人参皂甙Rg3刺激淋巴细胞CD4上调以及对胃癌细胞MKN-45的杀伤作用

目的探讨人参皂甙Rg3对淋巴细胞的免疫刺激作用及其对胃癌细胞MKN-45的影响。方法采用梯度密度分离法分离正常人淋巴细胞,经人参皂甙Rg3刺激后流式细胞术检测人参皂甙Rg3对正常人淋巴细胞CD4表达的影响;用MTT法测定人参皂甙Rg3对MKN-45抑制作用;HE染色法观察人参皂甙Rg3诱导MKN-45的凋亡作用。结果人参皂甙Rg3促进正常人淋巴细胞CD4表达明显高于正常对照组(P<0.05);人参皂甙Rg3对MKN-45抑制率、凋亡率与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论人参皂甙Rg3具有刺激淋巴细胞CD4上调的作用以及抑制MKN-45细胞生长的作用。

天花粉蛋白诱导胃癌细胞MKN-45凋亡的研究

目的 :研究天花粉蛋白（ trichosanthin,TCS）对胃癌细胞的作用，探讨其治疗胃癌的可能作用机制。方法 :采用生长曲线、集落形成实验、 MTT法、电镜、 TUNEL染色和流式细胞仪等技术，研究 TCS对胃癌细胞 MKN－ 45的增殖抑制和诱导凋亡作用。结果： TCS能够明显抑制胃癌细胞 MKN－ 45的生长和集落形成， 1μ g/ml和 0.1μ g/ml TCS作用 MKN－ 45后，细胞集落形成率分别为 (6.63± 1.31)％和 (14.68± 1.27)％，明显低于对照组的 (23.67± 2.76)％

丹参酮IIa诱导人胃癌细胞MKN-45凋亡及对端粒酶活性的影响

目的考察丹参酮IIa(tanshinone IIa,Tan IIa)诱导人胃癌细胞的凋亡作用,以及对端粒酶活性的影响。方法不同浓度TanⅡa处理人胃癌细胞株MKN-45后,显微镜下观察胃癌细胞形态变化,应用Annexin V/PI双重染色方法检测细胞凋亡比例,并用凋亡相关抗体检测通路情况,用RT-PCR以及TRAP-PCR法分别对胃癌细胞端粒酶基因hTert和端粒酶活性进行检测。结果TanⅡa处理胃癌细胞后,DAPI染色显示,细胞核内染色质聚缩,细胞核碎裂并有凋亡小体产生,提示TanⅡa诱导胃癌MKN-45细胞凋亡。Annexin V/PI双染结果显示,凋亡比例随化合物浓度提高而增加,40μM下晚期凋亡比例达到(45.02±6.48)%。凋亡相关蛋白的检测显示,PARP和Caspase-3活化,细胞色素C水平增加,而Caspase-8则无显著变化。同时TRAP-PCR结果显示,Tan IIa在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调,并在40μM下显著抑制hTert基因的表达。结论 TanⅡa对人胃癌细胞具有明显诱导细胞凋亡作用,且可能通过激活内源性途径引起细胞凋亡。TanⅡa还可抑制端粒酶活性和hTERT基因表达,这些可能是其发挥抗癌作用的重要机制之一。

天花粉蛋白诱导胃癌细胞MKN-45凋亡中P53、Bcl-2、c-myc蛋白表达变化

目的 选用对天花粉蛋白敏感的胃癌细胞株MKN 45 ,研究天花粉蛋白抗肿瘤机制。方法 免疫组化法测定凋亡相关基因 (P5 3、Bcl 2、c myc)的表达变化。 结果 胃癌细胞MKN 45经天花粉蛋白 (1μg/ml,2 4、48h)处理后 ,凋亡相关基因P5 3、Bcl 2、c myc表达未出现显著性改变。经 5 μg/ml的天花粉蛋白处理 2 4h后 ,得到相同结论。但当MKN 45细胞经 5 μg/ml的天花粉蛋白处理 48h后 ,发现野生型P5 3蛋白表达增加 ,而Bcl 2、c myc蛋白表达未出现显著性改变。 结论 天花粉蛋白可诱导MKN 45细胞凋亡 ,可能与上调野生型P5 3基因的表达有关。

