miR-130a在肝癌组织中的表达及对肝癌细胞迁移侵袭的影响

目的研究miR-130a在肝癌组织中的表达、对肝癌迁移侵袭的影响和这种影响与上皮间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)途径的关系。方法通过q RT-PCR检测肝癌组织标本和高转移性肝癌细胞株中miR-130a的表达,验证miR-130a在高转移性肝癌细胞株(MHCC97-H、HCCLM3)中的表达对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响,并研究这种影响与EMT相关分子(MMP-9和MMP-2)的关系。结果 miR-130a在肝癌组织中的表达显著高于对应的癌旁组织(P=0.001),miR-130a在肝癌细胞系中的表达也明显高于正常肝细胞(P=0.000)。Transwell实验结果显示,与对照组细胞相比,通过miR-130a抑制剂降低miR-130a水平的高转移性肝癌细胞系(MHCC97-H、HCCLM3)侵袭和转移的能力明显降低(P<0.01)。Western Blot显示下调miR-130a水平的MHCC97-H、HCCLM3肝癌细胞中MMP-9和MMP-2的表达水平均明显下降,Western Blot条带灰度明显降低(P<0.01)。结论 miR-130a在肝癌组织和高转移性肝癌细胞株中的高表达导致肝癌细胞的转移和侵袭增加,这一影响可能由miR-130a通过一定的信号通路促进肝癌细胞EMT而造成。

单克隆抗体MS57-2.1在胃癌生物学中的实验研究

目的:鉴定单克隆抗体MS57-2.1(简称MS57-2.1单抗)的胃癌特异性,研究MS57-2.1单抗的体外和体内抑瘤功能,为胃癌的靶向治疗提供候选抗体药物。方法:本课题组前期利用4个胃癌细胞株膜蛋白免疫A/J小鼠,通过杂交瘤联合高通量流式细胞技术筛选并获得抗胃癌MS57-2.1单抗。通过流式细胞和ELISA检测MS57-2.1单抗的胃癌特异性。通过免疫荧光技术鉴定MS57-2.1单抗的靶抗原在胃癌细胞的定位。通过体外和体内实验初步研究MS57-2.1单抗抑制胃癌细胞移动以及侵袭的作用。结果:流式细胞检测结果表明MS57-2.1单抗可以高亲和力与特定胃癌细胞株结合,而几乎不与正常人外周血细胞结合。ELISA结果表明MS57-2.1单抗可与胃癌组织膜蛋白结合,而不与幽门螺杆菌及胃癌细胞分泌蛋白结合。免疫荧光检测表明MS57-2.1单抗的靶抗原定位于胃癌细胞膜表面。在Transwell小室迁移和侵袭实验中,MS57-2.1单抗处理后胃癌细胞MKN45和BGC823移动能力受到明显抑制,穿过小室细胞数和穿膜细胞数显著低于无关同型单抗对照组和空白对照组。在裸鼠实验中,MS57-2.1单抗处理组的裸鼠肿瘤播散程度显著低于无关同型单抗对照组和空白对照组。结论:MS57-2.1单抗具有抑制胃癌细胞迁移、侵袭和播散的作用,是胃癌靶向治疗具有潜在应用价值的候选抗体药物。