吡格列酮对人胃癌细胞MCG-803生长及基因表达的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)配体吡格列酮对人胃癌细胞株MCG-803生长及基因表达的影响。方法不同浓度吡格列酮作用于MCG-803后,分别应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、Annexin V/PI双染色流式细胞术、荧光定量PCR法(RT-PCR)检测细胞增殖状态、细胞凋亡率及PPARγ基因表达水平。结果不同浓度吡格列酮均可显著抑制MCG-803细胞增殖(P<0.01),且呈时间、剂量依赖性;48小时后细胞凋亡率较对照组显著增加(P<0.01);随着吡格列酮浓度增加,PPARγ基因表达呈升高趋势。结论吡格列酮呈剂量及时间依赖性抑制人胃癌细胞株MCG-803生长,并促进其凋亡;PPARγ在MCG-803中有表达且随着吡格列酮浓度增加表达上调。

桦褐孔菌提取物对胃癌MGC-803细胞株的抗增殖与诱导凋亡作用

探讨了桦褐孔菌提取物对胃癌MGC - 80 3细胞株的抗增殖、诱导凋亡作用及对凋亡相关基因表达的影响。MTT比色法结果显示 ,桦褐孔菌提取物在 0 .5～ 16 0 μg/mL范围内 (其IC50 为 4 μg/mL)对胃癌MGC- 80 3细胞株均有抑制作用 ,并表现出浓度依赖性关系 ;凋亡形态学观察结果 ,药物浓度 2 μg/mL ,作用时间 12～ 2 4h后 ,细胞核染色质固缩并凝结成块 ,聚集在核膜周边 ,凋亡小体形成 ;TUNEL法检测结果 ,不同浓度药物均诱导胃癌MGC - 80 3细胞株凋亡 ,细胞凋亡率随药物浓度增加而上升 ,显示明显的量效关系。Ki- 6 7抗原检测结果 ,不同浓度药物均抑制胃癌MGC - 80 3细胞株增殖 ,表现出浓度、时间依赖性关系 ;2μg/mL桦褐孔菌提取物作用胃癌MGC - 80 3细胞株 4 8h之后 ,明显下调Bcl - 2基因蛋白表达。因此 ,通过此项研究可得出 ,桦褐孔菌提取物对胃癌MGC - 80 3细胞株有抗增殖作用和诱导凋亡作用 ,其凋亡的分子生物学机制可能与下调凋亡抑制基因Bcl 2表达有一定关系。

CIK细胞对MGC-803胃癌细胞株的诱导凋亡作用

目的 研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CYtokine-inducedkillcells,CIK)对MGC -80 3胃癌细胞株的诱导凋亡作用,并探讨其作用机制。方法 应用(TdT -mediateddUTPnickendla beling)TUNEL法检测CIK细胞诱导凋亡的情况;通过免疫细胞化学法测定Bcl- 2、Bax的阳性表达率,深入研究CIK细胞对MGC - 80 3胃癌细胞株凋亡相关基因蛋白表达的影响。结果 TUNEL法检测对照组成不染或均匀淡蓝色,实验组凋亡细胞缩小,核或核周成深蓝色。CIK实验组5～1 4小时凋亡率上调,1 4～2 4小时凋亡率下降。CIK实验组凋亡率与对照组相比有显著性差异(P <0 .0 1 )。免疫细胞化学结果表明:Bcl- 2蛋白随作用时间延长表达均下降,Bax蛋白表达上调,与对照组相比均有显著性差异(P <0 .0 1 )。结论 CIK细胞对MGC - 80 3胃癌细胞早期诱导凋亡,晚期诱导肿瘤细胞坏死。其作用机制之一可能是通过上调Bax,下调Bcl- 2的蛋白表达实现的。