5-氟尿嘧啶气雾对人胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡及周期的影响

目的通过体外模拟5-氟尿嘧啶(5-Fu)腹腔气雾化疗环境,评价5-Fu雾化对人胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡及周期的影响。方法运用自主研发的气雾化疗仪将5-Fu雾化,体外模拟腹腔气雾化疗环境,对胃癌细胞进行处理,维持气雾环境压力为8mmHg,作用时间为30min,并设生理盐水雾化作为对照,处理后用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果 MTT结果显示,5-Fu气雾化疗组杀伤率显著高于生理盐水组[(31.13±3.51)%比(4.65±1.99)%,P<0.001];流式细胞结果显示,与生理盐水组相比,5-Fu气雾化疗组细胞凋亡率升高[(12.00±0.92)%比(2.65±0.52)%,P<0.001)],G1期细胞增多[(51.83±1.95)%比(36.41±2.33)%,P<0.001]、S期细胞减少[(16.72±2.36)%比(45.20±3.27)%,P<0.001],差异均有统计学意义。结论 5-Fu气雾能有效抑制胃癌细胞的增殖并诱导凋亡,使细胞阻滞于G1期,为气雾化疗的临床应用提供实验依据。

盐酸伊利替康及氧化苦参碱对多耐药人胃癌细胞MKN-45的作用

目的:探讨盐酸伊利替康(CPT-11)及氧化苦参碱对裸鼠体内多药耐药人胃癌细胞MKN-45的抑制作用及其抗肿瘤作用的分子机制。方法:建立了多药耐药人胃癌MKN-45细胞的皮下移植瘤模型,随机分成0.9%氯化钠对照组、CPT-11治疗组、氧化苦参碱治疗组和CPT-11联合氧化苦参碱治疗组。每组裸鼠在胃癌组织移植7周后处死,并测算其肿瘤抑制率。采用末端脱氧核酸转移酶原位标记(TUNEL)和流式细胞仪法分析其凋亡指数。结果:CPT-11治疗组(10 mg.L^(-1)、20 mg.L^(-1))对多药耐药MKN-45细胞皮下移植瘤的抑制率显著增加,其凋亡率分别是(11.2±0.18)%和(12.2±1.65)%,两者比较无显著差异(P>0.05);氧化苦参碱联合CPT-11治疗组凋亡指数(AI)为(62.4±6.14)%,显著高于CPT-11治疗组和0.9%氯化钠时照组(1.27±0.11)%,(P<0.01)。结论:CPT-11可以增强氧化苦参碱对多药耐药细胞MKN-45的抑制作用,诱导裸鼠体内人胃癌细胞的凋亡;并能增强裸鼠体内胃癌对化疗的疗效和敏感性。

鱼藤素对胃癌细胞MKN-45增殖及凋亡的影响

目的:研究鱼藤素对胃癌细胞增殖及凋亡的影响。方法:利用CCK8检测不同浓度(0、1、10和25μmol/L)鱼藤素作用于胃癌细胞MKN-45 24、48、72和96 h后对其增殖的影响;AnnexinⅤ-FITC/PI检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期;利用倒置相差显微镜观察鱼藤素作用后细胞形态的变化;DAPI及Hoechst染色观察细胞核变化。结果:1μmol/L鱼藤素作用于MKN-45细胞24 h后抑制率为(28.82±0.002)%。随着鱼藤素浓度(10、25μmol/L)增加,作用时间(48、72、96 h)延长,其抑制作用增加,表明其抑制作用呈时间-剂量依赖关系。不同浓度(1、10和25μmol/L)鱼藤素作用于细胞48 h后,早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率显示鱼藤素显著促进细胞凋亡。细胞周期检测发现,与对照组比较,1μmol/L鱼藤素作用于细胞48 h后,S期细胞比例升高,G_0/G_1期及G_2/M期细胞比例下降;10μmol/L鱼藤素作用于细胞48 h后,G_2/M期细胞比例升高,G_0/G_1期细胞比例下降(P<0.01)。倒置相差显微镜检查镜下则显示,1、10和25μmol/L鱼藤素作用MKN-45细胞48 h后,可见典型凋亡样改变。DAPI及Hoechst染色可见鱼藤素组细胞核皱缩变小、染色质浓聚和典型的凋亡小体。结论:鱼藤素可明显抑制胃癌细胞的增殖、促进凋亡。机制可能与细胞周期阻滞于S期及G_2/M期有关。

