胃癌相关基因GCRG213正反义真核表达载体的构建及鉴定

目的:构建胃癌相关基因GCRG213正、反义真核表达载体．方法:从pGEM-T质粒上扩增出的胃癌相关基因GCRG213的DNA片段,两端分别引入限制性内切酶KpnI,BamHI和EcoRI, BamHI识别位点．按正向、反向克隆入真核表达载体pcDNA3．1(+)．测序正确的重组子pcDNA3．1-a(含GCRG213正向克隆), pcDNA3．1-b(含GCRG213反向克隆)和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞, G418筛选获得稳定转染的细胞株,采用半定量RT-PCR及Wlestern blot比较转染不同质粒的 MKN45细胞中GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异．结果:经测序证实,GCRG213正向克隆和反向克隆正确插入真核表达载体 pcDNA3．1(+),组成重组子pcDNA3．1-a(含正向克隆),pcDNA3．1-b(含反向克隆)．重组子 pcDNA3．1-a,pcDNA3．1-b和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株．与对应的空载体比较,RT-PCR结果显示转染pcDNA3．1-a的 MKN45细胞中其mRNA的表达上调35．4％,而转染pcDNA3．1-b的MKN45细胞中其mRNA 的表达下调32．1％;Western blot结果显示转染 pcDNA3．1-a的MKN45细胞中其蛋白的表达上调49．4％,而转染pcDNA3．1-b的MKN45细胞中其蛋白的表达下调50．3％．结论:成功构建胃癌相关基因GCRG213正、反义真核表达载体．

胃癌相关基因GCRG 213正反义表达重组腺相关病毒载体的构建

目的构建胃癌相关基因OCRG 213正、反义表达重组腺相关病毒载体,制备相应的重组腺相关病毒。方法通过引入限制性内切酶识别位点从pGEM-T质粒上扩增出胃癌相关基因GCRG 213的DNA片段,按正、反向克隆入pCMV-MCS载体,测序正确后用NotI酶切,克隆入pAAV-MCS载体,单、双酶切鉴定后,同pAAV-Helper、pAAV- RC质粒用磷酸钙转染法共转染AAV-293细胞制备病毒。结果成功构建包含胃癌相关基因GCRG213正、反义克隆的重组腺相关病毒载体,并制备出滴度为4×1010v．g．／ml腺相关病毒。结论载体的构建和病毒制备为进一步研究GCRG 213的体内功能打下了基础。

胃癌相关基因GCRG213真核表达载体的构建及其对胃癌细胞成瘤性的影响

目的:研究胃癌相关基因GCRG213正义、反义转染对胃癌细胞MKN45成瘤性的影响。方法:采用半定量RT-PCR及Western免疫印迹法比较转染不同质粒的MKN45细胞中GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异。选取稳定转染不同质粒的MKN45细胞,绘制细胞生长曲线,平板克隆形成实验、裸鼠移植瘤实验分析转染细胞成瘤性。结果:平板克隆形成实验显示转染了GCRG213正向克隆的MKN45细胞其细胞克隆形成数量高于转染空载体的细胞,而转染了GCRG213反向克隆的MKN45细胞其细胞克隆形成数量低于转染空载体的细胞。在裸鼠体内进行的转染细胞的成瘤性实验可见,转染了GCRG213正向克隆的MKN45细胞在裸鼠体内成瘤性高于转染空载体的细胞,而转染了GCRG213反向克隆的MKN45细胞在裸鼠体内成瘤性低于转染空载体的细胞。结论:胃癌相关基因GCRG213可促进肿瘤细胞的生长,促进肿瘤细胞的成瘤性,GCRG213反义转染可抑制肿瘤细胞的生长,抑制肿瘤细胞的成瘤性。

半夏泻心汤对慢性萎缩性胃炎癌前病变病人胃癌相关基因的影响

目的:探讨半夏泻心汤对慢性萎缩性胃炎癌前病变病人胃癌相关基因的影响。方法:收集慢性萎缩性胃炎癌前病变病人96例,随机分为2组,对照组病人给予胃复春片,观察组病人则加服半夏泻心汤,比较2组病人临床症状积分、总体治疗效果、胃癌相关基因积分与表达。结果:治疗后,观察组病人临床症状总积分(8.96±4.37)分,明显低于对照组的(13.68±4.96)分(P<0.01),观察组Cyclin D1积分(1.30±0.48)分,低于对照组的(1.83±0.51)分(P<0.01),观察组PTEN积分(2.96±0.50)分,高于对照组的(2.33±0.42)分(P<0.01),观察组总有效率78.00%,明显高于对照组的54.35%(P<0.05)。结论:半夏泻心汤对慢性萎缩性胃炎癌前病变病人胃癌相关基因的影响显著,具有借鉴意义。

胃癌相关基因——胃动蛋白基因家族的研究进展

胃癌的发生涉及到复杂的基因改变。胃动蛋白基因家族是胃组织特异性的胃癌抑制基因,且与三叶草因子家族、HP感染导致胃癌过程存在相关性。作者对国内外关于该家族基因的相关系统研究做一综述,以供参考。

