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一种嵌合型调控元件在肿瘤靶向基因治疗中的应用
1
作者
周培杰
高维强
方煜翔
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第10期255-262,共8页
肿瘤靶向基因治疗成功的关键是调控治疗基因在肿瘤细胞中特异、高效地表达。首次构建一种嵌合型表达调控元件,旨在转录水平、转录后水平和翻译水平上实现联合调控目的基因在肿瘤细胞中特异性表达。体外实验表明,在前列腺癌细胞系LNCa P...
肿瘤靶向基因治疗成功的关键是调控治疗基因在肿瘤细胞中特异、高效地表达。首次构建一种嵌合型表达调控元件,旨在转录水平、转录后水平和翻译水平上实现联合调控目的基因在肿瘤细胞中特异性表达。体外实验表明,在前列腺癌细胞系LNCa P中,该调控元件可将报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和荧光素酶(luciferase)的肿瘤表达特异性分别提高420%和480%。体外细胞存活实验表明,运用该元件调控单纯疱疹病毒-1胸腺激酶(HSV-1 TK)的表达能特异性杀伤LNCa P细胞,验证了该元件可成功用于治疗基因的肿瘤靶向表达。
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关键词
肿瘤靶向基因治疗
嵌合型表达调控条件
绿色荧光蛋白
单纯疱疹病毒-1胸腺激酶
前列腺癌
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职称材料
大肠癌基因治疗研究进展
2
作者
姚成才
《中华国际医学杂志》
2003年第2期165-168,共4页
随着分子遗传学和分子生物学的发展及基因工程技术的进步,基因治疗已成为继手术、化疗、放疗之后的又一新的肿瘤治疗手段。本文仅就大肠癌的基因治疗的现状、进展,存在的问题和未来前景作一综述。
关键词
大肠癌
抑癌
基因
疗法
细胞因子
自杀
基因
反义
基因治疗
肿瘤
抗原
靶
向基因治疗
单克隆抗体
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职称材料
Lenti-TK介导间充质干细胞对鼻咽癌CD133^+干细胞的靶向迁移及杀伤作用
被引量:
2
3
作者
李冠雪
申聪香
+3 位作者
文忠
钟品能
杨柯柯
张沈华
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期145-152,共8页
目的:观察慢病毒-胸苷激酶(lentivirus-thymidine kinase,Lenti-TK)/间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)对鼻咽癌CD133+干细胞的靶向迁移及杀伤作用。方法:构建包含TK基因的重组慢病毒表达载体Lenti-TK,感染MSC后得到Lenti-TK-MSC...
目的:观察慢病毒-胸苷激酶(lentivirus-thymidine kinase,Lenti-TK)/间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)对鼻咽癌CD133+干细胞的靶向迁移及杀伤作用。方法:构建包含TK基因的重组慢病毒表达载体Lenti-TK,感染MSC后得到Lenti-TK-MSC,RT-PCR及Western blotting检测Lenti-TK-MSC中HA-TK的表达。免疫磁珠法从鼻咽癌5-8F细胞中分选CD133+细胞;Transwell小室迁移实验检测Lenti-TK-MSC对CD133+5-8F细胞的趋向性;Lenti-TK-MSC联合更昔洛韦(ganciclovir,Lenti-TK-MSC/GCV)与CD133+5-8F细胞共培养,CCK-8试剂盒检测其对细胞的杀伤作用和旁观者效应。结果:成功构建重组慢病毒载体Lenti-TK,其滴度为1×108UT/ml,Lenti-TK(MOI=50)感染MSC 72 h时,感染效率达(95.1±0.1)%。Lenti-TK-MSC迁移至CD133+5-8F细胞组的细胞数明显多于CD133-5-8F细胞组、未分选5-8F细胞组[(83.0±8.7)vs(29.6±5.3)、(38.3±5.2),P=0.000]。Lenti-TK-MSC/GCV处理组与单独GCV处理组、Lenti-TK-MSC/GCV条件培养液(即Lenti-TK-MSC加入1 mg/L GCV培养48 h的培养上清)处理组相比,CD133+5-8F细胞的存活率明显降低[(37.2±2.3)%vs(98.5±3.1)%、(83.8±3.4)%,P=0.000]。Lenti-TK-MSC数量达到混合细胞总数(Lenti-TK-MSC和CD133+5-8F细胞)的20%时,CD133+5-8F细胞存活率为(68.2±2.3)%,表现出明显的旁观者杀伤效应。结论:Lenti-TK感染后MSC对鼻咽癌CD133+5-8F细胞具有靶向迁移及杀伤作用。
