前列腺癌血清前列腺特异性抗原白细胞介素-17白细胞介素-6肿瘤坏死因子-α表达水平与病理分期及预后的相关性研究

目的 分析血清前列腺特异性抗原(PSA)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平与前列腺癌患者病理分期和预后的相关性。方法 纳入2021年1月至2022年12月在我院接受治疗的120例前列腺癌患者作为研究对象,均进行血清PSA、IL-17、IL-6、TNF-α指标检测,比较不同肿瘤淋巴结转移分类(TNM)分期和前列腺癌格利森评分系统(Gleason)分级患者的血清PSA、IL-17、IL-6、TNF-α表达水平,应用Spearman相关性分析法对血清PSA、IL-17、IL-6、TNF-α表达水平与前列腺患者病例分期及预后的相关性进行分析。结果 不同TNM分期的血清PSA、IL-17、IL-6、TNF-α表达水平差异具有统计学意义(P<0.05)。不同Gleason分级的血清PSA、IL-17、IL-6、TNF-α表达水平差异具有统计学意义(P<0.05)。血清PSA、IL-17、IL-6、TNF-α表达水平与前列腺患者T分期、N分期、M分期和Gleason分级呈正相关(P<0.05)。结论 检测前列腺癌患者的血清PSA、IL-17、IL-6、TNF-α表达水平可作为病理分期和预后评估参考指标。

癌-睾丸抗原SPANXB在肝癌中的表达及其影响肝癌进展的机制研究

目的·分析癌-睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA)家族成员SPANXB(sperm protein associated with the nucleus on the X chromosome B)在肝癌中的表达及其与肝癌患者预后之间的相关性,并探究SPANXB对肝癌细胞增殖的影响及其潜在机制。方法·利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中的肝癌样本数据,分析SPANXB在肝癌组织中的表达及其与患者生存期的相关性。构建稳定敲低SPANXB与稳定过表达SPANXB的肝癌细胞系,利用活细胞成像实验、EdU细胞增殖实验和平板克隆形成实验评估SPANXB对肝癌细胞增殖的影响。通过RNA测序(RNA-sequence,RNA-seq)探究SPANXB调控肝癌细胞增殖的相关通路,并利用细胞周期实验验证SPANXB对肝癌细胞周期的影响。采用免疫沉淀-质谱联用技术(immunoprecipitation-mass spectrometry,IP-MS)探索与SPANXB相互作用的蛋白,并使用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)进行验证。结果·SPANXB mRNA在肝癌组织中的表达高于正常组织(P=0.003),且与肝癌患者的生存期呈负相关。稳定敲低SPANXB可降低肝癌细胞的增殖能力、克隆形成能力,而稳定过表达SPANXB则可促进这些过程。RNA-seq的结果显示,SPANXB的敲低可下调DNA复制与G1/S细胞周期转换相关通路,细胞周期实验的结果显示SPANXB的敲低可导致肝癌细胞周期发生改变。IP-MS和Co-IP结果显示,SPAXNB与有丝分裂停滞缺陷2样蛋白1(mitotic arrest deficient 2-like protein 1,MAD2L1)、WD重复域蛋白5(WD repeat domain 5,WDR5)等细胞周期相关蛋白存在相互作用。结论·SPANXB的高表达与肝癌的预后呈负相关,其可能通过与MAD2L1、WDR5相互作用调控细胞周期并增强肝癌细胞的增殖活性。

