石蒜碱对胃癌AGS细胞恶性生物学行为的影响及机制研究

目的探讨石蒜碱对胃癌AGS细胞恶性生物学行为的影响并初步探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度的盐酸石蒜碱(LH)(0μmol/L、0.015μmol/L、0.0625μmol/L、0.25μmol/L、1μmol/L、4μmol/L、16μmol/L)干预AGS细胞0 h、24 h和48 h,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)试验计算干预48 h时药物半数抑制浓度(IC50),以确定后续试验的LH浓度。将AGS细胞分为对照组(0.1%二甲基亚砜处理)、LH-L组(0.125μmol/L LH处理)、LH-M组(0.5μmol/L LH处理),LH-H组(2μmol/L LH处理),以及微小RNA(miRNA)-675-nc组(转染慢病毒空白载体)、miRNA-675-mimic组(转染慢病毒miRNA-675过表达载体)和LH+miRNA-675-mimic组(转染慢病毒miRNA-675过表达载体+2μmol/L LH处理)。应用CCK-8试验、平板克隆试验、细胞划痕愈合试验和Transwell试验分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力;应用实时荧光定量PCR检测miRNA-675和糖原合成酶激酶(GSK)-3βmRNA的相对表达水平;应用蛋白质印迹法检测GSK-3β和β-联蛋白(β-catenin)蛋白相对表达水平。结果在0.015~16μmol/L范围内,LH可时间-浓度依赖地抑制AGS细胞的增殖能力(P<0.05),干预48 h时,药物IC50为(0.81±0.13)μmol/L。对照组、LH-L组、LH-M组、LH-H组干预14 d后细胞克隆数,干预24 h、48 h后划痕愈合率,干预24 h后侵袭细胞数、迁移细胞数,干预48 h后miRNA-675相对表达水平均依次降低;干预48 h后LH-M组细胞的GSK-3βmRNA相对表达水平高于对照组,LH-H组细胞的GSK-3βmRNA相对表达水平高于对照组、LH-L组、LH-M组;干预48 h后LH-M组GSK-3β蛋白相对表达水平高于对照组,LH-H组GSK-3β蛋白相对表达水平高于对照组和LH-L组;干预48 h后LH-H组β-catenin蛋白相对表达水平低于对照组和LH-L组(均P<0.05)。miRNA-675-mimic组的光密度值(48 h)、细胞克隆数(14 d)、细胞侵袭数(24 h)、细胞迁移数(24 h)、β-catenin蛋白相对表达水平(48 h)均高于miRNA-675-nc组、LH+miRNA-675-mimic组;miRNA-675-mimic组GSK-3β蛋白相对表达水平(48 h)低于miRNA-675-nc组、LH+miRNA-675-mimic组(均P<0.05)。结论石蒜碱能有效地抑制胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移能力,该作用可能通过调控miRNA-675/GSK-3β/β-catenin轴实现。

阿托伐他汀对人胃癌AGS细胞增殖、自噬和糖代谢的影响及机制

目的探究阿托伐他汀对人胃癌AGS细胞增殖、自噬和糖代谢的影响及机制。方法通过预实验考察低、中、高浓度(12.5、25、50μmol/L)阿托伐他汀对AGS细胞活力的影响,筛选作用浓度。正式实验分为对照组(不做干预)、阿托伐他汀组(25μmol/L)、阳性对照组(50 mg/L 5-氟尿嘧啶)、抑制剂组[25μmol/L阿托伐他汀+10μmol/L磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路抑制剂LY294002]和激活剂组(25μmol/L阿托伐他汀+10μmol/L PI3K/Akt信号通路激活剂SC79),干预24 h,检测细胞糖代谢情况(葡萄糖和乳酸含量)和细胞增殖率,以及细胞中自噬相关蛋白轻链3(LC3)Ⅰ、LC3Ⅱ及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达。结果中、高浓度阿托伐他汀均能显著抑制AGS细胞活力(P<0.05),正式实验选择25μmol/L阿托伐他汀进行后续实验。与对照组相比,阳性对照组和阿托伐他汀组细胞中葡萄糖和乳酸含量、细胞增殖率以及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值均显著降低(P<0.05),LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与阿托伐他汀组相比,抑制剂能显著加强上述指标变化(P<0.05),激活剂能显著逆转上述指标变化(P<0.05)。结论阿托伐他汀可抑制人胃癌AGS细胞的糖代谢和增殖,促进细胞自噬,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路相关。

