RGD多肽结合型长循环脂质体的肿瘤靶向性研究

目的 :研究RGD(精氨酸、甘氨酸、天门冬氨酸 )多肽结合型长循环脂质体的肿瘤靶向性。方法 :将长循环脂质体 ,通过共价键反应与RGD基元多肽进行结合 ,然后研究其在荷瘤小白鼠体内的肿瘤靶向性。结果 :RGD结合型长循环脂质体在Colon26荷瘤小白鼠体内具有较好的肿瘤靶向性。结论

肿瘤靶向性细胞穿膜肽的固相合成及体外活性研究

目的采用固相合成法合成以基质金属蛋白酶为靶点的肿瘤靶向性细胞穿膜肽,用5-羧基四甲基罗丹明对其进行荧光标记,并对合成的产物进行生物活性和细胞毒性评估。方法采用N-芴甲氧羰基(Fmoc)作为α-氨基酸的保护基,以逐个延伸的固相合成法合成肿瘤靶向性细胞穿膜肽,并在有耦合剂HATU和DMF的情况下,加入5-羧基四甲基罗丹明进行荧光标记,应用高效液相色谱分析仪和质谱仪测定其纯度和分子量;荧光显微镜观察穿膜肽对体外培养的肝癌细胞株SMMC-7721和正常肝脏细胞株LO2的穿膜效果,以评价穿膜肽的生物学活性;MTT比色法检测穿膜肽对SMMC-7721细胞活性的影响。结果所合成的细胞穿膜肽经高效液相色谱法鉴定纯度为96.05%,经质谱鉴定相对分子量为3504.9。这种穿膜肽对正常肝脏细胞株LO2无明显穿膜作用,但对肝癌细胞株SMMC-7721有较强的穿膜作用,并且对细胞活性无明显影响。结论采用Fmoc固相肽合成法成功合成细胞穿膜肽;所合成的细胞穿膜肽具有肿瘤靶向性。

肿瘤靶向性沙门氏菌联合环磷酰胺治疗裸鼠Tca8113移植瘤的实验研究

目的:探讨肿瘤靶向性沙门氏菌VNP20009与环磷酰胺联合应用抑制人舌鳞癌细胞移植瘤的效应与毒副作用。方法:建立舌鳞癌Tca8113裸鼠皮下移植瘤模型64只,随机分为4组,治疗后测量肿瘤体积计算抑瘤率,检测血清VEGF、ALT、AST及肿瘤与肝脏内细菌浓度。结果:沙门氏菌与环磷酰胺联合比单用沙门氏菌或环磷酰胺能更有效地抑制Tca8113移植瘤的生长(P<0.01)。结论:减毒沙门氏菌VNP20009与环磷酰胺有协同抗肿瘤作用,联合治疗可以增强抗肿瘤效果。

突变型人IL-18的肿瘤靶向性改造及真核表达

为了构建肿瘤靶向性的人突变型IL18新基因并进行真核表达,以重组PCR技术构建EGFIL18融合基因,利用BactoBac杆状病毒表达系统和Sf9昆虫细胞株(来自秋天草地夜蛾)表达融合基因,纯化表达产物,并以IFNγ诱导实验和EGFR竞争结合实验初步评价融合蛋白的生物活性。测序证明构建的融合基因为原设计EGFIL18融合基因。SDSPAGE和Westernblot证明EGFIL18融合基因在昆虫细胞中获得表达,表达的融合蛋白的Mr约为20000,与理论值相符,纯化后融合蛋白具有特异的IL18单抗结合活性。IFNγ诱导实验和EGFR竞争结合实验显示,该融合蛋白具有肿瘤导向性和抗肿瘤活性。表明对突变型IL18成功地进行了肿瘤导向性改造并使其在真核细胞获得表达。