^(18)F-FDG PET/CT显像和血清学指标对前列腺肿瘤的诊断价值

目的 研究^(18)F-氟代脱氧葡萄糖(^(18)F-fluorodexyglucose,^(18)F-FDG)PET/CT显像和前列腺血清学指标诊断前列腺肿瘤的价值。方法 回顾性分析2013年8月至2021年12月在浙江大学医学院附属第二医院经病理证实的95例疑似前列腺肿瘤患者的^(18)F-FDG PET/CT图像与前列腺血清学指标。根据病理检查结果分为恶性组(n=77)和良性组(n=18)。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析前列腺病灶的最大标准摄取值(maximum standardized uptake value,SUV_(max))与血清总前列腺特异性抗原(total prostate specific antigen,tPSA)、游离前列腺特异性抗原(free prostate specific antigen,fPSA)及游离/总前列腺特异性抗原比值(free/total prostate specific antigen,f/t-PSA)诊断前列腺良恶性病灶的最佳截断界值。结果 ROC曲线显示,SUV_(max)、tPSA、fPSA和f/t-PSA诊断前列腺良恶性病灶的最佳截断值分别为4.47、46.67 ng/mL、11.11 ng/mL和0.10。SUV_(max)、tPSA、fPSA和f/t-PSA的ROC曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.658、0.897、0.842和0.836。^(18)F-FDG PET/CT显像、tPSA、f PSA和f/t-PSA对前列腺肿瘤的诊断敏感度分别是81.8%、97.4%、92.2%和83.1%,特异度分别是61.1%、27.8%、50.0%和50.0%,准确度分别是77.9%、84.2%、84.2%和76.8%。恶性组SUV_(max)、tPSA和fPSA均高于良性组,f/t-PSA低于良性组(均P<0.05)。^(18)F-FDG PET/CT检查显示,72例有远处转移病灶。结论 SUV_(max)、tPSA、fPSA和f/t-PSA均能鉴别前列腺良恶性病灶。^(18)F-FDG PET/CT显像在探测远处病灶方面更具有优势,能够为临床决策提供更好的帮助。

肿瘤-睾丸抗原SPANX-C基因mRNA在肝细胞癌中的表达及HLA-A2限制性CTL表位的预测

目的:检测肿瘤-睾丸抗原SPANX-C基因在肝细胞癌(HCC)中的表达,预测SPANX-C/HLA-A2限制性CTL表位.为HCC的免疫治疗寻找新的靶位.方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对HCC患者癌组织、相应癌旁组织和对照组织(肝硬化和正常肝组织)中的SPANX-C基因mRNA进行检测,随机选取RT-PCR阳性扩增产物进行序列测定;用超基序法和量化基序法联合预测SPANX-C/HLA-A2限制性CTL表位.结果:在所检测的115例HCC组织中有70例(60.9%)表达SPANX-C基因mRNA,癌旁组织和20例对照肝组织均不表达.SPANX-C基因的表达与肿瘤分期、肿瘤分化程度、血清甲胎蛋白(AFP)水平等临床指标无相关性(P>0.05).用基序预测法筛选出5个HLA-A2限制性CTL表位(9肽),其中SPANX-C51-59(LVVRYRRNV)与HLA-A2分子具有较高结合力.结论:SPANX-C基因mRNA在HCC组织中呈高频率特异性表达,并存在HLA-A2限制性CTL表位,有望用于HCC的免疫治疗.

Cultured ELISPOT试验在检测肿瘤-睾丸抗原特异性CTL反应中的初步应用

目的探讨Cultured ELISPOT试验检测肿瘤-睾丸抗原特异性CTL反应的能力。方法选择2016年1月-6月新疆医科大学附属肿瘤医院头颈放疗科确诊头颈部鳞癌肿瘤住院患者26例,采用ELISPOT试验(ELISPOT组),选择2016年10月-2017年2月新疆医科大学附属肿瘤医院头颈放疗科确诊头颈部鳞癌肿瘤住院患者17例,采用Cultured ELISPOT试验(Cultured ELISPOT组)。用合成的肿瘤-睾丸抗原(CTAs)NYESO1、SSX2、SALL4、MAGEA1、MAGEA3特异性CTL抗原表位肽刺激患者外周血单个核细胞(PBMC),分别检测两组患者分泌IFN-γ的CTL细胞的频率及强度,并比较两组差异。结果 (1)Cultured ELISPOT组患者特异性CTL平均反应频率高于ELISPOT组患者,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)Cultured ELISPOT组患者平均反应强度明显高于ELISPOT组患者,差异均有统计学意义(P<0.05),且Cultured ELISPOT组患者平均反应强度至少高于ELISPOT组患者25倍以上。结论 Cultured ELISPOT试验可以部分提高特异性T细胞免疫反应的平均反应频率及强度,有助于T细胞免疫在肿瘤中的研究。

