人结肠癌细胞胃泌素-黏着斑激酶通路的研究

目的研究胃泌素对人结肠癌细胞信号分子黏着斑激酶(FAK)酪氨酸磷酸化和蛋白质表达的影响。方法使用胆囊收缩素2受体(CCK2R)的真核表达载体pCR3.1/CCK2R,转染人结肠癌细胞株Colo320,上调胃泌素作用;使用胃泌素拮抗剂下调胃泌素作用。使用胃泌素按浓度和时间梯度刺激细胞,以免疫沉淀和蛋白质印迹法检测FAK酪氨酸磷酸化和蛋白质表达情况。结果胃泌素能够引起FAK酪氨酸磷酸化,具有时间和剂量依赖性;CCK2R表达上调可以增强此作用;胃泌素拮抗剂具有相反作用。结论FAK是胃泌素发挥效应的下游信号分子,以酪氨酸磷酸化的形式发挥作用。胃泌素CCKRFAK信号通路在胃泌素引起的肿瘤细胞增殖过程中发挥重要作用。

中药清肾颗粒对肾纤维化大鼠黏着斑激酶-Ras-丝裂素活化蛋白激酶信号转导通路的干预作用

目的：观察中药清肾颗粒对肾间质纤维化（RIF）大鼠肾组织黏着斑激酶-Ras-丝裂素活化蛋白激酶（FAK-Ras-MAPK）信号转导通路的影响。方法将40只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组、百令胶囊组和清肾颗粒组，每组10只。采用单侧输尿管结扎（UUO）法制备RIF大鼠模型。术后百令胶囊组将百令胶囊溶于4 mL温水按0.3 g·kg-1·d-1灌胃；清肾颗粒组将清肾颗粒溶于4 mL温水按6 g·kg-1·d-1灌胃，正常对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。8周后检测各组大鼠血尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）、纤维连接蛋白（FN）、α-肌动蛋白（α-SMA）水平；采用免疫组化法检测各组大鼠肾组织FAK、Ras、p38MAPK、FN、α-SMA的表达水平。结果模型组大鼠血清BUN、SCr、FN、α-SMA水平高于正常对照组；清肾颗粒组和百令胶囊组给药前血清BUN、SCr水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）；给药后两组BUN、SCr、FN、α-SMA均较模型组显著降低，且以清肾颗粒组降低更显著〔BUN（mmol/L）：13.18±4.91比18.56±5.59，SCr （μmol/L）：104.80±12.04比119.02±12.47，FN（mg/L）：29.72±16.75比46.38±8.63，α-SMA（kU/L）：5.49±2.68比7.13±2.37，均P＜0.05〕；免疫组化结果显示：模型组大鼠肾脏组织中FAK、Ras、p38MAPK及FN、α-SMA表达均高于正常对照组，清肾颗粒组和百令胶囊组上述各指标表达均较模型组显著降低，且以清肾颗粒组的下降程度更显著（FAK：3.00±1.41比5.28±2.21，FN：4.25±1.04比6.29±2.06，α-SMA：3.25±1.28比4.86±1.57， p38MAPK：2.50±1.31比4.71±2.50，Ras：3.50±1.41比4.29±1.38，均P＜0.05）。结论清肾颗粒可以降低RIF大鼠血清BUN、SCr水平，抑制肾脏内FAK-Ras-MAPK信号转导通路的活化，从而减少FN和α-SMA生成，发挥抗RIF作用。

抑制黏着斑激酶经Akt/NF-κB信号通路逆转结肠癌多细胞耐药

目的探讨抑制黏着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)在结肠癌HT29细胞中的表达能否逆转结肠癌多细胞耐药。方法采用免疫细胞化学和Westernblot检测单层细胞中FAK、FAKp的抑制情况,用MTT法检测单层细胞和多细胞球对5-FU敏感性的变化,采用流式细胞术检测抑制FAK对多细胞球5-FU诱导凋亡和自然凋亡的影响,免疫细胞化学检测单层细胞、Westernblot检测多细胞球中FAKshRNA干扰对Akt、NF-κB、Bcl-2、Caspase-3的影响。结果靶向干扰FAK能显著抑制单层细胞FAK、FAKp蛋白表达。MTT结果显示,FAKshRNA干扰增强了单层细胞和多细胞球对5-FU的敏感性,特别是后者,且二者差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞术结果显示,FAKshRNA干扰能够使多细胞球的自发凋亡率和5-FU诱导凋亡率显著增加(P=0.001,P=0.000),且两者之间差异显著(P=0.003)。在单层和多细胞球细胞中,FAKshRNA干扰后,Akt、NF-κB、Bcl-2的水平明显下调,而Caspase-3水平上调。结论抑制FAK表达能增强结肠癌多细胞球细胞对5-FU的敏感性,逆转其多细胞耐药性,其分子机制是通过FAK/Akt/NF-κB信号通路实现的。