酸变性法构建转铁蛋白-姜黄素纳米粒子及其肿瘤靶向性

目的提高姜黄素溶解度,改善姜黄素对肿瘤的靶向性。方法以盐酸为变性剂,打开转铁蛋白(Tf)疏水性空腔,转铁蛋白的输水区域与姜黄素结合,制备转铁蛋白-姜黄素(CCM)纳米粒子(NPs-CCM)。通过透视电镜观察纳米粒子的粒径和形貌;通过转铁蛋白及其相关制剂荧光光谱的变化,推测纳米粒子的形成过程中转铁蛋白某些基团极性的变化;通过转铁蛋白水溶液加入盐酸和姜黄素后8-苯氨基-1-萘磺酸(ANS)荧光光谱的变化,观察纳米粒子形成过程中转铁蛋白表面疏水区域的变化,推测纳米粒子的自组装的过程;通过激光共聚焦检测纳米粒子在细胞中的蓄积情况,考察纳米粒子在体外的靶向性;通过近红外活体成像实验,观察纳米粒子在小鼠肿瘤部位及其他器官的蓄积,考察纳米粒子在体内的靶向性。结果NPs?CCM为直径40~150nm的球形颗粒。姜黄素的溶解度提高了200倍以上。在纳米粒子的形成过程中,转铁蛋白溶液加入盐酸后,酸使转铁蛋白变性,疏水区域暴露,姜黄素与酸变性的转铁蛋白结合后,疏水区域逐渐减少,通过酸对蛋白变性的作用形成转铁蛋白的自组装纳米粒子。在体内和体外的靶向实验中,NPs-CCM表现出较强的靶向性。结论纳米粒NPs-CCM是优良的CCM肿瘤靶向药物载体。

肿瘤靶向性聚酰胺-胺型树枝状高分子基因载体的合成及性能研究

通过二硫键可逆地将转铁蛋白偶联在以季戊四醇衍生物为核的第5代聚酰胺-胺型树枝状大分子(G5PDPAMAM)载体表面上,合成出肿瘤靶向性基因载体G5PDPAMAM-dsTf.系统研究了该载体介导绿色荧光蛋白质粒pEFGP-C1转染不同细胞的性能.结果表明,相比于G5PD PAMAM对癌细胞MCF-7和HepG2的转染效率,G5PDPAMAM-dsTf的转染性能均有不同程度的提高,显示出较好的肿瘤靶向性.同时,游离转铁蛋白的拮抗实验也证明了G5PD PAMAM-dsTf可以通过癌细胞表面的转铁蛋白受体TFR介导进入细胞.

肿瘤靶向性多功能亚硝基脲的合成及抗肿瘤活性评价

氯乙基亚硝基脲(CENUs)是临床上重要的抗肿瘤药物,该类药物通过诱导形成DNA股间交联(dG-dC交联)发挥抗肿瘤作用。但O^(6)-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶(O^(6)-alkylguanine-DNA alkyltransferase,AGT)介导的细胞耐药性及明显的毒副作用降低了其抗癌效果。合成了一种肿瘤靶向性多功能亚硝基脲,该化合物由具有低氧选择活性的偶氮苯衍生物、能够抑制AGT活性的O^(6)-苄基鸟嘌呤衍生物和氯乙基亚硝基脲3部分组成。该化合物能够特异性地在低氧肿瘤区域被还原,释放AGT抑制剂和氯乙基亚硝基脲,从而发挥靶向抗肿瘤作用。多功能亚硝基脲及其各中间产物的化学结构经高分辨质谱、^(1)HNMR、^(13)CNMR及IR数据确证。通过CCK-8法评价了上述化合物对人脑神经胶质瘤SF763细胞的增殖抑制活性;并用荧光成像法评价了该化合物对SF763细胞的促凋亡活性。结果表明,与临床一线亚硝基脲类抗肿瘤药物尼莫司汀相比,多功能亚硝基脲能够更有效地抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡,并具有明显的低氧靶向性。