肿瘤睾丸抗原CT45-5基因小干扰RNA表达载体的构建及干扰效果鉴定

目的:构建肿瘤睾丸抗原CT45家族中5号成员基因(CT45-5)的小干扰RNA(siRNA),并检测其对HeLa及HeLa/Fhit细胞内源性CT45-5基因及外源脆性组氨酸三联体(Fhit)基因表达的干扰效果。方法:根据CT45-5基因序列,通过生物信息学方法对靶向CT45-5基因的siRNA进行预测,从中筛选出2对合理的CT45-5-siRNA,将其克隆到siRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 Hygro中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆进行测序鉴定;将构建的CT45-5-siRNA重组载体转染人宫颈癌细胞HeLa及HeLa/Fhit细胞,Western印迹检测siRNA对HeLa及HeLa/Fhit细胞内源性CT45-5及外源Fhit基因表达的干扰效果。结果:构建了2个CT45-5-siRNA重组质粒,其中一条对CT45-5基因具有明显的干扰作用,并且Fhit基因表达也被抑制。结论:构建的CT45-5-siRNA为与CT45-5功能相关的基因研究奠定了基础。

小剂量5-脱氧杂氮胞苷诱导HepG2肝癌细胞新生肿瘤-睾丸抗原CT10和SSX1表达及其意义

目的探讨小剂量5-脱氧杂氮胞苷(5-aza-CdR)诱导HepG2肝癌细胞肿瘤-睾丸抗原(nCTAs)的CT10和SSX1表达及其意义。方法采用RT-PCR方法检测HepG2、SMMC-7721、BEL-7402、MHCC97L和MHCC97M3肝癌细胞株MAGE1、MAGE3、CT10、CTp11、NE-ESO-1和SSX16种CTAs的mRNA表达,挑选不表达CT10和SSX1的HepG2细胞作为nCTAs表达的研究对象;用0、0.5、1.0、1.5μmol/L 5-aza-CdR处理HepG2细胞,不含5-aza-CdR为对照组,从低到高浓度分别为实验1、2、3组;分别采用RT-PCR和Western blot检测CT10和SSX1 mRNA和蛋白表达。结果5株肝癌细胞均存在不同的nCTAs表达,表达呈异质性改变,其中HepG2表达MAGE1、MAGE3、CTp11和NY-NSO-1,MHCC97L和MHCC97M3表达MAGE1、MAGE3、CT10、CTp11和SSX1,BEL-7402表达MAGE1、MAGE3和CTp11,而SMMC-7721只表达MAGE1、MAGE3。实验1、2、3组均能诱导新生CTA-CT10和SSX1表达,其中0.5μmol/L小剂量的实验1组也能诱导nCTAs的表达;实验3组诱导的nCTAs相对表达量显著高于实验1、2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不同的肝癌细胞表达不同的nCTAs,小剂量5-aza-CdR能诱导肝癌细胞株表达nCTAs。

肿瘤睾丸抗原CT45-5在DNA损伤应答中的作用

目的:用建立的CT45-5-siRNA研究肿瘤睾丸抗原CT45-5在DNA损伤应答中的作用。方法:通过靶向CT45-5基因小干扰RNA(siRNA)下调CT45-5的表达,用MTT比色法检测经喜树碱和依托泊苷处理后细胞对DNA损伤诱导剂的敏感性,用流式细胞技术检测电离辐射后细胞周期的变化。结果:在DNA损伤诱导剂处理后,在脆性组氨酸三联体(Fhit)高表达细胞中下调CT45-5的表达可以使细胞表现出更强的G2期阻滞及对DNA损伤诱导剂更耐受,而在Fhit缺失表达的细胞中却没有此现象。结论:CT45-5可能是以Fhit依赖的途径参与了DNA损伤应答。

