miR-324-5p在结肠癌中低表达以及通过靶定ABL2抑制结肠癌细胞迁移和侵袭

目的探讨miR-324-5p在结肠癌组织中的表达水平及对结肠癌细胞系HCT116和SW620迁移和侵袭能力的影响,以及其靶基因的确定和功能性研究。方法实时荧光定量PCR检测miR-324-5p在结肠癌组织中的表达。细胞迁移侵袭实验检测HCT116和SW620细胞的转移活性。生物信息学预测、荧光报告载体实验以及实时荧光定量PCR和Westernblot验证miR-324-5p下游靶基因。结果miR-324-5p在结肠癌组织中表达降低。miR-324-5p可以抑制结肠癌细胞系HCT116和SW620迁移和侵袭能力。ABL2是miR-324-5p直接作用的靶基因,过表达miR-324-5p可以同时在mRNA和蛋白水平上抑制ABL2基因的表达。抑制ABL2后,SW620和HCT116细胞的迁移和侵袭能力减弱。结论ABL2是miR-324-5p的直接靶基因,miR-324-5p通过抑制ABL2的表达而抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭。

miR-214-3p通过靶向调节p53增强胃癌细胞的转移能力

目的观察miR-214-3p在胃癌组织中的表达情况,探讨其对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其分子机制。方法通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测41对胃癌及癌旁正常组织中miR-214-3p的表达及其与肿瘤临床病理特征的关系;将胃癌细胞MGC-803接种于培养皿,每组设3个复孔,分3组:miR-214-3p上调组(转染miR-214-3p模拟物)、miR-214-3p下调组(转染miR-214-3p抑制剂),以及阴性对照(NC)组;qPCR法分别检测各组p53表达水平,Transwell实验检测转染miR-214-3p抑制剂对MGC-803细胞的迁移和侵袭能力的影响;生物信息学分析和荧光素酶活性测定以确定p53是否为miR-214-3p的靶基因。结果相比于癌旁组织,miR-214-3p在胃癌组织中上调,并且与肿瘤淋巴结转移相关;qPCR检测分析显示,相比于NC组,miR-214-3p上调组p53的表达下降,miR-214-3p下调组p53的表达上升;Transwell实验结果显示,与NC组相比,miR-214-3p下调组胃癌细胞的迁移和侵袭能力降低;生物信息学分析和荧光素酶活性测定结果显示miR-214-3p通过靶向结合p533′UTR从而抑制其表达。结论miR-214-3p在胃癌发生发展过程中可能发挥了重要作用,miR-214-3p可作为胃癌的潜在靶向标志物。

Rac1 shRNA对卵巢癌细胞株Skov3生物学行为的影响

目的为Rac1 shRNA治疗卵巢癌提供实验依据。方法 Rac1 shRNA载体pGPU6/GFP/Rac1-524以L ipofectim ineTM2000介导转染卵巢癌细胞株Skov3,Transwell肿瘤细胞迁移和侵袭实验检测转染细胞的迁移和侵袭能力,W estern印迹分析转染细胞MMP2蛋白的表达情况。结果转染Rac1 shRNA载体pGPU6/GFP/Rac1-524组、转染非特异shRNA载体pGPU6/GFP/NC组和未转染组迁移到滤膜底面的细胞数分别为97±21、319±75、365±92,而侵袭到滤膜底面的细胞数分别为79±22、285±63、324±84,转染Rac1 shRNA载体组与转染pGPU6/GFP/NC组、未转染组比较差异显著(P<0.05),转染pGPU6/GFP/NC组与未转染组相比无统计学意义(P>0.05)。转染Rac1 shRNA载体pGPU6/GFP/Rac1-524组MMP2蛋白的表达量下降。结论 Rac1 shRNA载体pGPU6/GFP/Rac1-524可有效抑制卵巢癌细胞Skov3的迁移和侵袭,该抑制作用可能是通过调控MMP2的表达而实现的。

siMIF抑制人乳腺癌细胞系MCF-7体外迁移和侵袭能力的研究

目的探讨人乳腺癌细胞系MCF-7中巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)的表达受抑制后,对细胞体外迁移和侵袭能力的影响。方法用慢病毒构建可以特异性干涉MIF的小干扰RNA(siMIF)载体,转染人乳腺癌细胞系MCF-7。在倒置荧光显微镜下观察siRNA的转染效率,实时荧光定量PCR检测MIF mRNA表达,Western blot法检测乳腺癌细胞中MIF蛋白和MMP14蛋白表达,细胞迁移实验和Transwell方法检测细胞的体外迁移和侵袭能力。结果慢病毒为载体的siMIF能有效地阻断人乳腺癌细胞系MCF-7的MIF mRNA和蛋白表达,MMP14的表达水平相应降低,且细胞的体外迁移和侵袭能力受到了明显的抑制作用。结论 MCF-7细胞转染特异性siMIF后,其MIF mRNA及蛋白表达被显著抑制,同时细胞的体外迁移和侵袭能力及相关蛋白表达也受到明显抑制。