斑蝥酸钠对人胃癌细胞BGC823中Bcl-2、p53基因表达的影响

目的研究斑蝥酸钠对人胃癌细胞BGC823中Bc1-2、p53基因表达的影响。方法采用流式细胞仪检测、分析斑蝥酸钠处理前后人胃癌细胞BGC823中Bc1-2、p53基因表达的变化。结果不同剂量斑蝥酸钠作用24h均可使Bc1-2、p53基因在人胃癌细胞BGC823中的表达下降。结论斑蝥酸钠可抑制Bc1-2、p53基因在人胃癌细胞BGC823中的表达。

干扰LASP1基因表达对胃癌细胞BGC823增殖、迁移及侵袭能力的影响

背景与目的:LASP1是一种新的肌动蛋白结合蛋白,参与细胞骨架的重组调控及细胞迁移,在多种恶性肿瘤中高表达,并与肿瘤的增殖、侵袭和转移密切相关。但目前LASP1在胃癌发生、发展中的作用少见报道。该研究旨在探讨LASP1在胃癌增殖和侵袭中的作用及分子机制。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测LASP1在不同胃癌细胞系中的表达,应用RNA干扰技术抑制BGC823细胞中LASP1的表达,采用RTFQ-PCR和Western blot检测转染后LASP1的表达,应用体外增殖、迁移和侵袭实验检测转染后细胞的增殖、迁移和侵袭能力,通过F-actin聚合实验检测细胞的F-actin的聚合能力,采用Western blot检测转染前后BGC823细胞中Akt的磷酸化情况。结果:LASP1在胃癌BGC823细胞中高表达。RNA干扰技术沉默LASP1基因后,干扰组与对照组相比,LASP1的m RNA和蛋白表达水平均明显下降。细胞增殖实验显示,干扰组细胞的增殖率低于对照组(P<0.05);Transwell迁移和侵袭实验发现,与对照组相比,干扰组细胞的迁移和侵袭能力均明显降低(P<0.05);在干扰组细胞内的F-actin聚合量比对照组减少(P<0.05);在干扰组细胞内Akt磷酸化受到抑制。结论:LASP1的表达降低可以抑制胃癌BGC823细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力,LASP1通过调节F-actin的聚合和Akt磷酸化从而影响胃癌细胞的侵袭、转移。

大蒜素对人胃癌细胞BGC823 cyclin D1和p27^(Kip1)表达的影响

背景与目的:在研究大蒜素抑制人胃癌细胞BGC823恶性增殖,将其阻滞于G1期并诱导BGC823细胞凋亡的分子机制及其靶基因过程中,我们发现cyclinD1和p27Kip1蛋白在G1期阻滞中起重要作用。本实验从mRNA和蛋白水平探讨大蒜素对人胃癌细胞BGC823cyclinD1和p27Kip1表达水平的影响。方法:用25μg/ml大蒜素处理BGC823细胞,并分别提取对照组和大蒜素处理组的总RNA和总蛋白,然后采用RT-PCR和Westernblot法检测大蒜素处理前后cyclinD1和p27Kip1mRNA和蛋白的变化。结果:经25μg/ml大蒜素处理BGC823细胞24h,cyclinD1蛋白表达下调,p27Kip1蛋白表达上调,处理48h上述变化更明显。而mRNA水平未见明显改变。结论:大蒜素可影响cyclinD1和p27Kip1蛋白的表达,而不影响mRNA的转录。

