芒柄花黄素对人胃癌细胞系SGC7901生长、增殖及侵袭影响

目的:探讨芒柄花黄素(Form)对人胃癌细胞株SGC7901的作用及机制。方法:用不同浓度(0、20、40、80μmol/L)Form处理SGC7901后,采用Hoechst、MTT、流式细胞术等检测细胞抑制率、细胞周期、细胞核形态及凋亡。采用蛋白质印迹检测β-Catenin、p-β-Catenin、Cyclin D1、CDK4及p-AKT、AKT、BCL-2、BAX、Caspase3等蛋白的表达,RT-PCR检测BCL-2、CDK4、CDK6、AKT、Cyclin D1及BAX、Caspase3等m RNA表达。结果:Form抑制SGC7901细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性。Hoechst结果表明,相比于对照组(0μmol/L),实验组Form(20、40、80μmol/L)作用48 h后,细胞核固缩、溶解,破裂后呈颗粒状聚集。流式细胞术结果显示,不同浓度Form处理48 h,细胞凋亡率分别为17.0%、21.5%、32.5%,呈浓度依赖性。RT-PCR结果显示,SGC7901中Caspase3、BAX m RNA表达量随Form浓度增加而上升(P<0.01);BCL-2、CDK4、CDK6、AKT、Cyclin D1的m RNA表达量逐渐降低(P<0.01)。WB结果表明,SGC7901细胞中β-Catenin、p-β-Catenin、Cyclin D1、CDK4以及p-AKT、AKT、BCL-2等蛋白的相对表达量随Form浓度增加而降低(P<0.01);Caspase3、BAX等蛋白表达逐渐上升(P<0.01)。结论:Form具有促进SGC7901细胞凋亡的作用;其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号,活化Caspase家族实现的。

瘦素对胃癌细胞系SGC7901增殖和凋亡的影响

目的 观察人胃癌细胞系SGC7901瘦素及瘦素受体的表达及瘦素对SGC7901增殖及凋亡的影响。方 法 免疫组化和RT-PCR检测SGC7901瘦素和瘦素受体的表达,噻唑蓝比色实验观察瘦素对SGC7901的增殖 作用,流式细胞仪检测瘦素对细胞周期及凋亡的影响,RT-PCR方法半定量检测瘦素对促凋亡基因bax mRNA 表达的影响。结果SGC7901既表达瘦素又表达瘦素受体,重组瘦素呈剂量依赖性地促进细胞的增殖,并明显 抑制细胞的凋亡,瘦素可抑制促凋亡基因bax mRNA的表达。结论 瘦素可能以自分泌方式调节人胃癌细胞系 SGC7901的增殖及凋亡。

RNA干扰沉默Twist基因对人胃癌细胞系SGC7901细胞增殖能力的影响

目的探讨Twist基因沉默后对人胃癌SGC7901细胞增殖能力的影响。方法利用脂质体转染法将携带有Twist干扰片段的pGen-esil/Twist载体导入人胃癌SGC7901细胞,G418筛选阳性克隆,经RT-PCR,Western印迹法检测干扰效果。通过绘制生长曲线、流式细胞术检测细胞周期等反映Twist对SGC7901细胞增殖能力的影响。结果生长曲线结果显示Twist基因沉默组细胞生长速度较两对照组缓慢。细胞周期结果显示Twist基因沉默组S期细胞数明显较对照组减少,增殖能力下降。结论Twist基因沉默后可抑制SGC7901细胞的分裂增殖,可能成为临床胃癌基因治疗的新靶点。

