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胃癌相关基因GCRG213正反义真核表达载体的构建及鉴定 被引量:4
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作者 高利利 吴本俨 +4 位作者 王孟薇 黄海力 伍银桥 尤纬缔 王卫华 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2006年第15期1453-1457,共5页
目的:构建胃癌相关基因GCRG213正、反义真核表达载体.方法:从pGEM-T质粒上扩增出的胃癌相关基因GCRG213的DNA片段,两端分别引入限制性内切酶KpnI,BamHI和EcoRI, BamHI识别位点.按正向、反向克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+).测序正确... 目的:构建胃癌相关基因GCRG213正、反义真核表达载体.方法:从pGEM-T质粒上扩增出的胃癌相关基因GCRG213的DNA片段,两端分别引入限制性内切酶KpnI,BamHI和EcoRI, BamHI识别位点.按正向、反向克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+).测序正确的重组子pcDNA3.1-a(含GCRG213正向克隆), pcDNA3.1-b(含GCRG213反向克隆)和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞, G418筛选获得稳定转染的细胞株,采用半定量RT-PCR及Wlestern blot比较转染不同质粒的 MKN45细胞中GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异.结果:经测序证实,GCRG213正向克隆和反向克隆正确插入真核表达载体 pcDNA3.1(+),组成重组子pcDNA3.1-a(含正向克隆),pcDNA3.1-b(含反向克隆).重组子 pcDNA3.1-a,pcDNA3.1-b和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株.与对应的空载体比较,RT-PCR结果显示转染pcDNA3.1-a的 MKN45细胞中其mRNA的表达上调35.4%,而转染pcDNA3.1-b的MKN45细胞中其mRNA 的表达下调32.1%;Western blot结果显示转染 pcDNA3.1-a的MKN45细胞中其蛋白的表达上调49.4%,而转染pcDNA3.1-b的MKN45细胞中其蛋白的表达下调50.3%.结论:成功构建胃癌相关基因GCRG213正、反义真核表达载体. 展开更多
关键词 胃癌相关基因gcrg213 真核表达 胃癌细胞 基因转染
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胃癌相关基因GCRG213真核表达载体的构建及其对胃癌细胞成瘤性的影响 被引量:1
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作者 高利利 吴本俨 +5 位作者 王孟薇 战大伟 黄海力 伍银桥 尤纬缔 王卫华 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2007年第2期105-107,共3页
目的:研究胃癌相关基因GCRG213正义、反义转染对胃癌细胞MKN45成瘤性的影响。方法:采用半定量RT-PCR及Western免疫印迹法比较转染不同质粒的MKN45细胞中GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异。选取稳定转染不同质粒的MKN45细胞,绘制... 目的:研究胃癌相关基因GCRG213正义、反义转染对胃癌细胞MKN45成瘤性的影响。方法:采用半定量RT-PCR及Western免疫印迹法比较转染不同质粒的MKN45细胞中GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异。选取稳定转染不同质粒的MKN45细胞,绘制细胞生长曲线,平板克隆形成实验、裸鼠移植瘤实验分析转染细胞成瘤性。结果:平板克隆形成实验显示转染了GCRG213正向克隆的MKN45细胞其细胞克隆形成数量高于转染空载体的细胞,而转染了GCRG213反向克隆的MKN45细胞其细胞克隆形成数量低于转染空载体的细胞。在裸鼠体内进行的转染细胞的成瘤性实验可见,转染了GCRG213正向克隆的MKN45细胞在裸鼠体内成瘤性高于转染空载体的细胞,而转染了GCRG213反向克隆的MKN45细胞在裸鼠体内成瘤性低于转染空载体的细胞。结论:胃癌相关基因GCRG213可促进肿瘤细胞的生长,促进肿瘤细胞的成瘤性,GCRG213反义转染可抑制肿瘤细胞的生长,抑制肿瘤细胞的成瘤性。 展开更多
关键词 胃肿瘤 胃癌相关基因gcrg213 真核表达 基因 转染
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胃癌相关基因GCRG213真核表达载体的构建及其对胃癌细胞MKN45的影响
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作者 高利利 王孟薇 +6 位作者 吴本俨 王珊 杨怡 黄海力 伍银桥 尤纬缔 王卫华 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第41期1-4,共4页