白蛋白修饰的仿脂蛋白载体的肿瘤靶向性研究

目的构建肿瘤靶向性好、生物安全性高的重组高密度脂蛋白载体。方法参照盘状高密度脂蛋白的结构,以相同的脂质成分和比例采用薄膜分散法制备脂核,选择白蛋白代替载脂蛋白AI孵育包裹于脂核周围形成脂蛋白载体;并对其微观形态、粒径、Zeta电位、紫杉醇于载体中的包封率和释药特性、肿瘤细胞摄取、小动物活体成像和生物安全性进行考察。结果重组脂蛋白载体粒径为(228.3±3.5)nm,Zeta电位为(-27.3±1.9)m V,包封率为(85.6±0.6)%,呈现明显的药物缓释特征;Hep G2细胞对重组脂蛋白的摄取量明显高于药物溶液组及LO2细胞;孵育白蛋白的载体在小鼠肿瘤部位可长时间、特异性蓄积,具有良好的肿瘤组织靶向性;细胞毒性和溶血性实验显示,重组脂蛋白载体具有良好的生物安全性。结论采用本实验方法制备的紫杉醇重组脂蛋白载体具有良好的肿瘤靶向特性和生物安全性,有望成为紫杉醇的新型靶向输送制剂。

抗EGFR单克隆抗体偶联载紫杉醇纳米粒对胃癌肿瘤靶向性能力研究

目的为了增强载药纳米粒靶向肿瘤的能力,将载药纳米粒与抗上皮生长因子细胞增殖和信号传导受体（EGFR）单克隆抗体偶联,探究该偶联是否会增加胃癌肿瘤靶向性。方法将制备好的载药纳米粒在羟基胶乳微球偶联抗体（EDC）的作用下通过酰胺反应与抗EGFR单克隆抗体进行偶联,制备成载药免疫纳米粒。通过透析袋法测定纳米粒体外缓释效果,用ELISA法测定抗体与载药纳米粒偶联率,最后采用荧光标记法对胃癌模型鼠进行活体成像结果纳米粒表面光滑,分布均匀,粒径在200~300nm间,载药量为61.02%,并且具有缓慢释药的效果,抗体与载药纳米粒的偶联率达到了70%,最终荧光活体成像的结果显示,此免疫载药抗体具有靶向胃肿瘤的效果。结论我们制备的免疫纳米粒既可以缓释药物也存在一定肿瘤靶向性,所以将抗体与载药纳米粒偶联,可以增加肿瘤病灶处局部的药物浓度,以此来缓解抗肿瘤药物对人体其他正常组织毒副作用。

前列腺癌相关生物分子在肿瘤靶向性中的意义

我国前列腺癌患者大部分就诊时已处于晚期，临床上大多采用挽救性治疗，如内分泌治疗、化疗等延长生存时间和缓解症状。腺病毒介导的基因治疗和病毒治疗作为肿瘤生物治疗方法具有潜在的抑制肿瘤细胞的作用。

减毒鼠伤寒沙门氏菌作为肿瘤基因治疗载体的低毒性和靶向性研究

目的研究基因工程减毒的沙门氏菌VNP20009的低毒性和对于肿瘤细胞的靶向性。方法将野生型沙门氏菌(对照组)和VNP20009(研究组)分别通过尾静脉注射感染正常小鼠,观察其生存期差别;将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记VNP20009,红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)和GFP分别标记小鼠前胃癌细胞(mouse forestomach carcinoma cell,MFC)的胞质和胞核,尾静脉注射感染离体肿瘤细胞和荷瘤小鼠,以双色荧光成像的定性方法和组织匀浆细菌培养的定量方法显示细菌在离体肿瘤细胞、在体肿瘤和正常组织中的生长情况。结果接受野生型沙门氏菌注射的对照组小鼠在注射后4d全部死亡,而接受VNP20009注射的研究组小鼠在注射后10d依然全部存活;VNP20009能在离体肿瘤细胞中持续增殖并引起核碎裂;在体实验中,感染后第6天,正常组织中的细菌明显减少,到第18天时几乎消失,但在肿瘤组织中依然持续增殖。细菌在肿瘤/正常组织(肝脏)中的比例在感染后第4天约为224∶1,第6天为1020∶1。结论基因工程减毒的沙门氏菌VNP20009有着良好的低毒性以及肿瘤靶向性,具有作为肿瘤基因治疗载体的潜力。