榄香烯乳联合顺铂抑制胃癌AGS细胞生长的实验研究

目的:研究榄香烯乳(elemene)单独或联合顺铂(cisplatin)对人胃癌AGS细胞增殖和周期的影响,并探讨两药是否有协同作用及其可能的分子机制。方法:榄香烯乳单独或联合顺铂作用人胃癌AGS细胞。MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;BrdU掺入标记增殖的AGS细胞,免疫荧光细胞染色法测定增殖细胞数;Western印迹检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的表达。结果:榄香烯乳(10-160μg/ml)对AGS细胞生长的抑制作用呈现浓度和时间依赖性,与对照组比较,除10μg/ml作用12h外,其它各组差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞周期中DNA合成前期(G0/G1期)细胞比例增加,DNA合成期(S期)细胞比例下降。榄香烯乳作用AGS细胞后,降低BrdU的渗入率,减少cyclinD1的表达。榄香烯乳(80μg/ml)联合顺铂(4μg/ml)对细胞增殖和周期的抑制明显强于单独用药(P<0.05)。结论:榄香烯乳可抑制人胃癌AGS细胞的增殖并阻滞细胞于G0/G1期,与顺铂联合具有协同作用,其机理可能与降低cyclinD1的表达有关。

EGFR表达抑制对胃癌AGS细胞生物学行为及化疗敏感性的影响

目的:观察表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)表达抑制对胃癌AGS细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡、细胞周期及化疗药物敏感性的影响。方法:设计3条EGFR-siRNA,转染胃癌AGS细胞,CCK-8方法测定细胞增殖,Transwell方法检测细胞侵袭和转移能力,流式细胞术测定细胞凋亡与周期,RT-PCR方法检测EGFR mRNA表达,Western blot方法检测EGFR、ERK、p-ERK、AKT和p-AKT蛋白表达。结果:EGFR干扰能有效抑制胃癌AGS细胞中EGFR的基因和蛋白表达水平(P<0.05)。与对照组、阴性siRNA转染组相比,EGFR-siRNA转染组AGS细胞增殖抑制显著增加,迁移、侵袭能力显著下降,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),对顺铂、多柔比星、紫杉醇的化疗敏感性显著增加(P<0.05)。EGFR表达抑制后,处于S期的细胞比例明显减少,G_2/M期细胞比例明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。EGFR表达抑制后,AKT和p-AKT表达下调。结论:抑制EGFR表达可抑制胃癌AGS细胞增殖,降低细胞迁移和侵袭能力,增加细胞对顺铂、多柔比星、紫杉醇的化疗敏感性,其机制可能与AKT、p-AKT的表达下降有关。