目的研究胃癌相关基因GCRG213正义、反义转染对胃癌细胞MKN45的影响。方法采用分子克隆及基因转染技术将GCRG213基因转入哺乳动物细胞,并结合反义转染技术研究GCRG213基因对胃癌细胞恶性生物学行为的影响。结果GCRG213正向和反向克隆正... 目的研究胃癌相关基因GCRG213正义、反义转染对胃癌细胞MKN45的影响。方法采用分子克隆及基因转染技术将GCRG213基因转入哺乳动物细胞,并结合反义转染技术研究GCRG213基因对胃癌细胞恶性生物学行为的影响。结果GCRG213正向和反向克隆正确插入真核表达载体pcDNA3.1(+);重组子pcDNA3.1-a、pcDNA3.1-b和空载体转染人胃癌细胞系MKN45细胞;正义转染其mRNA的表达上调,而反义转染下调;正义转染加快MKN45细胞生长增殖速度、降低细胞凋亡率,反义转染减慢MKN45细胞生长增殖速度,增加细胞凋亡率。结论胃癌相关基因GCRG213可促进肿瘤细胞生长、分裂和转移,抑制肿瘤细胞的凋亡,可能是一个新发现的恶性肿瘤癌变的促进因素。 展开更多
关键词 胃癌相关基因gcrg213 真核表达 胃癌细胞 基因转染
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胃癌相关基因GCRG213正反向转染和RNA干扰对裸鼠胃癌种植瘤的影响
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作者 徐世平 吴本俨 +4 位作者 王孟薇 高利利 伍银桥 王卫华 尤纬缔 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第14期1639-1642,共4页
目的:观察胃癌相关基因GCRG213体内正、反向转染和RNA干扰对裸鼠胃癌种植瘤的影响.方法:将对数生长期的胃癌细胞株MKN45接种到裸鼠皮下,成瘤后用制备好的分别含GCRG213正、反义克隆和RNAi片段的腺相关病毒分别在肿瘤局部注射,以空病毒... 目的:观察胃癌相关基因GCRG213体内正、反向转染和RNA干扰对裸鼠胃癌种植瘤的影响.方法:将对数生长期的胃癌细胞株MKN45接种到裸鼠皮下,成瘤后用制备好的分别含GCRG213正、反义克隆和RNAi片段的腺相关病毒分别在肿瘤局部注射,以空病毒和生理盐水对照,继续喂养2 wk后处死,取肿瘤测量重量,并用半定量RT-PCR检测肿瘤组织GCRG213mRNA表达水平.结果:裸鼠接种MKN45细胞3 wk左右皮下形成肿瘤结节.肿瘤组织重量在正向转染组为5.12±1.02g、反向组1.22±0.46g、RNAi组0.81±0.37g、空病毒组3.13±0.69g、生理盐水组3.45±0.87g;各组GCRG213 mRNA表达水平依次分别为0.406±0.01 3,0.211±0.021,0.087±0.015,0.312±0.050,0.283±0.061.结论:三种腺相关病毒分别有效地介导了GCRG213正、反义克隆和RNAi片段的体内表达,提高或降低了GCRG213 mRNA的表达水平,促进或抑制了胃癌种植瘤的生长. 展开更多
关键词 胃癌相关基因gcrg213 相关病毒 小干扰RNA 基因转染 胃癌种植瘤
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胃癌相关基因GCRG213的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:1
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作者 伍银桥 王刚石 +3 位作者 王孟薇 吴本俨 尤纬缔 王卫华 《军医进修学院学报》 CAS 2004年第4期258-260,共3页
目的 :利用硫氧还蛋白融合表达系统表达胃癌相关基因GCRG2 13。方法 :采用PCR技术从pGEM T质粒上扩增出含完整ORF的GCRG2 13cDNA序列 ,将其克隆至硫氧还蛋白融合表达载体 pET10 2 /D TOPO中 ,转化大肠杆菌BL2 1,经IPTG诱导表达重组融合... 目的 :利用硫氧还蛋白融合表达系统表达胃癌相关基因GCRG2 13。方法 :采用PCR技术从pGEM T质粒上扩增出含完整ORF的GCRG2 13cDNA序列 ,将其克隆至硫氧还蛋白融合表达载体 pET10 2 /D TOPO中 ,转化大肠杆菌BL2 1,经IPTG诱导表达重组融合蛋白 ,SDS PAGE分析表达产物。结果 :高效表达出相对分子量约2 9.4ku的重组融合蛋白。薄层凝胶扫描显示 ,其表达量占菌体总蛋白质的 2 8.7%。结论 :在大肠杆菌中成功表达了Thioredoxin GCRG2 13融合蛋白 ,为后续功能研究、蛋白制备及其抗体研制奠定了基础。 展开更多
关键词 胃癌 gcrg213基因 基因克隆 大肠杆菌 基因表达
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表达胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA腺相关病毒载体的构建和高滴度病毒制备
