蟾蜍灵对人胃癌细胞系MGc-803的细胞毒作用

蟾蜍灵(bufalin)是我国传统中药蟾酥中蟾毒的主要成分之 一，研究其抑癌作用及机制具有重要意义。采用台盼蓝染色法、噻唑蓝还原法和光镜观察bu falin对人低分化胃腺癌细胞系MGc-803的生长抑制作用。结果显示，0.01 μmol/L及以上 浓度bufalin对MGc-803细胞具有显著的抑制作用，IC50值约为0.1 μmol/L。bufal in抑制MGc-803生长的机制是致使细胞核染色质凝缩、碎裂，DNA损伤，胞浆RNA含量下降， 导致细胞死亡。

苦参素对人胃癌细胞系MGC-803增殖的抑制作用

目的:观察苦参素对人胃癌细胞系MGC803的增殖抑制作用。方法:人胃癌细胞系MGC803接种培养24h后,实验组分别加入不同浓度苦参素(0.25g/L、0.5g/L、1g/L、2g/L、4g/L),阳性对照组与阴性对照组分别加入氟尿嘧啶(2g/L)和培养液,继续培养12h,24h,36h,48h,采用MTT法测定苦参素对MGC803细胞的增殖抑制情况。判定苦参素的剂量与MGC803细胞增殖活性间的关系,计算细胞抑制率和群体倍增时间。结果:苦参素在0.25～4g/L范围内,对MGC803细胞的增殖活性具有抑制作用,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001),且该作用随剂量增加而增加。与阴性对照组比较,阳性对照组和实验组细胞群体倍增时间增加。结论:苦参素对人胃癌细胞系MGC803有明显的增殖抑制作用,且具有时间、剂量效应关系。

流式细胞术检测苦参素对人胃癌细胞系MGC-803凋亡的作用

目的:运用流式细胞术检测苦参素对人胃癌细胞系MGC-803凋亡的作用。方法:运用流式细胞术检测细胞凋亡率、凋亡峰及凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Bax的表达水平。结果:苦参素1mg/mL、2mg/mL作用24h后,流式细胞仪(FCM)检测结果显示,细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性(P<0.05);Bcl-2表达量明显减少,Bax表达量明显增加,差异具有显著性(P<0.05)。结论:苦参素对人胃癌细胞系MGC-803有诱导凋亡作用,其机制与上调Bax和下调Bcl-2表达有关。

苦参素诱导人胃癌细胞系MGC-803凋亡的研究

目的:探讨苦参素诱导人胃癌细胞系MGC-803调亡作用及机制。方法:运用倒置显微镜和透射电子显微镜观察细胞形态变化;运用流式细胞术检测细胞凋亡及凋亡相关基因蛋白Bc1-2和Bax的表达水平。结果:苦参素1mg/ml、2mg/ml作用24小时后,倒置显微镜和透射电子显微镜观察MGC-803细胞均出现典型的凋亡形态变化;流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性(P<0·05);Bcl-2表达量明显减少,Bax表达量明显增加,差异具有显著性(P<0·05);但细胞凋亡峰不明显。结论:苦参素对人胃癌细胞系MGC-803有诱导凋亡作用,其机制与上调Bax和下调Bcl-2表达有关。

miR-216a-5p通过抑制HMGB1降低胃癌细胞系MGC-803的增殖和迁移

目的探讨miR-216a-5p对胃癌细胞增殖和迁移的影响及其分子机制。方法用Western blot检测胃癌和癌旁组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达,RT-qPCR检测miR-216a-5p的表达。用人工合成的miR-216a-5p模拟物和其抑制物转染胃癌细胞系MGC-803。MTT检测细胞增殖,划痕法检测细胞迁移。双荧光素酶报告实验和Western blot检测miR-216a-5p和HMGB1之间的靶向关系。结果与癌旁组织相比,HMGB1在胃癌组织中高表达,miR-216a-5p在胃癌组织中低表达(P<0.05)。miR-216a-5p模拟物上调胃癌细胞miR-216a-5p的表达水平,抑制细胞的增殖和迁移;miR-216a-5p抑制物下调miR-216a-5p的表达水平,促进胃癌细胞的增殖和迁移(P<0.05)。miR-216a-5p可作用于HMGB1的3′UTR并抑制其表达。结论 miR-216a-5p通过靶向抑制HMGB1的表达降低胃癌细胞系MGC-803的增殖和迁移。