和胃降逆胶囊通过PI3K/AKT信号通路调控人胃癌AGS细胞增殖与凋亡机制研究

目的:探究和胃降逆胶囊对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:用不同药物剂量(3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg)制备的和胃降逆胶囊含药血清分别干预人胃癌AGS细胞,分为和胃降逆胶囊含药血清低剂量组、中剂量组、高剂量组及空白组,分别干预AGS细胞24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期分布情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、促凋亡基因(Bax)、抑细胞凋亡蛋白(Bcl-2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性抑制剂(p21)的表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Cyclin D1和p21 mRNA表达情况。结果:随着和胃降逆胶囊含药血清作用时间的延长,各药物组细胞活力逐渐降低,同剂量组24 h、48 h、72 h比较差异有统计学意义(P<0.05),48 h与72 h比较差异无统计学意义。在同一干预时间点,细胞活力随着药物血清浓度的增加而降低。各组含药血清处理AGS细胞48 h后,G0/G1期细胞比值与空白组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白及抑制凋亡蛋白Bcl-2和Cyclin D1的表达(P<0.05),上调AGS细胞中促凋亡蛋白Bax和p21的表达(P<0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中抑制凋亡基因Bcl-2和Cyclin D1 mRNA的表达(P<0.05),上调AGS细胞中促凋亡基因Bax和p21 mRNA的表达(P<0.05),且呈现出浓度相关性。结论:和胃降逆胶囊通过抑制PI3K/AKT通路的活化,调控下游周期阻滞相关基因和凋亡相关基因的表达,进而抑制人胃癌AGS细胞增殖并促进AGS细胞凋亡。

二氢杨梅素通过ERK和p38途径抑制人胃癌AGS细胞的增殖并诱导其凋亡

目的研究二氢杨梅素对人胃癌AGS细胞增殖的抑制功效及其机制。方法取对数生长期的胃癌AGS细胞,分别用10、20、40和80μmol/L的二氢杨梅素共培养处理,采用MTT实验检测细胞活力,磷脂结合蛋白V/PI染色和活性胱天蛋白酶测定细胞凋亡程序,Western-blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果当二氢杨梅素浓度为10~80μmol/L时,胃癌AGS细胞的增殖受到剂量依赖性抑制;经二氢杨梅素处理后,AGS细胞的总凋亡数量与样品浓度呈剂量依赖性;当二氢杨梅素浓度为80μmol/L时,胃癌AGS细胞的p-ERK/ERK蛋白的水平降低了81.5%,而p-p38/p38蛋白的水平降低了78.6%。结论二氢杨梅素可显著抑制胃癌细胞AGS的增殖,其机制可能是通过调控丝裂原活化蛋白激酶的家族成员ERK和p38的表达,抑制人胃癌AGS细胞的增殖并诱导其凋亡。

Ad-ING4对人胃癌AGS细胞凋亡及其p53基因表达的影响

目的探讨腺病毒介导的肿瘤生长抑制因子4(Ad-ING4)在体外对人胃癌AGS细胞凋亡的作用及其p53基因表达的影响。方法不同浓度(80、160、320ng/ml)的Ad-ING4作用人胃癌AGS细胞48h后,用Annexin V-FITC检测细胞凋亡率,RT-PCR检测p53 m RNA的表达,免疫印迹法检测p53蛋白表达水平,并与对照组进行比较。结果凋亡检测发现,不同浓度Ad-ING4可明显诱导人胃癌AGS细胞凋亡,并呈浓度依赖性(P<0.05);Ad-ING4作用前AGS细胞p53 m RNA和p53蛋白表达水平较低,不同浓度Ad-ING4作用后p53 m RNA和p53蛋白表达水平明显上调,呈浓度依赖性(P<0.05)。结论随Ad-ING4作用浓度增高,人胃癌AGS细胞出现明显凋亡,其机制可能与p53基因转录活性增强有关。

木犀草素抑制有氧糖酵解对胃癌AGS细胞凋亡的影响

目的:观察木犀草素通过下调胃癌AGS细胞有氧糖酵解水平,抑制有氧糖酵解相关蛋白表达,进而诱导胃癌AGS细胞凋亡过程。方法:Annexin V-FITC/PI双染法,流式细胞术检测木犀草素诱导细胞凋亡的作用;测定细胞培养基中葡萄糖及乳酸含量,计算葡萄糖消耗率及乳酸产量,评价不同浓度木犀草素(20、40、80μmol/L)对胃癌AGS细胞有氧糖酵解的影响;免疫印迹法(Western Bolt)检测各组细胞有氧糖酵解及凋亡相关蛋白表达的影响。结果:木犀草素对胃癌AGS细胞IC_(50)值为55.64μmol/L;随着木犀草素浓度增大,胃癌AGS细胞凋亡率升高(P<0.0001),葡萄糖消耗率及乳酸产量升高(P<0.01,P<0.001,P<0.0001),Caspase-3、HKⅡ、GLUT1、PKM2表达降低(P<0.01,P<0.001,P<0.0001),Cleaved Caspase-3表达升高(P<0.001,P<0.0001)。结论:木犀草素可诱导胃癌AGS细胞凋亡,其机制可能通过抑制胃癌AGS细胞有氧糖酵解途径有关。