整合素/黏着斑激酶信号通路及转化生长因子-β信号通路与肝星状细胞活化的关系

肝损伤-炎症-修复导致肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）活化,分泌大量的胶原蛋白,引起细胞外基质细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的合成与降解失调,是肝纤维化（hepatic fibrosis）形成的关键.整合素（integrin）/黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）信号通路可以通过多条途径促进HSC的活化,加重转化生长因子-β（TGF-β）诱导的纤维化进程.本文就整合素/FAK信号通路促进HSC的活化及其与TGF-β信号通路的相互作用作一综述.

膜型基质金属蛋白酶-1在黏着斑激酶相关非激酶调控肝星状细胞胶原代谢中的作用

目的:探讨黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)对纤维连接蛋白(FN)刺激的肝星状细胞(HSC)膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)表达的影响并探讨MT1-MMP在FRNK调控HSC胶原代谢中的作用。方法:应用体外细胞培养技术,脂质体介导法进行FRNK质粒瞬时转染;采用Western blotting法测定FRNK蛋白在瞬时转染时相应的表达,鉴定转染效果;分别应用Western blotting和RT-PCR方法测定MT1-MMP在HSC中的相应表达。结果:FRNK质粒成功转染HSC,于转染48h时,FRNK蛋白表达最强,P<0·05;FRNK转染后在基因水平上:MT1-MMP mRNA表达明显增加;翻译蛋白水平上:FRNK质粒转染HSC48h后,MT1-MMP蛋白表达量显著升高。结论:脂质体介导下FRNK质粒转染,可使外源性FRNK在HSC内大量表达,FRNK可能通过上调MT1-MMP值来抑制HSC胶原合成。

黏着斑激酶信号通路在细菌侵入非吞噬细胞中的作用

细菌对宿主细胞的黏附和侵袭是引发传染病的重要步骤。细菌在黏附的过程中,其表面结构或特殊黏附分子和宿主细胞表面受体相互作用激活黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK),通过FAK/Src-Cortactin-Arp2/3通路和FAK/PI3K-Rac通路调控细胞骨架重排,促进细菌侵入非吞噬细胞。为了深入探讨细菌侵入非吞噬细胞的整个过程及调控机制,就细菌对非吞噬细胞的黏附、侵入以及细胞FAK信号通路在此过程中的调节作用进行综述。

I型单纯疱疹病毒感染对人角膜上皮细胞基质金属蛋白酶-2和黏着斑激酶表达的影响

背景研究表明，I型单纯疱疹病毒（HSV-1）感染可导致角膜上皮细胞（CECs）基质金属蛋白酶（MMPs）表达、分泌和活性改变。黏着斑激酶（FAK）对MMPs的表达、释放和激活起着重要的调节作用。人角膜上皮感染HSV-1后FAK的表达变化鲜有报道。目的探讨HSV-1感染对体外培养的人CECsMMP-2和FAK表达的影响。方法以HSV-1（F株）感染体外培养的人CECs，应用逆转录PCR（RT—PCR）、免疫印迹法、免疫组织化学法分别于感染后2、20、40h检测人CECsMMP-2、FAK及磷酸化黏着斑激酶（p-FAK）的表达情况。结果RT．PCR法检测结果显示，感染细胞的MMP-2mRNA、FAKmRNA较非感染细胞（即加入无病毒无血清培养液的阴性对照组）的表达明显增强，不同时间点间比较差异无统计学意义，组别与时间点间不存在交互作用（MMP-2mRNA：F目目=0．968，P=0．436；F蚴I=47．649，P=0．000；F女Ⅱ#目=0．757，P=0．536．FAKmRNA：F时间=0．658，P=0．631；F组别=35．182，P=0．000；F交互作用=1．386，P=0．137）。Westernblot法检测结果显示，感染后2h时p-FAK、FAK、MMP-2在感染细胞与非感染细胞间差异均无统计学意义（P’0．05），感染后20h、40h感染细胞的蛋白表达较非感染细胞均明显增强（P〈0．05）。免疫组织化学染色检测结果显示，随着感染时间的延长，MMP-2、FAK、p-FAK蛋白染色阳性细胞数目增多。结论在HSV-1感染早期，FAK的激活可刺激MMPs活性增强，从而加速角膜溃疡及坏死性病变的形成。