槐耳醇提物抑制人胃癌细胞MKN-45增殖的实验研究

目的观察槐耳不同提取部位对人胃癌MKN-45细胞增殖的影响,并筛选其有效部位。方法用系统溶剂法将槐耳提取为石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、水五个部位后,用CCK-8显色法,检测不同部位不同浓度的槐耳醇提取物对MKN-45增殖的作用。结果槐耳石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇部位为抗肿瘤有效部位,其中以正丁醇部位效果最佳,其对MKN-45细胞半数抑制率(IC50)为56.142μg·m L-1。结论槐耳醇提物能抑制人胃癌MKN-45细胞增殖,其最有效部位为槐耳正丁醇部位。

吉非替尼与5-氟尿嘧啶、紫杉醇联合对胃癌细胞MKN-45的抑制作用

目的探讨吉非替尼与5-氟尿嘧啶(5-FU)、紫杉醇(Paclitaxel)联合序贯对人胃癌细胞MKN-45的抑制作用,筛选出体外对胃癌有效的联合用药方案。方法采用免疫组化法鉴定MKN-45细胞内EGFR相关抗原,采用MTT法测定5-FU、紫杉醇与吉非替尼联合对MKN-45细胞的抑制作用。利用combidrug软件分析联合用药的作用效果。结果表明MKN-45细胞内EGFR相关抗原表达阳性。先用化疗药物24h序贯吉非替尼48h方式给药时,5-氟尿嘧啶,紫杉醇与吉非替尼均有协同作用,CI值<1;先用吉非替尼48h序贯化疗药物24h方式给药时,5-氟尿嘧啶,与吉非替尼有协同作用,CI值<1,紫杉醇与吉非替尼在fa>0.85时,CI值>1,呈拮抗作用。结论 5-氟尿嘧啶与吉非替尼具有协同作用,联合效果不受序贯给药顺序的影响。先用紫杉醇24h序贯吉非替尼48h具有协同作用,联合效果优于其余两种给药方案。

川楝素对人胃癌细胞MKN-45中CTPS细胞蛇形成的影响及其机制

目的:本研究旨在对川楝素(TSN)与胃癌细胞MKN-45中CTPS细胞蛇形成的联系进行初步探究。方法:以人胃癌细胞MKN-45为实验材料,设置7个处理组分别为:0、20、40、60、80、100、120 nmol/L TSN。每组3次重复,分别作用24 h、48 h、72 h,利用CCK-8法检测川楝素对MKN-45细胞增殖抑制作用,使用免疫荧光检测之后再通过激光共聚焦显微镜观察细胞内CTPS细胞蛇形态,qRT-PCR检测川楝素对MYC基因表达的影响。另外设置2个处理组为1 mmol/L DON和1 mmol/L MPA,每组3次重复,作用6 h然后采用免疫荧光检测细胞蛇形态。结果:免疫荧光结果显示,分别利用1 mmol/L DON和1 mmol/L MPA处理MKN-45细胞后CTPS形成丝状的细胞蛇结构,意味着该细胞具有形成CTPS细胞蛇的能力;川楝素处理组的细胞增殖率明显低于0 nmol/L TSN组(P<0.01);免疫荧光结果显示80 nmol/L的川楝素作用72 h时MKN-45细胞中CTPS细胞蛇形成数量最多;qRT-PCR检测结果显示,80 nmol/L川楝素作用24 h细胞内MYC表达明显降低(P<0.05),48 h后细胞内MYC的表达量明显增多(P<0.01)随后表达降低。结论:川楝素可能通过调节MYC的表达影响细胞内细胞蛇的组装。