Spiranthesphenanthrene A对人胃癌AGS细胞凋亡影响及其机制初步研究

为探讨从绶草中分离得到的新化合物spiranthesphenanthrene A对人胃癌AGS细胞凋亡的作用及可能机制,利用MTT法检测spiranthesphenanthrene A对AGS细胞活力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blotting检测凋亡相关蛋白表达水平。结果表明:spiranthesphenanthrene A呈剂量和时间依赖性地抑制AGS细胞活力(P<0.05);与空白对照组相比, spiranthesphenanthrene A可显著诱导AGS细胞凋亡,且呈剂量依赖性(P<0.05)。进一步研究表明, spiranthesphenanthrene A可显著上调凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、Bax和Cytochrome C (Cyt-C)的表达,并下调Bcl-2的表达(P<0.05)。这一研究提示spiranthesphenanthrene A能抑制AGS细胞活力,并通过内源性线粒体途径诱导细胞凋亡。

miRNA-24通过靶向CARMA3基因调控胃癌AGS细胞的增殖和凋亡

目的:探讨miRNA-24对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的作用机制。方法:实时定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测不同胃癌细胞株(AGS、MKN74、HGC27)和胃黏膜上皮GES-1细胞中miRNA-24的表达水平。建立miRNA-24过表达的AGS细胞株,采用CCK-8法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,Western blotting检测细胞周期和凋亡相关cyclin D1、CDK2、Bcl-2、p-IκB-α/IκB-α和p-Rb/Rb蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因分析法预测和验证miRNA-24可能的靶基因。结果:3株胃癌细胞中miRNA-24的表达均低于GES-1 cell。转染miRNA-24 mimic(miR-24组)48 h后AGS细胞增殖活力显著低于miR-NC组[(119.62±12.63)%vs(147.79±11.89)%,P<0.05],并出现周期阻滞,且早期和晚期细胞凋亡率明显较miR-NC组上升[早期凋亡率:(11.32±2.27)%vs(0.57±0.08)%;晚期凋亡率:(15.56±2.27)%vs(0.85±0.16)%,均P<0.05]。转染miRNA-24 mimic后,细胞中cyclin D1、CDK2、Bcl-2及p-Rb的蛋白表达水平均较miR-NC组显著降低,p-IκB-α蛋白的表达水平较miR-NC组显著上升。共转染miRNA-24 mimic和miRNA-24可能作用靶点CARMA3基因过表达质粒的miR-24+pc DNA-CARMA3组AGS细胞CARMA3蛋白表达较miR-24组明显增加(1.74±0.09 vs 1.03±0.06,P<0.05)。miR-24+pc DNA3-CARMA3组AGS细胞48 h增殖活力较miR-24组显著升高[(137.85±15.34)%vs(102.31±11.23)%,P<0.05];而miR-24+pc DNA3-CARMA3组AGS细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均较miR-24组显著降低[早期凋亡率:(4.24±0.56)%vs(11.32±2.27)%,P<0.05;晚期凋亡率:(6.38±0.63)%vs(15.56±2.27)%,P<0.05]。CARMA3过表达可部分逆转miRNA-24对胃癌AGS细胞增殖及凋亡的作用。结论:miRNA-24可通过靶向CARMA3基因抑制胃癌细胞的增殖、促进其凋亡。