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关键词
鼻咽癌
CD133+细胞
间充质干细胞
肿瘤
干细胞
肿瘤靶向基因治疗
旁观者效应
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职称材料
靶向增强型TK表达载体在鼻咽癌细胞中的作用研究
4
作者
钱宇虹
文忠
+2 位作者
赖肖芬
于超生
关小芳
《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》
CAS
2010年第3期161-168,共8页
目的探讨hTERT启动子及CMV增强子双调控机制的增强型表达载体pGL3-bas-ic-EGFP-TK-hTERTp-CMV enhancer在鼻咽癌细胞中的靶向杀伤效应。方法构建靶向性增强型hTERT启动子及CMV增强子双调控TK表达载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp-CMV enha...
目的探讨hTERT启动子及CMV增强子双调控机制的增强型表达载体pGL3-bas-ic-EGFP-TK-hTERTp-CMV enhancer在鼻咽癌细胞中的靶向杀伤效应。方法构建靶向性增强型hTERT启动子及CMV增强子双调控TK表达载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp-CMV enhancer,并以单启动子载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp作为对照组,分别转染端粒酶阳性的人鼻咽癌细胞株5-8F、人乳腺癌细胞MCF-7(阳性对照)及正常人血管内皮细胞ECV(阴性对照)。荧光显微镜下观察其TK基因绿色荧光蛋白表达,实时荧光定量PCR方法检测转染细胞中TK基因mRNA定量表达差异,Stretch PCR法检测肿瘤细胞端粒酶活性,MTT法分析杀灭鼻咽癌细胞的效果等作为检验指标。结果①该增强型表达载体转染5-8F细胞及MCF-7细胞后的绿色荧光表达及TK基因的mRNA表达均强于单启动子pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp组;而ECV细胞只有极微弱的绿色荧光和极弱的TK基因的mRNA表达。实时荧光定量PCR显示,增强型载体组A值较对照组单启动子组明显增高,是单启动子组的2~5倍。StretchPCR法检测转染前后5-8F细胞端粒酶活性明显被抑制。②加入GCV后增强载体组对鼻咽癌5-8F细胞及乳腺癌MCF-7细胞体外增殖均有明显抑制作用,均高于单启动子载体组、不加GCV的增强型载体组、空载体组及空白对照组。结论以hTERT启动子及CMV增强子双调控机制介导TK基因的新型靶向增强型表达载体能够高效靶向性杀灭鼻咽癌细胞,这种新型高效靶向增强型载体有可能成为一种针对包括鼻咽癌在内的具有较为广泛抗癌谱的恶性肿瘤临床靶向基因治疗的新策略。
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关键词
增强型载体
鼻咽癌
肿瘤靶向基因治疗
端粒酶
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职称材料
题名
一种嵌合型调控元件在肿瘤靶向基因治疗中的应用
1
作者
周培杰
高维强
方煜翔
机构
上海交通大学医学院附属仁济医院仁济-MedX临床干细胞研究中心癌基因及相关基因国家重点实验室
上海交通大学生物医学工程学院
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第10期255-262,共8页
基金
国家自然科学基金项目(81301857
81130038)
文摘