IL-18基因增强肿瘤抗原致敏DC诱导的CTL特异性杀伤肝癌细胞

目的:探讨腺病毒介导的白细胞介素-18(IL-18)基因转染能否使肿瘤抗原冲击的树突状细胞(dentritic cell,DC)在体外诱导出更强的抗肝癌免疫反应。方法:携IL-18的重组腺病毒载体感染经肝癌细胞株HepG2冻融抗原致敏的DC(AdIL-18-HepG2/DC),FACS分析AdIL-18-HepG2/DC表面分子的表达,ELISA法检测IL-18的分泌水平,3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞增殖能力,MTT法检测细胞毒性T淋巴细胞杀伤效应。结果:AdIL-18-HepG2/DC较未转染DC能高水平地表达CD1a、CD11c、CD80、CD86以及HLA-DR;较未经IL-18转染的DC分泌较高水平的IL-18。AdIL-18-HepG2/DC能非常有效地刺激自体T细胞增殖(CPM值为228 018±1 079),其刺激强度显著强于AdIL-18DC、HepG2/DC、AdlzcZ/DC及DC(均P<0.05)。当靶细胞为HepG2时,AdIL-18-HepG2/DC诱导的CTL杀伤活性显著高于其他各组(均P<0.05),并且其杀伤能力与效应细胞数量成正比。结论:IL-18基因转染且肝癌抗原致敏的DC可以显著增强DC的特异性抗肝癌效应。

血清肿瘤抗原检测联合CT与PET-CT扫描对肺癌确诊率的比较

背景与目的:正电子发射计算机断层显像(positronemissiontomography-computedtomography,PET-CT)是一种新的、用于影像学诊断的、将人体生物学信息与解剖信息结合的分子影像设备,具有更好的空间分辨力和早期的肿瘤探测能力。本研究中我们比较肿瘤标志物检测联合螺旋CT扫描与PET-CT全身代谢显像对肺癌诊断及临床分期的准确率。方法:手术或穿刺活检确诊为肺癌的43例患者,术前行螺旋CT扫描并有血清学CA125、CA19-9、CEA检测结果,为明确诊断及临床分期同时行PET-CT扫描,比较两种方法对肺癌的检出率以及临床分期结果。结果:血清肿瘤抗原检测联合CT扫描与PET-CT显像对肺癌诊断符合率分别为67.44%和90.70%,肺癌局部病灶显示阳性率分别为86.05%和95.35%,对纵隔淋巴结检出的阳性率分别为65.12%和83.72%,同时PET-CT显像检出肿瘤标志物联合CT扫描未发现的6例远处转移。与CT扫描相比,PET-CT显像使43例患者中的5例(11.63%)临床分期提前,7例(16.28%)推后,使4例(9.3%)患者改变了治疗方式。结论:PET-CT比血清肿瘤抗原检测联合CT扫描对肺癌的诊断阳性率高,且对肺癌的临床分期更加准确,PET-CT全身代谢显像是诊断肺癌及进一步明确肺癌分期的一种良好方法。

胃癌中肿瘤/睾丸抗原的表达研究及NY-ESO-1蛋白的自身抗体检测

目的: 分析胃癌中11种CT抗原(cancer/testisantigen)基因的表达分布及NY ESO 1蛋白引发的自身体液免疫应答,为胃癌的特异性肿瘤疫苗治疗提供依据。方法: 利用RT-PCR方法,检测101例胃癌患者肿瘤标本和对应正常胃黏膜中11种CT抗原基因的表达。ELISA方法检测抗NY ESO 1抗体。利用NY ESO 1的单抗E978,应用免疫组化方法检测组织切片中NY ESO 1抗原物质。结果: 101例胃癌患者中, 74. 3%的患者至少表达1种检测的CT抗原基因。12例患者表达NY ESO 1mRNA, 5例可以检测到NY ESO 1抗原蛋白以及针对NY ESO 1抗原的体液免疫反应。结论: 胃癌中表达多种CT抗原基因,表达率较高的MAGE 3,SSX 4和NY ESO 1 /LAGE 1蛋白等可作为肿瘤疫苗的备选抗原,其中NY ESO 1蛋白的免疫原性得到验证。CT抗原的多价肿瘤疫苗在胃癌治疗中具有一定的可行性。