高压氧联合紫杉醇对人胃癌AGS细胞周期及活性氧水平的影响

目的探讨高压氧(HBO)联合紫杉醇(PTX)对体外培养的人胃癌AGS细胞株增殖、活性氧水平(ROS)及细胞周期的影响。方法体外培养人胃癌AGS细胞完成后,将细胞分为4组:对照组、PTX组、HBO组和HBO+PTX组。采用CCK-8法检测HBO和PTX联用对胃癌AGS细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞内ROS水平和细胞周期阻滞情况,Western blotting实验检测AGS细胞内细胞周期相关蛋白的表达水平。结果HBO+PTX组AGS细胞存活率明显低于对照组和HBO组(P<0.01),也低于PTX组(P<0.05);HBO+PTX组AGS细胞内ROS水平明显高于对照组和HBO组(P<0.01),也高于PTX组(P<0.05)。PTX将AGS细胞周期阻滞在S期(P<0.05),同时发现HBO+PTX组S期占比略高于PTX组(P>0.05)。HBO+PTX组Cyclin A1表达量明显低于其他3组(P<0.05或P<0.01),CDK2表达量低于对照组和HBO组(P<0.05),略低于PTX组(P>0.05)。结论HBO能够有效增强PTX对AGS细胞的增殖抑制作用,提高AGS细胞内ROS水平,并阻滞细胞周期,从而抑制AGS细胞的分裂与增殖。

橙皮苷诱导人胃癌AGS细胞凋亡机制的研究

目的探讨橙皮苷对胃癌AGS细胞的诱导凋亡作用及其相关分子机制。方法采用MTT比色法检测橙皮苷对AGS细胞的杀伤作用;Annexin V-FITC/PI双染法和流式细胞术检测橙皮苷对AGS细胞的诱导凋亡作用、活性氧水平及加入活性氧清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)后细胞凋亡变化情况;Western blotting法检测细胞凋亡相关蛋白和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白的表达。结果MTT比色法检测结果显示橙皮苷对AGS具有良好的增殖抑制作用。经橙皮苷处理后AGS细胞呈现细胞核固缩、细胞皱缩等凋亡现象。Annexin V-FITC/PI双染法和流式细胞术检测结果表明橙皮苷可以诱导AGS细胞发生线粒体依赖性凋亡,增加细胞内活性氧的水平,预处理NAC后,橙皮苷的诱导凋亡作用被抑制。Western blotting检测结果显示p-JNK、p-p38、Bad、cleaved Caspase-3及活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleave PARP)蛋白表达水平升高,抗凋亡蛋白磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)及Bcl-2表达水平降低,说明橙皮苷激活了AGS细胞中的MAPK信号通路及线粒体依赖性凋亡。结论橙皮苷对AGS细胞具有良好的杀伤作用,并通过提高AGS细胞内活性氧水平,进而调控MAPK信号通路来诱导AGS细胞发生线粒体依赖性凋亡。

奥利司他对胃癌AGS细胞顺铂耐药性的逆转作用及机制研究

目的研究奥利司他对胃癌AGS细胞顺铂(DDP)耐药性的逆转作用及相关机制。方法体外培养AGS细胞及AGS/DPP细胞,将AGS/DPP细胞分为奥利司他组、DDP组、联合组与对照组。奥利司他组给予60μg·mL^-1奥利司他,DDP组给予8μg·mL^-1DDP,联合组给予60μg·mL^-1奥利司他+8μg·mL^-1DDP,对照组给予等量生理盐水,分别处理24 h。用噻唑蓝(MTT)法检测奥利司他对AGS/DDP细胞的耐药逆转效果;用流式细胞术检测AGS/DDP细胞周期及细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(WB)法检测AGS/DDP细胞磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达。结果干预24 h时,对照组、奥利司他组、DDP组及联合组AGS/DDP细胞在G0/G1期的细胞比例分别为(12.52±0.68)%,(36.34±0.92)%,(48.11±1.03)%,(63.56±1.22)%;凋亡率分别(4.69±0.87)%,(8.49±0.94)%,(11.19±0.31)%,(36.44±4.78)%;AGS/DDP细胞p-PI3K蛋白相对表达量分别为0.98±0.02,0.80±0.11,0.59±0.05,0.21±0.04;p-AKT蛋白相对表达量分别为0.92±0.08,0.43±0.06,0.31±0.03,0.14±0.02。与对照组比较,奥利司他组、DDP组及联合组AGS/DDP细胞在G0/G1的比例及凋亡率均升高,且联合组高于奥利司他组、DDP组;p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量均显著降低,且联合组低于奥利司他组、DDP组(均P<0.05)。结论奥利司他可以逆转AGS/DDP细胞株的耐药,提高AGS/DDP细胞对DDP的敏感性,其机制可能与抑制PI3K/AKT通路的信号转导,阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡相关。