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作者 徐世平 吴本俨 +5 位作者 王孟薇 高利利 伍银桥 蒋立新 王卫华 尤纬缔 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第12期1417-1420,共4页
目的:构建一个表达胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA的重组腺相关病毒载体,制备能靶向性抑制GCRG213表达的重组腺相关病毒.方法:将构建好并经验证的包含胃癌相关基因GCRG213特异性小干扰RNA片段GCRG213-RNAi-2的IMG800-GCRG213i-2质粒用Bam... 目的:构建一个表达胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA的重组腺相关病毒载体,制备能靶向性抑制GCRG213表达的重组腺相关病毒.方法:将构建好并经验证的包含胃癌相关基因GCRG213特异性小干扰RNA片段GCRG213-RNAi-2的IMG800-GCRG213i-2质粒用Bam H I+Bg/Ⅱ双酶切,回收410 bp左右目的片段,将pSNAV2.0质粒用BamH I单酶切后同目的片段连接,经酶切和测序鉴定后,用新建质粒脂质体转染BHK-21细胞,G418筛选后大规模培养,再用辅助病毒HSV1-rc/△UL2感染,获取病毒.结果:成功构建包含U6启动子和胃癌相关基因GCRG213特异性RNA干扰片段的重组腺相关病毒载体,并制备出滴度为5×10^(12)vector genome/L高滴度腺相关病毒.结论:载体的构建为进一步研究GCRG213的体内功能打下了基础,也将为更多的基因干预和基因的功能研究提供有效的工具. 展开更多
关键词 胃癌 gcrg213基因 相关病毒 SIRNA 基因转染
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胃癌相关基因GCRG 213正反义表达重组腺相关病毒载体的构建 被引量:2
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作者 徐世平 吴本俨 +5 位作者 王孟薇 高利利 伍银桥 蒋立新 王卫华 尤纬缔 《华南国防医学杂志》 CAS 2007年第3期1-5,共5页
目的构建胃癌相关基因OCRG 213正、反义表达重组腺相关病毒载体,制备相应的重组腺相关病毒。方法通过引入限制性内切酶识别位点从pGEM-T质粒上扩增出胃癌相关基因GCRG 213的DNA片段,按正、反向克隆入pCMV-MCS载体,测序正确后用NotI酶切... 目的构建胃癌相关基因OCRG 213正、反义表达重组腺相关病毒载体,制备相应的重组腺相关病毒。方法通过引入限制性内切酶识别位点从pGEM-T质粒上扩增出胃癌相关基因GCRG 213的DNA片段,按正、反向克隆入pCMV-MCS载体,测序正确后用NotI酶切,克隆入pAAV-MCS载体,单、双酶切鉴定后,同pAAV-Helper、pAAV- RC质粒用磷酸钙转染法共转染AAV-293细胞制备病毒。结果成功构建包含胃癌相关基因GCRG213正、反义克隆的重组腺相关病毒载体,并制备出滴度为4×1010v.g./ml腺相关病毒。结论载体的构建和病毒制备为进一步研究GCRG 213的体内功能打下了基础。 展开更多
关键词 胃癌相关基因gcrg 213相关病毒 基因转染
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胃癌相关蛋白GCRG213在胃癌细胞中特异性表达 被引量:1
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作者 王卫华 吴本俨 +1 位作者 伍银桥 尤纬缔 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第1期80-81,共2页
目的:观察来源于胃癌高表达基因GCRG213抗体在两种不同细胞的表达情况,评价GCRG213抗体的肿瘤特异性. 方法:应用免疫印迹方法对GCRG213抗体在胃癌细胞SGC-7901和胃上皮细胞HFE-145的表达进行比较分析. 结果:GCRG213抗体与胃癌SGC-7901... 目的:观察来源于胃癌高表达基因GCRG213抗体在两种不同细胞的表达情况,评价GCRG213抗体的肿瘤特异性. 方法:应用免疫印迹方法对GCRG213抗体在胃癌细胞SGC-7901和胃上皮细胞HFE-145的表达进行比较分析. 结果:GCRG213抗体与胃癌SGC-7901细胞蛋白免疫结合后在相应大小位置有一清晰的特异性条带,而与胃上皮HFE-145细胞蛋白免疫结合后则无特异性条带出现, GCRG213抗体与两种细胞蛋白的结合存在明显差异. 结论:GCRG213抗体具有很强的肿瘤特异性. 展开更多
关键词 抗体 肿瘤 胃癌细胞 特异性表达 相关蛋白 gcrg213 高表达 HFE 基因 免疫印迹
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A gene encoding an apurinic/apyrimidinic endonuclease-like protein is up-regulated in human gastric cancer 被引量:19