肿瘤靶向基因治疗成功的关键是调控治疗基因在肿瘤细胞中特异、高效地表达。首次构建一种嵌合型表达调控元件,旨在转录水平、转录后水平和翻译水平上实现联合调控目的基因在肿瘤细胞中特异性表达。体外实验表明,在前列腺癌细胞系LNCa P中,该调控元件可将报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和荧光素酶(luciferase)的肿瘤表达特异性分别提高420%和480%。体外细胞存活实验表明,运用该元件调控单纯疱疹病毒-1胸腺激酶(HSV-1 TK)的表达能特异性杀伤LNCa P细胞,验证了该元件可成功用于治疗基因的肿瘤靶向表达。
关键词
肿瘤靶向基因治疗
嵌合型表达调控条件
绿色荧光蛋白
单纯疱疹病毒-1胸腺激酶
前列腺癌
Keywords
tumor-specific targeting therapy
embedded expression regulatory element
EGFP
HSV-1 TK
prostate cancer
分类号
R730.5 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
大肠癌基因治疗研究进展
2
作者
姚成才
机构
武汉大学中南医院肿瘤科
出处
《中华国际医学杂志》
2003年第2期165-168,共4页
文摘
随着分子遗传学和分子生物学的发展及基因工程技术的进步,基因治疗已成为继手术、化疗、放疗之后的又一新的肿瘤治疗手段。本文仅就大肠癌的基因治疗的现状、进展,存在的问题和未来前景作一综述。
关键词
大肠癌
抑癌
基因
疗法
细胞因子
自杀
基因
反义
基因治疗
肿瘤
抗原
靶
向基因治疗
单克隆抗体
分类号
R735.34 [医药卫生—肿瘤]
R730.54 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
Lenti-TK介导间充质干细胞对鼻咽癌CD133^+干细胞的靶向迁移及杀伤作用
被引量:
2
3
作者
李冠雪
申聪香
文忠
钟品能
杨柯柯
张沈华
机构
南方医科大学珠江医院耳鼻咽喉-头颈外科
出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期145-152,共8页
基金
广东省科技计划资助项目(No.2010B031200009)~~
文摘
目的:观察慢病毒-胸苷激酶(lentivirus-thymidine kinase,Lenti-TK)/间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)对鼻咽癌CD133+干细胞的靶向迁移及杀伤作用。方法:构建包含TK基因的重组慢病毒表达载体Lenti-TK,感染MSC后得到Lenti-TK-MSC,RT-PCR及Western blotting检测Lenti-TK-MSC中HA-TK的表达。免疫磁珠法从鼻咽癌5-8F细胞中分选CD133+细胞;Transwell小室迁移实验检测Lenti-TK-MSC对CD133+5-8F细胞的趋向性;Lenti-TK-MSC联合更昔洛韦(ganciclovir,Lenti-TK-MSC/GCV)与CD133+5-8F细胞共培养,CCK-8试剂盒检测其对细胞的杀伤作用和旁观者效应。结果:成功构建重组慢病毒载体Lenti-TK,其滴度为1×108UT/ml,Lenti-TK(MOI=50)感染MSC 72 h时,感染效率达(95.1±0.1)%。Lenti-TK-MSC迁移至CD133+5-8F细胞组的细胞数明显多于CD133-5-8F细胞组、未分选5-8F细胞组[(83.0±8.7)vs(29.6±5.3)、(38.3±5.2),P=0.000]。Lenti-TK-MSC/GCV处理组与单独GCV处理组、Lenti-TK-MSC/GCV条件培养液(即Lenti-TK-MSC加入1 mg/L GCV培养48 h的培养上清)处理组相比,CD133+5-8F细胞的存活率明显降低[(37.2±2.3)%vs(98.5±3.1)%、(83.8±3.4)%,P=0.000]。Lenti-TK-MSC数量达到混合细胞总数(Lenti-TK-MSC和CD133+5-8F细胞)的20%时,CD133+5-8F细胞存活率为(68.2±2.3)%,表现出明显的旁观者杀伤效应。结论:Lenti-TK感染后MSC对鼻咽癌CD133+5-8F细胞具有靶向迁移及杀伤作用。
关键词
鼻咽癌
CD133+细胞
间充质干细胞
肿瘤
干细胞
肿瘤靶向基因治疗
旁观者效应
Keywords
nasopharyngeal carcinoma