PKGIα通路抑制剂DT-3对胃癌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨PKGIα信号通路特异性抑制剂DT-3对胃癌细胞增殖和迁移的影响。方法:利用生物信息学分析,基于GEO、TCGA、HPA、Kaplan-Meier plotter数据库和GEPIA在线分析网站对PKGI在组织中的表达进行差异分析并探讨PKGI和PKGIα在胃癌患者中的预后情况。采用CCK-8、克隆形成实验检测DT-3对细胞增殖的影响,划痕愈合实验观察DT-3对细胞迁移的影响;Western blot-ting法验证PKGIα的蛋白表达和相关性分析。结果:胃腺癌组织中PKGI mRNA表达增高,在42种胃癌细胞株里有27种能检测到PKGI mRNA的表达,高表达PKGIαmRNA的胃癌组织更具肿瘤侵袭性;免疫组织化学(IHC)结果展示PKGI蛋白表达情况,12例胃癌组织中观察到6例存在中、高强度的细胞质染色阳性反应;PKGI和CDH1的表达呈负相关(r=-0.74,P<0.05);生存分析显示PKGI和PKGIαmRNA高表达对胃腺癌患者的总生存期(OS)有统计学意义(HR>1,logrank P<0.05)。实验结果表明PKGIα蛋白在人胃癌细胞株AGS中的表达增加;DT-3抑制细胞增殖迁移(P<0.05),使NF-κB磷酸化p65表达降低,且PKGI和NF-κB p-p65的表达呈极强正相关(r=0.957,P<0.05)。结论:通过抑制PKGIα信号通路,可以有效抑制胃癌细胞增殖迁移。

三叶因子-2过表达对胃癌细胞株AGS增殖的影响

目的探讨三叶因子-2(trefoil factor family 2,TFF2)瞬时过表达对胃癌细胞增殖的影响及其机制。方法以真核表达质粒pcDNA3.1-Tff2转染AGS细胞,通过Western blot检测TFF2蛋白的表达,采用CCK-8检测细胞增殖能力的变化,Annexin V/PI法检测其凋亡。结果 pcDNA3.1-Tff2转染AGS细胞后TFF2蛋白表达水平较pc DNA3.1空质粒对照组升高5倍以上,pc DNA3.1-Tff2转染组AGS细胞增殖受到明显抑制,CCK-8实验96 hOD_(490nm)吸光度值较pc DNA3.1空质粒组显著下降(0.296 vs 2.108,P<0.01),凋亡率显著升高[(15.1%±1.21%)vs(5.49%±0.32%),P<0.01]。结论 TFF2在胃癌细胞中过表达可抑制其增殖并促进其凋亡,补充外源性TFF2可能成为一种有效抑制胃癌进展的治疗途径。