肿瘤抗原TRAG-3 HLA-A2.1限制性CTL表位的鉴定

目的 寻找并鉴定TRAG 3来源的HLA A2 .1限制性CTL表位 ,为临床开展基于TRAG 3表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法 应用超基序和量化基序方案 ,预测TRAG 3HLA A2 .1限制性CTL表位。用计算机分子模拟的方法 ,对预测表位进行分子模拟。用流式细胞仪分析测定各肽与HLA A2 .1分子的结合力。最后 ,应用HLA A2 .1阳性健康志愿者外周血单个核细胞 (PBMC)对其体外诱导的CTL效应进行鉴定。结果 应用超基序和量化基序方案 ,预测出 4个候选表位肽 ,用计算机分子模拟发现其中只有TRAG 3( 37- 45) 不符合HLA A2 .1限制性CTL表位的特点。在上述 4个九肽中 ,TRAG 3( 58- 6 6 ) 与HLA A2 .1分子的结合力最高。在进一步的CTL诱导实验中 ,发现TRAG 3( 58- 6 6 ) 能够诱导健康志愿者PBMC产生特异性CTL。结论 表位预测、计算机分子模拟、结合力分析和体外CTL诱导实验的一致性较好。 4种方法一致认为 ,TRAG 3( 58- 6 6 ) (ILLRDA GLV)为HLA A2 .1限制性CTL表位。该表位肽可望用于基于TRAG

膀胱移行细胞癌中肿瘤-睾丸抗原基因的表达情况

目的:研究4种肿瘤-睾丸抗原(CT)基因在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义。方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测49例膀胱移行细胞癌患者癌组织(新鲜标本,Ta-T1期28例,T2-T4期21例;G120例,G216例,G313例)及其中15例患者癌旁组织的cTAGE-1、cTAGE-2、MAGE-A1及NY-ESO-1等4种CT基因mRNA的表达。结果:49例膀胱移行细胞癌组织中MAGE-A1表达最高,其次为cTAGE-1,cTAGE-2及NY-ESO-1,分别为59%(29/49),55%(27/49),51%(25/49)及47%(23/49)。15例癌旁组织表达均阴性。膀胱移行细胞癌组织中肿瘤不同分期、不同分级之间4种CT基因表达的差异均无统计学意义(Pearsonχ2检验法,P>0.05)。结论:CT基因在膀胱移行细胞癌组织中有较高表达,而在癌旁组织无表达,可以进一步研究作为膀胱移行细胞癌特异性免疫治疗靶基因的可行性。

肝细胞肝癌患者肿瘤/睾丸抗原SSX-1及NY-ESO-1mRNA的表达意义

目的:检测SSX-1及NY—ESO-1mRNA在肝细胞性肝癌(HCC)患者的外周血及肝癌组织中的表达情况及其临床意义. 方法:用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)方法对26例HCC患者的外周血、癌组织、相应的癌旁组织及20例对照研究标本进行SSX-1和NY—ESO-1mRNA检测. 为验证结果的可靠性,对SSX-1和NY—ESO-1的RT—PCR产物进行了DNA测序. 结果:SSX-1及NY-ESO-1 mRNA在26例HCC组织中的表达率分别为61.5%和11.5%,在相应的外周血中的表达率分别为46.2%和3.8%.外周血中表达SSX-1或NY—ESO-1 mRNA的HCC患者,其组织标本中也表达上述基因.所有的癌旁组织,作为对照的肝硬化和正常肝组织以及非肿瘤患者的外周血中均未发现这两种基因的表达.测序结果表明所得到的cDNA确为要扩增的目的基因.SSX-1和NY—ESO-1基因的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清AFP水平、肝炎病毒感染等临床指标无显著相关性(P>0.05).37.5% 的AFP正常(<20 ng/L)的HCC患者外周血中有SSX-1基因表达.外周血中表达SSX-1mRNA的患者的短期(6 mo) 复发率为50%(4/8),不表达者的复发率为25%(3/12). 结论:在HCC患者及癌组织中SSX-1和NY-ESO-1基因高特异性表达,在检查AFP的同时检测外周血SSX-1 mRNA的表达,有助于提高HCC的检出率.表达SSX-1 mRNA的HCC患者的短期复发率明显增高,可作为监测HCC复发、转移和预后的指标.