靶向ING1基因的miR-622真核表达载体在胃癌细胞MKN-45中的鉴定及其功能

目的:研究构建靶向ING1基因的miR-622真核表达载体并验证其转染人胃癌细胞株MKN-45细胞后对ING1基因的干扰效果及其功能.方法:将外源性重组真核表达载体pSuper/miR-622转染到人胃癌细胞株MKN-45内,经G418筛选并建立高表达miR-622的稳定转染胃癌细胞株.稳定表达该miR-622的胃癌细胞为:MKN-45-pSuper/miR-622组,转染空质粒细胞及未处理细胞为对照组(MKN-45-pSuper组和MKN-45组),采用实时荧光定量PCR验证miR-622在稳定转染细胞的表达,蛋白印迹检测其对ING1基因表达的干扰效果,通过细胞增殖和周期实验验证miR-622在胃癌细胞MKN-45中的功能.结果:与pSuper空载体组相比,转染了pSuper/miR-622高表达质粒的MKN-45细胞中ING1蛋白表达明显减少,降低了4.63倍(1.83±0.86vs8.47±1.43,P<0.05);与转染pSuper空载体的MKN-45细胞对照组相比,转染了pSuper/miR-622高表达质粒的MKN-45细胞地促进了胃癌细胞增殖(P<0.05),而转染了pSuper空载体的MKN-45细胞组与正常组组间无统计学意义(P>0.05).pSuper/miR-622组在胃癌细胞G0/G1期为21.45±0.16而pSuper空载体组48.21±0.34;pSuper/miR-622组在胃癌细胞G2/M期为53.67±0.41而pSuper空载体组20.27±0.18,与pSuper空载体组细胞相比较,miR-622的高表达促进了胃癌细胞周期的演化.结论:miR-622真核表达载体构建和稳定表达胃癌细胞筛选成功,为继续深入的研究miR-622在胃癌中的功能奠定了基础.

金丝桃苷诱导人胃癌细胞MKN-45凋亡及其机制

目的探讨金丝桃苷(hyperoside,Hyp)对人胃癌MKN-45细胞增殖及凋亡的影响及其机制。方法体外培养MKN-45细胞,对照组不加药物,实验组分别加入不同浓度Hyp(12.5、25、50、100、200μg/ml)作用24、48 h,MTT法检测Hyp对细胞增殖的影响并筛选适宜药物浓度;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率;Western blot法分析NF-κB P65、caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果 Hyp可明显抑制MKN-45细胞的增殖,阻滞细胞于G0/G1期并促进其凋亡,Western blot结果显示,随着药物浓度的增高,Hyp可使NF-κB P65、Bcl-2蛋白表达降低,casepase-3、Bax蛋白表达增高。结论金丝桃苷可抑制MKN-45细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能与该药物阻断细胞周期,抑制NF-κB通路,下调NF-κB P65、Bcl-2蛋白,上调casepase-3、Bax蛋白有关。

法米替尼在胃癌细胞MKN-45移植瘤中的作用

目的探讨法米替尼在胃癌细胞MKN-45移植瘤中的作用。方法胃癌细胞MKN-45移植瘤裸鼠共20只按随机数字法分为对照组、法米替尼50 mg/kg组、法米替尼100 mg/kg组、法米替尼500 mg/kg组,5只/组,分别给予0.9%氯化钠注射液和50、100、500 mg/kg法米替尼;每日1次,连续22 d,口服给药。筛选出高效低毒剂量(50 mg/kg)进行第2次动物实验,方法相同,MKN-45移植瘤裸鼠共40只随机分为8组(5只/组):对照组(0.9%氯化钠注射液,每日1次,连续18 d,口服给药);法米替尼组(50 mg/kg,每日1次,口服给药);5-氟尿嘧啶(5-FU)组(10 mg/kg和20 mg/kg组,隔天1次,腹腔注射);顺铂(DDP)组(3 mg/kg和6 mg/kg组,每周1次,腹腔注射);紫杉醇(PTX)组(10 mg/kg组,每周1次;以及20 mg/kg组:每周2次,每次10 mg/kg;腹腔注射),连续18 d。给药过程中,记录裸鼠生长状况、肿瘤体积、裸鼠体质量、结束后肿瘤组织称质量等用来计算肿瘤抑制率和死亡情况,进而评估药物疗效和安全性。通过免疫组织化学CD34染色检测法米替尼用药后肿瘤血管的变化。结果与对照组相比,法米替尼50 mg/kg组和法米替尼100 mg/kg组在给药第8天后裸鼠肿瘤体积明显生长减缓,用药22 d后,各组裸鼠肿瘤体积[对照组(2036±805)mm^3,法米替尼50 mg/kg组:(343±167)mm^3,法米替尼100 mg/kg组:(304±206)mm^3],差异有统计学意义(P<0.05)。给药第14日开始至给药结束,法米替尼100 mg/kg组裸鼠体质量较对照组和法米替尼50 mg/kg组明显下降,而对照组和法米替尼50 mg/kg组裸鼠体质量比较差异无统计学意义(P>0.05)。用药22 d后,各组裸鼠体质量:对照组(21.58±2.32)g,法米替尼50 mg/kg组:(18.78±1.41)g;法米替尼100 mg/kg组:(15.08±2.63)g。法米替尼50 mg/kg剂量将作为安全有效剂量继续第2次实验。第2次实验对比对照组和各化疗组,法米替尼用药后肿瘤体积和最终肿瘤质量均显著降低。法米替尼组抑瘤率为93.0%,远远高于其他单药组(5-FU组:10 mg/kg 16.6%,20 mg/kg组37.9%;DDP 3 mg/kg 54.3%,6 mg/kg 58.2%;PTX:10 mg/kg组22.9%,20 mg/kg组52.2%)。法米替尼组CD_(34)表达较对照组明显降低(法米替尼组CD_(34)^-;对照组CD_(34)^(++))。结论法米替尼较其他传统化疗药物对于胃癌有更好的抗肿瘤作用,为今后临床试验提供一定的理论支持。