肿瘤靶向性细胞穿膜肽介导小分子干扰RNA对肝癌细胞的抑制作用

目的 观察以基质金属蛋白酶为靶点的肿瘤靶向性细胞穿膜肽介导小干扰RNA（siRNA）进入肝癌并对肝癌细胞SMMC-7721起一定抑制作用.方法 以体外培养的肝癌细胞SMMC-7721为研究对象,将细胞分为实验组和对照组,实验组加入siRNA质粒/穿膜肽复合物,对照组加入空质粒/穿膜肽复合物,培养48 h后收集两组细胞,流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因的表达水平,噻唑蓝（MTT）法检测SiRNA质粒/穿膜肽复合物对细胞增殖的抑制作用.结果 实验组与对照组比较G1期细胞所占比例增多（实验组75.14％、对照组62.55％）,G2期细胞比例减少（实验组11.39％、对照组12.14％）、S期细胞比例减少（实验组13.47％、对照组25.31％）,说明经穿膜肽质粒复合物处理后细胞被阻滞在G1期,实验组细胞hTERT mRNA的表达量约为未对照组的74％,即实验组mRNA表达水平下调约26％.肝癌细胞经穿膜肽复合物处理48 h后MTT法测细胞增殖抑制率为34.82％.结论 肿瘤靶向性细胞穿膜肽可介导siRNA进入肝癌细胞并可对肝癌细胞起一定的抑制作用.

可诱导肿瘤靶向性IFN-α2a重组腺病毒的构建及其表达

腺病毒载体广泛应用于恶性肿瘤的靶向性基因治疗的研究,但这些肿瘤靶向载体缺乏可控性,其疗效和安全性受到很大的影响,因此开发新型可诱导的生物肿瘤靶向载体是当今抗肿瘤靶向药物研究的当务之急。该研究构建了可诱导肿瘤靶向性IFN-α2a重组腺病毒。重组腺病毒能够有效感染人肝癌细胞株HepG2等多种肿瘤细胞株,RT-PCR和Western blot结果表明肿瘤细胞能高效表达IFN-α2a,而其非肿瘤细胞株L02几乎没有表达。诱导试验表明重组腺病毒Ad MT-Ⅱ-hTERT/IFN-α2a能被ZnSO4诱导表达。可诱导肿瘤靶向性重组腺病毒Ad MT-Ⅱ-hTERT/IFN-α2a成功构建为下一步体内外抑癌实验研究打下了基础。

靶向性抗肿瘤融合基因RGD-IL-24重组腺病毒的构建及鉴定

目的:构建靶向性抗肿瘤融合基因RGD-IL-24的重组腺病毒载体,转染乳腺癌MCF-7细胞观察其感染,并对其体外抗肿瘤效应和肿瘤靶向性进行初步研究。方法:利用PCR技术将GRGDS序列融合至IL-24的N端,克隆至pAdTrack-CMV质粒上。经PmeI线性化后与腺病毒骨架pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒载体pAdEasy/RGD-IL-24。重组腺病毒载体经PacI线性化后转染293细胞,包装出重组腺病毒Ad.RGD-IL-24。PCR方法鉴定重组腺病毒,TCID50测定病毒滴度,MTT法和形态学分析Ad.RGD-IL-24诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡的活性,细胞黏附实验评价其肿瘤靶向性。结果:成功构建腺病毒载体,腺病毒滴度达1.3×109pfu/mL。Ad.RGD-IL-24诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡,显著抑制其生长,并具有肿瘤靶向性。结论:成功构建了有较强感染能力和肿瘤靶向性的重组RGD-IL-24腺病毒载体。

肿瘤靶向性鼠伤寒沙门菌A1-R对人结直肠癌肝转移裸鼠原位移植瘤模型的治疗效果

在结肠癌及其他癌症中,肝转移是最常见的死亡原因。一般来说,肝转移难以治疗。本研究旨在探索鼠伤寒沙门菌A1-R治疗人类结直肠癌肝转移原位裸鼠模型的治疗效果。本研究使用了HT-29人类结肠癌细胞表达红色荧光蛋白（RFP）。