重楼总皂苷提取分离及其对人胃癌细胞BGC823的抑制作用

目的:初步探索重楼总皂苷的提取分离方法,并通过比较重楼总皂苷与重楼醇提物、重楼皂苷Ⅰ对人胃癌细胞BGC823生长抑制作用评价重楼总皂苷提取分离工艺和临床应用价值。方法:采用热回流提取法得到重楼醇提物,再经大孔吸附树脂分离得到重楼总皂苷。采用噻唑蓝染色法(MTT法)和集落形成实验,比较重楼总皂苷与重楼醇提物、重楼皂苷Ⅰ对人胃癌BGC823细胞增殖和集落形成的影响。结果:重楼总皂苷、重楼醇提物、重楼皂苷Ⅰ作用于人胃癌BGC823细胞48h的半数抑制浓度(IC50)分别为(8.63±0.30)、(2.61±0.03)、(1.97±0.01)μg/mL。在3.13、6.25、12.5μg/mL浓度下重楼醇提物组集落形成抑制率为30.84%、53.27%、100%,而重楼总皂苷组在各浓度范围内均无集落形成。结论:重楼总皂苷对人胃癌BGC823细胞生长抑制作用显著优于重楼醇提物,稍弱于重楼皂苷Ⅰ,但二者IC50数值接近且均较低,从而肯定重楼总皂苷提取分离工艺和临床应用潜能。

含RGD的细胞粘附肽抑制人胃癌细胞BGC823增殖及诱导其凋亡作用

目的四种含RGD的细胞粘附肽(RGD、RGD(NH2)2、RGDS、RGDS-NH2)对人胃癌细胞BGC823(Human stomach cancer BGC823)生长增殖的影响,进而探讨含四种RGD诱导BGC823细胞凋亡的作用。方法通过MTT法检测四种含RGD对BGC823细胞生长增殖的抑制作用;通过HE染色、透射电子显微镜、免疫组织化学、流式细胞术和凋亡细胞的DNA片段分析等方法观察凋亡细胞的形态结构变化及细胞凋亡的机制。结果含RGD能抑制BGC823细胞的生长增殖,并呈浓度依赖性;其含RGD诱导BGC823细胞凋亡可能通过线粒体引发这一途径。结论含RGD诱导BGC823细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞的增殖。并且在介导细胞凋亡中,RGD具有高度保守的特性。

同源异型盒基因HOXA5对胃癌细胞BGC823侵袭能力的影响

目的检测人胃癌组织中HOXA5基因的表达情况,观察干扰HOXA5基因的表达之后,胃癌细胞BGC823的迁移和侵袭能力的变化,为阐明HOXA5在胃癌向远处转移的分子机制中提供新的思路。方法通过实时定量PCR(qRT-PCR)、Western blot以及免疫组织化学等技术,检测胃癌组织中HOXA5基因的表达。应用细胞转染的方法将HOXA5基因的过表达质粒转入胃癌细胞BGC823中,经qRT-PCR和Western blot验证HOXA5表达上调之后,利用Transwell侵袭实验检测BGC823细胞侵袭能力的变化。结果在收集的69例新鲜的胃癌组织以及相对应的癌旁组织中,免疫组织化学显示相比于癌旁组织的表达情况,胃癌组织中只有26例HOXA5的表达高于癌旁组织,比例为37.7%;qRTPCR、Western blot检测发现相对于癌旁组织,胃癌组织中HOXA5的表达水平显著下调(mRNA水平下调3倍,蛋白水平下调2倍,差异具有统计学意义,P<0.05)。BGC823细胞转染了过表达质粒之后,HOXA5的表达能够被上调。过表达了HOXA5基因的BGC823细胞的侵袭能力下降。结论在胃癌组织中HOXA5的表达下调,而在胃癌细胞BGC823中增强HOXA5的表达能够降低细胞的侵袭能力,说明HOXA5在胃癌的发生发展和侵袭、转移中发挥着抑癌基因的作用,可作为一个新的治疗靶点。

