去甲硫氨酸环境加化疗药物对人胃癌原代细胞生长的阻抑

目的 :探索人胃癌原代细胞在体外去除甲硫氨酸 (Met)但含同型半胱氨酸 (Hcy)的培养基 (Met-Hcy+)中能否正常生长和去Met状态是否增加化疗药物对胃癌细胞的杀伤作用。 方法 :将 40例新鲜人胃癌组织制成单细胞悬液 ,分别置于Met-Hcy+和Met+Hcy-(含Met不含Hcy)的培养基中培养 48h ,利用MTT等方法检测各组细胞增殖情况以及在不同培养基中分别加入ADM、DDP、5 FU、MMC和MTX化疗药物后对各组细胞增殖的抑制程度。 结果 :①人胃癌原代细胞在Met-Hcy+培养基中表现为细胞总数减少 ;②Met-Hcy+培养基分别与ADM、DDP、5 FU、MMC和MTX联合时 ,可显著提高各化疗药物对胃癌原代细胞的杀伤作用。 结论 :①人胃癌原代细胞在体外培养中表现出对Met的依赖性 ;②Met-Hcy+培养环境联合应用各化疗药物 ,可提高对人胃癌原代细胞的杀伤作用 ;③MTT法是检测“Met饥饿法”联合个体化化疗药物敏感性的有效手段。

人胃癌原代细胞的甲硫氨酸依赖性研究

目的 :探索人胃癌和胃粘膜上皮原代细胞在体外不含甲硫氨酸 (Met)而含同型半胱氨酸 (Hcy)培养基 (Met-Hcy+)中能否正常生长及是否存在Met依赖性。 方法 : 将新鲜人胃癌及胃粘膜组织制成单细胞悬液 ,分别置于Met-Hcy+和Met+Hcy-培养基中培养 ,利用细胞计数和流式细胞分选仪检测各组细胞增殖状态。 结果 :人胃癌原代细胞在Met-Hcy+培养基中生长受抑 ,表现为细胞总数减少 ,G0 、G1期细胞比例下降 ,S期细胞比例升高。胃粘膜细胞在Met-Hcy+培养基中生长正常 ,细胞总数及细胞周期比例未受影响。 结论 :人胃癌原代细胞在体外培养中表现出Met依赖性 ,而胃粘膜细胞则未见类似现象。

甲硫氨酸缺乏及联合化疗对人原代胃癌细胞的影响

目的 :探索人原代胃癌细胞和胃黏膜上皮原代细胞在体外缺乏甲硫氨酸 (Met)的培养基中能否正常生长 ;并评价去Met状态能否增强化学药物对胃癌细胞的杀伤作用。方法 :将新鲜人胃癌及胃黏膜组织制成单细胞悬液 ,分别置于不含Met、但含同型半胱氨酸 (Met-Hcy+ )和含Met、不含Hcy(Met+ Hcy-)的培养基中培养 ,或联合应用不同化学药物 ,利用细胞计数、流式细胞仪 (FCM)和MTT法检测各组细胞增殖状态。结果 :①人原代胃癌细胞在Met-Hcy+ 培养基中生长受抑制 ,表现为细胞总数减少 ,G0 、G1期细胞比例下降 ,S期细胞比例升高 ;而胃黏膜细胞生长正常。②Met-Hcy+ 培养基与不同化学药物联合应用时 ,胃癌原代细胞明显减少。结论 :①人原代胃癌细胞在体外培养中表现出对Met的依赖性 ,而胃黏膜细胞则未见类似现象。②Met-Hcy+ 培养环境联合化学药物 ,可提高对人原代胃癌细胞的杀伤作用。

CD133^(+)与CD133^(-)人原代胃癌细胞的差异表达基因及核心基因的筛选

目的通过生物信息学方法筛选出CD133^(+)与CD133^(-)人原代胃癌细胞的差异表达基因(DEGs),寻找可能参与胃癌发生的关键基因。方法根据人CD133^(+)和CD133^(-)人原代胃癌细胞的转录组数据,以|log2FC|≥1,P<0.05为标准筛选DEGs;用Metascape对DEGs进行基因本体论(GO)富集及京都基因和基因组数据库(KEGG)通路富集分析,利用STRING数据库及Cytoscape 3.8.0软件构建蛋白质^(-)蛋白质相互作用(PPI)网络,筛选核心基因;利用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析核心基因与胃癌患者总生存率的关系。结果在CD133^(+)与CD133^(-)人原代胃癌细胞间筛选出305个DEGs,其中下调的DEGs 227个,上调的DEGs 78个;这些DEGs主要参与钙离子通道调节、DNA复制及DNA的代谢过程;KEGG通路分析提示DEGs主要富集于IL^(-)17信号通路、RNA运输以及MAPK信号通路;PPI筛选出20个关键基因,其中趋化因子8(CXCL8)、TCP1伴侣蛋白亚基2(CCT2)、核糖体产物因子2(RPF2)、蛋白酶体20S亚基α4(PSMA4)、胞质伴侣素6A(CCT6A)、蛋白酶体26S亚基(PSMD12)以及凝聚素Ⅰ复合物亚基G(NCAPG)表达与胃癌患者的总生存率负相关,RUNX家族转录因子2表达与胃癌患者的总生存率正相关(P<0.05)。结论获得CD133^(+)与CD133^(-)人原代胃癌细胞的305个DEGs及20个核心基因。