Laminin五肽对胃癌细胞系MGc-803的体外抑制作用

在肿瘤转移形成过程中,肿瘤细胞通过基底膜侵入是一个关键性步骤。Laminin 是基底膜所特有的非胶原糖蛋白,在肿瘤细胞粘着、铺展及增殖中均有促进作用。一种来源于 LamininB1链顺序的合成九肽已被鉴定为主要的细胞结合位点,在这个九肽序列中的一段五肽（YIGSR）被发现减少了黑色素瘤细胞注射的小鼠中肺克隆的形成,而且在体外也抑制了肿瘤细胞的侵入。我们应用这一五肽,观察其对胃癌细胞系 MGc-803的体外抑制作用,试图为临床消化道系统肿瘤的治疗寻找一个新途径。

胃复春胶囊提取物对人胃癌细胞系MGC-803细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响

目的研究胃复春胶囊提取物对人胃癌细胞系MGC-803细胞的凋亡作用及其作用机理。方法MGC-803细胞分别用不同浓度的胃复春胶囊提取物处理。CCK-8法检测细胞活力;Hoechst 33258染色观察形态学改变;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达。结果胃复春胶囊提取物(浓度为0~100μg·mL^(-1))可以浓度和时间依赖性地降低MGC-803细胞的活力。Hoechst 33258染色显示胃复春胶囊提取物处理后的MGC-803细胞膜通透性增高。流式细胞检测结果显示胃复春胶囊提取物作用于MGC-803细胞后可以诱导细胞凋亡,细胞凋亡率分别为(20.4±2.7)%(25μg·mL^(-1))、(41.3±6.2)%(50μg·mL^(-1))、(68.8±5.8)%(100μg·mL^(-1)),明显高于对照组凋亡率(3.8±1.6)%(0μg·mL^(-1))(P<0.05)。MGC-803细胞经过不同浓度胃复春胶囊提取物处理24 h后,处于G0/G1期细胞比例升高,而G2/M期和S期细胞比例下降;免疫印迹实验结果表明胃复春胶囊提取物(浓度为25,50,100μg·mL^(-1))处理组MGC-803细胞中cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9和Bax表达量升高,而Bcl-2表达量降低,且呈剂量依赖性。结论胃复春胶囊提取物能抑制MGC-803细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制与下调Bcl-2基因的表达,上调Bax基因的表达以及增加Caspases活性有关。

基于VEGF/PI3K/AKT通路探讨消岩汤联合阿帕替尼抑制胃癌MGC-803细胞增殖的作用机制研究

[目的]明确消岩汤通过血管内皮生长因子(VEGF)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路治疗胃癌的作用机制。[方法]通过CCK-8检测消岩汤对MGC-803细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测消岩汤对MGC-803细胞凋亡和周期的影响;通过蛋白免疫印迹(Western blot)检测消岩汤、阿帕替尼及其联合用药作用于MGC-803细胞后VEGF/PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。[结果]消岩汤呈剂量依赖性抑制MGC-803细胞的增殖(P<0.05),其半抑制浓度(IC_(50))为63.56 mg/mL;随着消岩汤浓度的增加,MGC-803细胞的总凋亡率逐渐升高(P<0.05);随着消岩汤浓度的增加,MGC-803细胞的G0/G1期细胞所占百分比逐渐降低(P<0.05),S期细胞所占百分比逐渐升高(P<0.05),G2/M期细胞所占百分比变化不大(P>0.05);与空白对照组比较,消岩汤组、阿帕替尼组及其联合用药组的p-PI3K、p-AKT、Bcl-2、血管内皮生长因子A(VEGFA)和血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)蛋白的表达量显著下调(P<0.05),Cleaved Caspase-9和Bax蛋白的表达量显著上调(P<0.05),相较于单药组,联合用药组对相关蛋白的调控作用更强。[结论]消岩汤能有效抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,诱导凋亡以及S期阻滞,抗胃癌作用机制与其对VEGF/PI3K/AKT信号通路的调控相关。