泮托拉唑对胃癌细胞MKN-45增殖与凋亡的影响

目的探讨泮托拉唑对胃癌细胞MKN-45增殖与凋亡的影响及相关机制。方法采用0、10、20、40μg/ml的泮托拉唑处理MKN-45细胞48 h;MTT法检测细胞活力;Hoechst染色检测细胞形态;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及Cyclin E表达。结果与0μg/ml比较,10、20、40μg/ml的泮托拉唑能明显降低MKN-45细胞活力(P﹤0.01),使细胞核发白,皱染,使细胞周期阻滞在G1期(P﹤0.01),下调Cyclin D1及Cyclin E的表达(P﹤0.01);与0μg/ml比较,20、40μg/ml的泮托拉唑能明显下调MKN-45细胞中Bcl-2的表达(P﹤0.01),上调Bax的表达(P﹤0.01)。结论泮托拉唑通过调控细胞周期蛋白及细胞凋亡相关蛋白表达抑制胃癌细胞MKN-45的增殖,并诱导细胞凋亡。

密点麻蜥调控SLC7A11/GPX4通路诱导胃癌MKN45细胞铁死亡的作用及机制

目的:基于SLC7A11/GPX4信号通路探讨密点麻蜥对人胃癌MKN45细胞发生铁死亡的影响。方法:选择SD大鼠制备含药血清,将MKN45细胞随机分为空白对照组(10%空白血清)、5-FU含药血清(10%)阳性对照组、密点麻蜥含药血清低(5%)、中(10%)、高(20%)浓度组。CCK-8法检测MKN45细胞的存活率;Transwell法检测MKN45细胞的迁移及侵袭能力;激光共聚焦检测细胞内二价铁离子(Fe^(2+))水平;试剂盒检测细胞内LPO水平;流式细胞术检测细胞内ROS水平;qPCR法检测密点麻蜥对MKN45细胞中SLC7A11、GPX4、P53 mRNA表达的影响;Western Blotting检测密点麻蜥对MKN45细胞中SLC7A11、GPX4、P53蛋白表达的影响。结果:与空白对照组比较,密点麻蜥含药血清中、高浓度组MKN45细胞存活率、迁移及侵袭能力显著降低,Fe^(2+)、ROS水平显著升高,P53、SLC7A11、GPX4 mRNA及蛋白表达显著降低,高浓度组LPO水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:密点麻蜥可能通过抑制SLC7A11/GPX4信号通路,同时促进细胞内Fe~(2+)、LPO的积累,从而诱导MKN45细胞发生铁死亡,抑制其增殖、迁移及侵袭。