创伤后深静脉血栓形成中的黏着斑激酶信号通路

背景:创伤后深静脉血栓形成的分子机制复杂,黏着斑激酶信号通路在深静脉血栓形成过程中的作用尚未阐明。目的:探讨黏着斑激酶信号通路在创伤性深静脉血栓形成中的作用。方法:取20只SD大鼠制备股骨骨折模型。造模后5d,根据血栓形成情况将模型大鼠分为2组:血栓形成组和无血栓形成组,每组10只。另取10只正常大鼠作为对照组。无创切取大鼠股静脉血管组织,抽取总RNA,Genechip Rat Genome4302.0芯片测定股静脉RNA的表达,并分析黏着斑激酶信号通路基因表达的变化。结果与结论:与无血栓形成组比较,血栓形成组中黏着斑激酶信号通路细胞外基质、蛋白激酶C、Fyn、辅肌动蛋白、Vav等关键基因均上调;下调的有整联蛋白α、肌球蛋白轻链磷酸酶、c-Jun基因。结果提示黏着斑激酶信号通路可能是调控血栓生物学状态的重要信号通路。

RGD多肽修饰多孔钽可激活MG63细胞整合素/黏着斑激酶信号通路

背景:在材料表面复合RGD多肽可诱导成骨细胞整合素基因的表达,促进成骨细胞黏附在生物材料的表面并分化成熟,促进新骨形成。目的:分析RGD多肽修饰国产多孔钽后对MG63细胞整合素/黏着斑激酶信号通路的影响。方法:制备RGD多肽修饰的多孔钽材料。将MG63细胞分别接种于多孔钽、RGD多肽修饰的多孔钽材料表面,以单纯培养的MG63细胞为空白组,培养1,3,5,7 d时,采用CCK-8法检测细胞增殖;培养1,3,5 d时,倒置显微镜下观察细胞生长状态;培养3,5 d时,扫描电镜观察细胞黏附;培养5 d时,采用Western-blot与RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、整合素β1与黏着斑激酶表达。结果与结论:①RGD修饰组培养3,5,7 d的细胞增殖快于多孔钽组、空白组(P<0.05),多孔钽组各时间点细胞增殖与空白组比较差异无显著性意义(P>0.05);②倒置显微镜显示,培养1 d时,多孔钽组、RGD修饰组细胞贴附在材料边缘,细胞数量随着培养时间的延长逐渐增加,其中RGD修饰组细胞数量及密集程度优于多孔钽组;③扫描电镜显示,培养3 d时,多孔钽组、RGD修饰组材料表面均可见细胞黏附生长,细胞在材料孔壁及孔隙内黏附生长,伸出伪足嵌入孔洞内;5 d时,细胞分泌大量细胞外基质,细胞通过基质相互连接并逐渐覆盖材料表面,其中RGD修饰组细胞生长状态、基质分泌及细胞覆盖面积优于多孔钽组;④Western-blot检测显示,RGD修饰组Ⅰ型胶原、整合素β1蛋白表达高于多孔钽组、空白组(P<0.05),多孔钽组Ⅰ型胶原、整合素β1、黏着斑激酶蛋白表达高于空白组(P<0.05);⑤RT-PCR检测显示,RGD修饰组Ⅰ型胶原、整合素β1与黏着斑激酶mRNA表达高于多孔钽组、空白组(P<0.05),并且多孔钽组高于空白组(P<0.05);⑥结果表明,RGD多肽修饰多孔钽后可上调细胞膜上Ⅰ型胶原、整合素β1表达激活整合素/黏着斑激酶信号通路,促进细胞黏附、生长。

慢性阻塞性肺疾病患者血清IL-6和黏着斑激酶水平检测临床意义

目的探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者检测血清IL-6和粘着斑激酶（FAK）水平的意义。方法选取COPD患者120例，对照组100例健康人群，通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清IL-6和FAK水平。结果对照组和CC）PD各分级组间血尿酸、胆固醇和三酰甘油差异均无统计学意义（F=0．891～1．254，均P〉0．05），而FAK和IL-6水平比较差异有统计学意义（F-10．451～25．387，均P〈0．05）。COPDⅠ～Ⅳ级IL-6水平有升高的趋势，但各分级组间IL-6水平差异无统计学意义（t=0．098～0．145，均P〉0．05）。COPDⅠ～Ⅳ级FAK水平差异有统计学意义（t=33．541～55．612，均P〈0．05）。IL-6和FAK存在显著的正相关（r=0．881）。结论检测血清FAK可反映cOPD患者严重程度，且它是呼吸道平滑肌细胞增殖的靶标。