红芪多糖诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的作用机制研究

本文重点探究红芪多糖对人胃癌MGC-803细胞凋亡的作用机制。方法 利用体外细胞培养技术,将MGC-803细胞分配为对照组和红芪多糖处理组。应用细胞凋亡相关蛋白和免疫印迹法,考察黄芪多糖对细胞凋亡的影响,一并研究它们对于蛋白质的表达水平的改变。结果 实验结果显示,红芪多糖处理组中,MGC-803细胞的凋亡明显增加,伴随着细胞凋亡指标的增加和相关蛋白的表达改变。和对照组比较,摄入中药成分实验样本呈现明显细胞死亡比例增长态势,这种情况随着处理量的增加表现出与剂量增加相关性。红芪提取物能够促使人的胃癌MGC-803细胞引起细胞凋亡,作用原理包含关于跟死亡途径相连的蛋白质表现调节控制。实验的最终成效显示,红芪提取物能显著遏制癌细胞的增殖,为了研制新式胃癌治疗药物供应了关键的科学根据。

微小RNA-433-3p靶向同源异形盒基因A1抑制胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的研究

目的探讨微小RNA-433-3p(miR-433-3p)靶向同源异形盒基因A1(HOXA1)对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的影响。方法体外培养人胃癌MGC-803细胞,分为对照组(正常培养,不进行任何处理)、si-NC组(转染miR-433-3p siRNA阴性对照)、si-miR-433-3p组(转染miR-433-3p siRNA)、mimic-NC组(转染miR-433-3p mimic阴性对照)和miR-433-3p mimic组(转染miR-433-3p mimic)。荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测MGC-803细胞中miR-433-3p及HOXA1 mRNA表达;细胞计数法、Transwell法分别检测MGC-803细胞增殖、侵袭;双荧光素酶报告基因试验检测miR-433-3p与HOXA1的靶向关系。结果与对照组和si-NC组相比,si-miR-433-3p组MGC-803细胞中miR-433-3p表达降低(P<0.05),HOXA1 mRNA表达、细胞增殖率、侵袭细胞数升高(P<0.05)。与对照组和mimic-NC组相比,miR-433-3p mimic组MGC-803细胞中miR-433-3p表达升高(P<0.05),HOXA1 mRNA表达、细胞增殖率、侵袭细胞数降低(P<0.05)。TargetScan网站预测及双荧光素酶报告基因试验结果显示,miR-433-3p与HOXA1在MGC-803细胞中存在靶向关系。结论miR-433-3p能靶向调控HOXA1抑制胃癌MGC-803细胞的增殖、侵袭过程。

雄黄诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡

目的观察雄黄体外抗人胃癌MGC-803细胞作用及其可能作用机制。方法采用MTS法和细胞克隆实验法观察雄黄对MGC-803细胞增殖的影响,应用PI/Hoechest33258双染法和流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光分光光度计检测细胞内钙和线粒体膜电位,荧光定量PCR测Bad mRNA的表达。结果雄黄能剂量依赖性地抑制MGC-803细胞的生长和克隆形成。雄黄作用后,MGC-803细胞出现凋亡形态学改变如染色质浓缩等;流式细胞仪检测显示,雄黄能剂量依赖性地诱导细胞凋亡,其中,225μg/ml雄黄引起MGC-803细胞凋亡的百分率为(43.6±5.4)%。雄黄能剂量依赖性的引起MGC-803细胞的细胞内钙升高和线粒体膜电位降低,并上调Bad mRNA的表达。结论雄黄具有一定的抗肿瘤作用,并能诱导细胞凋亡,可能与钙依赖的凋亡通路有关。

