胞表位。结果目前已知EIF4G1蛋白的亚型有5种,亚型间的氨基酸变化局限在一个由300个氨基酸形成的序列区域,亚型特异性的B细胞表位可能位于该区域的14～19、21～27、52～61、106～112、113～139、183～189、201～216和217～224位氨基酸残基区域内或附近。结论 EIF4G1蛋白质亚型间存在特异性B细胞表位,这些表位对应用合成肽抗原检测蛋白质亚型和进行肿瘤患者的早期诊断具有重要指导意义。

结肠肿瘤干细胞和化疗药物筛选的进展

已被科学界广泛接受的概念是：肿瘤是一种干细胞疾病,包括结直肠癌。几年前普遍的观念是在所有肿瘤里的新生细胞都具有肿瘤性增生的能力,但是近来的证据提示了一个可能性：这样的功能仅限于一小撮肿瘤起始细胞,也称为肿瘤干细胞（cancer stem cells,CSCs）。所以,恶性肿瘤的构成方式是分等级的，其中CSCs能产生更多分化了的肿瘤细胞。

稳定转染红色荧光蛋白基因的人脑胶质瘤起始细胞可自发融合宿主骨髓间充质干细胞并诱导恶性转化

背景:异种移植瘤中宿主来源间质细胞恶性转化已有报道,但是对恶变的机制知之甚少。目的:旨在使用双色荧光示踪的体内模型研究宿主来源肿瘤间质细胞的恶性转化,并探讨可能的机制。方法:将稳定转染红色荧光蛋白基因的人脑胶质瘤起始细胞(glioma-initiatingcellstransfectedwithred fluorescent protein gene,GICs-RFP)接种到表达绿光荧光蛋白的裸鼠体内,建立具有2种荧光的动物模型;通过激光共聚焦观察移植瘤的荧光表达;流式细胞仪检测和分选各种荧光细胞,包括绿色荧光蛋白细胞、红色荧光蛋白细胞和表达这2种荧光的融合细胞;体外亚克隆得到具有恶性肿瘤细胞特征的同时表达绿色荧光蛋白/红色荧光蛋白两种荧光的融合细胞;体外鉴定细胞来源、表面标记物和恶性特征,裸鼠皮下移植验证融合细胞致瘤特性。实验经苏州大学动物实验伦理委员会批准,批准号为ECSU-201800090。结果与结论:GICs-RFP在绿色荧光蛋白裸小鼠的体内致瘤率均为100%(14/14);动物移植瘤模型中均可观察到融合细胞,分选、克隆到的融合细胞不仅共表达绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白,而且共表达GICs-RFP标记物Nestin和骨髓间充质干细胞标记物CD44、CD105和CD29;融合细胞在体外表现出高度增殖活性,较GICs-RFP更具侵袭和迁移特征;融合细胞(1×105个/只)在无胸腺裸小鼠的致瘤率为100%(4/4)。提示GICs-RFP自发融合宿主骨髓间充质干细胞并诱导恶性转化,为肿瘤异质性的细胞来源提供了新的双色荧光示踪的证据。

真核起始因子3e亚基与原发性肝细胞癌的发生与发展正相关

背景真核起始因子3(eukaryotic initiation factor 3,eIF3)是哺乳动物细胞中最复杂的翻译起始因子,真核起始因子3e亚基(eukaryotic initiation factor 3e subunit,eIF3e)是eIF313个亚基中的一个,其表达水平的失调与癌症的发生和发展密切相关.然而,eIF3e在不同类型的恶性肿瘤中的报道相互矛盾.迄今为止,eIF3e在原发性肝细胞癌(primary hepatocellular carcinoma,HCC)中的作用不明.目的研究eIF3e在HCC发生和发展中的作用.方法从临床上随机获取5例HCC病人手术后的新鲜肝癌组织及癌旁组织标本,用qRT-PCR和Western Blot分别定量检测肝癌组织和癌旁组织内eIF3e的mRNA转录水平和蛋白表达水平.通过转染eIF3e过表达质粒或eIF3e干扰质粒进入HepG2,用qRT-PCR及Western Blot分别定量检测细胞内eIF3e转录和翻译表达水平,证实eIF3E过表达上调和干扰后的下调.用Kit-8细胞计数法(Cell Counting Kit-8,CCK-8)评价细胞增殖行为;用划痕实验观察细胞迁移行为;用流氏分析法调查细胞凋亡行为;运用裸鼠成瘤实验评价eIF3e对肿瘤生长的影响.结果和癌旁组织比较,发现肝癌组织中eIF3e上调.细胞实验证实,肝癌细胞系HepG2及Huh7中eIF3e mRNA转录水平均高于正常肝细胞系HL7702.过表达质粒和干扰质粒分别瞬时转染HepG2,发现eIF3e上调后增强了HepG2增殖和迁移行为,但对细胞凋亡无影响;而eIF3e下调后,减弱了HepG2增殖和迁移行为,促进凋亡;裸鼠实验结果证实eIF3e促进肿瘤生长.结论eIF3e的过表达与原发性肝细胞癌的发生和发展正相关,有潜力成为HCC治疗新靶点.

肝细胞癌组织中真核翻译起始因子6表达观察

目的观察肝细胞癌(HCC)组织真核翻译起始因子6(EIF6)的表达变化,并探讨其临床意义。方法116例HCC患者,均行肿瘤切除术,术中保留HCC组织及癌旁组织标本。采用免疫组化Envision两步法检测HCC及癌旁组织EIF6,分析EIF6表达与HCC患者临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier法分析EIF6表达对HCC患者预后的影响,分别采用单因素、多因素Cox回归分析法分析HCC预后的影响因素。结果与癌旁组织比较,HCC组织EIF6表达升高(P<0.05)。EIF6表达与HCC患者乙肝表面抗原、WHO分级、TNM分期有关(P均<0.05)。与EIF6低表达者比较,EIF6高表达的HCC患者生存时间短(P<0.05);EIF6表达、TNM分期与HCC患者预后相关(P<0.05)。EIF6表达、TNM分期均不是HCC患者预后的独立影响因素(HR分别为7.129、0.485;P均>0.05)。结论HCC组织中EIF6高表达。EIF6可能参与了HCC的发生、发展。EIF6表达不是HCC预后的独立影响因素。