17β-雌二醇对胃癌细胞系SGC7901中NF-κB蛋白表达的影响

目的:观察不同浓度雌二醇处理不同时间的情况下,人胃癌细胞系SGC7901中NF-B蛋白表达量的变化,探讨胃癌中雌激素对NF-B蛋白表达可能存在的影响.方法:SGC7901细胞经10 10mol/L和10 8mol/L的17-雌二醇(17β-estradiol,E2)处理6 h、12 h和24 h,应用Western Blot及灰度分析的方法检测蛋白表达量的改变,平均光密度值采用t检验分析.结果:E2作用于SGC7901细胞6h后,NF-κB蛋白表达量在10 10mol/L浓度组与对照组无明显差异,而10 8mol/L浓度组明显高于对照组(P<0.05).12h后,NF-κB蛋白表达量在10 10mol/L浓度组和10 8mol/L浓度组明显低于对照组(P<0.05).24 h后,NF-κB蛋白表达量在10 10mol/L浓度组和10 8mol/L浓度组低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05).结论:雌激素可对胃癌细胞系SGC7901中NF-κB蛋白表达量产生影响.

缺氧状态下丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1在胃癌细胞系SGC7901中的过表达及其意义

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶 1 (MKP 1)在缺氧胃癌细胞系SGC790 1中的表达及对缺氧诱导因子 1(HIF 1)的影响。方法 采用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和Western印迹检测MKP 1在常氧及缺氧状态下胃癌细胞系SGC790 1中的表达 ;借助DNA重组技术构建MKP 1基因的正义真核表达载体 ;利用脂质体将正义真核表达载体和空载体转入SGC790 1细胞 ;双荧光素酶报告基因 (DualLuciferaseReporter,DLR)检测系统检测荧光素酶活性并采用ELISA法检测SGC790 1细胞培养上清血管内皮生长因子 (VEGF)的变化。结果 (1)半定量RT PCR和Western印迹结果提示 ,MKP 1在胃癌细胞系SGC790 1中表达 ,缺氧时其表达上调 ;(2 )分别将MKP 1正义真核表达载体和pcDNA3.1空载体瞬时转入SGC790 1细胞 ;转染 4 8h后 ,缺氧 12h磷酸化HIF 1α在正义真核表达载体转染细胞 (SGC790 1 MKP 1)中的表达低于空载体转染细胞 (SGC790 1 空载体 )和未转染细胞(SGC790 1)。 (3)报告基因试验显示常氧情况下 3、6和 12h荧光素酶活性在SGC790 1细胞、SGC790 1 空载体细胞和SGC790 1 MKP 1细胞中差异无显著意义 (P >0 .0 5 ) ;缺氧情况下 ,SGC790 1 MKP 1细胞中荧光素酶活性在 3、6和 12h均明显低于SGC790 1细胞和SGC790 1 空载体 (P <0 .0 1)

人胃癌细胞系SGC-7901放射敏感性及异质性的研究

目的研究人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１及其克隆亚系的放射敏感性。方法ＳＧＣ７９０１细胞株及其两个克隆亚系（大集落、小集落）的细胞用８ＭｅＶ直线加速器电子束以不同剂量照射，分别经４８小时、７２小时培养及集落培养后，计数并得出各组存活曲线。结果１．两个克隆亚系之间的Ｄ０值有显著差异（Ｐ＜００５）；２．大集落亚系与ＳＧＣ母系之间在集落形成实验中，其Ｄ０值有差异（Ｐ＜００５）。结论ＳＧＣ７９０１细胞系及其克隆亚系对放射的敏感性存在着异质性。

化疗药物对人胃癌SGC-7901细胞系端粒酶活性影响

目的 研究常见化疗药物对人胃癌SGC 790 1细胞系端粒酶活性影响。方法 MTT (噻唑蓝 )法测定化疗药物顺铂、丝裂霉素、阿霉素、 5 氟尿嘧啶、氟铁龙 (脱氧氟尿苷 )对人胃癌SGC 790 1细胞系毒性作用的半数抑制(IC5 0 )浓度 ;用TRAP ELISA法测定 4 0×IC5 0浓度化疗药物作用于SGC 790 1细胞 4h、 2 8h端粒酶活性及IC5 0浓度IC5 0化疗药物作用于SGC 790 1细胞 2 4h、 72h、 12 0h细胞端粒酶活性。结果 高浓度 ,低浓度顺铂、丝裂霉素对SGC 790 1细胞端粒酶活性有完全抑制作用 ;而阿霉素、 5 氟尿嘧啶、氟铁龙对SGC 790 1细胞端粒酶活性有部分抑制作用。结论 阿霉素、 5 氟尿嘧啶、氟铁龙对SGC 790 1细胞端粒酶活性有轻度抑制作用 ;顺铂、丝裂霉素能完全抑制端粒酶活性 。