细胞粘附肽(RGDS)抑制人胃癌细胞BGC823生长及诱导其凋亡

目的研究细胞粘附肽(RGDS)对人胃癌细胞系BGC823(Human stomach cancer BGC823)生长增殖的影响,进而探讨RGDS诱导BGC823细胞凋亡的作用。方法用不同浓度的RGDS处理BGC823细胞48h后,MTT法检测RGDS对BGC823细胞生长增殖的抑制作用,通过HE染色、透射电子显微镜、免疫组织化学、流式细胞术和凋亡细胞的DNA片断等方法观察凋亡细胞的形态结构变化以及定性、定量检测细胞凋亡。结果RGDS能抑制BGC823细胞的生长增殖,并呈浓度依赖性;RGDS诱导BGC823细胞凋亡的作用机制可能通过抑制凋亡抑制蛋白Survivin的表达引发这一途径。结论RGDS能够通过诱导BGC823细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞的增殖。

靶向EGFR基因RNA干扰对胃癌细胞BGC823细胞增殖和凋亡的影响

目的利用R NA干扰技术下调表皮生长因子受体(EGFR)基因的表达,观察其对胃癌BGC823细胞增殖和凋亡的影响。方法将细胞分为3组,空白对照组、空载体组和实验组(转染EGFRshRNA组)。构建针对EGFR基因的s和R NA真核表达载体,转染入胃癌BGC823细胞中,运用R T-PCR和Western blot检测EGFR在mRNA和蛋白水平的变化;WST-1法检测细胞增殖的影响:Hoechst33258染色观察细胞核形态学变化。实验重复3次。结果成功构建表达质粒pGenSil-EGFR并转染BGC823细胞,shRNA下调EGFR的表达后,与空白对照组相比EGFR在mR NA和蛋白水平的表达均下降,抑制率分别为58.6%和75.2%。shR NA转染24、48、72 h,WST-1法检测胃癌细胞BGC823的增殖情况,与空白对照组相比,24 h后三组差异不明显(F=0.326,P>0.05),48 h及72 h后,细胞增殖明显下降(F=68.25及274.45,P<0.001),有统计学意义。EGFR shR NA作用BGC823细胞72 h后,经Hoechst33258染色发现,实验组细胞核染色质边集,出现凋亡小体。结论靶向EGFR基因RNA干扰能够阻抑胃癌细胞BGC823细胞的EGFR表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,EGFR基因有望成为胃癌基因治疗靶点。

细胞黏附肽抑制人胃癌细胞BGC823生长及诱导其凋亡作用

目的:研究细胞黏附肽(RGD)对人胃癌BGC823细胞生长增殖的影响,探讨RGD诱导BGC823细胞凋亡的作用。方法:将体外培养的BGC823细胞分为12.5、25.0、50.0、100.0 mg.L-1RGD处理组和对照组,RGD处理BGC823细胞24、48、和72 h后,MTT法检测不同浓度RGD作用不同时间对BGC823细胞生长增殖的抑制作用,分别利用光镜、透射电镜、免疫组织化学法、流式细胞术和凋亡细胞的DNA片段方法观察凋亡细胞的形态学变化以及定性、定量检测细胞凋亡。结果:MTT检测,RGD各剂量组在作用24、48和72 h时,BGC823细胞的抑制率均高于对照组(P<0.01),且随着RGD浓度增加BGC823细胞的抑制率增加;50.0 mg.L-1RGD处理BGC823细胞48 h后,光镜下显示,细胞体积变小,胞核深染,胞浆发红,出现很多的凋亡细胞;透射电镜显示,细胞表面微绒毛消失,异染色质趋边凝聚、聚集在核膜上,形成新月形帽状结构,甚至核膜消失,细胞核碎裂,可见凋亡小体。流式细胞术检测,BGC823细胞发生凋亡,且凋亡峰随着浓度的增加而增高;电泳结果显示,BGC823细胞内的DNA片段断裂为大小不等的小片段,呈现出很清晰的梯状降解条带;免疫组织化学染色结果显示,50.0 mg.L-1RGD处理BGC823细胞48 h后Survivin的表达量较对照组明显减少,经图像分析检测,实验组平均灰度值高于对照组(P<0.01),提示实验组细胞发生凋亡。结论:RGD通过诱导BGC823细胞凋亡抑制肿瘤细胞的增殖,其RGD诱导BGC823细胞凋亡的作用机制可能通过线粒体引发这一途径。