CD133^(+)原代胃癌细胞生长、迁移和侵袭能力的检测

目的利用免疫磁珠从人原代胃癌细胞中分选CD133^(+)胃癌细胞,研究其在体内外的增殖、迁移和侵袭能力。方法利用免疫磁珠从人原代胃癌细胞中分选CD133^(+)和CD133-原代胃癌细胞,用免疫荧光检测细胞中CD133的表达,进行细胞克隆形成实验、细胞划痕实验和Transwell侵袭检测细胞体外增殖、迁移和侵袭能力;建立CD133^(+)和CD133-原代胃癌细胞裸鼠移植瘤模型,检测其体内成瘤能力及移植瘤中CD133和Ki67表达。结果用免疫磁珠成功分选到CD133^(+)和CD133-原代胃癌细胞,与CD133-原代胃癌细胞组比较,免疫荧光证实CD133^(+)细胞中CD133高表达、体外形成的细胞克隆数明显增加(P<0.001);细胞划痕和Transwell侵袭实验结果显示,CD133^(+)和CD133-细胞的伤愈百分比分别为(76.5±1.4)%和(39.8±2.0)%,侵袭细胞数分别为(624±37)/视野和(281±31)/视野,差异均有统计学意义(P<0.001);CD133^(+)细胞裸鼠内成瘤能力明显高于CD133-组,瘤组织中CD133和Ki67的表达水平也高于CD133-细胞(P<0.01)。结论CD133^(+)人原代胃癌细胞具有更强的体外增殖,迁移和侵袭能力及体内成瘤能力。

ERK/MAP激酶抑制剂U0126增强索拉菲尼对原代胃癌细胞的抑制效应

目的:研究ERK/MAP激酶抑制剂U0126是否增强索拉菲尼对原代胃癌细胞的抑制效应,并探索其可能机制。方法:选取病理确诊胃癌患者外科手术标本培养原代胃癌细胞。使用索拉菲尼和U0126分别或同时处理原代细胞。MTT试验检测处理后细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Q-PCR和Western Blotting分别检测转录水平和翻译水平增殖和凋亡相关分子的表达情况。结果:使用索拉菲尼和U0126同时处理的原代胃癌细胞,其增殖明显受到抑制,凋亡增加,并均强于单独处理组。同时处理组中p-ERK和p-Raf表达水平降低,Bim、Bax和Bad水平升高,水平变化均强于单独处理组,P<0.01。结论:U0126能够增强索拉菲尼抑制胃癌细胞增殖和促进细胞凋亡的效应,其机制可能是二者在抑制ERK/MAPK通路及诱导Bcl-2家族中促凋亡分子表达上有协同效应。

顺铂杀伤原代胃癌细胞的体内外实验研究

目的 评价顺铂对原代胃癌细胞的体内外杀伤效应。方法 采用纯化后的人体新鲜胃癌细胞，用台盼蓝染色法和四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测经顺铂作用后细胞活力及代谢活性的变化；另用末端脱氧核苷酸转移酶法 (TdT法 )和正常免疫小鼠肾包膜下种植法 (SRC法 )分别检测顺铂体外促凋亡效应及体内抑瘤率。结果 经顺铂作用后，肿瘤细胞出现明显的形态学改变和代谢活性的下降；不同个体肿瘤细胞对顺铂敏感性不同，低分化胃癌细胞较高分化者更敏感（ 40.25％比 34.26％）； 10倍血药浓度下顺铂对肿瘤细胞的抑制率高于单倍浓度（ 40.10％比 38.45％）。 经顺铂作用后，原代胃癌细胞凋亡率增加，为 32.12％。顺铂还能明显抑制体内移植瘤的生长。结论 顺铂可能通过包括诱导凋亡在内的多种途径杀伤原代胃癌细胞，尤对低分化者显示了明显的肿瘤杀伤效应。

胃、十二指肠

化疗药物对原代胃癌细胞的体外杀伤效应及其与端粒酶逆转录酶mRNA表达的关系, 钙粘蛋白基因高甲基化与胃癌发生、发展的关系, E2F-1基因真核表达载体的构建及其对胃癌细胞株MKN-45增殖的影响, 水通道蛋白4在人胃癌组织中的表达分布及临床意义, KAI1。