奥曲肽抑制胃癌细胞系SGC-7901生长的实验研究

目的 研究奥曲肽对胃癌细胞系SGC -790 1生长的抑制作用。方法 将奥曲肽注入胃癌细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT )法测定细胞生长抑制效应 ,将3 H -胸腺嘧啶核苷 (3 H -TdR )掺入试验测定奥曲肽对胃癌细胞DNA合成的影响 ,显微镜下观察胃癌细胞形态变化 ,应用流式细胞仪 (FCM )检测细胞周期 ,并采用TRAPPCR -ELISA法对胃癌细胞端粒酶活性进行检测。结果 奥曲肽对胃癌细胞系SGC -790 1的生长及DNA合成均有抑制作用 ,显微镜下可见细胞变圆、变小、脱落 ,FCM检测结果显示奥曲肽作用后 ,G0 /G1期细胞比例增高 ,S期、G2 /M期细胞比例下降 ,端粒酶活性显著受抑制。结论 奥曲肽能明显抑制胃癌细胞系SGC -790 1的生长 ,形成G0 /G1期阻滞 。

D-氨基葡萄糖衍生物对人胃癌细胞系SGC-7901增生的影响

目的:观察D-氨基葡萄糖衍生物体外对人胃癌SGC- 7901细胞增生的影响,探讨其可能作用机制. 方法:采用MTT法,筛选药物作用最佳浓度.用流式细胞仪分析诱导凋亡前后的细胞DNA含量,透射电镜观察凋亡细胞的超微结构.免疫组化测定CD44表达. 结果:D-氨基葡萄糖衍生物能明显抑制胃癌细胞的增长(P<0.01),MTT法显示抑制程度具有时间和剂量效应关系,统计组间比较差异有显著性(P<0.01);流式细胞仪分析可见亚二倍体(Sub-G1)凋亡峰;电镜观察到凋亡细胞的典型变化,免疫组化及光密度检测示CD44表达下降(216.5±7.0 vs 190.0±14.2,P=0.000). 结论:D-氨基葡萄糖衍生物通过诱导肿瘤细胞凋亡而抑制人胃癌SGC-7901细胞增生,同时还有下调CD44的作用.

Af116609基因对胃癌细胞系SGC7901/VCR耐药性的影响

目的研究Af116609基因转染胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR后,对胃癌细胞耐药性的影响。方法采用RT-PCR法克隆Af116609基因,用Northernblot检测其差异表达,以基因转染技术调节其表达,通过体外药敏实验观察其对胃癌耐药表型的影响。结果从胃癌耐药细胞SGC7901/VCR中克隆到Af116609基因的CDS序列327bp,该序列与GenBank登录的一致。Northernblot结果显示,该基因在耐药细胞高表达。体外药敏实验发现,转染正义真核表达载体的药敏细胞中该基因上调,对长春新碱、5-氟脲嘧啶和阿糖胞苷的耐药性增加,而对阿霉素的抗性有损害,对氨甲喋呤的抗性无明显影响;转染反义真核表达载体的耐药细胞中该基因下调,对上述5种药物的抗性均减弱。结论Af116609基因与胃癌MDR表型相关,可作为逆转胃癌MDR的候选靶分子。