蛋氨酸脑啡肽抑制人胃癌细胞BGC823增殖作用及免疫调节机制

采用不同浓度梯度的蛋氨酸脑啡肽(methionine enkephalin,MENK)体外作用于人胃癌细胞BGC823后,探讨对其增殖影响及其作用机制,为胃癌的免疫治疗提供理论依据。体外培养人胃癌细胞株BGC823,PCR检测阿片受体OGFr的表达;用不同浓度(0、1、2、3、4 mg/mL)的MENK体外作用于BGC823细胞24、48、72、96 h后,MTS检测MENK对其增殖影响;流式细胞术和Annexin V-FITC/PI双染法检测4 mg/mL MENK体外处理48、72 h后BGC823细胞凋亡变化。结果显示,人胃癌BGC823细胞有阿片受体OGFr的表达;MENK可抑制BGC823细胞增殖,且随着剂量的增加和时间的延长,其抑制作用逐渐增强(P<0.05);4 mg/mL MENK48 h处理组与空白组相比细胞凋亡率增加,72 h处理组与48 h处理组结果一致(P<0.05)。结果表明,MENK可抑制BGC823细胞增殖,具有显著的剂量依赖性和时间依赖性,且可通过诱导细胞凋亡抑制BGC823细胞的增殖。

EphA3促进胃癌细胞BGC823的增殖

目的:初步探索EphA3与胃癌细胞BGC823增殖的关系。方法:用T_4DNA连接酶将EphA3的全长cDNA片段连接到酶切后的慢病毒载体pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro中制备慢病毒,感染胃癌BGC823细胞建立过表达EphA3细胞系,Western印迹检测目的蛋白的表达,CCK8细胞生长实验和裸鼠成瘤实验检测EphA3对BGC823细胞增殖的影响。结果:双酶切鉴定与基因测序表明过表达EphA3慢病毒载体构建成功;Western印迹表明建立了过表达EphA3的BGC823细胞系,高表达EphA3对BGC823细胞的增殖和成瘤后生长有明显的促进作用。结论:EphA3促进BGC823胃癌细胞增殖,为胃癌的靶向性治疗及个性化治疗提供了线索。

罗哌卡因对胃癌BGC-823细胞生物学行为及AMPK/Nrf2信号通路的影响

目的探究罗哌卡因对胃癌BGC-823细胞生物学行为及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响。方法体外培养胃癌BGC-823细胞,取培养至对数生长期的BGC-823细胞分为对照组(常规培养)、顺铂组(培养基含5 mg/L顺铂)及罗哌卡因低水平(培养基含25 mg/L罗哌卡因)、中水平(培养基含50 mg/L罗哌卡因)、高水平(培养基含100 mg/L罗哌卡因)组,培养48 h。采用细胞计数试剂-8(CCK-8)检测BGC-823细胞存活率;Transwell小室实验检测BGC-823细胞侵袭能力;流式细胞仪检测BGC-823细胞凋亡率;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测BGC-823细胞中AMPK、Nrf2信使RNA(mRNA)水平;Western blot法检测BGC-823细胞中AMPK、Nrf2蛋白水平。结果与对照组比较,顺铂组及罗哌卡因低、中、高水平组BGC-823细胞存活率、侵袭数量、AMPK、Nrf2 mRNA和蛋白水平均下降(P<0.05),而凋亡率升高(P<0.05);与顺铂组比较,罗哌卡因低、中、高水平组BGC-823细胞存活率、侵袭数量、AMPK、Nrf2 mRNA和蛋白水平均升高(P<0.05),而凋亡率下降(P<0.05);与罗哌卡因低水平组比较,罗哌卡因中、高水平组BGC-823细胞存活率、侵袭数量、AMPK、Nrf2 mRNA和蛋白水平均依次下降(P<0.05),而凋亡率依次升高(P<0.05)。结论罗哌卡因能抑制BGC-823细胞存活和侵袭,促进BGC-823细胞凋亡,其机制可能与抑制AMPK/Nrf2信号通路有关。