FTO在胃癌组织中的表达降低及其对细胞系MGC-803功能的影响

目的探讨RNA甲基化相关蛋白FTO在胃癌中的表达变化情况,及其对胃癌细胞功能的影响。方法用realtime PCR检测54例胃癌组织及对应癌旁组织中FTO的表达;用质粒(p CMV6-FTO)实现FTO在胃癌细胞系MGC-803中的过表达;通过增殖实验、划痕试验和Transwell实验,检测FTO对MGC-803细胞功能的影响。结果 FTO mRNA在胃癌组织的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05),且其表达与胃癌样本的临床分期密切相关(P<0.05);在MGC-803细胞系中过表达FTO,可抑制胃癌细胞增殖(P<0.05)、抑制细胞迁移(P<0.05)和侵袭(P<0.05)。结论 FTO在胃癌组织中低表达,并且抑制胃癌细胞系的增殖、迁移和侵袭,可能与胃癌发生发展密切相关。

Snail在TGF-β1诱导胃癌细胞MGC-803上皮间质转化中的作用

目的 探讨Snail在TGF-β1诱导人胃癌细胞MGC-803上皮细胞向间质细胞转化过程中的表达及其作用.方法 TGF-β1处理人胃癌细胞MGC-803不同时间（0h,3h,6h,24h,48h,72h）,倒置显微镜观察细胞形态的变化,Western blot方法检测Snail蛋白及E-cadherin,Vimentin蛋白的表达情况,Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 （1）随着TGF-β1作用时间的延长,MGC-803细胞形态发生变化,伪足不同程度的增多;（2）在外源性TGF-β1作用下,胃癌细胞MGC-803均不同程度地表达Snail和E-cadherin,Snail从0h到6h表达量增强,到6h时达到最高.E-cadherin蛋白从0h到6h表达逐渐增高,6h时最高,后续变化不明显.Vimentin蛋白6h表达量最低,此后逐渐升高,72h时表达量最高;（3）Transwell小室实验显示6h时,细胞开始穿过ECM膜,随着时间的延长,穿过的细胞逐渐增多,72h最多.结论 在TGF-β1诱导人胃癌细胞MGC-803细胞EMT的过程中,Snail蛋白起到重要作用,启动Vimentin转录表达.

槐定碱诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的实验研究

目的 探讨槐定碱对人胃癌MGC 80 3细胞抑制作用及其诱导凋亡机理。方法 用MTT法测定槐定碱对MGC 80 3细胞的IC50 ,荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳等技术观察细胞凋亡。结果 实验显示 0 .4～ 3.2mg /ml的槐定碱对体外培养的MGC 80 3细胞有明显的抑制作用并可诱导其发生凋亡 ,凋亡细胞表现为细胞固缩 ,核染色质聚集或碎裂、胞质空泡化等 ;DNA电泳可见DNA“梯形”条带 ;流式细胞仪检测Sub G1凋亡峰在G1期前出现 ,S期细胞比例增高。结论 槐定碱对体外培养MGC 80 3细胞生长有抑制作用 ,机理与通过阻止细胞周期的进程 ,诱导肿瘤细胞凋亡有关。

槲皮素对胃癌MGC-803细胞VEGF-C及VEGFR-3表达水平的影响

目的:研究槲皮素抑制胃癌MGC-803细胞淋巴转移的作用。方法:实验分为对照组和40μmol/L槲皮素处理组两组。采用免疫组化和RT-PCR方法,检测槲皮素对VEGF-C及其受体VEGFR-3表达水平的作用。结果:槲皮素处理48h后VEGF-C和VEGFR-3表达水平均有下调,与对照组相比有统计学意义(P<0.01)。结论:槲皮素可下调胃癌MGC-803细胞VEGF-C、VEGFR-3的表达。

