肿瘤间质灌注液蛋白质组学研究

目的探讨肿瘤间质灌注液蛋白质组作为分析肿瘤组织中细胞微环境蛋白质组的可能性。方法应用PBS液孵育新鲜肿瘤组织,提取肿瘤间质灌注液中的总蛋白,并应用蛋白质组学技术对其进行分析研究。结果应用双向电泳、质谱和生物信息技术成功分离并鉴定出肿瘤间质灌注液中的蛋白成分;在肿瘤间质灌注液中发现肿瘤分泌蛋白Profilin-1。结论肿瘤间质灌注液蛋白质组学研究为研究肿瘤组织中细胞微环境蛋白质组提供了新的研究方案。

中医肿瘤痰浊对S180肿瘤细胞的增殖影响作用的体外实验研究

目的针对肿瘤生存环境进行研究,观察在肿瘤间质液(痰浊)影响下对体外培养的S180肿瘤细胞生长增殖的影响作用。方法取传3代S180肉瘤实体瘤,经研磨,用生理盐水与瘤重按照2:1比例稀释,以每只小鼠0.2mL右侧腋下接种混悬液,制备荷瘤鼠。至2周,肿瘤长至蚕豆大小。取瘤、研磨、离心、过滤,取不含肿瘤细胞的肿瘤间质液(痰浊)、间质液(痰浊)以3种不同质量浓度各20μL,对照组用生理盐水20μL,观察对S180肿瘤细胞的生长影响;MTT法观察肿瘤细胞增殖情况。结果提取的肿瘤间质液中不含肿瘤细胞,不同时间各组OD值差异有统计学意义,在时间上存在质量浓度递增关系;S180肿瘤细胞的质量浓度与所加入的肿瘤间质液质量浓度存在依赖性。连续培养4d间质液组对S180肿瘤细胞可见明显增殖作用,高质量浓度组最明显。结论肿瘤间质液(痰浊)对体外培养S180肿瘤有生长和增殖有促进作用,且成质量浓度依赖性。

CSF-ctDNA与TIF-ctDNA检测在脑胶质瘤中的临床应用研究

目的:探讨脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)来源的循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)与肿瘤间质液(tumor interstitial fluid,TIF)ctDNA检测在脑胶质瘤中的诊断、复发监测、肿瘤标志物及靶向药物筛选方面的应用价值。方法:收集2019年1月至12月河南省人民医院12例脑胶质瘤患者CSF标本、TIF标本及血液标本。CSF标本、TIF标本进行二代基因测序(next generation sequencing,NGS)检测ctDNA突变,血液标本进行白细胞胚系突变检测,二者对比筛选出肿瘤突变基因。与临床资料结合,对胶质瘤患者CSF-ctDNA与TIF-ctDNA检测结果进行对比及生物信息学分析。结果:检测到57种基因变异类型共209个,标本总平均突变数为8.7个,CSF-ctDNA平均突变数为4.3个,TIF-ctDNA平均突变数为13个。9例CSF-ctDNA检测阳性率为(75.0%)、11例TIF-ctDNA检测阳性率(91.6%)。同1例患者ctDNA浓度TIF标本高于CSF标本,TIF标本ctDNA平均浓度(3.38 ng/μL)高于CSF标本中ctDNA平均浓度(0.58 ng/μL)。ctDNA检测发现肿瘤基因突变,较影像学发现复发时间平均提前2.9个月。突变基因PIK3CA、PTEN、KRAS、EGFR、TP53、NF1、BRCA1、BRCA2、TSC1、TSC2、IDH1、CDKN2A匹配到靶向潜在获益药物,突变基因PIK3CA、KRAS、EGFR匹配到潜在耐药药物。结论:CSF-ctDNA与TIF-ctDNA能够比影像学更早发现肿瘤复发,是一种可行的能够在肿瘤的发生和复发的过程反复检测、筛选胶质瘤标志物的方法,对胶质瘤患者基因诊断及靶向治疗有一定临床指导作用。相对于CSF-ctDNA,TIF-ctDNA检测获得样本ctDNA浓度更高,检测患者基因平均突变数更多、检测阳性率与检测效力更高,能够提供更多、全面的肿瘤基因组信息,适合临床用于获取胶质瘤的基因表达信息。