斑蝥酸钠诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的实验研究

目的观察斑蝥酸钠体外对人胃癌BGC823细胞凋亡的影响。方法应用MTT法及流式细胞仪检测、分析斑蝥酸钠对人胃癌BGC823细胞的生长和凋亡的影响。结果不同剂量斑蝥酸钠作用24 h均可使人胃癌BGC823细胞生长明显抑制(P<0.01),并出现典型的凋亡峰,细胞增殖阻滞于G1期。结论斑蝥酸钠对人胃癌BGC823细胞生长有抑制作用,可诱导胃癌细胞凋亡。

力达霉素诱导人胃癌BGC823细胞凋亡和抑制裸鼠移植瘤生长

观察力达霉素(LDM)对人胃癌BGC823细胞的诱导凋亡作用及体内抗肿瘤活性。采用MTT法观察LDM对人胃癌BGC823细胞增殖的抑制作用。利用Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测细胞凋亡的改变。采用Western blotting法检测细胞中VEGF蛋白的表达情况。建立裸鼠胃癌皮下移植瘤模型,观察LDM的体内抗肿瘤活性。LDM能够明显抑制BGC823细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞VEGF蛋白的表达,抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长。LDM剂量0.02和0.04 mg.kg-1的抑瘤率分别为57%和72%(P<0.01)。LDM可诱导胃癌细胞凋亡并抑制裸鼠移植肿瘤的生长。

白屈菜红碱对人胃癌BGC823细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的观察白屈菜红碱(che lerythrine)对人胃癌BGC 823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法通过M TT实验检测白屈菜红碱对细胞生长的抑制率,AO/EB的荧光核染色观察细胞形态,DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果M TT实验显示白屈菜红碱抑制BGC 823细胞的生长呈时间、浓度依赖的方式,显微镜下观察到AO/EB的荧光核染后凋亡的细胞,琼脂糖凝胶电泳出现DNA的片段化,在白屈菜红碱质量浓度为1.5、2.0、2.5μg/mL且培养24 h时,流式细胞仪可以检测到凋亡峰,且细胞被阻滞在S和G2/M期。结论白屈菜红碱能有效地诱导BGC 823细胞凋亡,而且其诱导的凋亡具有周期依赖性。

香菇多糖联合多西他赛对胃癌BGC823细胞增殖的影响

目的:观察香菇多糖单药及联合多西他赛抑制胃癌细胞BGC823增殖的作用。方法:分别用不同浓度的香菇多糖、多西他赛和香菇多糖联合多西他赛处理胃癌细胞BGC823。香菇多糖终浓度分别为1.560μg/ml,3.125μg/ml,6.250μg/ml,12.500μg/ml。多西他赛终浓度分别为0.625μg/ml,1.250μg/ml,2.500μg/ml,5.000μg/ml。MTT法检测各组细胞增殖情况;同时用Annexin V/PI法检测各组细胞的凋亡。结果:单药香菇多糖能抑制BCG823细胞的增殖,不同浓度(由高到低)对BGC823细胞的增殖抑制率分别为67.7%,56.0%、42.1%和23.2%,与阴性对照组比较有统计学意义(P<0.05)。不同浓度香菇多糖联合多西他赛能增强多西他赛对BGC823细胞增殖的抑制作用。单药香菇多糖能增加BGC823细胞的细胞凋亡率,与多西他赛联用使细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:香菇多糖能抑制胃癌BGC823细胞的增殖,并能显著增强多西他赛抑制胃癌细胞BGC823的增殖作用。