肝细胞癌组织和外周血中肿瘤/睾丸抗原SSX-2和SSX-5的表达

目的:检测SSX家族中SSX-2和SSX-5mRNA在肝细胞癌(HCC)组织和外周血中的表达情况及其与临床指标之间的关系,评价其作为肝癌免疫治疗特异性靶位的可能性, 及作为肝癌辅助诊断和监测预后、复发指标的可能性. 方法:用一步法逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)方法对HCC患者26例的癌组织、相应癌旁组织和外周血及对照(肝硬化和正常肝组织)中SSX-2,SSX-5mRNA 的表达进行了检测,为验证结果的可靠性,随机选取每一种抗原RT-PCR呈阳性的产物1例进行DNA序列测定,并对检测结果与AFP,HBSAg,肿瘤直径, TNM分期等临床指标之间的相关性进行分析. 结果:26例HCC肝癌组织SSX-2和SSX-5基因表达阳性率分别为34.6%和46.2%,两种基因同时表达的有4例(15.4%),至少有一种基因表达的有17例(65.4%), 癌旁组织表达的阳性率皆为0%;在26例HCC患者外周血中,SSX-2mRNA的表达率为19.2%,在组织呈阳性的患者外周血中的表达率为55.6%;SSX-5mRNA的表达率为23.1%,在组织呈阳性的患者外周血中的表达率为50%;两种基因同时表达者为7.7%,至少有一种表达者为34.6%.对照组中12例肝硬化和10例非肿瘤肝组织及外周血均未检测到SSX-2和SSX-5的表达.二者均取1例DNA测序,结果表明RT—PCR产物为SSX-2 和SSX-5 cDNA.SSX-2和SSX-5的表达与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、AFP水平、HBV感染等无显著相关性(P>0.05).部分AFP正常(<20 ng/L)HCC患者外周血中存在SSX-2或/和SSX-5基因的表达. 结论:SSX-2和SSX-5基因在HCC中呈高频率、高特异表达,二者可同时在HCC中表达,可以作为肝癌免疫治疗特异性靶位.二者的表达与年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、血清AFP水平、肝炎病毒感染无显著相关性;SSX-2,SSX-5基因的表达可用于HCC的辅助诊断和作为监测复发和预后的指标.

^(18)F-标记的前列腺特异性膜抗原JK-PSMA-7的制备及初步PET/CT显像

为合成一种新型^(18)F-标记的前列腺特异性膜抗原^(18)F-JK-PSMA-7,经亲核取代、酸水解、高效液相色谱分离、固相萃取等4步合成^(18)F-JK-PSMA-7,并测定其质量和体外稳定性,计算其脂水分配系数,通过动物实验评价其生物安全性和生物分布特性,同时对1例健康志愿者和3例前列腺癌患者行PET/CT显像。结果表明,^(18)F-JK-PSMA-7的合成时间为45 min,合成产率为(31.0±2.5)%(未衰减校正,n=3),放化纯度>99%,体外稳定性良好,常温放置3个半衰期放化纯度仍>95%,脂水分配系数log P=-3.56±0.13,其他质控结果满足临床要求。生物分布实验显示其在体内稳定性较好,在所测时间点肌肉和骨骼几乎无摄取,药物在膀胱内的摄取较高,证明其经泌尿系统代谢。对1例健康志愿者和3例前列腺癌患者行PET/CT显像发现:1例健康志愿者主要在唾液腺、泪腺、下颌下腺、肝脏、脾脏和肠道、膀胱等器官有生理性高放射性摄取,3例前列腺癌患者前列腺病灶和转移灶都有浓聚,其中最大标准摄取值(SUVmax)为54.82。可见新型前列腺特异性膜抗原显像剂^(18)F-JK-PSMA-7的合成产率高、放化纯度高、质量稳定,有望成为诊断前列腺癌的新药物。