MAPK通路在红托竹荪多糖诱导人胃癌MKN-45细胞凋亡中的作用机制研究

目的:研究红托竹荪多糖对人胃癌MKN-45细胞增殖与凋亡的影响,并基于丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号通路探讨其可能的作用机制。方法:体外培养MKN-45细胞,分为对照组,红托竹荪多糖低、中及高剂量组,采用终浓度分别为0、4、6及8 mg/mL的红托竹荪多糖作用于细胞48 h后,采用细胞计数法检测红托竹荪多糖对人胃癌MKN-45细胞增殖的影响;采用倒置显微镜观察不同浓度的红托竹荪多糖作用于人胃癌MKN-45细胞48 h后细胞形态学的变化。设立实验组的红托竹荪多糖终浓度为8 mg/mL,采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染色流式细胞技术检测细胞的凋亡率;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用蛋白质印迹法检测红托竹荪多糖作用胃癌细胞后p38蛋白激酶(p38)、磷酸化p38蛋白激酶(p-p38)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、C-JUN氨基末端激酶(JNK)、磷酸化C-JUN氨基末端激酶(p-JNK)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)和活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白的表达,即与3-磷酸甘油醛脱氢酶(GADPH)灰度值比值。结果:作用48 h后,不同浓度的红托竹荪多糖(4、6及8 mg/mL)对人胃癌MKN-45细胞增殖的抑制率分别为(8.27±5.99)%、(21.83±5.77)%和(56.95±5.21)%;在检测的浓度范围下,随着浓度的升高,红托竹荪多糖对MKN-45细胞增殖的抑制率逐渐升高。倒置显微镜下显示,经8 mg/mL的红托竹荪多糖作用48 h后,MKN-45细胞密度与对照组相比明显减少。流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,实验组人胃癌MKN-45细胞凋亡率显著升高(P<0.05);细胞周期结果显示,实验组G_(1)期细胞比例明显减少(P<0.05),G_(2)期细胞比例明显增多(P<0.05),S期细胞比例明显减少(P<0.05);蛋白质印迹法结果显示,与对照组相比,实验组MKN-45细胞中cleaved Caspase-3的表达有升高趋势(P<0.05),Bcl-2的表达有降低趋势(P<0.05),p-P38/P38比值、p-ERK/ERK比值与p-JNK/JNK比值均低于对照组(P<0.05),上述差异均有统计学意义。结论:红托竹荪多糖在体外能抑制人胃癌MKN-45细胞增殖并诱导细胞凋亡,使肿瘤细胞阻滞在G_(2)/M期,其作用可能通过调控MAPK信号通路实现。

金丝桃苷增强共刺激细胞杀伤胃癌细胞MKN-45的研究

目的探讨金丝桃苷对共刺激细胞杀伤胃癌细胞MKN-45的影响及可能机制。方法健康者外周血单个核细胞（PBMC）在体外诱导为共刺激细胞，常规传代培养胃癌细胞MKN45。给予不同浓度金丝桃苷诱导24h、48h、72h，CCK8法和MTF法分别检测人共刺激细胞和胃癌细胞MKN-45增殖情况；诱导72h，乳酸脱氢酶（LDH）释放法测定共刺激细胞杀伤胃癌细胞株MKN-45的活性；流式细胞术（FCM）检测共刺激细胞穿孔素、颗粒酶B（GraB）、CDl07a、IFN－γ的表达变化；Westernblot检测共刺激细胞信号调节蛋白（Bcl-2、p-AKT、p-ERK1／2、β-catenin）的表达变化。结果培养10天共刺激细胞表达率达到38．85％；低浓度金丝桃苷促进共刺激细胞生长并呈时间依赖性，其中金丝桃苷浓度为0．8μg/mL诱导72h增殖率达到（43．73±2．99）％，与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）；浓度〉25μg／mL对MKN-45有剂量依赖性抑制作用，抑制率高达57．3％，与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0．05）；金丝桃苷诱导72h，浓度在0．8μg／mL时对MKN-45的杀伤活性增强作用最大，杀伤活性为（48．13±2．02）％，共刺激细胞穿孔素、曲aB、CDl07a和IFN-γ的表达明显增加，表达率分别为（85．74±2．89）％、（87．56±3．23）％、（89．66±2．42）％和（82．29±3．95）％，信号调节蛋白Bcl-2、p-AKT、p-ERKl／2、β-catenin的表达也不同程度的增加，灰度值计算表达率分别为（71．86±1．16）％、（14．62±0．84）％、（17．44±1．51）％、（15．12±1．55）％，与对照组比较均具有统计学意义（P〈0．05）。结论金丝桃苷在一定浓度范围内能促进共刺激细胞增殖、抑制胃癌细胞MKN-45的生长，并增强共刺激细胞对胃癌细胞MKN45的杀伤活性，其机制可能与活化Bcl-2、p-AKT、p-ERKl／2、β-eatenin，上调共刺激细胞穿孔素、Grab、CDl07a、IFN-γ的表达有关。