熊果酸诱导人胃癌BGC823细胞凋亡及其作用机制初探

背景与目的:熊果酸(ursolic acid,UA)广泛存在于夏枯草、白花蛇舌草等清热解毒药中,可抑制多种肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡,具有广泛生物学活性。本研究将UA作用于人胃癌BGC823细胞,观察其对细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:MTT法检测UA对BGC823细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期与凋亡的变化;Realtime-PCR检测细胞bax、bcl-2mRNA表达的变化。结果:UA呈时间-剂量依赖性抑制BGC823细胞增殖,分别作用24、48、72h后半数抑制浓度依次为36.88、34.72、32.18μmol/L;UA能诱导BGC823细胞凋亡,并阻滞细胞于G2/M期;此外,其还可上调BGC823细胞bax及下调bc1-2mRNA表达,且作用随剂量的增加而加强。结论:UA呈时间-剂量依赖性抑制BGC823细胞增殖,并诱导其凋亡,阻滞细胞于G2/M期;其凋亡机制可能与上调bax及下调bcl-2基因的表达有关。

茅苍术提取物对胃癌BGC-823和SGC-7901细胞增殖抑制作用研究

目的探讨茅苍术提取物对胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901的增殖抑制效应。方法采用不同浓度(0.625,1.25,2.55,10 mg.mL-)1茅苍术水提物处理胃癌BGC-823和SGC-7901细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物对细胞的抑制作用;倒置显微镜下观察细胞的形态学改变;Hoechst 33342染色,荧光显微镜观察细胞凋亡形态;应用流式细胞仪观察凋亡过程中的细胞周期变化。结果茅苍术提取物对胃癌BGC-823和SGC-7901细胞增殖均有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性;光镜下可见凋亡细胞的形态学特征性改变;流式细胞仪检测表明经茅苍术提取物处理,BGC-823细胞周期阻滞于S期,SGC-7901细胞周期阻滞于G0/G1期。结论体外实验显示茅苍术提取物能抑制胃癌BGC-823和SGC-7901细胞增殖,可以诱导胃癌细胞凋亡。

香加皮水提取物诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制

目的研究香加皮水提取物(CPE)诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制。方法采用G iem sa染色观察细胞凋亡形态学变化;电子显微镜观察凋亡细胞的超微结构变化;流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳方法检测BGC-823细胞凋亡率、细胞周期和细胞凋亡的DNA水平变化;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax和surv iv in mRNA表达水平变化;免疫细胞化学方法检测bcl-2、bax和surv iv in蛋白表达的变化。结果经CPE作用后,人胃癌细胞BGC-823出现明显的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变,细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈现梯形图。经250μg/mL CPE处理48 h后,多数BGC-823细胞被阻滞在G2/M期,而且细胞发生明显的凋亡变化,BGC-823细胞凋亡率可达18.9%。CPE可抑制BGC-823细胞bcl和surv iv in mRNA及蛋白的表达,促进baxmRNA及蛋白的表达。CPE可明显延长S180荷瘤小鼠生存期,且具有剂量依赖性。结论CPE通过阻滞BGC-823细胞于G2/M期及诱导BGC-823细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,其作用机制与抑制细胞的bcl-2和surv iv in基因mRNA及蛋白表达、促进bax基因和蛋白的表达有关。

槲皮素对胃癌细胞SGC-7901和BGC-823生长的影响

目的 观察槲皮素对胃癌细胞SGC 790 1和BGC 82 3生长和增殖的影响。方法 以台盼蓝拒染法计数胃癌细胞的生长抑制率 ,荧光显微镜了解凋亡的发生 ,流式细胞术检测细胞周期变化。结果 台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制SGC 790 1和BGC 82 3细胞增殖的作用明显 ,呈浓度和时间依赖性 ,槲皮素处理 48h后的Ic50为 14 12 μm(SGC 790 1)和 2 8 13 μm(BGC 82 3 )。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化 ,流式细胞仪检测表明经 10～ 2 0 μm/L的槲皮素处理 ,SGC 790 1细胞周期阻滞于G0 /G1期 ,BGC 82 3细胞周期阻滞于S期。结论 槲皮素能抑制胃癌细胞的生长并诱导其发生凋亡 。