肿瘤-睾丸抗原SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1在胰腺癌中的表达及其生物学意义

目的检测肿瘤-睾丸抗原(CTA)SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1在正常胰腺组织、慢性胰腺炎以及胰腺癌中的表达情况,寻找胰腺肿瘤中高表达的CTA。方法应用免疫组织化学SP法检测8例正常胰腺组织、15例慢性胰腺炎组织、52例胰腺癌组织中SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1的表达。Western blotting检测52例胰腺癌组织中SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1的表达。结果正常胰腺组织、慢性胰腺炎中SSX、MAGE-A1和NY-ESO-1均不表达,SSX、NY-ESO-1、MAGE-A1在52例胰腺癌的阳性表达率分别为48.08%(25/52)、7.69%(4/52)、5.77%(3/52);经相关分析,SSX、NY-ESO-1和MAGE-1的阳性表达与患者的年龄、性别、病变部位、分化程度均未见明显相关关系(P>0.05);SSX的表达与肿瘤的浸润转移呈负相关(r=-0.306,P=0.028);52例胰腺癌病例中55.77%(29/52)有1种以上的CTA表达。结论不同种类的CTA在胰腺癌中的表达存在显著差异,SSX的阳性表达率最高;胰腺癌中SSX的高表达与肿瘤的转移呈明显的负相关关系;CTA在胰腺癌中的表达呈现簇生现象。

肿瘤睾丸抗原(CTA)在肺癌中的表达

目的 检测多种肿瘤睾丸抗原 (CTA )基因在肺癌中的表达。方法 用逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)法对 35例肺癌患者癌组织和癌旁正常肺组织进行MAGE 1、 3,SSX 1、 2、 4、 5和NY ESO 1mR NA表达检测。随机抽取每种CTA基因的 3例RT PCR扩增产物的目的片段进行DNA序列测定。结果 35例肺癌标本中MAGE 1、 3,SSX 1、 2、 4、 5和NY ESO 1的表达率分别为 34.3% ( 12 / 35 )、5 7.1% ( 2 0 / 35 )、17.1% ( 6 / 35 )、17.1% ( 6 / 35 )、2 0 .0 % ( 7/ 35 )、2 5 .7% ( 9/ 35 )和 37.1% ( 13/ 35 )。正常肺组织中 7种CTA基因均无表达。肿瘤组织中 7种基因至少有 1种表达的几率是 2 6 / 35 ( 74.3% ) ,两种或两种以上同时表达几率是2 3/ 35 ( 6 5 .7% )。测序结果表明RT PCR产物确为CTA基因。结论 CTA在肺癌主动免疫治疗中是一种合适的、有前景的攻击靶点。同时 。

睾丸肿瘤抗原MAGE-E1基因片段的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 :克隆及表达人胶质瘤特异性抗原MAGE E1基因片段。方法 :从人胶质瘤细胞系BT 32 5提取总RNA ,用RT PCR从中扩增出MAGE E1基因片段。将MAGE E1基因片段插入载体pGEM Teasy中 ,经全自动序列分析仪测序正确后 ,再克隆至表达载体 pGEX 4T 2中 ,构建重组表达载体pGEX 4T 2 MAGE E1,并转化大肠杆菌进行表达。结果 :用 1mmol/L异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 5h ,MAGE E1蛋白的表达即达高峰。SDS PAGE及凝胶密度扫描分析表明 ,表达出Mr 约 4 10 0 0大小的蛋白 ,占菌体总蛋白的 35 %。结论 :该基因片段的高效表达为进一步制备其抗体 ,以及制备肿瘤疫苗奠定了基础。

肿瘤-睾丸抗原MAGE-A1、MAGE-A3、MAGE-A4在胰腺癌中的表达及意义

目的:检测肿瘤-睾丸抗原(CTA)黑色素抗原A(Melanoma Antigen-A,MAGE-A)在胰腺癌中的表达情况,寻找胰腺癌中高表达MAGE亚型。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对52例胰腺癌组织及癌旁正常组织中MAGE亚型MAGE-A1、MAGE-A3、MAGE-A4的表达情况进行检测。结果:癌旁正常组织中无MAGE亚型的表达,MAGE-A1、MAGE-A3、MAGE-A4在52例胰腺癌的阳性表达率分别为5.77%(3/52)、44.23%(23/52)、23.08%(12/52);经相关分析,MAGE-A1、MAGE-A4的阳性表达与患者的年龄、性别、病变部位、分化程度无明显相关关系(P>0.05);MAGE-A3的阳性表达与肿瘤的分化程度呈负相关(r=-0.294,P=0.034),而与患者的年龄、性别、病变部位无明显相关关系(P>0.05)。结论:胰腺癌中MAGE亚型中MAGE-A3表达率最高,其阳性表达与肿瘤的分级呈负相关关系;MAGE-A3有望成为胰腺癌免疫治疗特异性的靶点。