蛴螬提取物体外对人MGC-803胃癌细胞株的抗增殖及诱导凋亡作用的形态学观察

目的 :探讨蛴螬提取物体外对MGC 80 3胃癌细胞株的抗增殖及诱导凋亡的形态学观察。方法 :通过倒置显微镜、HE染色、扫描电镜技术及吖啶橙 (AO) /溴化乙锭 (EB)荧光染色方法和免疫细胞化学技术检测蛴螬提取物对MGC 80 3胃癌细胞诱导凋亡作用的方式。结果 :(1)光镜及电镜观察结果表明 ,蛴螬 (终浓度为 4mg/ml)作用于MGC 80 3胃癌细胞 2 4h后 ,可见胞核固缩、胞核碎裂、凋亡小体形成等凋亡形态学变化 ;(2 )经AO/EB荧光染色观察结果表明 ,当终浓度为 4mg/ml的蛴螬作用于MGC 80 3细胞 2 4h后 ,其凋亡率和破膜率与自然凋亡率和破膜率相比均有显著性差异 ,其凋亡率为 86 3% (P <0 0 0 1) ,破膜率为 4 1 9% (P <0 0 0 1)。说明蛴螬提取物确实有诱导MGC 80 3细胞凋亡的作用 ,同时也有细胞毒作用 ,但以诱导细胞凋亡为主。 (3)应用免疫细胞化学技术(S P法 )检测用药前后ki 6 7抗原的表达改变 ,探讨蛴螬提取物在体外对MGC 80 3胃癌细胞株的抗增殖作用。结论 :蛴螬提取物在体外对人MGC 80 3胃癌细胞株有显著抗增殖及诱导凋亡作用。

蛴螬提取物体外对人MGC-803胃癌细胞株凋亡相关基因作用的研究

目的 :探讨蛴螬提取物体外对MGC - 80 3胃癌细胞株的诱导凋亡作用的分子生物学机制。方法 :通过倒置显微镜、HE染色、吖啶橙 (AO) /溴化乙锭 (EB)荧光染色方法检测蛴螬提取物对MGC - 80 3胃癌细胞诱导凋亡和抑制作用的方式 ;应用免疫组织化学技术 (S -P法 )检测用药前后凋亡相关基因bcl- 2、bax表达的改变 ,探讨蛴螬提取物在体外对MGC - 80 3胃癌细胞株的抗增殖及诱导凋亡作用的可能机制。结果 :光镜结果表明 ,蛴螬 (终浓度为 4mg/ml)作用于MGC - 80 3胃癌细胞 2 4h后 ,可见胞核固缩、胞核碎裂、凋亡小体形成等凋亡形态学变化 ;经AO/EB荧光染色观察结果表明 ,当终浓度为 4mg/ml的蛴螬作用于MGC - 80 3细胞 2 4h后 ,其凋亡率和破膜率与自然凋亡率和破膜率相比均有显著性差异 ,其凋亡率为86 3% (P <0 0 0 1) ,破膜率为 4 1 9% (P <0 0 0 1)。免疫组化结果表明 ,用药前后凋亡相关基因bcl- 2、bax均有显著性改变 (P <0 0 0 1)。结论 :蛴螬提取物在体外对人MGC - 80 3胃癌细胞株有显著性抗增殖及诱导凋亡作用 ,其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制与凋亡相关基因bcl- 2、bas的表达改变有关。

抗癌口服液体外对人胃癌MGC-803细胞株的抗增殖作用及药物敏感性的研究

目的:探讨抗癌口服液体外给药对胃癌MGC-803细胞株的抗增殖作用并观察其药物敏感性。方法:应用MTT法、生长曲线及集落形成率的测定研究该中药在体外对人胃癌细胞株增殖的抑制作用及药物敏感性。结果:用MTT法和生长曲线的检测结果表明,谊中药在体外对MGC-803胃癌细胞株有明显抑制作用,加药组与对照组相比其生长抑制率有显著性差异(P<0.01),而且这种抑制作用呈现浓度和时间的依赖性。通过集落形成率的测定结果表明,加药组与对照组相比其集落形成率和集落形成抑制率有显著性差异(P<0.01),说明读中药对MGC-803胃癌细胞株有明显的抗增殖作用。结论:该中药在体外能够抑制胃癌细胞增殖,并对MGC-803胃癌细胞株有较好的敏感性。

熊果酸诱导人胃癌细胞株MGC-803发生凋亡和自噬

目的:观察熊果酸(UA)对胃癌细胞株MGC-803凋亡与自噬的影响。方法:体外培养人胃癌细胞株MGC-803,以CCK8法测定UA对MGC-803细胞活力的影响并筛选出UA最佳作用浓度和时间;采用倒置相差显微镜观察UA干预后MGC-803细胞的形态学改变;采用MDC染色法观察UA对MGC-803细胞自噬的影响;采用实时定量PCR法检测凋亡相关基因BAX、BCL2和自噬相关基因Beclin1、LC3Ⅱ的表达水平;采用WB法对上述凋亡及自噬相关基因进行蛋白水平的验证。结果:CCK8法显示UA能显著抑制MGC-803细胞增殖,并具有浓度和时间依赖性;倒置相差显微镜观察到UA干预后视野下MGC-803细胞数量显著减少,部分细胞的形态发生变化,呈现碎片化;MDC染色法显示UA干预后视野下MGC-803细胞的荧光信号显著增强;实时定量PCR法显示UA显著上调凋亡相关基因BAX水平以及自噬相关基因Beclin1、LC3Ⅱ水平(P<0.05),显著下调凋亡相关基因BCL2水平(P<0.05);WB法显示UA显著上调凋亡相关蛋白BAX水平以及自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ水平(P<0.05),显著下调凋亡相关蛋白BCL2水平(P<0.05)。结论:熊果酸对人胃癌细胞株生长具有显著的抑制作用且呈剂量和时间依赖性,同时熊果酸诱导人胃癌细胞死亡过程中凋亡和自噬均被激活。

