HPLC法同时测定肿节风提取物中绿原酸、异嗪皮啶、迷迭香酸的含量

目的建立运用HPLC法同时测定肿节风提取物中绿原酸、异嗪皮啶和迷迭香酸含量的方法。方法采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB—C18（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱；流动相：乙腈（A）-0．1％甲酸（B），梯度洗脱0～30min，5％→20％A；30～40rain，20％→25％A；40～60rain，25％→29％A；60～65min，29％→32％A；流速：1mL·min^-1；检测波长：330nm；柱温：30℃；进样量：20μL。结果绿原酸、异嗪皮啶、迷迭香酸分别在0．0280～0．448μg（r=0．9998）、0．0164—0．262μg（r=0．9999）、0．113—1．81μg（r=0．9999）范围内呈良好的线性关系；平均回收率（n=6）分别为103．4％（RSD=2．77％）、98.3％（RSD=2．58％）、95.2％（RSD=2．49％）。结论该法简便快速，重复性好，准确可靠，可用于同时测定肿节风提取物中绿原酸、异嗪皮啶、迷迭香酸的含量．

肿节风提取物薄层色谱鉴别条件的优化

目的 优化肿节风提取物的薄层色谱鉴别条件,以提高方法的耐用性.方法 采用薄层色谱法,以异嗪皮啶作为对照品,以石油醚（30℃～60℃）-乙酸乙酯-甲酸（6：4：0.5）为展开剂,置紫外光灯（365nm）下检视.结果 供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,均显相同颜色的荧光斑点,且斑点清晰,分离良好.结论 优化后的薄层色谱鉴别方法可操作性强,方法更为简便,可更好地用于肿节风提取物的质量控制.

HPLC法测定肿节风提取物中异秦皮啶的含量

样品中的异秦皮啶经超声提取后用高效液相色谱法测定其含量。色谱柱为Diamonsil C18柱，以乙腈-0．1％磷酸溶液（20：80）为流动相，检测波长为344nm，流速为1．0mL·min^-1。异秦皮啶在0．01704～1．0224μg呈良好的线性关系，相关系数r为0．9996，此方法操作简便，结果准确、可靠，回收率为96．9％。

基于UHPLC-Q-TOF/MS技术分析肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分

目的筛选肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分。方法(1)以人巨核细胞白血病细胞(Dami)与人骨髓基质细胞(HS-5)共培养的方式建立巨核细胞分化障碍模型作为评价体系,实验分组:Dami组(Dami)、对照组(Dami+HS-5)、PMA组[Dami+HS-5+5 ng·mL-1佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(PMA)]、模型组[Dami+HS-5+1%兔抗大鼠血小板血清(APS)+5 ng·mL-1PMA],培养48 h。采用流式细胞术检测巨核细胞分化成熟表面标记分子CD41a、CD61的表达情况。(2)将49只SD雄性大鼠随机分为空白血浆组、15 min组、30 min组、60 min组、90 min组、120 min组、240 min组,每组7只。各给药组大鼠灌胃肿节风总黄酮提取物1.26 g·kg^(-1),在6个设定时间点(15、30、60、90、120、240 min)采血制备肿节风总黄酮提取物经时含药血浆。(3)采用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱法(UHPLC-Q-TOF/MS)对肿节风总黄酮提取物经时含药血浆进行分析,以峰面积构建肿节风总黄酮提取物经时含药血浆中的化学成分随时间变化量矩阵(X矩阵)。将所采集的6个不同时间点的肿节风总黄酮经时含药血浆对巨核细胞分化成熟障碍模型进行干预,采用流式细胞术检测细胞表面分子CD41a、CD61的表达水平,构建肿节风总黄酮提取物经时含药血浆效应矩阵(Y矩阵)。(4)将X矩阵和Y矩阵数据标准化处理后,采用偏最小二乘法(Partial least squares,PLS)计算分析量效关系,以变量重要性投影(Variable importance for projection,VIP)>1为阈值,筛选与细胞表面分子CD41a、CD61变化相关的效应成分,并进行化学成分鉴定,作为肿节风总黄酮提取物中促进巨核细胞分化的潜在效应成分,最后回归评价体系验证其药效。结果(1)与Dami组比较,对照组Dami细胞表面的CD41a表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,PMA组Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.01)。与PMA组比较,模型组Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著降低(P<0.01)。(2)与空白血浆组比较,15、30、60、90、120、240 min各时间点Dami细胞表面分子CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.01),且CD41a、CD61均在30 min组表达水平最高。在正、负离子模式下筛选出VIP值>1的潜在效应成分,并选取540.3638@12.25与559.2991@11.53两个成分进行药效学验证。559.2991@11.53被鉴定为胡萝卜苷(Daucosterol,Dau),540.3638@12.25被鉴定为迷迭香酸-4-O-β-D-葡萄糖(Rosmarinic acid 4-O-β-Dglucoside,Ros)。Ros、Dau分别干预巨核细胞分化成熟障碍模型后,与模型组比较,Ros及Dau低、中、高剂量组(40、60、80μg·mL-1)的Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论Ros、Dau可能是肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分。

注射用肿节风提取物温度敏感原位凝胶制备及体外释药评析

目的:制备注射用肿节风提取物温敏型原位凝胶制剂,并对其体外释药进行考察。方法:以泊洛沙姆407(P-407)为载体材料制备注射用肿节风提取物温敏型原位凝胶制剂,采用HPLC测定制剂在磷酸盐缓冲溶液(pH7.6)的体外释放度,并对体外释放数据进行拟合。结果:最佳处方为16%P-407+6%P-188+0.2%HPMC+0.5%苯甲醇+4%(g·mL-1)肿节风提取物,胶凝温度在33℃,体外释放行为符合Higuchi方程。结论:注射用肿节风提取物温敏原位凝胶的制备工艺简便,药物释放达到预期要求。