胃癌相关基因GCRG213真核表达载体的构建及其对胃癌细胞MKN45的影响

目的研究胃癌相关基因GCRG213正义、反义转染对胃癌细胞MKN45的影响。方法采用分子克隆及基因转染技术将GCRG213基因转入哺乳动物细胞,并结合反义转染技术研究GCRG213基因对胃癌细胞恶性生物学行为的影响。结果GCRG213正向和反向克隆正确插入真核表达载体pcDNA3.1(+);重组子pcDNA3.1-a、pcDNA3.1-b和空载体转染人胃癌细胞系MKN45细胞;正义转染其mRNA的表达上调,而反义转染下调;正义转染加快MKN45细胞生长增殖速度、降低细胞凋亡率,反义转染减慢MKN45细胞生长增殖速度,增加细胞凋亡率。结论胃癌相关基因GCRG213可促进肿瘤细胞生长、分裂和转移,抑制肿瘤细胞的凋亡,可能是一个新发现的恶性肿瘤癌变的促进因素。

胃癌相关基因GCRG213正反向转染和RNA干扰对裸鼠胃癌种植瘤的影响

目的:观察胃癌相关基因GCRG213体内正、反向转染和RNA干扰对裸鼠胃癌种植瘤的影响.方法:将对数生长期的胃癌细胞株MKN45接种到裸鼠皮下,成瘤后用制备好的分别含GCRG213正、反义克隆和RNAi片段的腺相关病毒分别在肿瘤局部注射,以空病毒和生理盐水对照,继续喂养2 wk后处死,取肿瘤测量重量,并用半定量RT-PCR检测肿瘤组织GCRG213mRNA表达水平.结果:裸鼠接种MKN45细胞3 wk左右皮下形成肿瘤结节.肿瘤组织重量在正向转染组为5.12±1.02g、反向组1.22±0.46g、RNAi组0.81±0.37g、空病毒组3.13±0.69g、生理盐水组3.45±0.87g;各组GCRG213 mRNA表达水平依次分别为0.406±0.01 3,0.211±0.021,0.087±0.015,0.312±0.050,0.283±0.061.结论:三种腺相关病毒分别有效地介导了GCRG213正、反义克隆和RNAi片段的体内表达,提高或降低了GCRG213 mRNA的表达水平,促进或抑制了胃癌种植瘤的生长.

胃癌相关基因 gcI的克隆及其功能预测分析

目的：分析胃癌相关基因gcI的克隆片段，并预测该基因片段的功能。方法利用mRNA差异技术，分别筛选胃癌前期患者及正常人胃黏膜组织中的差异表达基因段gcI，通过5’RACE方法扩增差异表达基因的全长cRNA，根据数据库查阅结果分析所得cRNA中氨基酸序列的生物学特征，并检测其编码蛋白不同胃组织中的表达。结果两组gcI基因表达结果和IP3R水平比较差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论胃癌相关基因gcI克隆后的功能分析结果显示，gcI基因在胃癌前期患者体内的表达水平高于正常标准，预测胃癌相关基因gcI是胃癌病变中的影响因素和重要变化指标，其具体功能尚待进一步研究分析。

基于数据库的胃癌相关差异表达基因筛选及生物学功能分析

目的基于数据库筛选胃癌相关差异表达基因,分析胃癌相关差异表达基因的生物学功能及相关信号通路,探索胃癌相关核心差异表达基因与胃癌预后的关系。方法从GEO数据库选取胃癌相关基因芯片GSE79973、GSE54129,应用GEO2R分别筛选出两组芯片胃癌组织与正常胃黏膜组织的差异表达基因,取交集后得到共有差异表达基因。应用DAVID对差异表达基因进行生物学功能及信号通路分析。采用STRING构建差异表达基因蛋白互作网络,应用Cytoscape软件的MCODE插件筛选胃癌相关核心差异表达基因。对核心差异表达基因与胃癌预后的关系进行分析。结果相对于正常胃黏膜组织,胃癌组织差异表达基因共164个,其中42个上调、122个下调,主要存在于胞外区、蛋白细胞外基质、细胞外基质、细胞外外泌体等部位,主要涉及细胞外基质受体相互作用、局部黏附、蛋白质消化和吸收、细胞色素P450代谢等相关通路。初步筛选出13个胃癌相关核心基因(COL1A2、BGN、THBS2、FN1、THBS1、COL1A1、COL4A1、SPARC、COL11A1、COL6A3、COL12A1、TIMP1、SPP1),除THBS1外,其余12个与胃癌不良预后明显相关(P均<0.05)。结论与正常胃黏膜组织相比,胃癌组织相关差异表达基因共164个,其中42个上调、122个下调,主要在胞外区、蛋白细胞外基质等部位,主要与细胞外基质受体相互作用、局部黏附等相关通路有关;13个胃癌相关核心基因COL1A2、BGN、THBS2等中有12个与胃癌不良预后相关。