金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植人胃癌MKN-45细胞凋亡的影响

目的：评价金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植入胃癌MKN-45细胞的抑制作用.方法：50只裸鼠建立原位移植人胃癌MKN-45细胞模型,随机分为模型组,金龙蛇颗粒高、中、低剂量组和5-FU干预组.各组裸鼠予以相应药物实施干预.观察各组荷瘤裸鼠一般情况,肿瘤生长情况及抑瘤率.流式细胞仪检测肿瘤细胞周期分布及细胞凋亡情况.采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-fluorescein isothiocyanate/propidium iodide,Annexin V-FITC/PI）双标记染色法鉴别早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞.电镜下观察肿瘤细胞的超微结构变化.结果：金龙蛇颗粒高、中、低剂量组的抑瘤率分别为68.13%、55.94%和50.31%,呈剂量依赖效应,与5-FU干预组抑瘤率比较,差异无统计学意义.金龙蛇颗粒各剂量组肿瘤细胞凋亡率为22.81%～38.54%,亦呈剂量依赖效应,且肿瘤细胞主要被阻滞于G0/G1期.AnnexinV-FITC/PI双标记染色结果显示,金龙蛇颗粒各剂量组以早期凋亡细胞居多,5-FU干预组则以晚期凋亡细胞和坏死细胞居多.结论：金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植人胃癌MKN-45细胞具有较好的抑制作用,促进MKN-45细胞凋亡可能是其抗肿瘤治疗的主要作用机制之一.

胃泌素调控Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的 研究胃泌素调控Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法 传代培养人胃癌细胞MKN45,采用噻唑蓝(MMT)法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,Western印迹检测相关通路蛋白表达水平。结果 与对照组相比,胃泌素组细胞增殖能力、人胃癌细胞MKN45迁移能力、细胞侵袭能力及c-myc、Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平明显升高,细胞凋亡能力明显降低(P<0.05);丙谷胺组细胞增殖能力、人胃癌细胞MKN45迁移能力、细胞侵袭能力及c-myc、Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平明显降低,细胞凋亡能力明显升高(P<0.05);胃泌素联合丙谷胺组细胞增殖能力、人胃癌细胞MKN45迁移能力、细胞侵袭能力及c-myc、Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平明显升高,细胞的凋亡能力明显降低(P<0.05);与胃泌素组相比,丙谷胺组细胞增殖能力、人胃癌细胞MKN45迁移能力、细胞侵袭能力及c-myc、Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平明显降低,细胞凋亡能力明显升高(P<0.05);胃泌素联合丙谷胺组细胞增殖能力、人胃癌细胞MKN45迁移能力、细胞侵袭能力及c-myc、Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平明显降低,细胞凋亡能力明显升高(P<0.05);与丙谷胺组相比,胃泌素联合丙谷胺组细胞增殖能力、人胃癌细胞MKN45迁移能力、细胞侵袭能力及c-myc、Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平明显升高,细胞凋亡能力明显降低(P<0.05)。结论 胃泌素通过Wnt/β-catenin信号通路上调c-myc、Wnt3a、β-catenin蛋白的表达水平促进胃癌细胞增殖、侵袭及转移能力。

藤梨根提取物对人胃癌MKN-45细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨太白山藤梨根提取物(Radix Actinidiae extractive,RAE)在体外对胃癌MKN-45细胞增殖与凋亡的影响。方法:用0.01-100μg/ml浓度范围内的RAE和胃癌MKN-45细胞共培养24、48、72、96小时,采用MTT法检测RAE对MKN-45细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测其对MKN-45细胞凋亡及细胞周期分布的影响;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:RAE在体外能够显著抑制胃癌MKN-45细胞的增殖,且呈现浓度和时间依赖性;RAE对胃癌细胞的作用表现为周期特异性,使细胞阻滞于G0/G1期,进一步诱导细胞凋亡。对照组凋亡率为0.53%,1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml浓度的RAE干预胃癌细胞48小时后均出现凋亡峰,细胞凋亡率分别为3.27%、8.97%、12.6%。DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,不同浓度RAE处理的细胞样品中均可看到梯形凋亡条带,并呈现浓度依赖性。结论:RAE在体外对人胃癌MKN-45细胞有显著的抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡作用,其作用机制可能是使胃癌细胞周期阻滞于G0/G1期。