卵巢上皮性癌组织中黏着斑激酶和肝癌缺失基因-1 mRNA的表达

目的:检测卵巢上皮性癌组织中黏着斑激酶(FAK)和肝癌缺失基因-1(DLC1)mRNA的表达。方法:采用逆转录聚合酶链反应检测12例正常卵巢和32例卵巢上皮性癌组织中FAK与DLC1 mRNA的表达。结果:卵巢上皮性癌组织中FAK mRNA的表达水平(0.81±0.33)高于正常卵巢组织(0.24±0.15),2者相比,差异有统计学意义(t=2.979,P=0.007);FAK mRNA的表达水平与卵巢上皮性癌的分化程度、淋巴结转移和腹水形成有关(t/F=3.405,2.223和2.330,P均<0.05)。卵巢上皮性癌组织中DLC1 mRNA的表达水平(0.30±0.11)低于正常卵巢组织(0.68±0.17),2者相比,差异有统计学意义(t=-3.284,P=0.013);DLC1 mRNA的表达与卵巢上皮性癌的临床分期、淋巴结转移和腹水形成有关(t/F=3.156,2.944和2.470,P均<0.05)。卵巢上皮性癌组织中FAK与DLC1 mRNA的表达有关联(rP=0.369,P=0.025)。结论:FAK的过表达和DLC1低表达或表达缺失可能与卵巢上皮性癌的发生、发展有关;联合检测2者有助于判断卵巢上皮性癌的恶性程度。

川芎嗪对人肝癌细胞钙激活中性蛋白酶-2、黏着斑激酶及迁移侵袭能力的影响

目的探讨川芎嗪(TMP)对人肝癌细胞钙激活中性蛋白酶(Calpain)-2、黏着斑激酶(FAK)及迁移侵袭能力的影响,以了解其抑制肝癌的机制。方法将人肝癌细胞(MHCC97-H)分为对照组和TMP组,TMP组予以TMP 1.0 mg/ml干预24 h,采用Western印迹检测两组Calpain-2、FAK蛋白表达情况,划痕实验、Transwell实验检测MHCC97-H迁移、侵袭能力。结果与对照组比较,TMP组Calpain-2、FAK蛋白表达均明显下调(P<0.05);其迁移率、穿膜细胞数及吸光度值均明显下降(P<0.05)。结论下调肝癌细胞系(MHCC97-H)的Calpain-2、FAK水平可能是TMP抗肝癌作用机制之一。

黏着斑激酶介导信号通路在瓣膜性心房颤动心房纤维化中的研究

目的:瓣膜性心房颤动(房颤)往往伴随心房重构,心房纤维化是心房重构的一个重要特征。黏着斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)作为非受体酪氨酸激酶家族中的一员,其在纤维增生过程中发挥着重要的调节作用。因此,本研究拟探索FAK在瓣膜性房颤患者纤维化心房中的变化,并对其介导的下游信号通路进行探究。

黏着斑激酶介导信号通路在心房颤动模型小鼠心房重构中的研究

目的探索黏着斑激酶(FAK)及其介导下游信号通路AKT/S6K在心房颤动(房颤)小鼠模型心房重构中分子改变。方法利用为心脏特异性表达人源肾素原受体(pRR)的转基因小鼠作为房颤小鼠模型,选取野生型C57BL/6J小鼠为对照组,两组各选取16例8月龄小鼠作为研究对象,通过超声心动图检测观察心房心室改变;获取心房组织,分别进行Masson病理染色和蛋白免疫印迹,观察两组纤维化程度和FAK及其下游通路在两组小鼠心房组织中的变化。结果房颤模型小鼠在8月龄已经岀现明显的持续性房颤,超声心动图提示房颤组小鼠心房和心室都较对照组小鼠扩大,有心房重构。病理提示房颤组小鼠心房纤维化程度较高,同时FAK及下游AKT/S6K通路蛋白的磷酸化表达均发生上调。结论心房重构是房颤引起的心肌组织结构的变化,为房颤持续和血栓形成提供基质。房颤可引起心房扩大和纤维化形成,其中FAK介导的AKT/SK通路可能是参与重构的重要分子。