甘草提取物诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的初步研究

目的 :研究甘草提取物诱导胃癌MGC 80 3细胞发生凋亡。方法 :用荧光双染、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪等方法 ,观察甘草提取物处理MGC 80 3细胞后细胞形态和染色质DNA等的变化 ,以双重免疫标记法和免疫组化法检测处理前后 p53基因表达的变化。结果 :激光扫描共聚焦显微镜观察到处于不同凋亡进程中的细胞 ;流式细胞仪检测到显著的凋亡峰 ,且凋亡百分率呈浓度、时间依赖性 ;高浓度甘草提取物处理的MGC 80 3细胞的DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的“ladder” ;甘草提取物对p53基因表达没有影响。结论 :甘草通过p53非依赖途径诱导MGC 80 3细胞凋亡 ,可望作为一种新的细胞凋亡诱导剂用于胃癌的治疗。

去甲斑蝥素抑制胃癌MGC-803细胞生长并诱导其凋亡

目的:探讨去甲斑蝥素对胃癌MGC-803细胞的抑制作用及其可能的作用机制。方法:噻唑蓝(MTT)法及克隆形成抑制实验观察去甲斑蝥素对胃癌MGC-803细胞的生长抑制作用,碘化丙锭(propidium iodide,PI)单染色检测细胞周期改变,膜连蛋白-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC/PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达。结果:去甲斑蝥素作用MGC-803细胞后,不同浓度的去甲斑蝥素对胃癌细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量-效应关系(P<0.05),去甲斑蝥素作用于胃癌MGC-803细胞48 h和72 h的IC_(50)浓度分别为69.92μmol/L和31.27μmol/L;与对照组相比随着去甲斑蝥素的浓度增加,细胞克隆逐渐减少;细胞周期检测结果显示,随着去甲斑蝥素浓度的增加,胃癌MGC-803细胞出现明显G2/M期阻滞;不同浓度去甲斑蝥素作用后,出现明显的凋亡细胞群;Western blotting检测结果显示,去甲斑蝥素处理组细胞的Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-1表达明显降低,促凋亡蛋白Bax表达基本不变。Casepase-9、Caspase-3活化降解,PARP蛋白出现切割条带。结论:去甲斑蝥素能够抑制胃癌MGC-803细胞生长,使细胞周期抑制在G2/M期,并通过线粒体凋亡途径诱导细胞发生凋亡。

Survivin基因沉默抑制胃癌MGC-803细胞增殖并增强其对塞来昔布的敏感性

目的研究Survivin基因沉默对人胃癌MGC-803细胞增殖和对化疗药物塞来昔布敏感性的影响。方法设计合成Survivin的siRNA序列,LipofectamineTM2000转染入MGC-803细胞。采用RT-PCR和Western blotting检测Survivin在干扰后mRNA和蛋白的表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期。通过MTT法和细胞克隆形成试验法察Survivin基因沉默后MGC-803细胞对塞来昔布的敏感性。结果 Survivin基因沉默48 h后,MGC-803细胞的Survivin基因和蛋白表达明显降低(P<0.05)。细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少(P<0.05)。Survivin基因沉默组细胞对塞来昔布的敏感性显著性增强(P<0.05)。结论 Survivin特异性siRNA能显著沉默MGC-803细胞Survivin基因,抑制细胞增殖,并增强MGC-803细胞对塞来昔布的敏感性。

重楼总皂苷对胃癌细胞株MGC-803生长的抑制作用

目的研究重楼总皂苷对胃癌细胞株MGC-803生长的抑制作用,并探讨其作用机制。方法采用MTT法检测重楼总苷对MGC-803细胞生长的抑制作用,采用流式细胞术测定细胞周期变化及细胞凋亡率,并分析E-phA2、survivin及Caspase-3蛋白的表达变化。结果重楼总皂苷可显著抑制MGC-803细胞的生长,并且呈时间-剂量依赖关系;可阻滞细胞于S期,诱导细胞凋亡率的升高;可显著抑制EphA2、survivin蛋白的表达,同时上调Caspase-3蛋白的表达。结论其作用机制可能与下调EphA2和survivin的表达以及促进Caspase-3的表达有关。