CD133 + cell
mesenchymal stem cell
cancer stem cell
tumor targeted genetherapy
bystander effect
分类号
R739.63 [医药卫生—肿瘤]
R730.54 [医药卫生—肿瘤]
下载PDF
职称材料
题名
靶向增强型TK表达载体在鼻咽癌细胞中的作用研究
4
作者
钱宇虹
文忠
赖肖芬
于超生
关小芳
机构
南方医科大学珠江医院耳鼻咽喉头颈外科
出处
《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》
CAS
2010年第3期161-168,共8页
基金
广东省科技计划项目资助(课题编号:2007B031003008)
文摘
目的探讨hTERT启动子及CMV增强子双调控机制的增强型表达载体pGL3-bas-ic-EGFP-TK-hTERTp-CMV enhancer在鼻咽癌细胞中的靶向杀伤效应。方法构建靶向性增强型hTERT启动子及CMV增强子双调控TK表达载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp-CMV enhancer,并以单启动子载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp作为对照组,分别转染端粒酶阳性的人鼻咽癌细胞株5-8F、人乳腺癌细胞MCF-7(阳性对照)及正常人血管内皮细胞ECV(阴性对照)。荧光显微镜下观察其TK基因绿色荧光蛋白表达,实时荧光定量PCR方法检测转染细胞中TK基因mRNA定量表达差异,Stretch PCR法检测肿瘤细胞端粒酶活性,MTT法分析杀灭鼻咽癌细胞的效果等作为检验指标。结果①该增强型表达载体转染5-8F细胞及MCF-7细胞后的绿色荧光表达及TK基因的mRNA表达均强于单启动子pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp组;而ECV细胞只有极微弱的绿色荧光和极弱的TK基因的mRNA表达。实时荧光定量PCR显示,增强型载体组A值较对照组单启动子组明显增高,是单启动子组的2~5倍。StretchPCR法检测转染前后5-8F细胞端粒酶活性明显被抑制。②加入GCV后增强载体组对鼻咽癌5-8F细胞及乳腺癌MCF-7细胞体外增殖均有明显抑制作用,均高于单启动子载体组、不加GCV的增强型载体组、空载体组及空白对照组。结论以hTERT启动子及CMV增强子双调控机制介导TK基因的新型靶向增强型表达载体能够高效靶向性杀灭鼻咽癌细胞,这种新型高效靶向增强型载体有可能成为一种针对包括鼻咽癌在内的具有较为广泛抗癌谱的恶性肿瘤临床靶向基因治疗的新策略。
关键词
增强型载体
鼻咽癌
肿瘤靶向基因治疗
端粒酶
Keywords
Enhanced TK gene vector
Nasopharyngeal neoplsm
Gene target therapy
Telomerase
分类号
R739.62 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一种嵌合型调控元件在肿瘤靶向基因治疗中的应用
周培杰
高维强
方煜翔
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
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职称材料
2
大肠癌基因治疗研究进展
姚成才
《中华国际医学杂志》
2003
0
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职称材料
3
Lenti-TK介导间充质干细胞对鼻咽癌CD133^+干细胞的靶向迁移及杀伤作用
李冠雪
申聪香
文忠
钟品能
杨柯柯
张沈华
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
2
下载PDF
职称材料
4
靶向增强型TK表达载体在鼻咽癌细胞中的作用研究
钱宇虹
文忠
赖肖芬
于超生
关小芳
《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》
CAS
2010
0
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职称材料
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