喜树碱结构修饰及抗肿瘤靶向性研究进展

喜树碱是从中药喜树中分离出来的一种生物碱,具有细胞毒活性,对恶性肿瘤具有抑制作用。但是,由于其有水溶性差、稳定性低及选择性差的缺陷,限制了其在临床上的应用。为了增加喜树碱的水溶性和抗肿瘤活性,研究者采用在喜树碱结构的活性位点引入极性基团、亲水性聚合物载体或具有靶向性的分子等策略对其进行结构修饰。本文从药效团拼合原理角度,对近十年喜树碱的结构修饰和靶向性研究两个方面进行综述。

α-肿瘤坏死因子的肿瘤靶向性改造

α-肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是一种多效性的细胞因子,能高效地杀伤或抑制肿瘤细胞。但是由于其对全身有毒副作用,这使T N F-α的应用受到了限制。提高T N F-α的抗肿瘤活性,降低毒副作用以及开发具有肿瘤靶向性的融合蛋白是将其应用于临床的关键。

肿瘤靶向治疗的新型细胞载体

肿瘤靶向性病毒作为一种特殊的肿瘤治疗药物和基因治疗载体近年来已得到长足发展,许多高效、靶向性病毒载体已被相继研究开发,但仍不能满足临床上肿瘤靶向治疗的需要,如何将这些靶向病毒准确而高效地运输到肿瘤病变部位仍然未得到充分解决.细胞因子诱导杀伤细胞(cytokine-inducedkillercells,CIK)作为肿瘤的细胞治疗方法之一已成功地在临床上得到了广泛应用.最近科学家使用CIK细胞作为病毒运载工具,成功地将病毒运载到肿瘤组织部位并显示出高效的抗肿瘤作用,该方法为病毒运输定位于肿瘤病变部位找到了突破口,实验资料显示其具有潜在的应用价值.

ACTL^(TM)靶向性抗肿瘤细胞免疫技术治疗恶性肿瘤患者的护理

对8例恶性肿瘤患者行靶向性抗肿瘤细胞免疫技术治疗,在治疗期间发生发热4例、恶心2例,给予对症处理后症状得到控制,出院后随访期间患者生活质量得到有效改善,自身免疫能力得到有效提高。通过影像学、血清肿瘤标志物的检查,未发现肿瘤复发和向远处器官转移。治疗前做好心理护理,治疗中严格执行ACTL回输流程,加强对症护理,可有效避免不良反应的发生,减轻患者的痛苦,提高治疗效果。

聚乙二醇修饰对羟喜树碱隐形纳米囊泡的肿瘤靶向和抑瘤作用的影响

目的探讨聚乙二醇相对分子质量对载羟喜树碱(HCPT)的聚乙二醇化聚十六烷基氰基丙烯酸酯纳米囊泡(PEG-PHDCA)在S180肉瘤小鼠体内的肿瘤靶向性及抗肿瘤作用的影响。方法选用司盘60和PEG-PHDCA为载体材料,制备HCPT的PEG-PHDCA隐形纳米囊泡,进行S180肉瘤小鼠瘤内药动学试验和抑瘤试验。结果PEG相对分子质量为2 000、5 000、10 000的PEG-PHDCA纳米囊泡在S180肉瘤小鼠肿瘤中125I-HCPT的AUC分别为HCPT的9.21、13.82、9.48倍;对S180肉瘤小鼠抑瘤率分别为88%、97.1%、80.8%,普通纳米粒PHDCA组抑瘤率为41.8,而原药组抑瘤率仅为17.3%。结论PEG修饰纳米囊泡明显优于原药和未经PEG修饰纳米囊泡,PEG相对分子质量为5 000,粒径为80 nm左右时,载HCPT的隐形纳米囊泡具有最佳肿瘤靶向作用。