黏着斑相关非激酶抑制肝癌细胞迁移及分子机制研究

目的用黏着斑激酶(FAK)磷酸化抑制剂黏着斑相关非激酶(FRNK)阻断FAK磷酸化,探讨FAK信号途径在肝癌细胞迁移中的作用、分子机制及FRNK对迁移的抑制效应。方法利用EGFPFRNK质粒转染培养的肝癌HepG2细胞,Transwell小室模型研究对细胞迁移能力的影响,Westernblot法检测FAK和磷酸肌醇3激酶(PI3K)的磷酸化水平,并通过激光共聚焦分析免疫荧光双染后转录因子核因子κB(NFκB)核转位的情况。结果EGFPFRNK重组质粒转染HepG2细胞后,外源性FRNK可显著抑制HepG2细胞的迁移能力,转染组的磷酸化FAK比未转染组下降约50.2%(P<0.01)。PI3K水平也较未转染组降低了39.5%(P<0.05)。代表NFκB核转位的细胞核区与胞质区绿色荧光比值分别为3.495±0.227和1.182±0.106,转染组显著低于未转染组(P<0.01)。结论外源性FRNK可抑制FAK磷酸化,从而降低抑制PI3K和NFκB的活化水平而减少细胞迁移,FAK可能是介导肝癌HepG2细胞迁移的重要信号途径。

黏着斑激酶

黏着斑激酶是细胞基质-整合素信号通路的重要传递者，作为多种信号通路的枢纽，它可以直接参与细胞多种功能的调节。本文综述了FAK的结构、激活途径以及其与多种信号分子的相互作用，以便我们能更好地了解FAK的功能。

黏着斑激酶与细胞迁移

细胞迁移过程始于细胞前端板状伪足的形成、外周黏附的建立、细胞体的收缩和尾部的解离。黏着斑激酶是一种非受体酪氨酸蛋白激酶,通过其激酶活性和"脚手架"的功能在细胞迁移的各个过程中发挥关键作用。现重点介绍黏着斑激酶介导的信号转导通路及其在调控细胞迁移方面的研究进展。

骨桥蛋白诱导的黏着斑激酶信号途径参与大肠癌的侵袭与转移

目的观察并分析大肠癌中骨桥蛋白(OPN)、整合素β3、黏着斑激酶(FAK)和磷脂酰肌醇激酶(PI3K)的表达特点、相互关系以及与大肠癌进展的相关性,试图揭示介导大肠癌侵袭的信号途径。方法采用SABC免疫组织化学方法,检测这4种抗原在14例结肠癌组织和16例直肠癌组织以及相应的正常组织中的表达。结果OPN在正常组织中主要表达于间质,而在大肠癌组织中主要分布于实质,且随Dukes分期的进展,实质中OPN的阳性染色颗粒逐渐增多,间质中却明显减少;整合素β3在正常组织中呈中等量表达,而在肿瘤组织中几乎检测不到其存在;FAK和PI3K在正常组织中基本无表达,而在肿瘤组织中其表达量明显升高,其表达水平与肿瘤Dukes分期密切相关,二者在肿瘤实质中的表达模式与OPN具有明显的一致性。结论OPN诱导的FAK和PI3K信号途径参与了大肠癌中晚期发生的侵袭与转移过程。

内皮素—1促进人肺血管平滑肌细胞黏着斑激酶的表达

目的探讨内皮素-1(ET-1)与黏着斑激酶(FAK)在肺血管平滑肌细胞增生中的关系及其影响。方法采用免疫印迹方法测定了不同组别中FAK的表达,并采用流式细胞仪分析了不同组别细胞周期的变化。结果Westernblot分析结果表明:对照组FAK蛋白质无表达,其余4组细胞的FAK均有表达,其中ET-1组表达最高;BQ123组、混合组与fibronection(FN)组之间比较没有明显差异;但都比ET-1组低(P<0.01)。流式细胞仪测定结果示:与对照组比较:FN组、混合组、ET-1组、BQ123组均有明显差异(P<0.01),均表现为细胞中G1相的比例减少,而S相增高(P<0.01);与FN组比较,BQ123组、混合组无明显差异;但ET-1组有明显差异(P<0.01),BQ123、混合组与FN组。的G1相、S相变化基本相同(P>0.05)。结论ET-1促进人肺血管平滑肌细胞FAK的表达,在肺血管结构的重构方面可能有着重要的病理生理学意义。

黏着斑激酶在结直肠癌中的研究进展

黏着斑激酶(focal adhe sion kinase,FAK)是一种非受体酪氨酸激酶,他作为整合素介导的信号传导过程中的中心分子与多个信号通路相交通,参与细胞的生长、增殖、损伤修复及凋亡等多种生物学行为.FAK在结直肠癌中高表达,在正常大肠组织中呈弱阳性或阴性.FAK可能成为结直肠癌治疗的一个重要靶点,抑制FAK的功能可以阻断多条与肿瘤相关的信号通路.