四嗪二甲酰胺诱导人胃癌AGS、SGC7901细胞系凋亡及其分子机制的实验研究

目的:观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制胃癌细胞株 AGS 和 SGC7901增殖并诱导细胞凋亡及其作用机制。方法:将不同浓度的 ZGDHu-1与 AGS 和 SGC7901细胞在体外培养,用台盼蓝染色、SRB 法、5′-溴-2′脱氧尿苷(Brdu)-ELISA 法观察 ZGDHu-1对 AGS 和 SGC7901细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA 凝胶电泳、DNA 含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI 双标记、Hoechst33258荧光染色等技术检测细胞凋亡。用流式细胞术观察经 ZGDHu-1作用后 AGS 和SGC7901细胞 bcl-2、bax、P53蛋白质和 P38MAPK 和 Stat3磷酸化表达的变化的表达改变。结果:ZGDHu-1能抑制 AGS和 SGC7901细胞增殖和活力,呈现作用时间和剂量的量效关系。AGS 和 SGC7901细胞与 ZGDHu-1作用后,大部分细胞阻滞于 G_2-M 期;出现典型的细胞肜态改变,DNA 片断化,亚 G1峰检出并显著增加,Annexin-V+/PI-表达升高,Ho-echst33258荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等均证实 ZGDHu-1能诱导 AGS 和 SGC7901细胞凋亡。AGS 和SGC7901细胞经不同浓度的 ZGDHu-1体外培养后,bcl-2蛋白有所下调,但主要是上调 bax 和 P53蛋白,导致 bax/bcl-2比值明显增高,均并呈现剂量依赖性;磷酸化 P38MAPK 表达增强,而磷酸化 Stat3表达降低。结论:ZGDHu-1通过诱导细胞凋亡抑制 AGS 和 SGC7901细胞增殖,其机制可能与上调 bax 和 P53的表达,增强 P38MAPK 的磷酸化和抑制 STAT3的活化有关。

人端粒酶反义寡脱氧核苷酸对胃癌细胞系SGC-7901的生长抑制和诱导凋亡的研究

端粒酶活性在胃癌组织中表达率很高,在正常胃黏膜组织中则基本不表达。因此,以端粒酶为靶点的反义治疗有望成为胃癌治疗的有效途径之一。目的:检测特定的人端粒酶反义寡脱氧核苷酸(AS-ODN)对胃癌细胞系SGC-7901生长的抑制作用,并证明其主要机制为抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡。方法:用改良的聚合酶链反应(PCR)-端粒重复扩增协议(TRAP)法定量检测端粒酶AS-ODN作用前后SGC-7901细胞的端粒酶活性;台盼蓝染色法观察SGC-7901细胞活力;光镜和电镜观察凋亡细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:SGC-7901细胞有端粒酶活性表达。不同浓度的端粒酶AS-ODN作用于SGC-7901细胞48～96h后,细胞端粒酶活性和生长受到明显抑制,光镜、电镜观察和流式细胞仪检测均证实有细胞凋亡存在。错义AS-ODN(N-ODN)处理组SGC-7901细胞则无显著变化(P<0.05)。结论:端粒酶AS-ODN通过抑制胃癌细胞的端粒酶活性和诱导细胞凋亡,最终抑制胃癌细胞生长,其抑制作用呈剂量、时间依赖性和序列特异性。端粒酶AS-ODN对端粒酶活性的抑制比对细胞生长的抑制更敏感,两种抑制作用并不完全平行。

Y-27632抑制胃癌SGC-7901细胞系侵袭与转移

目的探讨Y-27632对胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响,及其作用机制是否是通过对SRF的调控来实现的。方法将细胞分为3组:1)对照组;2)Y-27632通路阻断剂组;3)siRNA-SRF-1107干扰组。各组分别转染、加药,孵育48 h。用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室和划痕实验检测细胞侵袭能力和迁移能力。Western blot法检测SRF、ROCK1、E-cadherin、β-catenin、F-actin、MRTF-A及Cyclin D1的表达。结果 Y-27632能显著抑制胃癌SGC-7901细胞的侵袭、迁移能力(P<0.05),而对其增殖没有影响。Y-27632能显著下调SGC-7901细胞的ROCK1、SRF、F-actin和MRTF-A的表达,上调E-cadherin的表达(P<0.05)。结论 Y-27632通过上调E-cadherin表达,同时阻断ROCK信号抑制SRF辅因子MRTF-A的表达,最终下调SRF转录水平,从而抑制胃癌SGC-7901细胞侵袭、转移和迁移能力。