miR-106a通过调控PI3K/PDK1/AKT蛋白通路调节胃癌细胞生物学行为的研究

目的探讨miR-106a对胃癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法选取AGS人胃癌细胞系,经培养后分为27个样本。所有样本随机分为miR-106a inhibitor、miR-mimic、miR-NC共计3组,分别给予miR-106a抑制剂、miR-106a模拟物及安慰剂干预。观察各组细胞存活率、细胞周期、细胞侵袭、迁移及caspase活性、Bax、Bcl-2、Casepase-3蛋白相对表达量、p85β、p-PDK1、p-AKT蛋白相对表达量。结果与miR-NC组比较,miR-106a inhibitor组AGS细胞活性降低[(分别为15.01±0.97)、(69.82±2.31)%](P<0.01);miR-106a mimics组AGS细胞G0/G1期细胞比例降低(P<0.05)(分别为17.33±1.04、58.24±0.82),G2/M和S期细胞比例升高(分别为50.11±1.12、35.64±1.07和31.56±0.92、9.24±0.25);miR-106a inhibitor组AGS细胞G0/G1期细胞比例升高(分别为78.43±1.12、58.24±0.82)(P<0.05),G2/M和S期细胞比例降低(分别为33.65±0.99、35.64±1.07和19.78±0.84、9.24±0.25)(P<0.01)。与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞的迁移、侵袭能力增强,miR-106a inhibitor组AGS细胞的迁移、侵袭能力减弱(P<0.01);与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9活性降低,miR-106a inhibitor组AGS细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9活性升高(P<0.05);miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞Bax(分别为0.69±0.07、1.48±0.15)、Casepase-3蛋白(分别为0.37±0.04、0.91±0.09)相对表达量降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高(分别为1.53±0.12、0.94±0.09),miR-106a inhibitor组AGS细胞Bax(分别为2.07±0.21、1.48±0.15)、Casepase-3蛋白(分别为1.23±0.12、0.91±0.09)相对表达量升高,Bcl-2蛋白相对表达量降低(P<0.05)(分别为0.65±0.07、0.94±0.09);与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞p85β(分别为1.24±0.12、0.94±0.09)、p-PDK1(分别为2.13±0.23、1.01±0.10)、p-AKT蛋白(分别为1.14±0.11、0.72±0.06)相对表达量升高,miR-106a inhibitor组AGS细胞p85β(分别为0.69±0.07、0.94±0.09)、p-PDK1(分别为0.75±0.07、1.01±0.10)、p-AKT(分别为0.53±0.05、0.72±0.06)相对表达量降低(P<0.05)。结论miRNA-106a表达能通过调控宫颈癌细胞PI3K/PDK1/AKT蛋白通路调控其细胞生物学行为,包括降低癌细胞活力、迁移和侵袭,诱导癌细胞细胞周期停滞,抑制miRNA-106a表达可能是胃癌患者治疗的新靶点之一。

一氧化氮对胃癌细胞AGS生长的抑制及其机制探讨

目的:探讨外源一氧化氮(nitric oxide,NO)对胃癌AGS细胞生长及c-jun和c-fos表达的影响。方法:应用MTT法评价NO供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP),SNP的同源类似物铁氰化钠Na_3Fe(CN)_6和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(N-nitro-L-arginine methylester,L-NAME)对胃癌细胞生长的抑制作用,RT-PCR和免疫印迹检测c-jun和c-fos的基因和蛋白表达。结果:SNP剂量依赖性的抑制AGS细胞的生长,其IC_(50)值为2.13mmol/L。1mmol/L SNP处理12、24、48h后,细胞生长抑制率分别为(16.12±0.85)%、(20.33±1.31)%、(22.06±2.03)%(P<0.05),NOS抑制剂L-NAME预处理明显减弱了SNP对癌细胞的生长抑制效应,Na_3Fe(CN)_6对胃癌细胞生长无抑制。与对照组比较,SNP使c-jun和c-fos的mRNA和蛋白表达降低,NOS抑制剂L-NAME预处理逆转了SNP的这种作用,Na_3Fe(CN)_6对c-jun和c-fos的mRNA和蛋白表达无影响。结论:NO可诱导胃癌细胞c-jun和c-fos表达降低,抑制癌细胞生长。