熊果酸对胃癌细胞株MGC-803凋亡和自噬的调控及其作用机制

目的:观察熊果酸(UA)对胃癌细胞株MGC-803 自噬和凋亡的调控作用,并探讨UA基于PI3K/AKT/mTOR信号通路诱发MGC-803 细胞自噬的机制。方法:体外培养人胃癌细胞株MGC-803,分为空白对照组、UA干预组和UA+3-MA组。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,双荧光mRFP-eGFP-LC3 质粒转染细胞法检测各组细胞自噬发生情况,qPCR实验检测各组细胞LC3B、BAX、Bcl-2 mRNA的表达水平,WB实验检测各组细胞Ⅰ型PI3K、p-AKT、p-mTOR、ULK1、LC3B、BAX、Bcl-2 蛋白的表达水平。结果:与空白对照组相比,UA干预组细胞凋亡率显著增加(P<0.05);与UA干预组相比,UA+3-MA组细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。双荧光mRFP-eGFP-LC3 质粒转染法显示,与空白对照组相比,UA 干预组绿色和红色荧光亮点数均显著增加(P<0.05);与UA干预组相比,UA+3-MA组绿色和红色荧光亮点数均显著减少(P<0.05)。qPCR和WB实验结果显示,与空白对照组相比,UA干预组BAX和LC3B mRNA和蛋白以及ULK1 蛋白表达水平均显著上调,Bcl-2 基因和蛋白表达水平以及Ⅰ型PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平均显著下调(均P<0.05);与UA干预组相比,UA+3-MA组BAX、LC3B mRNA和蛋白表达水平显著下调,Bcl-2 基因和蛋白表达水平显著上调(均P<0.05),Ⅰ型PI3K、p-AKT、p-mTOR 和ULK1 蛋白表达水平无显著差异(P>0.05)。结论: UA诱导的自噬可以促进胃癌细胞MGC-803 的凋亡,其机制可能与UA参与调控PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达有关。

盐酸小檗碱诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的研究

目的 :探讨小檗碱诱导人胃癌细胞株MGC 80 3的细胞凋亡。方法 :用 4μg/ml盐酸小檗碱在体外作用于人胃癌MGC 80 3细胞 48小时后进行吖啶橙染色、荧光照相 ,同时用原位末端标记 ,检测给药 48小时后MGC 80 3细胞的凋亡情况。结果 :荧光照相发现MGC 80 3细胞呈典型的凋亡细胞形态 ,细胞核和细胞质内可见致密浓染的黄绿色染色 ,甚至可见黄绿色碎片 ;而原位末端标记法 (insituend labelling ,ISEL)检测结果显示盐酸小檗碱组细胞凋亡指数显著高于空白对照组 (P <0 .0 5 )。 结论 :盐酸小檗碱诱导了人胃癌MGC 80 3细胞的凋亡。

胃安宁颗粒对人胃癌MGC-803细胞bcl-2基因表达的影响

目的:通过体外实验,观察胃安宁颗粒含药血清对MGC-803细胞中Bcl-2蛋白表达量的影响,初步探讨其可能的抗癌分子生物学机制。方法:采用免疫印迹法检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达情况。结果:与空白血清对照组比较,胃安宁含药血清干预MGC-803细胞24h后,大、中剂量含药血清组中Bcl-2蛋白表达量明显降低;48h后3个剂量含药血清组中Bcl-2蛋白表达量均明显降低。结论:胃安宁颗粒治疗胃癌的机制可能与同时抑制MGC-803细胞中Bcl-2蛋白表达相关。