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作者 Gang-ShiWang Meng-WeiWang +3 位作者 Ben-YanWu Xiao-BingLiu Wei-You Xin-YanYang 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2003年第6期1196-1201,共6页
AIM: To identify the gene that may predispose to human gastric cancer and to analyze its expression in gastric cancer and non-tumorous gastric mucosa.METHODS: Cancer, para-tumor, and non-tumor gastric tissues were stu... AIM: To identify the gene that may predispose to human gastric cancer and to analyze its expression in gastric cancer and non-tumorous gastric mucosa.METHODS: Cancer, para-tumor, and non-tumor gastric tissues were studied for gene expression profile using fluorescent differential display reverse transcription polymerase chain reaction (DDRT-PCR). The differentially expressed bands of interest were analyzed by cloning,Northern blotting, and sequencing. The sequencing results were compared with the GenBank database for homologyand conserved domain analysis. In situ hybridization with DIG-labeled cRNA probes was used to detect the expression of gene in paraffin embedded gastric adenocarcinoma and non-cancerous tissues.RESULTS: A gene expressed higher in tumor and para-tumor tissues than in their non-tumor counterparts of all 7 tested gastric adenocarcinoma patients was identified by means of DDRT-PCR analysis, it was named GCRG213(gastric cancer related gene 213). Northern blot confirmed the differential expression. GCRG213(GenBank No. AY053451) consisted of 1094 base pairs with an open reading frame (ORF) which encoded 142 amino acids. The deduced amino acid sequence contained a putative conserved domain, apurinic/apyrimidinic endonuclease (APE). In situ hybridization analysis showed that C-CRG213was expressed higher in gastric cancer tissues than in their corresponding non-tumor ones. Precancerous leisions of gastric adenocarcinoma showed a high GCRG213 expression, too. No difference of the expression pattems was found between the early and advanced gastric cancer.CONCLUSION: A gene named GCRG213 was identified in human gastric adenocarcinoma. It encoded an APE-like protein which was probably a new member of the APE family.GCRG213 was over-expressed not only in gastric cancer,but also in its precancerous leisions. The role of GCRG213 expression in carcinogenesis needs further study. 展开更多
关键词 胃癌 gcrg213基因 基因表达 磷酸内切酶 肿瘤发生学
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