熊果酸体外抗胃癌细胞SGC7901机制的研究

目的 探讨熊果酸（ursolic acid,UA）体外抑制胃癌细胞SGC7901生长的作用机制.方法 体外培养人胃癌细胞株SGC7901,MTT法观察不同浓度UA作用不同时间对细胞生长的影响;不同浓度UA（0～40 μmol/L）处理SGC7901细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态变化;荧光染料Hoechst 33258染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western Blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果 20～40 μmol/L UA可抑制SGC7901的生长,并呈浓度和时间依赖性,其作用12、24、36、48 h的IC50分别为（57.50±1.18）、（34.28±2.05）、（27.54±1.11）、（24.83±1.02）μmol/L.20～40 μmol/L UA作用24 h后,SGC7901细胞变圆,出现不同程度的漂浮;同时细胞被阻滞于G0/G1期并发生凋亡,随药物浓度升高,凋亡率增加,凋亡相关蛋白Bcl-2表达减少,Bax无明显变化.结论 熊果酸对SGC7901细胞具有较强的抗肿瘤活性,其机制可能与细胞毒作用、增殖抑制作用以及下调凋亡相关蛋白Bcl-2表达而促进凋亡有关.

非甾体类抗炎药对胃癌SGC7901细胞增生及环氧合酶活性的影响

目的:探讨非甾体类抗炎药(nonsteroidal anti-inflammatory drugs,NSAID)对体外培养的胃癌细胞SGC7901生长及环氧合酶活性的作用。 方法:用MTF法观察阿司匹林、尼美舒利对胃癌细胞SGC7901生长的影响;免疫细胞化学方法检测Ki-67及COX-2蛋白表达;采用放射免疫分析法测定细胞培养上清PGE2水平。 结果:阿司匹林和尼美舒利呈时间、剂量依赖性方式抑制细胞增生,减少Ki-67蛋白表达。胃癌细胞SGC7901COX-2蛋白表达阳性,并伴有PGE_2释放,尼美舒利可减少PGE_2产生,但对COX-2蛋白表达无影响。 结论:阿司匹林和尼美舒利均可抑制COX-2表达阳性的胃癌细胞SGC7901生长,尼美舒利通过抑制COX-2酶活性而减少PGE_2释放,该研究提示COX-2可能在胃癌细胞SGC7901增生中起重要作用。

姜黄素诱导人胃癌SGC7901细胞自噬性凋亡的研究

目的观察姜黄素体外诱导人胃癌SGC7901细胞自噬性凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度的姜黄素处理SGC7901细胞,MTT法检测细胞增殖;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin,MDC)荧光染色和Hoechst33342荧光染色观察细胞自噬和凋亡的发生;流式细胞术检测细胞凋亡率;Westernblot检测细胞凋亡相关蛋白NF-κB、自噬相关蛋白Beclin1及LC3Ⅱ的表达。结果姜黄素可呈剂量依赖性明显抑制SGC7901的生长。MDC染色显示,40μmol/L姜黄素在作用12 h后即可诱导SGC7901细胞发生自噬,24 h自噬减少;Hoechst33342荧光染色显示,40μmol/L姜黄素诱导凋亡在24 h最明显;流式细胞术显示,40μmol/L姜黄素作用24 h时SGC7901细胞凋亡率明显增加。Western blot检测显示,姜黄素诱导SGC7901细胞自噬性凋亡过程中,凋亡相关蛋白NF-κB、自噬相关蛋白Beclin1及LC3的表达均上调。结论姜黄素通过诱导自噬性凋亡抑制人胃癌细胞SGC7901的生长,其机制与NF-κB、Beclin1及LC3蛋白的表达上调有关。