PPARγ激活剂罗格列酮抑制人胃癌MGC803细胞增殖机制的研究

目的探讨PPARγ激活剂罗格列酮抑制人胃癌MGC803细胞增殖的机制。方法采用MTT法、集落形成实验和流式细胞仪分别观察罗格列酮作用于胃癌MGC803细胞48 h对细胞增殖和细胞周期的影响。结果12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L的罗格列酮对人胃癌MGC803细胞生长抑制率分别为10.85%、32.52%、57.47%、78.94%,罗格列酮处理后MGC803细胞集落形成明显受到抑制,且细胞周期停滞于G1期。结论罗格列酮对人胃癌MGC803细胞的增殖抑制作用与诱导细胞周期G1期停滞有关。

siRNA沉默转录因子OCT1对胃癌细胞株生物学功能的影响

目的探究沉默转录因子OCT1对胃癌细胞株MGC803和SGC7901生物学功能的影响。方法应用腺病毒做载体包装OCT1-siRNA,并转染人胃癌细胞株MGC803和SGC7901。应用MTT法和细胞侵袭实验检测OCT1-siRNA转染是否成功、胃癌细胞增殖和侵袭力的变化。采用Western blot法检测对照组、OCT1-siRNA组及阴性OCT1-siRNA组中人胃癌细胞中OCT1蛋白的表达量。结果胃癌细胞株MGC803和SGC7901转染OCT1-siRNA 48和72h后,对照组和OCT1-siRNA阴性组细胞增殖能力和细胞侵袭力高/强于OCT1-siRNA组(P均<0.05)。MGC803和SGC7901细胞OCT1-siRNA组中OCT1蛋白表达水平均下降(F=118.72、91.23,P均<0.05)。结论应用siRNA技术干扰沉默转录因子OCT1的功能后,胃癌细胞株的增殖能力和侵袭力减弱,表明转录因子OCT1可能增强了胃癌细胞的生物学活性。

白刺对胃癌MGC-803细胞的抑制作用

目的:探讨白刺对胃癌MGC-803细胞的抑制作用。方法:采用噻唑蓝法(MTT法)检测白刺对胃癌MGC-803细胞的抑制率,荧光显微镜检测白刺对胃癌MGC-803细胞的凋亡效果,通过病理切片观察白刺对胃癌MGC-803细胞的毒性。结果:白刺对胃癌MGC-803细胞具有抑制作用,可使细胞核固缩,出现凋亡小体,病理结果显示白刺对昆明小鼠的脏器没有明显毒性。结论:白刺具有抑制胃癌MGC-803细胞的作用。

体外右美托咪定对MGC-803胃癌细胞增殖的影响

目的:探讨体外右美托咪定对MGC-803胃癌细胞增殖的影响。方法:将MGC-803胃癌细胞随机分为六组,右美托咪定组(A1、A2、A3、A4、A5组)和对照组(C组),右美托咪定组各组的右美托咪定终浓度分别为1000、100、10、1、0.1 ng/m L,通过MTT实验检测各组OD值,并计算增殖率。结果:右美托咪定组各组OD值及增殖率与C组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:体外右美托咪定对MGC-803胃癌细胞的增殖无明显影响。

一株对LAK细胞杀伤耐受的胃癌细胞株的建立及其相关生物学特性的研究

人胃癌细胞系MGC-803经反复与LAK细胞共培养获得对LAK细胞杀伤耐受的特性。在反复共培养十个周期后，残留细胞数量逐渐增多并达到稳定。在八小时^3H-TdR释放细胞毒实验中，当效靶比为40：1时，LAK细胞对亲代细胞MGC-803^p杀伤率为90%，而对耐受株MGC-803^R的杀伤率仅为40%。

BALB/c裸鼠皮下接种人胃癌MGC-803细胞成瘤实验方法比较

目的 通过不同的接种方法,筛选出建立胃癌皮下移植瘤模型的最优方法,并以此为瘤源建立胃癌皮下移植瘤模型。方法 (1)体外培养人胃癌MGC-803细胞,PBS调节细胞浓度至1×10^(7)个/mL,按0.2mL/只接种于BALB/c裸鼠左侧腋下;(2)BALB/c裸鼠接种人胃癌MGC-803细胞成瘤后,生理盐水按比例加入瘤块组织进行研磨,按0.2mL/只将研磨液接种于BALB/c裸鼠左侧腋下;(3)将成瘤裸鼠的移植瘤剥离出,在载玻片上切成约2mm×2mm×2mm大小的瘤组织块,进行瘤转瘤接种。结果 成功筛选出建立胃癌皮下移植瘤模型的最优方法,将细胞成瘤裸鼠的瘤块进行瘤转瘤,直接植入皮下。结论本实验利用人胃癌MGC-803细胞,成功建立了BALB/c裸鼠腋下接种人胃癌MGC-803细胞成瘤实验方法,该模型为胃癌的进一步治疗及相关指标的检测提供了一个良好的技术平台。