连翘苷对胃癌细胞AGS增殖、迁移和侵袭的抑制作用

目的探讨连翘苷对胃癌细胞AGS增殖、迁移和侵袭的抑制作用。方法5、10、20μmol/L连翘苷作用AGS细胞24 h后,CCK-8、Transwell法检测细胞增殖、迁移和侵袭,Western blot法检测Ki67、MMP-2、MMP-9蛋白表达,RT-qPCR法检测lncRNA EXOC 7 mRNA表达。转染EXOC 7表达小干扰RNA至AGS细胞,观察降低EXOC 7表达对AGS细胞增殖、迁移和侵袭及Ki67、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响。结果连翘苷作用于AGS细胞后,细胞增殖活力、迁移和侵袭数,Ki67、MMP-2、MMP-9蛋白,EXOC 7 mRNA表达均降低(P<0.05)。抑制EXOC 7表达后,AGS细胞增殖活力、迁移和侵袭数,Ki67、MMP-2、MMP-9蛋白表达均降低(P<0.05)。过表达EXOC 7可以逆转连翘苷对AGS细胞增殖、迁移和侵袭及Ki67、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响。结论连翘苷可能通过降低EXOC 7表达抑制胃癌细胞AGS增殖、迁移和侵袭。

幽门螺杆菌cagA基因多态性与胃癌细胞白细胞介素-22 mRNA表达的关系研究

目的研究幽门螺杆菌(Hp)cagA基因多态性与胃癌AGS细胞、SGC7901细胞白细胞介素22(IL-22)mRNA表达的关系,并探讨HpcagA基因多态性对胃癌AGS细胞、SGC7901细胞IL-22mRNA表达模式的影响。方法37℃、5%CO2孵育箱培养AGS细胞、SGC7901细胞;采用微需氧产气袋培养Hp,用cagA基因东亚型HPK5菌株、西方型HP26695菌株感染AGS细胞及SGC7901细胞0.5h、3h、6h、9h、12h、24h;姬姆萨染色方法评估Hp感染AGS细胞、SGC7901细胞效果;RT-PCR法、ELISA法分别检测上述6个时间段AGS细胞、SGC7901细胞IL-22mRNA相对表达量和IL-22浓度。结果cagA基因东亚型HPK5和西方型HP26695菌株感染AGS细胞0.5h、3h、6h、9h、12h、24h所诱导IL-22mRNA的相对表达差异有统计学意义(P<0.05);东亚型菌株诱导AGS细胞IL-22mRNA表达随时间增加而增加,而西方型菌株诱导AGS细胞IL-22mRNA表达3h、12h出现峰值。cagA基因东亚型和西方型菌株感染SGC7901细胞0.5h、3h、6h、9h、12h、24h所诱导IL-22mRNA的相对表达差异有统计学意义(P<0.05);东亚型和西方型菌株诱导SGC7901细胞IL-22mRNA表达均随时间增加而增加。结论①HpcagA基因东亚型HPK5菌株更易诱导IL-22mRNA及其浓度的表达;②HpcagA基因东亚型HPK5菌株感染AGS细胞诱导IL-22产生呈时间依赖性,西方型菌株感染AGS细胞诱导IL-22产生在3h、12h时出现峰值;③HpcagA基因东亚型菌株和西方型菌株感染SGC7901细胞产生的IL-22均随时间的增加而增加。

Neuropilin-1的干扰RNA对胃癌细胞株AGS生物学行为的影响

目的:探讨神经纤毛蛋白-1(neuropilin-1,NRP-1)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人胃腺癌细胞株AGS某些生物学行为的影响。方法:通过脂质体lip-2000分别将NRP-1特异性siRNA、control siRNA转染入人胃腺癌AGS细胞株作为转染组、无意义序列组,加入PBS的细胞作为空白对照组,采用MTT法检测三组细胞24h、48h、72h的增殖情况;Transwell小室侵袭和迁徙实验检测细胞的迁徙和侵袭能力。结果:转染后,转染组细胞的增殖能力在24h、48h和72h与对照组相比,均显著下降(P=0.00)。小室迁徙及侵袭实验表明:与对照组相比,转染组的胃癌AGS细胞迁徙能力显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。转染组的胃癌AGS细胞侵袭能力显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:Neuropilin-1的siRNA能够明显影响人胃癌细胞株AGS的某些生物学行为。