复方乌梅散对胃癌细胞粘附迁徙和侵袭能力的影响

目的观察复方乌梅散体外对人胃癌细胞株MGC-803粘附、迁徙、侵袭能力的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察不同浓度的复方乌梅散(1,2,4 g·L-1)体外对人胃癌细胞株MGC-803粘附能力的影响,并用划痕实验和Transwell小室检测药物干预后细胞的迁徙和侵袭能力的改变。结果与空白组比较,复方乌梅散能抑制人胃癌细胞株MGC-803的粘附能力,并随着药物浓度的增大,其抑制率也明显增大,呈现剂量依赖性;浓度从2 g·L-1开始,即可明显抑制胃癌细胞的迁徙,随着剂量的增加诱导的效果更加明显;在抑制细胞侵袭方面,与空白对照组比较,作用24 h后,1、2、4 g·L-1分别对应38%、56%、76%的抑制率,且具有明显差异(P<0.01)。结论复方乌梅散对人胃癌细胞株MGC-803的粘附、迁徙、侵袭具有抑制作用,且呈现剂量依赖性。

Jiepx METTL3介导KLK6的m6A修饰促进胃癌细胞的细胞活力

目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)是否介导Kallikrein相关肽酶6(KLK6)的N6-甲基腺苷(m6A)修饰促进胃癌细胞的细胞活力。方法通过m6A抗体纯化胃癌细胞MGC⁃803和正常胃细胞GES⁃1中的m6A修饰的mRNA,通过实时荧光定量PCR检测这些mRNA中KLK6的相对表达量。过表达或敲低METTL3后纯化m6A修饰的mRNA,通过实时荧光定量PCR检测这些mRNA中KLK6的相对表达量。通过体外转录和METTL3体外催化KLK6的mRNA的m6A修饰。在METTL3敲低的胃癌细胞MGC⁃803中转染体外合成的m6A修饰的KLK6的mRNA,通过MTT检测胃癌细胞MGC⁃803的细胞活力。结果胃癌细胞MGC⁃803中mRNA的m6A修饰多于正常胃细胞GSE⁃1,并且胃癌细胞MGC⁃803中KLK6 mRNA的m6A修饰多于正常胃细胞GSE⁃1(P<0.05)。过表达MET⁃TL3后,胃癌细胞MGC⁃803中KLK6 mRNA的m6A修饰多于正常胃细胞GSE⁃1(P<0.05)。敲低METTL3后,胃癌细胞MGC⁃803中KLK6 mRNA的m6A修饰少于正常胃细胞GSE⁃1(P<0.05)。敲低METTL3并转染体外合成的m6A修饰的KLK6的mRNA后,胃癌细胞MG⁃803的细胞活力上升(P<0.05)。结论胃癌细胞MGC⁃803中,METTL3通过对KLK6 mRNA进行m6A修饰促进细胞活力。

Survivin反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡及对化疗药物的增敏作用

目的观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌细胞的增殖、凋亡及对化疗药物敏感性影响。方法人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染胃癌细胞株MGC803后,用MTT法检测细胞毒作用,流式细胞术检测细胞的凋亡;RT-PCR、Western blot检测survivin mRNA及蛋白的表达。结果survivin ASODN抑制MGC803增殖,呈剂量依赖性;各survivin ASODN处理组MGC803细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01);survivin ASODN处理组MGC803细胞survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降(P<0.01);200nmol/Lsur-vivin ASODN和顺铂联合处理MGC803细胞株,其细胞抑制率为74.7%,显著高于单用survivin ASODN组的38.4%和单用顺铂组的33.6%(P<0.01)。结论survivin ASODN能够抑制MGC803细胞增殖、诱导凋亡,并能增加MGC803细胞对化疗药物的敏感性。

蚯蚓纤溶酶增加胃癌细胞对放射线敏感性的实验研究

目的探讨蚯蚓纤溶酶对胃癌细胞株MGC803的放射增敏作用及机制。方法采用克隆形成实验观察蚯蚓纤溶酶的放射增敏作用;流式细胞术观察药物对胃癌细胞株MGC803周期分布的影响;RT-PCR法检测药物对细胞内硒谷胱甘肽过氧化物酶(SeGPx)基因表达的影响。结果蚯蚓纤溶酶对胃癌细胞有放射增敏效应,100uku/L、300uku/L蚯蚓纤溶酶的放射增敏比分别为1.06和1.14。射线照射后MGC803细胞发生G1期阻滞,蚯蚓纤溶酶对细胞G1期阻滞无明显影响;PCR检测发现射线可诱导的SeGPxmRNA表达下调,蚯蚓纤溶酶能够增强射线诱导的SeGPxmRNA表达下调作用。结论蚯蚓纤溶酶能够增加胃癌细胞对放射线的敏感性,增敏机理可能与药物下调细胞内抗氧化酶SeGPx基因表达有关。